基因

记录一篇2019年Wulff实验室发表在NBT上的一篇关于R基因克隆方法——AgRenseq的文献，由于还未吃透，暂做简单记录。 驯化和快速育种导致作物多样性降低，单个R基因导入作物中费时费力而且抗性很快会被病原克服，而同时导入多个R基因则可避免上述情况，但是目前R基因克隆的方法要求分离或突变后代的产生，这对于有着难以分辨性状的近缘野生种属更难实现。GWAS可以关联性状至基因，但是受参考基因组的影响（如目标基因来自外源渗入片段，而参考基因组无此片段），而Kmer-GWAS则可以不依赖于参考基因组而实现。在本文中作者利用Kmer-GWAS与RenSeq技术发明了一种新的快速鉴定克隆R基因的方法——AgRenSeq AgRenSeq to engineer disease resistance Discovery and cloning of diverse R genes (colored dots on vertical chromosomes) in a germplasm panel (far left) allows the rapid engineering by transformation of a multi-R gene stack with zero linkage drag (R1 to R4, top right) or facilitates incorporation and stacking of R genes into elite lines and reduction of linkage drag (colored bars around R genes) by multiple backcrossing and marker-assisted selection (MAS; bottom right). AgRenseq原文 AgRenseq方法步骤

7.3.3.1 为什么选择植物根际植物根际是木霉菌通常的生态位，植物根部分泌物为木霉的活体生活和腐生生活提供了机会。在埃塞俄比亚高原森林咖啡树的根际，木霉属真菌的种类最多（Mulaw et al.2010）；而在意大利撒丁岛的非根际的土壤中，木霉种类很少（Migheli et al.，2009）。木霉对根际的偏好性可从两个方面进行解释。首先，92%的陆地植物有菌根真菌寄生，菌根真菌可能是木霉潜在的猎物。然而，目前对菌根真菌和木霉的互作关系了解得并不多。有些研究提出两类真菌是协同关系，而有些研究发现木霉可以攻击丛枝菌根真菌并抑制它们在植物根部定殖。而且，木霉菌数量会因为丛枝菌根真菌减少而减少（Migheli et al.，2009）。研究木霉与外生菌根真菌互作的较少。其次，植物根部尤其是根尖被黏滑的黏胶层包围，该胶层是由根冠外围细胞分泌的果胶、半纤维素等多糖组成。这些组分易被木霉的半纤维素酶降解，这种机制也可能是木霉进化获得的，使其能利用被猎物真菌降解木材释放出的多糖。研究表明，T.harzianum CECT 2413在番茄根际有效定殖需要多聚半乳糖醛酸内切酶的辅助（Moran-Diez et al.，2009）。植物根部分泌的单糖和二糖为菌根提供了重要的碳源，蔗糖对T.virens在植物根际的定殖也有类似的作用（Vargas et al.，2009）。T.reesei，T.atroviride和T.virens的基因组中含有编码胞内葡糖酶的基因而没有编码胞外葡糖酶的基因，因此，葡萄糖在水解前必须被葡萄糖转运酶转移至胞内。T.virens含有一个特异的蔗糖转运蛋白，该蛋白在根际定殖的早期会被诱导表达，其功能类似于植物的蔗糖载体（Vargas et al.，2011），表明蔗糖被从植物转运至真菌。总之，真菌猎物和根分泌的养分是吸引木霉在植物根际定殖和与植物根系互作的原因。7.3.3.2 与植物的互作与真菌和动物类似，植物在感受到其他生物存在时可以激活其潜在的防卫反应。研究比较透彻的是各种植物病原菌能激发两类天然免疫防御（Jones et al.，2006）。第一阶段是对病原菌或微生物相关的分子模式（PAMP或MAMP）进行识别和反应，称PAMP诱导的免疫（PTI）。第二阶段是对病原菌毒性因子的反应，称效应子诱导的免疫（ETI）。木霉和其他非植物病原菌一样会激发产生诱导系统抗性（ISR），会诱导与茉莉酸和乙烯信号通路有关的组分达到高峰，比如过氧化氢裂解酶、过氧化物酶和苯丙氨酸裂解酶（诱导木质化）。例如，真菌内果胶酶作用于根尖的黏胶层会释放寡聚半乳糖醛酸，能激活植物的防卫反应（Moran-Diez et al.，2009）。T.asperelloides在黄瓜根际定殖的前期，植物识别MAMP和最初互作释放的分子后，会在细胞壁积累更多的胼胝质和纤维素，释放酚类化合物，从而阻止微生物进一步定殖。因为木霉菌不是植物病原菌，预期不会激发第二阶段的植物先天性免疫反应。然而，T.asperellum与黄瓜根系互作的早期，能诱导植物产生浓度依赖性的系统获得抗性（SAR），SAR通常与第二阶段的植物免疫反应有关（Segarra et al.，2007）。目前仅发现少数能有效刺激植物防卫反应的木霉种类或菌株具有上述效应，分别是T.asperelloides T203，T.virens和原生质融合子T.harzianum T-22。木霉菌产生的几类分子例如木聚糖酶、抗菌肽、膨胀因子和cerato-platanin可以作为MAMP。T.viride ATCC52438的木聚糖内切酶Eix是在木霉中发现的第一个能在烟草和番茄中激发乙烯形成的蛋白（Dean et al.，1991）。T.virens 是一个高效生防菌株，分泌与Eix相同的木聚糖内切酶，在T.reesei和T.virens基因组中发现了同源酶的编码基因。Eix的催化活性不是激发防卫反应所必需的，Eix自身作为MAMP，不是反应产物。实际上，Eix结合到植物Eix受体2（Eix2或LeEix）是诱导防卫反应所必需的，该受体是植物富含亮氨酸重复受体蛋白超家族的成员，携带一个受体介导的胞吞信号。而且，Eix结合到植物受体可以造成膜功能的改变，这也是激发植物防卫反应所必需的（Bar et al.，2009）。在T.virens中敲除抗菌肽合成酶Tex1基因，阻断抗菌肽的合成，会导致菌株无法诱导黄瓜产生ISR，而添加抗菌肽混合物可以恢复这种效应（Viterbo et al.，2007）。对抗菌肽诱导ISR的机制尚未明确，可能与抗菌肽改变膜功能有关。膨胀因子具有纤维素结合域，能破坏植物细胞壁上的结晶纤维素结构。膨胀因子有助于T.asperellum在根部定殖，诱导局部防卫反应，但不会引起ISR。膨胀因子与植物扩展蛋白具有序列相似性，扩展蛋白能促进根和根毛细胞的扩展。木霉可以利用膨胀因子诱导的根表面扩张，在根际形成定殖（Guo et al.，2011）。Cerato-platanin（CP）是一类小的分泌蛋白，其特点是具有4个半胱氨酸，形成2个二硫键。T.virens的 CP Sm1 能诱导玉米和棉花产生 ISR，Sm1的同源蛋白（Epl1）是T.atroviride持续分泌的主要蛋白之一。Sm1 糖基化使该蛋白保持单体形式，能激发ISR。去糖基化后会形成Sm1二聚体，不能激发ISR。植物能通过去糖基化改变Sm1的聚合状态，从而影响其诱导抗性反应的能力（Djonovic et al.，2007 a；Vargas et al.，2008）。T.reesei，T.atroviride和T.virens中都含有3个sm1的旁系同源基因，而其他属真菌多数只含有1个，表明CP在木霉中可能具有重要的作用。木霉基因组编码的其他富含半胱氨酸的小分子量分泌蛋白在根部定殖中也可能具有一定的作用，类似于外生菌根真菌Laccaria bicolor在植物根系定殖时，会在菌丝积累小分子量的分泌蛋白（Martin et al.，2008）。7.3.3.3 促进植物生长某些情况下，木霉在植物根部的定殖能促进植物生长。例如，T.virens能增加拟南芥的根系生物量和侧根生长率（Contreras-Cornejo et al.，2009）。这些效应可能与植物生长素介导的反应途径有关，在这些途径缺陷的突变体中，木霉菌的促生效应减弱。然而，对植物的促生作用也可能与降低植物激素乙烯的水平有关。T.asperelloides T203具有一个a-1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）脱氨酶基因（acc1），在与油菜的互作过程中表达，其中ACC是乙烯合成中的重要中间物。敲除该基因会降低真菌促进根延长的能力。由于持续高水平的乙烯会抑制根延长，Acc1 酶提供了一个能促进根延长的机制（Viterbo et al.，2010a，2010b）。与其他的子囊菌相比，木霉菌基因组中包含许多编码腈水解酶的基因。这些腈水解酶可能在水解β-氰基-L-丙氨酸或将吲哚-3-乙腈转化为吲哚-3-乙酸（IAA）中起作用，β-氰基-L-丙氨酸是由乙烯合成过程释放的氰化物形成的，而IAA是能促进植物根系生长的激素（Piotrowski et al.，2006）。7.3.3.4 植物内生性植物内生细菌和真菌比较常见，这些微生物能给寄主带来许多好处，包括刺激植物生长、抗干旱胁迫和预防病原菌侵染。尽管许多木霉种类具有兼性植物内生性，目前仅发现少数植物内生性木霉菌（Bae et al.，2009）。大多数植物内生木霉被归类到新的分类群，而且没有发现它们的有性型。进化分析通常会将它们放在各自所属进化枝的末端位置，表明植物内生性是木霉菌最近进化获得的（Chaverri et al.，2011）。有些木霉种类例如T.hamatum，既有植物内生菌，也有普通的土壤和根际习居菌，该特点与其他属的机会真菌类似（Rodriguez et al.，2009）。目前尚不明确是否有专性植物内生木霉。木霉可以利用定殖在马铃薯根部外围的菌丛枝菌根真菌的菌丝进入植物根部（De Jaeger et al.，2010），表明真菌营养生活也促进了植物内生性的进化。

简单意义上讲就是病原物的毒性基因。

　　毕赤酵母ppic9k可以提取基因组dna来克隆基因　　酵母ppic9k载体能表达植物来源的基因　　典型的巴斯德毕赤酵母表达载体载体包含醇氧化酶－1（AOX1）基因的启动子和转录终止子（5"AOX1和3"AOX1），它们被多克隆位点（MCS）分开，外源基因可以在此插入。此载体还包含组氨醇脱氢酶基因（HIS4）选择标记及3"AOX1区。当整合型载体转化受体时，它的5"AOX1和3"AOX1能与染色体上的同源基因重组，从而使整个载体连同外源基因插入到受体染色体上，外源基因在5"AOX1启动子控制下表达。毕赤酵母本身不分泌内源蛋白，而外源蛋白的分泌需要具有引导分泌的信号序列。　　而由89个氨基酸组成的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有：pPIC9，pPIC9K，pHIL-S1，pPICZα A，pYAM75P等。胞内表达载体主要有：pHIL-D2，pA0815，pPIC3K，pPICZ，pHWO10，pGAPZ， pGAPZa(Invitrogen)，pPIC3.5K等。工程菌株Y11430，MG1003，GS115 （AOX1），KM71，SMD1168。　　毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有HIS4营养缺陷标记。其中，GS115菌株具有AOX1基因，是Mut+，即甲醇利用正常型；而KM71菌株的AOX1位点被ARG4基因插入，表型为Muts，即甲醇利用缓慢型，两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。

酵母ppic9k载体能表达植物来源的基因典型的巴斯德毕赤酵母表达载体载体包含醇氧化酶－1（AOX1）基因的启动子和转录终止子（5"AOX1和3"AOX1），它们被多克隆位点（MCS）分开，外源基因可以在此插入。此载体还包含组氨醇脱氢酶基因（HIS4）选择标记及3"AOX1区。当整合型载体转化受体时，它的5"AOX1和3"AOX1能与染色体上的同源基因重组，从而使整个载体连同外源基因插入到受体染色体上，外源基因在5"AOX1启动子控制下表达。毕赤酵母本身不分泌内源蛋白，而外源蛋白的分泌需要具有引导分泌的信号序列。而由89个氨基酸组成的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有：pPIC9，pPIC9K，pHIL-S1，pPICZα A，pYAM75P等。胞内表达载体主要有：pHIL-D2，pA0815，pPIC3K，pPICZ，pHWO10，pGAPZ， pGAPZa(Invitrogen)，pPIC3.5K等。工程菌株Y11430，MG1003，GS115 （AOX1），KM71，SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有HIS4营养缺陷标记。其中，GS115菌株具有AOX1基因，是Mut+，即甲醇利用正常型；而KM71菌株的AOX1位点被ARG4基因插入，表型为Muts，即甲醇利用缓慢型，两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。

抽取总DNA用不同的内切酶进行酶切连接到克隆载体或者表达载体中转化受体菌跳去转化子，验证确实插入了片段那么这些重组菌和质粒就是你要的库

1 cDNA 文库的构建 1.1 cDNA 文库构建的基本原理与方法 cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得文库。其基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法，盐酸胍—有机溶剂法，热酚法等等，提取方法的选择主要根据不同的样品而定)，要构建一个高质量的 cDNA 文库，获得高质量的 mRNA 是至关重要的，所以处理 mRNA 样品时必须仔细小心。由于 RNA 酶存在所有的生物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。在获得高质量的 mRNA 后，用反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链， cDNA 第2链的合成(用 RNA 酶 H 和大肠杆菌 DNA 聚合酶 I，同时包括使用 T4 噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌 DNA 连接酶进行的修复反应)，合成接头的加入、将双链 DNA 克隆到载体中去、分析 cDNA 插入片断，扩增 cDNA 文库、对建立的 cDNA 文库进行鉴定。这里强调的是对载体的选择，常规用的是 λ 噬菌体，这是因为 λ DNA 两端具有由12个核苷酸的粘性末端，可用来构建柯斯质粒，这种质粒能容纳大片段的外源 DNA。 1.2 cDNA 全长文库 经典 cDNA 文库的构建虽然高效、简便，但文库克隆的片段一般较小，单个克隆上的 DNA 片段太短，所能提供的基因信息很少，大多需要几个克隆才能覆盖一个完整的全基因的 cDNA。为了克隆到真正的 cDNA 全长，建立富含全长的 cDNA 文库具有重要意义。为此，必须克服仅用 mRNA 的 PolyA 尾合成以及由普通逆转录酶作用特点所导致的局限性。全长 cDNA 文库，是指从生物体内一套完整的 mRNA 分子经反转录而得到的 DNA 分子群体，是 mRNA 分子群的一个完整的拷贝。全长 cDNA 文库不仅能提供完整的 mRNA 信息，而且可以通过基因序列比对得到 mRNA 剪接信息，此外，还可以对蛋白质序列进行预测及进行体外表达和通过反向遗传学研究基因的功能等。目前所报道的对全长文库的构建一般按照美国 CLONTECH 公司的 SMART cDNA Library Construction Kit 方法或 GeneRacer 试剂盒 (Invitrogen，USA) 使用说明进行。判断一个 cDNA 文库中的 cDNA 序列是否是全长基因的 cDNA，主要方法有以下几种。 1.2.1 直接从序列上评价 5"端：如果有同源全长基因的比较，可以通过与其它生物已知的对应基因5"末端进行比较来判断。如果无同源基因的新基因，则首先判断编码框架是否完整，即在开放阅读框的第1个 ATG 上游有无同框架的终止密码子；其次，判断是否有转录起始点，一般加在5"帽结构后有一段富含嘧啶的区域，或者是 cDNA 5"序列与基因组序列中经过酶切保护的部分相同，则可以确定得到的 cDNA 的5"端是完整的。3"端：同样可以用其它生物已知的对应基因3"末端进行比较来判断，或编码框架的下游有终止密码子，或有1个以上的 PolyA 加尾信号，或无明显加尾信号的则也有 PolyA 尾。 1.2.2 用实验方法证实 可以通过引物延伸法确定5"端和3"端的长度，如：5"端 RACE，3"端 RACE，或者通过 Northern Blot 证实大小是否一致。 1.3 对 cDNA 文库的分析 对 cDNA 文库质量的评价主要有两个方面。第一方面为文库的代表性，cDNA 文库的代表性是指文库中包含的重组 cDNA 分子反映来源细胞中表达信息(即 mRNA 种类)的完整性，它是体现文库质量的最重要指标。文库的代表性好坏可用文库的库容量来衡量，它是指构建的原始 cDNA 文库中所包含的独立的重组子克隆数。库容量取决于来源细胞中表达出的 mRNA 种类和每种 mRNA 序列的拷贝数，1个正常细胞含10000～30000种不同的 mRNA，按丰度可分为低丰度、中丰度和高丰度三种，其中低丰度 mRNA 是指某一种在细胞总计数群中所占比例少于0.5％时。满足最低要求的 cDNA 文库的库容量可以用 Clack-Carbor 公式 N=Ln(1-P)/(1-1/n) 计算( P 为文库中任何一种 mRNA 序列信息的概率，通常设为99％；N 为文库中以 P 概率出现细胞中任何一种 mRNA 序列理论上应具有的最少重组子克隆数；n 为细胞中最稀少的 mRNA 序列的拷贝数；T 为细胞中表达出的所有 mRNA 的总拷贝数)。第二方面是重组 cDNA 片段的序列完整性。在细胞中表达出的各种 mRNA 片段的序列完整性。在细胞中表达出的各种 mRNA 尽管具体序列不同，但基本上都是由3部分组成，即5"端非翻译区，中间的编码区和3"端非翻译区。非翻译区的序列特征对基因的表达具有重要的调控作用，编码序列则是合成基因产物—蛋白质模板。因此，要从文库中分离获得目的基因完整的序列和功能信息，要求文库中的重组 cDNA 片段足够长以便尽可能地反应出天然基因的结构。 2 cDNA 文库构建的其它类型 2.1 均一化 cDNA 文库 它是指某一特定组织或细胞的所有表达基因均包含其中，且在 cDNA 文库中表达基因对应的 cDNA 的拷贝数相等或接近。WEISSMAN 早就提出了可以通过基因组 DNA 饱和杂交的原理将 cDNA 文库进行均一化的理论。但该理论一直以来都被认为不能应用于实际。其主要限制因素是难以提供足量的极低表达丰度的 cDNA 用于饱和杂交，从而可能会造成部分基因的 cDNA 的丢失。20年前，基于 DNA-RNA 杂交的研究就已经将基因的转录水平分为高中低3类。随后研究进一步表明，绝大多数基因是处于中等或低等表达丰度的，在单个细胞中含有近1～15个拷贝，而高丰度表达基因的转录产物在单个细胞中最高可达5000个左右拷贝，约占总表达量的25％。这种基因表达能力上的巨大差异成了获得一个具有完整代表性的 cDNA 文库的障碍，其表达量上的巨大差异更为大规模研究增添了困难。对单一组织的 cDNA 文库而言，高拷贝基因序列的大量存在给基因的筛选和鉴定带来不必要的浪费，尤其是在大规模的 EST 测序中。 均一化 cDNA 文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来障碍的有效措施，有利于研究基因的表达和序列分析。现在，在构建均一化的 cDNA 文库中至少有2种主要的观点：一种是基于复性动力学的原理，高丰度的 cDNA 在退火条件下复性的速度快，而低丰度的 cDNA 复性要很长时间，从而可以通过控制复性时间来降低丰度；另一种是基于基因组 DNA 在拷贝数上具有相对均一化的性质，通过 cDNA 与基因组 DNA 饱和杂交而降低在文库中高拷贝存在的 cDNA 的丰度。第一种方法的掌握对技术的要求比较高，对多数人而言需要多次摸索才能找到最适条件；而后一种方法易于掌握，但有研究者根据复性动力学的原理也提出了其不利因素，即采用基因组 DNA 饱和杂交的方法会因为低拷贝的表达基因拷贝数少而无法被杂交上。目前已报到的均一化 cDNA 文库多是根据第二种原理构建的，常用策略有基于 PCR 技术利用 cDNA 多次复性 mRNA-cDNA 杂交等。有研究报道，针对各自选择的高表达靶序列进行分析后，均一化处理后文库的高丰度表达 cDNA 是处理前的0.3％～2.5％，基本满足节约筛选的要求。 均一化 cDNA 文库具有以下4方面的优点：第一，在经济上具有广泛的应用空间，可以节约大量试验成本。第二，增加克隆低丰度 mRNA 的机会，适用于分析各种发育阶段或各种组织的基因表达及突变检测。第三，与原始丰度的 mRNA 拷贝数相对应的 cDNA 探针与均一化的 cDNA 文库作杂交，可以估计出大多数基因的表达水平及发现一些组织特异的基因。而以往的文库构建，忽略了 mRNA 丰度的影响。第四，可以用于遗传图谱的制作和进行大规模的原位杂交，作为优化的文库系统还可以用于大规模的测序或芯片制作等研究。 2.2 差减 cDNA 文库 (Subtractive cDNA library) 差减文库也称扣除文库，使用两种遗传背景相同或大致相同但在个别功能或特性上不同的材料(如不同基因处理细胞系或植物的近等基因系等)提取 mRNA (或反转录后合成 cDNA)，在一定条件下用大大过量不含目的基因的一方作为驱动子( Driver )与含有目的基因的试验方( Tester )进行杂交，选择性的祛除两部分共同基因杂交形成的复合物，往往进行多次的杂交—祛除过程，最后将含有相关目的基因的未杂交部分收集后，并连接到载体形成文库。消减杂交是构建差减 cDNA 文库的核心，差减文库是否构建成功很大程度上决定于差减杂交的效率。差减杂交的方法主要有(1)羟基磷灰石柱层析法 (HAP)；(2)生物素标记、链亲和蛋白结合排除法；(3)限制性内切酶技术相结合的差减方法；(4)差减抑制杂交法 (SSH)；(5)磁珠介导的差减法 (MAST)，其中 SSH 法最为常用。 抑制性消减杂交技术 (Suppression Subtractive Hybridization，SSH) 是 DIATCHENKO 等人于1996年依据消减杂交和抑制 PCR 发展出来的一种分离差异表达基因的新方法，主要用于分离两种细胞或两种组织的细胞中的差异表达基因。它主要是利用抑制 PCR 对差减杂交后丰度一致的目的材料中两端连有不同接头的差异表达片段进行指数扩增，而两端连接上同一接头的同源双链片段仅呈线形扩增，从而达到富集差异表达基因的目的。因此应用该技术能够对两个有差异表达的材料(细胞或组织)高、中、低丰度目的基因都进行有效、快速、简便克隆。近年来已成功应用于植物发育、肿瘤与疾病、以及外界因子诱导组织细胞中相关的应答基因的分析和克隆。 2.3 固相 cDNA 文库构建 cDNA 的固相合成是人们早为熟知的技术，但局限之处 oligo(dT) 与纤维素胶粒或磁珠的结合比较牢固，将 cDNA 洗脱下来时得率不是很高，而且以后的反应步骤也不能都在介质上进行，这可能是该技术应用并不十分广泛的原因。 最近 THOMAS ROEDE 提出了一种新的 cDNA 文库固相合成方法( THOMAS ROEDE，1998)，克服了以前文库构建中存在的缺点，所用的酶和试剂与传统方法完全相同，不同的是 cDNA 的合成和修饰均在固相支持物—磁珠上完成。cDNA 通过一个生物素固定在链霉素偶联的磁珠上，这样在反应过程中就可以简便而迅速的实现酶和缓冲液的更换，因此它将快速与高质量的文库构建结合在一起(构建文库只需1 d)，并且构建的文库适合大多数的研究目的。 固相 cDNA 合成法的主要优点是可以简便 cDNA 合成的操作。在进行缓冲液更换时既没有 cDNA 的丢失之忧，也无其它物质污染之忧。另外，用此方法可以得到真实的代表性文库，它包含有短小的 cDNA，这是因为在克隆之前省去了分级分离的步骤。总之，固相法结合了传统的 cDNA 合成的优点并弥补了其不足。这种方法简便易行，可靠低廉，所建文库高质量，因此它可能会替代目前应用的 cDNA 文库操作方法。 另外，最近发展起来的微量 RNA 的 cDNA 构建，是使用 PCR 技术，在实验室条件下扩增的 mRNA 的 cDNA 量，其 PCR 检测的灵敏度远远大于反转录 PCR(RT-PCR) 法。微量 RNA 的 cDNA PCR 文库的构建可为有关微量活性物质遗传基因的研究提供方便。 3 cDNA 文库应用于分离新基因的方法 发现并分离克隆新基因始终是分子生物学研究的主要任务和目的，虽然 cDNA 文库的用途很多，但是，应用于分离新基因是其最重要的用途。前述的不管是哪种类型的 cDNA 文库，都可以用于分离新基因，只是使用的方法有差异。分离方法主要有两种：第一，对于非全长 cDNA 文库，即不管是经典的 cDNA 文库方法或差减法构建的 cDNA 文库，需要利用已经获得的新 cDNA 序列片段，通过 RACE 方法获得新基因的全长序列。第二，利用全长 cDNA 文库与目的基因片段作为探针的杂交筛选。 3.1 从非全长 cDNA 文库中筛选新基因 3.1.1 RACE 法 RACE 文库即快速扩增 cDNA 末端法( Rapid Amplification of cDNA End，RACE )只需知道 mRNA 内很短的一段序列即可扩增出其 cDNA 的5"(5" RACE )和3"端(3" RACE )。该法的主要特是利用一条根据已知序列设计的特异性引物和一条与 mRNA 的 PolyA (3" RACE )或加至第一链 cDNA 3"端的同聚尾(5" RACE )互补的通用引物，由于同聚体并非良好的 PCR 引物，同时为了便于 RACE 产物的克隆，可向同聚体引物的5"端内加入一内切酶位点。所用的 cDNA 模板可以使用多聚 dT 引物延伸合成(3"，5"-RACE 均可)。当 RACE PCR 产物为复杂的混合物时，可取部分产物作模板，用另一条位于原引物内侧的序列作为引物与通用引物配对进行另一轮 PCR (巢式 PCR )。早在1988年，FROHMAN 等即用此方法成功地获得了4种 mRNA 的5"合3"末端序列。 迄今已有几种改良的 RACE 方法，通过修饰与优化，与最初的 FROHMAN 报道有所不同：(1) BARSON 等采用锁定寡聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸引物“锁定”基因特异性序列的3"末端与其 Poly (A) 尾的连接处，进行第1条 cDNA 链的合成，消除了在合成第1条 cDNA 链时寡聚 (dT) RNA 模板 Poly (A) 尾任何部位结合而带来的影响。(2) EDWARDS 和 TROUTT 小组利用 T4 RNA 连接酶把寡核苷酸连接到单链 cDNA 的5"末端，然后用一个3"末端特异性引物和一个锚定引物就可以直接对锚定连接的 cDNA 进行体外 PCR 扩增和克隆。随后，BERTLING 等又用 DNA 连接酶代替 RNA 连接酶。这些方法都避免了在第2条 cDNA 链内同聚序列区互补而导致截断 cDNA 的产生。(3) MARUYAMA 等提出 cRACE 法，采用的引物为基因特异性的，所以非特异性 PCR 产物基本上不会产生。Clontech 等公司也根据 RACE 法的更新，相继推出了 RACE 的相应试剂盒，为克隆 cDNA 提供了方便的工具。最近 HUANG 等人即用 RACE 试剂盒克隆了一种含有类植物血凝素免疫受体 ITIM。 3.1.2 用 PCR 法从 cDNA 文库中快速克隆基因 通过对文库的筛选或适用简并引物进行 PCR 反应，常常只能获得不完整的 cDNA 片段。为了得到 cDNA 全长，常常要重新筛选文库。重新筛选文库工作量大，RACE 虽然为此提供可方便，但应用该方法需重新提取 mRNA 和反转录。而用 PCR 法从 cDNA 文库中快速克隆基因的方法，只需提取 λ 噬菌体 DNA，按保守序列设计 PCR 引物便可将未知片段进行克隆。特别是在基因的两端变异较大而中间某区域保守的情况下，用 PCR 法很容易获取 cDNA 的全长。同一转录产物，又是存在着不同的拼接方式，通过筛库的办法同时将不同拼接方式的克隆筛选出来可能性较小，而使用 PCR 扩增后，有利于观察到不同的拼接方式。另外，为研究基因在不同组织中表达情况，常根据差异显示法找出特异的 mRNA。 3.2 从全长 cDNA 文库中进行杂交筛选 3.2.1 标记探针 cDNA 文库筛选法 cDNA 文库通常涂抹到母盘培养基上，然后再把这些菌落的样品吸印到硝酸纤维素膜或尼龙膜上；这时加入标记的探针，如果出现杂交信号，那么从母盘上就可以把包含杂交信号的菌落分离、培养出来。以此筛选出阳性克隆，进行序列分析，以获得 cDNA 全长。该方法能避免 PCR 扩增的非特异性扩增或错配，是一种比较准确可靠的 cDNA 克隆方法。主要缺点是克隆过程需要一系列的酶促反应、产率低、费时长、工作量大。该方法适合于表达丰度高的基因的筛选分离。用于做标记探针的 DNA 片段可以是其它生物的基因片段，在这种情况下筛选出来的基因往往是已分离基因的同源基因；如果用于做标记探针的 DNA 片段是通过新分离蛋白质的氨基酸反推设计的 DNA 序列，或者是特异分子标记子 DNA 序列，那么可以筛选得到新功能基因。 3.2.2 反式 PCR 反式 PCR 克隆 cDNA 全长的基因原理是：双链 cDNA 合成后进行尾—尾连接，环化的 cDNA 用位于已知序列内的限制性内切酶酶切位点造成缺口或用 NaOH 处理使之变性，然后用2条基因特异性引物对重新线性化或变性的 cDNA 进行扩增。反式 PCR 的优势在于，它采用了2条基因特异性引物，因此不易产生非特异性扩增。该方法可以快速、高效地扩增 cDNA 或基因组中已知序列两侧位置的片段。 4 小结 随着生物及信息技术的迅速发展，寻找新基因、克隆新基因、进而研究基因的功能已成为功能基因组研究中的一项重要工作。在过去寻找新基因的方法中，以消减杂交、mRNA 差异显示，cDNA 的代表性差异显示分析法、差异消减展示等方法应用最广。这些方法在新基因的发现方面都各有其独特的优势，可寻找出一些差异表达序列，但这些差异表达序列大部分情况都是不完整的基因。目前，比较可行而且应用较多的方法主要还是 cDNA 文库的筛选。一方面 cDNA 文库只代表一定时期一定条件下正在表达的基因，是整个真核基因组中的少部分序列，因此 cDNA 克隆的复杂程度比直接从基因组克隆的要小得多；另一方面由于每个 cDNA 克隆只代表一种 mRNA 序列，因此在基因克隆过程中出现假阳性的概率比较低，所以 cDNA 文库的构建已成为当前分子生物学研究和基因工程操作的基础。本文涉及到的有关 cDNA 文库构建方法，是目前比较常用的，这些方法各有优缺点，研究者应根据自己的实际情况，选择合适的技术，已达到自己预期的目的。

要看测什么和用什么测，第一代测序，大概一个单向（最多1000左右）20多吧，第二代测序，1G的数据量不到1000，还有量大从优，如果你有测序的需求可以私信我。

如果是已知的质粒，才能查到。如果是自己新建的，必须用专业软件，比如Invitrogen的VECTOR NTI 来作图。抗性基因的序列都可以在NCBI上输入基因的名称后查到

格式没有要求。因为你的软件是试用模式，所以导入功能还没有被激活而已。

The Abridged Anchor Primer (AAP),Abridged Universal Amplification Primer (AUAP),Anchor Primer (AP)Universal Amplification Primer (UAP)

提连接后的质粒,酶切使其线性化,与酵母感受态细胞混合电击转化,在含抗生素的平板上筛选,再PCR筛选具体请看这个Invitrogen公司的Easyselect Pichia Expression KitA Manual of Methods for Expression of Recombinant Proteins Using pPICZ and pPICZα in Pichia pastoris

在过去的几十年里,分子生物学家已经开发许多可以用来更快地构建目的DNA序列结构的技术来简化和规范克隆过程。 你熟悉这些克隆技术吗?下面我们来看看这些技术的特点。 1, 限制性酶切与连接法 长期以来，限制酶切与连接法被认为是一种传统的克隆方法。这个方法便宜灵活，可以分为两步过程：酶切和连接。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA片段上并切割双链DNA。DNA连接酶催化两双链DNA片段相邻的5"-磷酸和3"-羟基间形成磷酸二酯键。在分子克隆中，最有用的DNA连接酶是来自T4噬菌体的DNA 连接酶：T4 DNA连接酶。这个方法原理较简单，我不做过多介绍。 2, Gateway 克隆技术 Gateway克隆发明于九十年代末，由walhout[2]等提出，一种通用性的克隆方法，与传统克隆方法相比，Gateway技术的优点是可以不必考虑目的DNA 是否有合适的酶切位点，也不必进行繁琐而费时费力的酶切和连接反应，就可以按确定的方向和读码框快速而准确地将目的基因克隆到各种与Gateway技术兼容的目的载体上。 它利用λ噬菌体与大肠杆菌染色体之间发生的位点特异性的重组整合与切除反应，即LR和BP。BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应，创建一个入门克隆。LR 反应是一个attR入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或多个目的载体。重组位点attB、attP、attL和attR 由噬菌体λ和大肠杆菌编码的酶合剂特异识别。 Invitrogen公司开发了包括运用于原核、酵母、昆虫和哺乳动物等不同宿主的表达载体，大大提高了Gateway技术的适用性。Gateway技术已被广泛用于高通量载体的构建 3, Gibson Assembly 传统的限制性内切酶克隆技术，会在两个片段的结合位置上形成一道“疤”或“缝”，这种瑕疵可能会对DNA片段的行为产生微妙的影响。这一点特别令合成生物学家头疼，因为他们常常要将启动子和终止子这样的DNA片段转变为可预测的独立元件。Now我给大家介绍一下Gibson Assembly，一种无缝克隆方法。 Gibson组装最早由Daniel Gibson博士和他的同事J. Craig Venter在2009年提出[3]。Gibson组装非常适合用于拼接多个线性DNA片段，当然也适合将目的DNA插入载体中。如下图所示，首先，需要在DNA片段的末端加上同源片段（通过PCR法加上）；然后，将这些DNA片段和一种master mix（含有三种酶）混合孵育一个小时就可以了。这种master mix含有三种不同类型的酶：1）一种外切酶，从5"端开始对DNA进行消化，产生长的黏性末端，这样便于与另外的同源末端进行配对结合。2）一种聚合酶，用于修补gap。3）一种DNA连接酶，实现无痕拼接，形成完整的DNA分子。 这个系统最厉害的是，这三种酶都可以在同一个温度下很好的发挥功能，所以整个反应在50摄氏度条件下一个小时就可以完成。一小时后，样品可以直接用于转化。当然Gibson Assembly也有缺陷，这一过程并没有生成限制性酶切位点，因而不方便将拼接片段转移到另一个载体上。建议最好是事先设计好限制性位点。需要注意的是，如果一次性组装超过5个片段，成功率会大大降低。 4, Golden Gate 拼装法 Golden Gate 拼装法主要是依赖于一种II型限制性内切酶(ⅡS 型酶，如 BsaⅠ和 AarⅠ)，这种酶能够在其DNA 识别处的相邻位置进行剪切[4]。如果人为设计识别位点不同的相邻序列，就可利用同种限制酶产生不同的粘性末端，从而一次组装多个片段，这克服了传统多片段组装时限制酶种类的限制。 具体到原理：一般的内切酶分为三种，通常用的是2类的酶，识别特定的回文序列，并从中切开。而golden gate一般用的是3类酶，一般以bsmb 1，Bsa1, Bbs1这三种酶，识别特定的序列，并在特定序列以后隔几个任意的碱基切开，这样子就可以克服2类酶必须要回文序列才能用的缺点，实现片段的连接。 另外，要说的是连接部分，传统的连接酶是T4用的比较多，T4可以连接黏性末端跟平末端，而golden gate里用的是T7，它的特点是只能实现连接黏性末端。因为T7的这一特性，所以在连接的时候可以把片段跟切好的载体混到一种特殊的buffer里，在这里内切酶跟T7都可以保持比较高的活性，通过温度的调节，实现克隆的构建。因为用的是T7，所以不用担心PCR片段自连降低克隆效率，又因为是用的三类酶，可以通过黏性末端的设计，可以一种酶切多个片段，又不用担心这几个片段之间的乱连，来达到分子克隆的目的[5]。 5, TOPO克隆(TA克隆) TOPO克隆使用DNA拓扑异构酶I，该酶同时具有限制酶和连接酶的特性。这种酶在复制期间切割并重新连接DNA，整个克隆过程可以在室温下完成，且仅需5分钟。TOPO克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。 Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶把PCR片断连接到T载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA 拓扑异构酶I。 pCR-TOPO 载体也是一种 T 载体，只是在其 3"末端的突出 T 上共价结合了一个拓扑异构酶 Ⅰ ，当带 3′ 末端的突出 A 的 PCR 产物与该 T 载体互补配对时，拓扑异构酶 Ⅰ 就将该缺口连接起来。 自沃森，克里克在1953年发现DNA双螺旋结构不过60余年，如今的DNA克隆技术却已发展到如此的程度。合成生物学正处在高速发展时期，这些进步技术的进步必将推动生物革命浪潮的到来。你都掌握了吗？ Reference [1] 李华琴,林陈水,张文倩. 不依赖连接反应的高通量克隆方法. 氨基酸和生物资源.2013,35(4):43-46 [2] Walhout A J M, Temple G F, Brasch M A, et al. GATEWAY recombinational cloning: Application to the cloning of large numbers of open reading frames or ORFeomes[J]. Methods in enzymology, 2000, 328: 575-IN7. [3] Gibson, D.G., et al. (2009) Nat. Methods 6, 343-345. [4] Morbitzer R, Elsaesser J, Hausner J, et al. Assembly of custom TALE-type DNA binding domains by modular cloning[J]. Nucleic acids research, 2011, 39(13): 5790-5799. [5] https://www.zhihu.com/question/49568914/answer/116646832

这几天沉迷于BBC的自然系列纪录片 《地球脉动》 ，它分别以地球迥然不同的6大生态区：岛屿、山脉、丛林、沙漠、草原、城市为切入点，向我们展示了地球时刻涌现的神奇脉动！这些美轮美奂的场景也离不开摄影团队的努力，BBC工作人员为了一个特写镜头可以在雪地里待上100多个小时。本文不会介绍这个纪录片的内容毕竟这么伟大的作品任何文字都是多余的，这里只分享我从这个系列纪录片里观察和思考到的。自然的资源是有限的，大部分动物们生存的气候环境非常恶劣，春意盎然的“捕食季”则显得过于短暂。不管是喜马拉雅山脉的金雕，还是平原里的狐狸都要在非捕食季节想办法找到猎物否则很快就会饿死。猎物太过稀少以至于它们不得不花费很多时间来寻觅，可即使运气好找到了食物也会要面对对同类的斗争，只有先赢得这场内部争斗才有资格享受事物。那些失败的动物则要重新开始漫漫的觅食之旅，这种为了食物生死斗争的情况只有到了“捕食季”才能缓解。到了阳光普照的春季，真的可以用万物复苏来形容，植物吐露出绿芽，动物从地下或遥远的地方赶来。一夜间动物、植物都展现出最美的姿态，享受着大自然给予的“短暂天堂”，他们可以平和地享受丰富的食物和水源，此时也是繁衍下一代的最佳时期，那么第一件事就是找到自己的伴侣。鸟类的竞争还不算太激烈，虽然它们仍要努力通过装扮巢穴、唱歌、跳舞等行为来获得异性的关注，但至少它们失败后可以继续尝试。而对于野马、狮子、叶猴等大型动物而言现实更加残酷，它们的交配权是用生命换来的，要想有交配权你必须成为群族的老大，你需要和现在的老大拼个你死我活功。成功者不仅享有族群的所有异性交配权还有食物优先享用权，这种超高的投资回报率让斗争时时刻刻发生着，这也许是自然界的生存常态。即使一些食物链顶端的动物——金雕、狮子等，它们在所生活的地区没有天敌，但大自然的奥妙之处在于它可以通过这些捕食者种族内的竞争来维持动态平衡。 长期这样的竞争虽然很残酷但这也是大自然壮丽的组成部分，是这些动物为了适应残酷的“优胜劣汰”而付出的代价。每个动植物为了赢得竞争的胜利纷纷展现出自己最残忍亦或最美的姿态。为了吸引异性，杰氏巧织雀会找一个平地，把周围所有有色彩的东西去除，这样才能突出自己多彩的特点，这些五彩斑斓的个体汇聚在一起成就了无与伦比的壮丽风景。可如果一切都是随机的，是大自然不断调整自身以维持生态系统稳定性的结果，那无可厚非。可关键是人类建立起城市后对生态的大肆破坏让动物们的生存环境越来越恶劣，可居住面积越来越小，导致动物彼此的竞争越来越残酷！最可怕的是，由于人类对自然宏观环境的破坏导致很多一时间无法适应环境骤变的动物被自然选择所淘汰，毕竟生物进化出一系列适应环境的特征需要好几代通过自然选择出的优质基因，这可能需要几百万的时间。归根结底生物这种非此即彼的零和竞争源于两点：①资源的有限；②自身的能力局限。但人不同，人是世界上唯一能进行复杂抽象思维的生物，我们能够学习并改造自己的能力去适应不同的生活环境。人类的物质资源确实有限但虚拟资源确永无止境，它的极限就是我们人类自身欲望的极限。因此我们应该发挥自己的创造力去找到属于自己的领地而不是陷入毫无意义的零和游戏，毕竟任何竞争都是目光短浅的表象。 每个地域由于其独特的地理位置和气候，为了适应环境每个生物都要进化出独特的生理特征，德拉科蜥蜴的“翅膀”、金雕的“千里眼”等。尤其是那些人迹罕至的地方，那里气候都极其恶劣，白天气温四五十度，晚上又冷到零下十几度，如果靠近海边还要经常承受巨大的风暴。这里生存的动物会演化出独立的生活习惯和生理特性，这样的代价也是巨大的，它们很难适应其他的环境。 岛屿、沙漠、丛林、平原等不同的气候环境都拥有世界上独一无二的专属动物：比如费尔南加多岛的海鬣蜥可以在水里憋气半小时、阿拉伯半岛的努比亚羱羊可以在山峰间跳跃、平原上的薮猫纤长的四肢可以让他们在草原里迅速的跳跃。。。 不仅仅是动物，植物也是这样，草原的降雨非常不平均：一些地方由于降水过于分散无法成林因而形成草原，这些地方的下雨天能够一天带来30厘米的降水量！这么高的降水量远远超过土地的吸收程度，因此大雨过后的草原就会变成“一片汪洋”，很多地表植物都会被水淹死，但杂草却茁壮成长。杂草不断生长来让自己超过水平面沐浴到阳光和空气，也因此草原到处都是一米多高的杂草。 而我们人类也应该从动物适应环境的特点上学到我们每个人都有自己的特点，也存在一个唯一适合你的环境。而我们的努力需要找到自己的这个岛屿，只有在这里你才能发挥自己最大的潜能。 当然任何硬币的正反面，特定环境下的独特能力可以让你最好的适应目前的状况，可一旦环境面临骤变，这些动物也将无法使用变化而被环境淘汰。孤立种群数百万年里都在相对平静的状态下进化，当突然的条件出现的时候，他们会猝不及防，近期灭绝的80%都是岛屿生物。这些突然的变化大部分是由人类所带来，人类携带外来物种进入一个岛屿，由于这些外来物种不存在天敌，初期又有足够多的事物而没必要进行同类斗争，它们对原有生态系统会带来毁灭性的打击！ 天赋这东西在自然界格外重要，自然界强调的是 纯粹的身体天赋 ——体积、速度等。对于那些自身力量很局限的动物想要生存就要学会利用其他生物：在草原生存的红蜂鸟非常擅长于在半空中抓捕昆虫，但它们过小的体积没办法把猎物从草堆里赶出来，他们只能寄希望于其他大型动物路过让昆虫受惊飞出草丛。从鸵鸟到大象都是它们的好运先生，虽然鸵鸟和大象并不喜欢红蜂鸟站在自己的背上，这种行为的本质是属于纯粹的利己主义，毕竟对于大象和鸵鸟而言没有任何益处。 大自然最神奇的是它的共赢合作，海底的珊瑚群是很多鱼类的家园，甚至说珊瑚群的大小和数量决定了海底世界的多样性。很多大型鱼类长途旅行后会到达珊瑚群请小鱼帮助清理身体和嘴巴的残留物，比如大白鲨；不止如此，一些在这里生存的鱼类会找寻自己的合作伙伴来捕食猎物，虾虎鱼和近盲虾就是一堆完美搭档——近盲虾负责挖洞，虾虎鱼躲在洞里等待猎物。 老鹰基本上都是孤胆英雄，但在美洲沙漠的栗翅鹰确实是地球上唯一成群结队的老鹰，因为它们的猎物地松鼠是个头小速度快而且善于利用美洲沙漠遍布的仙人掌森林隐藏自己，以至于单靠“个人力量”无法捕捉，因此它们选择编队飞翔把猎物赶到空旷地带来填饱肚子。 从这些画面我们可以看出所有的合作都是在认清自己优劣势的基础上，机会也是充分发挥自己优势后的结果。小鸟不会笨到自己挥舞翅膀企图把草丛中的昆虫赶出来，他们懂得现在巨人（大象）的肩膀上让自己生活的更容易！在没有外来物的干扰下大自然永远维持着动态平衡，当某一生物数量激增的时候它的天敌数量也会激增从而让它们彼此保持平衡。整个食物链都是这样起此彼伏的平衡状态，除了现在顶端的人类以外，当然地球的伟大的，她给予了我们人类创造资源的能力，如果我们仍然停留在消耗自然资源维持经济发展我们终将付出惨痛的代价，它终究会以人类无法预料的方式毁灭我们。 几乎任何生态系统的生物都有自己的天敌，因此在这里生存需要绝对的运气，从出身开始就需要！在岛屿这一集里有个画面看得我紧张万分，号称年度最佳追逐戏：一群刚破壳而出的海鬣蜥就要开始一场速度决定生命的比赛——它们的捕食者蛇正密切的关注着它们。第一个出壳的蜥蜴由于缺乏危机意识很可能被等待的蛇群吃掉，但之后的蜥蜴由于目睹了前者发生的事情会观察蛇的动态伺机而动，它们的生存几率远大于前者。运气还包括你可能是一窝鸟蛋中唯一没有被吃蛋鸟吃掉的，和创立新企业很像，除了好的领导团队外还需要非常好的运气，即包括经济大趋势也包括很多小的运气。很多企业家的成功往往不是由实力决定，毕竟天才企业家少之又少，大部分创业者实力都差不多（就和刚从蛋里出来的海鬣蜥一样），决定企业生存的就是运气！所以对于很多工作而言，我们还没有发展到比拼天赋的时候，更多的只是比谁更用心更懂得方法而已！ 你也许会想为什么母蜥蜴不守护在蛋旁边这样不就能保护自己孩子了吗？每个动物对待孩子的态度会给我们人类正确的教育理念带来重要的思考。 雪豹是个非常珍奇的动物，一方面由于其数量过于稀有只生活在喜马拉雅雪山里，另一方面由于其行踪飘忽不定即使BBC摄影师也需要借助遥感摄影技术才能一窥真容。曾经我看到有个摄影师为了拍到雪豹的照片在雪山上找寻等待了几个月！ 雪豹属于哺乳类动物，它的孩子很小的时候有妈妈全程陪伴，教它们捕猎。当它们长大以后，雪豹妈妈会离开孩子，让孩子开始自己一个人生活，仿佛这世界自己就没有生过孩子，继续艰苦的为了生存生存不断寻找食物。而小雪豹也要开始重复母亲的生活一个人走下去。 羱羊生活在高山上，稍微走错一步就会跌入悬崖，也因此它们天生具备的蹄子抓地力比世界上最好的登山鞋强百倍。它们经常会为了食物从山顶上跳跃到山谷下，还记得玩《银河历险记3》游戏第一关的时候那个在山谷间跳跃不时发出叫声的就是它了。小羱羊刚出生的时候就要开始觅食之旅，他们不得不为了去山谷开始在悬崖峭壁上跳跃，它们甚至还没有站稳脚步就要开始这种不允许犯任何错的考验。但好在成年羱羊会陪伴孩子左右，当它们害怕不敢跳跃的时候，母亲会亲子示范下如何正确的跳跃，在这样的教育方式下小羱羊会以惊人的速度掌握跳跃能力！最大的困难能带来最迅速的成长，一旦小羱羊度过这段生死之路它们就已经具备了成年羱羊对山谷的掌控能力。这对于他们到达山谷后面对赤狐的追捕极有帮助，它们可以借助优秀的攀爬能力躲过猎杀。这样的做法可以给我们很多思考，羱羊之所以这么做因为它们天生就具备这些天赋，经过正确的训练后就可以变成极强的能力。 我们人类的孩子也都具备某个方面独特的能力，但由于社会生活的多样性找到孩子兴趣和天赋的结合点成了非常困难的事情。 而且要想把兴趣变成能成为自己核心优势的能力需要合适的指引，我们家长或老师该做的是恰到好处的指点而不是从头到尾的灌输，尤其是对内向孩子而言。当孩子选好方向后再利用精进训练精神不断的发展，让他接受一个又一个挑战来磨砺自己的技能和意志力。巨型乌贼给人是震撼的，磁性乌贼把卵产在礁石下面，接下来的几个星期后，所有的成年的雄性和雌性乌贼就会死亡。他们的寿命只有两年，孩子是证明它们留给这个世界唯一的遗产，大约4个月这些卵就会孵化，它们这些新一代将会继承这个海底花园。我有时候在想，会不会是因为它们体型过大生存需要消耗巨量的资源而珊瑚礁的资源相对有限，所以这些成年乌贼选择牺牲自己来成全孩子的发展？但谁也不知道大自然为何会创造这所有的一切？ 这些动物为何要前赴后继的不惜用自己生命换取下一代的成长？而且它们培育下一代的方法看起来又这么残忍？花了这么大代价培育孩子， 可当孩子可以独立生存的时候它们就主动离开孩子不要求一点回报？这是一种什么样的精神觉悟？太多无法理解的事情了，我能想到的唯一解释就是——为了种族基因的延续！ 其实人类空间的扩张可以与动物和谐共生而不是毁灭它们的生存空间。印度的叶猴、纽约的游隼、孟买的野豹等都非常好的适应了城市这个新的生态系统，而这个城市的人也习惯了它们的存在。尤其是印度把叶猴当作神灵哈奴曼的象征经常喂养它们。 建设城市可以更加的与自然合一，意大利米兰的“垂直森林”非常成功的把所有的植物建设在这些绿化建筑纸上，要种植这些数量的树木通常需要占地两万平方米，然而这幢森林只需要十分之一的面积。尤其是新加坡已经把生态系统融入到城市建筑之中，过去45年里新加坡种植了两百万颗树，这个国家的物种也超过了其他所有国家的物种数量。 万物一体，存在即合理，合理即有价值。大自然通过数千年的进化给了很多科技灵感，而现在向大自然学习的呼声达到制高点。科技创业浪潮使得各个科技企业追求构建生态系统，网络的指数利发现爆发都是自然界存在的常态，我们从对自然的观察和理解是上去找寻处理复杂系统的办法。商业，社会学家和经济学家都在像大自然学习，我们更要爱护我们的大自然。

《水调歌头》 奥利给

1.铭记光辉历史 1、《水调歌头·重上井冈山》作者：毛泽东 久有楚轻狂，重上井冈山。千里来寻故地，旧貌变新颜。到处莺歌燕舞，更有潺潺流水，高路入云端。过了黄洋界，险处不须看。 风雷动，旌旗奋，是人寰。三十八年过去，弹指一挥间。可上九天揽月，可下五洋捉鳖，谈笑凯歌还。世上无难事，只要肯登攀。 2、《忆秦娥·娄山关》作者：毛泽东 西风烈，长空雁叫霜晨月。霜晨月，马蹄声碎，喇叭声咽。 雄关漫道真如铁，而今迈步从头越。从头越，苍山如海，残阳如血。 3、《西江月·井岗山》作者：毛泽东 秋山下旌旗在望，山头鼓角相闻。敌军围困万千重，我自威然不动。 早已森严壁垒，更加众志成城。黄洋界上炮声隆，报道敌军宵遁。 2.继承红色基因,争做新时代好少年诗歌 我们是新时代的好少年 我从春天走来 在碧水芳草的呼吸里触摸到美丽中国的气息 我从夏夜走来 在淳朴乡风的熏陶里品味到文明中国的价值 我从秋色走来 在发展奇迹的赞叹里体验到富强中国的崛起 我从冬日走来 在幸福灿烂的笑容里感受到和谐中国的甜蜜 穿越历史的波涛 理想的翅膀，在梦里悄然撑起 祝福的歌声，在胸中激荡 光阴似箭，我们在知识的海洋编织梦想的花园 岁月如歌，我们用最美的音乐给理想谱上金曲 莘莘学子，承载着中华民族的希望 棵棵幼苗，寄托着民族发展的希望 当太阳还不曾升起时 我的心就早已飞到蓝天上 我们是新时代的好少年 热爱祖国、热爱人民、勤奋学习、志存高远 我们是新时代的接班人 品德优良，团结友爱，体魄强健、活泼开朗 我们是新时代的接班人 我们以红领巾的名义时刻准备着 为了最美的中国梦 为了祖国辉煌灿烂的明天 为了实现中华民族的伟大复兴 勇攀高峰、努力向前 3.传承红色基因,继承先烈遗志,激发爱国热情的古诗有哪几首 过零丁洋 【作者】文天祥【朝代】宋 辛苦遭逢起一经，干戈落落四周星。 山河破碎风抛絮，身世飘摇雨打萍。 皇恐滩头说皇恐，零丁洋里叹零丁。 人生自古谁无死，留取丹心照汗青。 出塞 【作者】王昌龄【朝代】唐 秦时明月汉时关，万里长征人未还。 但使龙城飞将在，不教胡马度阴山。 骝马新跨白玉鞍，战罢沙场月色寒。 城头铁鼓声犹震，匣里金刀血未干。 春望 【作者】杜甫【朝代】唐 国破山河在，城春草木深。 感时花溅泪，恨别鸟惊心。 烽火连三月，家书抵万金。 白头搔更短，浑欲不胜簪。 4.放飞中国梦,传承红基因诗歌不超100字 4月6日，滁州市来安县半塔镇中心学校和学校关工委组织学生去爱国主义教育基地皖东烈士陵园举行“放飞中国梦，传承红基因”主题教育活动。 全体学生身着整洁的校服，佩戴鲜艳的红领巾，高举少先队队旗，在老师的带领下，排着整齐的队伍在革命烈士纪念碑前的广场举行集会。全体师生高唱中华人民共和国国歌和中国少年先锋队队歌，向革命英雄纪念碑敬献花篮，学生代表和学校校长分别向全体学生、老师发出号召，希望大家能高举旗帜，继承革命先烈遗志，放飞中国梦，传承红基因，努力学习，争取用优异的成绩来报答伟大的祖国。每一位师生又向革命英雄纪念碑、无名烈士纪念碑和长眠于此的新四军老战士敬献了鲜花，瞻仰了皖东革命纪念馆等。 5.传承红色基因顺口溜有什么 红色基因是一种革命精神的传来承，红色，象征光明，凝聚力量，引领未来。 瑞金、井冈山、遵义、延源安、西柏坡，无一例外地因为“红色”而典藏了历史。 “红色基因”是中国共产党人的精神内核。是中华民族的精神纽带，孕育了永放光芒的抗洪抢险精神、bai抗震救灾精神、北京奥运精神、载人航天精神。鼓舞着一代又一代中华儿du女为了中华民族的伟大复兴而坚强自立、坚持梦想、勇往直前。面对敌对势力的阻zhi挠诋毁，面对自然灾害的汹涌来袭，我们不动摇、dao不懈怠、不折腾，用勤劳和智慧、用坚定与执着，写下了令世人惊叹的“中国故事”。 6.红色基因在我心中手抄报内容都可以写什么 祖国在我心中 在爬满甲骨文的钟鼎之上，读祖国童年的灵性；在布满烽火的长城之上，读祖国青春的豪放；在缀满诗歌与科学的大地之上，读祖国壮年的成熟…… 沿着黄河与长江的源头，漂流而下，过壶口，闯关东，走三峡，奔大海。在河西走廊，华北平原，我看祖国的富饶与辽阔，看祖国千里马般日夜兼程的超越；在长江三角洲、珠江三角洲，看祖国崇高与巍峨，看祖国繁荣的霓虹灯日夜闪烁，灿若银河…… 给我肤色的祖国，给我智慧与胆略的祖国。尽管在乡村，还有辍学孩子渴望的目光；尽管在城镇，还有下岗女工无奈地诉说，但我知道，更有改革的浪潮迭起，冲破旧的观念，旧体制的束缚，迎来新世纪磅礴的日出！ 这是一个除旧立新的祖国。这是一个沸腾上升的祖国；这是一个如日中天的祖国。我的话语多得成一部历史，我的话语多得可组成一片星河，但是说得最多最动情的一句，便是——腾飞吧祖国、祖国吉祥，吉祥祖国。 努力吧！奋斗吧！中国青少年。为我们开辟民族复兴的新蓝天……！

1. 关于红色基因诗句 关于红色基因诗句 1.铭记光辉历史 1、《水调歌头·重上井冈山》作者：毛泽东 久有楚轻狂，重上井冈山。千里来寻故地，旧貌变新颜。到处莺歌燕舞，更有潺潺流水，高路入云端。过了黄洋界，险处不须看。 风雷动，旌旗奋，是人寰。三十八年过去，弹指一挥间。可上九天揽月，可下五洋捉鳖，谈笑凯歌还。世上无难事，只要肯登攀。 2、《忆秦娥·娄山关》作者：毛泽东 西风烈，长空雁叫霜晨月。霜晨月，马蹄声碎，喇叭声咽。 雄关漫道真如铁，而今迈步从头越。从头越，苍山如海，残阳如血。 3、《西江月·井岗山》作者：毛泽东 秋山下旌旗在望，山头鼓角相闻。敌军围困万千重，我自威然不动。 早已森严壁垒，更加众志成城。黄洋界上炮声隆，报道敌军宵遁。 2.继承红色基因,争做新时代好少年诗歌 我们是新时代的好少年 我从春天走来 在碧水芳草的呼吸里触摸到美丽中国的气息 我从夏夜走来 在淳朴乡风的熏陶里品味到文明中国的价值 我从秋色走来 在发展奇迹的赞叹里体验到富强中国的崛起 我从冬日走来 在幸福灿烂的笑容里感受到和谐中国的甜蜜 穿越历史的波涛 理想的翅膀，在梦里悄然撑起 祝福的歌声，在胸中激荡 光阴似箭，我们在知识的海洋编织梦想的花园 岁月如歌，我们用最美的音乐给理想谱上金曲 莘莘学子，承载着中华民族的希望 棵棵幼苗，寄托着民族发展的希望 当太阳还不曾升起时 我的心就早已飞到蓝天上 我们是新时代的好少年 热爱祖国、热爱人民、勤奋学习、志存高远 我们是新时代的接班人 品德优良，团结友爱，体魄强健、活泼开朗 我们是新时代的接班人 我们以红领巾的名义时刻准备着 为了最美的中国梦 为了祖国辉煌灿烂的明天 为了实现中华民族的伟大复兴 勇攀高峰、努力向前 3.传承红色基因,继承先烈遗志,激发爱国热情的古诗有哪几首 过零丁洋 【作者】文天祥【朝代】宋 辛苦遭逢起一经，干戈落落四周星。 山河破碎风抛絮，身世飘摇雨打萍。 皇恐滩头说皇恐，零丁洋里叹零丁。 人生自古谁无死，留取丹心照汗青。 出塞 【作者】王昌龄【朝代】唐 秦时明月汉时关，万里长征人未还。 但使龙城飞将在，不教胡马度阴山。 骝马新跨白玉鞍，战罢沙场月色寒。 城头铁鼓声犹震，匣里金刀血未干。 春望 【作者】杜甫【朝代】唐 国破山河在，城春草木深。 感时花溅泪，恨别鸟惊心。 烽火连三月，家书抵万金。 白头搔更短，浑欲不胜簪。 4.放飞中国梦,传承红基因诗歌不超100字 4月6日，滁州市来安县半塔镇中心学校和学校关工委组织学生去爱国主义教育基地皖东烈士陵园举行“放飞中国梦，传承红基因”主题教育活动。 全体学生身着整洁的校服，佩戴鲜艳的红领巾，高举少先队队旗，在老师的带领下，排着整齐的队伍在革命烈士纪念碑前的广场举行集会。全体师生高唱中华人民共和国国歌和中国少年先锋队队歌，向革命英雄纪念碑敬献花篮，学生代表和学校校长分别向全体学生、老师发出号召，希望大家能高举旗帜，继承革命先烈遗志，放飞中国梦，传承红基因，努力学习，争取用优异的成绩来报答伟大的祖国。每一位师生又向革命英雄纪念碑、无名烈士纪念碑和长眠于此的新四军老战士敬献了鲜花，瞻仰了皖东革命纪念馆等。 5.传承红色基因顺口溜有什么 红色基因是一种革命精神的传来承，红色，象征光明，凝聚力量，引领未来。 瑞金、井冈山、遵义、延源安、西柏坡，无一例外地因为“红色”而典藏了历史。 “红色基因”是中国共产党人的精神内核。是中华民族的精神纽带，孕育了永放光芒的抗洪抢险精神、bai抗震救灾精神、北京奥运精神、载人航天精神。鼓舞着一代又一代中华儿du女为了中华民族的伟大复兴而坚强自立、坚持梦想、勇往直前。面对敌对势力的阻zhi挠诋毁，面对自然灾害的汹涌来袭，我们不动摇、dao不懈怠、不折腾，用勤劳和智慧、用坚定与执着，写下了令世人惊叹的“中国故事”。 6.红色基因在我心中手抄报内容都可以写什么 祖国在我心中 在爬满甲骨文的钟鼎之上，读祖国童年的灵性；在布满烽火的长城之上，读祖国青春的豪放；在缀满诗歌与科学的大地之上，读祖国壮年的成熟…… 沿着黄河与长江的源头，漂流而下，过壶口，闯关东，走三峡，奔大海。在河西走廊，华北平原，我看祖国的富饶与辽阔，看祖国千里马般日夜兼程的超越；在长江三角洲、珠江三角洲，看祖国崇高与巍峨，看祖国繁荣的霓虹灯日夜闪烁，灿若银河…… 给我肤色的祖国，给我智慧与胆略的祖国。尽管在乡村，还有辍学孩子渴望的目光；尽管在城镇，还有下岗女工无奈地诉说，但我知道，更有改革的浪潮迭起，冲破旧的观念，旧体制的束缚，迎来新世纪磅礴的日出！ 这是一个除旧立新的祖国。这是一个沸腾上升的祖国；这是一个如日中天的祖国。我的话语多得成一部历史，我的话语多得可组成一片星河，但是说得最多最动情的一句，便是——腾飞吧祖国、祖国吉祥，吉祥祖国。 努力吧！奋斗吧！中国青少年。为我们开辟民族复兴的新蓝天……！

我还记得是李连杰主演是不？

定义：启动子是参与特定基因转录及其调控的DNA序列。包含核心启动子区域和调控区域。核心启动子区域产生基础水平的转录，调控区域能够对不同的环境条件作出应答，对基因的表达水平做出相应的调节。 区域：启动子的范围非常大，可以包含转录起始位点上游2000bp，有些特定基因的转录区内部也存在着转录因子的结合位点，因此也属于启动子范围。 这项搜寻要从UCSC基因组浏览器开始，网址为以编码pendrin (PDS)的基因为例来说明上述问题。PDS与耳蜗的异常发育、感觉神经性听力下降以及弥散性甲状腺增大（甲状腺肿）有关。 　　进入UCSC的主页后，在Organism的下拉菜单中选择Human，然后点击Browser。使用者现在到了人类基因组浏览器入口。本例的搜寻很简单：在assembly的下拉菜单中选择Dec. 2001，在position框中键入pendrin，然后点击Submit。返回的页面结果显示一个已知的基因和两个mRNA序列。继续点击mRNA序列的登录号AF030880，出现包含这个mRNA区域的图解概要。为了获得这个区域更清晰的图像，点击紧靠zoom out的1.5X按钮。最后点击页面中部的reset all按钮，使各个路径的设置恢复默认状态。 　　然而，对于本例的搜寻目的来说，默认设置不是理想的设置。按照视图利用页面底部的Track Controls按纽，将一些路径设置为hide模式（即不显示），其他设置为dense模式（所有资料密集在一条直线上）；另一些路径设置为full模式（每个特征有一个分开的线条，最多达300）。在考虑这些路径内究竟存在那些资料之前，对这些路径的内容和表现做一个简要的讨论是必要的，许多这些讨论是由外界提供给UCSC的。下面是对基因预测方法的更进一步讨论，这些信息也可以在其他地方找到。 　　对于Known Genes（已知基因）和预测的基因路径来说，一般的惯例是以一个高的垂直线或块状表示每个编码外显子，以短的垂直线或块状表示5′端和3′端非翻译区。 　　起连接作用的内含子以非常细的线条表示。翻译的方向由沿着细线的箭头指示。 　　Known Genes来自LocusLink内的mRNA参照序列，已经利用BLAT程序将这些序列与基因组序列进行比对排列。 　　Acembly Gene Predictions With Alt-splicing路径是利用Acembly程序将人类mRNA和EST序列数据与人类基因组序列进行比对排列而来的。Acembly程序试图找到mRNA与基因组序列的最好的比对排列以及判断选择性剪接模型。假如有多于1个的基因模型具有统计学意义，则它们都全部显示出来。有关Acembly的更多信息可以在NCBI的网站找到（http://www.ncbi.nih.gov/IEB/Research/Acembly/）。 　　Ensembl Gene Predictions路径由Ensembl提供。Ensembl基因通过许多方法来预测，包括与已知mRNA和蛋白质进行同源性比较，ab initio基因预测使用GENSCAN和基因预测HMMs。 http://www.ebi.ac.uk/ensembl/ 　　Fgenesh++ Gene Predictions路径通过寻找基因的结构特征来预测基因内部的外显子，例如剪接位点的给位和受位的结构特征，利用一种动态的程序算法推定编码区域和推定外显子5′端和3′端的内含子区域；这个方法也考虑到蛋白质相似性的资料。 　　Genscan Gene Predictions路径由GENSCAN方法衍生而来，通过这个方法，可以确定内含子、外显子、启动子区域和poly(A)信号。此时，这个方法并不期望查询的序列只出现1个基因，因此可以对部分基因或被基因之间的DNA分隔的多个基因进行准确的预测。 　　Human mRNAs from Genbank路径显示基因库的人类mRNAs与基因组序列的比对排列。 　　Spliced ESTs和Human EST路径显示来自GenBank的ESTs序列与基因组的序列对齐比较。由于ESTs通常代表了转录基因的片断，一个EST很有可能对应于某个外显子区。 　　最后，Repeating Elements by RepeatMasker这个路径显示的是重复元件，例如散在的或长或短的核元素(SINEs和LINEs)，长末端重复序列(LTRs)和低复杂性区域(http://repeatmasker.genome.washington.edu/cgi-bin/RepeatMasker)。一般来说，在将基因预测方法应用于核苷酸序列之前，需要去掉或掩饰这些成分。 　　回到视图显示的例子，可以看到大多数路径返回了几乎同样的基因预测结果。作为一个规则，通过多种方法预测的外显子提高了预测的正确率而不会出现“假阳性”结果。多数方法显示3′端非翻译区，以左侧大而短的块状表示。Acembly路径显示除了全长序列产物（如这个部分第3条线所示）之外还有3个可能的选择性剪接，其它大多数路径显示与此预测结果相符。Genscan路径从左、右方向往远处延伸：GENSCAN可以被用于预测多个基因。 　　尽管这些图解概要很有用，然而研究者更需要与这些垂直线或块状相对应的序列。以此为例，用Fgenesh++预测作为获得原始序列数据的基础，但不管选择哪个路径其步骤都是一样的。点击标有Fgenesh++ Gene Predictions的路径，出现的是一个描述预测的概要页面。 　　序列的区域与pendrin基因相似（从这个例子一开始就已经知道了）。给出了序列的大小及序列开始和结束的预测，并显示预测是以负链为基础的。想要获得序列，点击Genomic Sequence。使用者将被带到一个标题为Get Genomic Sequence Near Gene的查询页面，在这个页面上，可以获得转录物、编码区、启动子或转录物加启动子的序列。 　　点击Transcript返回的页面显示完整的转录子，外显子以大写字母表示。 　　点击Coding Region Only得到的是编码区,外显子以大写字母表示。 　　点击Transcript + Promoter，返回的页面显示的是在上述选择Transcript所获序列的5′端添加了启动子序列，以大写字母表示外显子。启动子的长度显示在文本框内。 　　点击Promoter返回的页面正好是启动子区。

先查阅相关文献，然后得到序列号。 在上NCBI主页，输入序列号就可以得到具体序列了。

找几个近源的物种的该基因clustal，找出几个长度大于20的保守区，在这几个保守区域拉几条引物，放到primer5里评一下分，找一对分数高的引物，产物长度200-1000bp都可以，扩去就行了。如果找不到完全一致的引物，就在不一样的那个碱基上设计成简并的。如果知道要找的基因的名字是可以很快的找到要找的序列，在基因名称检索界面输入就好。 因为提交NCBI上的基因组都有预测CDS的，上面都标出每个CDS的可能功能及相应蛋白或酶的名字 如果不知道基因名字，可以通过做比对来判断，可以尝试一下用BIOED

利用生信工具进行目的基因的引物设计，使用了NCBI进行筛选与设计引物，使用 idtdna对筛选出的DNA进行检查。本文分享了如何筛选出高质量的基因引物，帮助想通过生信进行引物设计的学生、从业者找出合适的基因，毕竟购买引物也比较烧钱，避免设计出的基因质量偏低。 1.查询目的基因： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/?term=zbed3 备注：这里需要注意的是，要找到合适的目的基因！如果找智人，一般会是NM开头 2.选择其中一个数据连接： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001329564.2 ，选择Pick Primers 3.进入： 4.根据一些实验经验调节一些关键参数： 1）Primer Parameters- PCR product size ：设置为75-300 2）Exon/intron selection- Exon junction span ：设置必须跨越外显子（Primer must span an exon-exon junction），避免污染 3） Advanced parameters - Primer Parameters：GC建议在40%-60%之间 5.点击Get Primers 6.跳转页面 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/primertool.cgi?ctg_time=1561727583&job_key=v7VgKRZ5G9E86w3uAI4p3HqVOO5XhiPzVg 7.挑选合适的primer pair，其中product length最好是在150附近（不是绝对） 8.注册idtdna进行dna分析， https://sg.idtdna.com/calc/analyzer 9.抽取其中一个primer pair Products on intended target product length = 146 Forward primer 1 ACAGCAACACAGAAGACCGT 20 Template 604 .................... 623 Reverse primer 1 CCAGTAAGCTTGCCATTGAGC 21 Template 749 ..................... 729 10.使用idtdna进行筛选 举例：正旋：ACAGCAACACAGAAGACCGT，反旋：CCAGTAAGCTTGCCATTGAGC 以此使用正旋与反旋填写入sequence，如图使用正旋，点击self-dimer，如果序列结果中，basePairs都小于10，那么这个引物就算比较好的了，不是自旋产生的。 11.接着正反计算，输入正反旋，年级HETERO-DIMER,最后点击CALCULATE，如果序列结果中，basePairs都小于10，那么这个引物就算比较好的了，不是自旋产生的。

　　在NCBI网站，选择OMIM（PUBMED下面），输入基因名称，你会获得许多关于该基因的信息，其中就包括染色体定位。

病毒分好多种，有的是DNA病毒，有的是RNA病毒。而且从序列本身来说，RNA和DNA序列没有本质的不同。

你是想要做blast吧？左边有这一项，是做基因比对的如果你想提交新测序的基因，得具体看看说明，没做过

GI genebank收录号 NW 我觉得是NCBI确定的mRNA表达序列 XP 软件预测的Protein XM 软件预测的miRNA表达序列 我的意见 仅供参考 但我认为多半是 因为在XM后面都有解释http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=handbook.section.GenBank_ASMTo produce RefSeq records, NCBI culls the best available information on each molecule and updates the records as more information emerges. A commonly used analogy is that if GenBank is akin to the primary research literature, RefSeq is akin to the review literature.

你问题补充的那些是该基因编码的蛋白质在不同数据库中的ID号码。/note是编码蛋白的名称。/gene_synonym表示该蛋白的其他别名。

GI编号是NCBI网站的所有序列相关数据库的流水编号,其最有用的特征就是唯一性.对于每一条递交给NCBI的序列,都会付给一个编号,而且这个编号对应的序列不可更改.这个编号对应这个唯一的一条序列,类似与我们用的身份证号.因此,利用GI在NCBI中查询时,你只要把数据库（蛋白质/核苷酸）选对,只要输入这个号码就可以把相应的序列调出来.值得一提的是登录号（Accession Number）.每一个递交的序列,除了获得一个GI号,还会被赋予一个登录号.递交序列的作者利用登录号对序列进行修改和完善.每一次修改的序列会获得一个新的GI号,登录号不变,但会追加一个流水的版本号.因此,GI号和带版本号的登录号都唯一定位到唯一条序列.

1.整理序列信息：包括病原采集地、病原的寄主、寄主症状、采集人等基本信息；还有序列分析结果，包括序列全长大小，开放阅读框（ORF）的长度、位置及特定ORF序列翻译的氨基酸序列等基因水平的信息，这对于接下来的快速准确提交序列及提交成功后为全世界其他作者准确全面分享此类信息很重要；2.登陆BackIt站点，注意到页面右边的“Sign in to use BankIt”标签，点击登录进入。如果没有账号就注册一个（注意，此账号与NCBI账号不通用）。附 注册账号步骤，需要填写的项目为：Title：你的职位或头衔First name：名last name：姓login：登陆名Affiliation：所属机构地址，一般填写自己学校地址E-mail Address：通信电邮，填完后会发随机密码到此电邮地址，使用随机密码进行登陆，当然登陆后可对密码进行重置；3.登陆BankIt，看到如下图所示界面，此时NCBI会自动分配一个SubmissionID，但不是最终的提交序列ID：接下来共有九个步骤（好事多磨）：3.1 Contact Information填写个人姓名、机构、电邮等资料集联系方式，如果错误该页会有ERROR提示直到正确填写，填写完毕点击CONTINUE；3.2 Reference填写参考作者信息（Reference author）及序列相关信息，比如该序列是否对应有文章，如单纯提交序列则只需选择Unpublished即可（Reference title项可以填入“Direct Submission”），有的话就填写已发表文章的信息（卷、期等），接下来会问你该序列的提交者是否是序列的发现者等信息，填写完毕点击CONTINUE；※提示：新版的BankIt中，接下来会有“Sequencing Technology”一项，呈现有454、Illumina、SOLiD及Other等测序方法选择，目前为“Sanger dideoxy sequencing”即一代测序方法测序，并且所提交的序列均为“assembled sequences”，目前的“assembly program”为“Lasergene，version 7.0”。3.3 Nucleotide包括三个小项：Submission Release Date（期望NCBI什么时候公布你的序列）、16S rRNA submissions（该序列是否为16S rRNA）、Sequence(s) and Definition Line(s)（会提示问你该序列是否为全长genomic DNA、线状或环状等、序列长度，需要复制序列或提交FASTA格式文件），如若序列长度与复制序列或FASTA文件长度不同则会有提示，需要重新提交序列，依次选择即可。一般选择“Immediately after Processing”，“非16S rRNA”，“genomic DNA”，“circular”，“complete”等信息，然后将全序列粘贴到下方的空格中，别忘了在上方写上总核苷酸数。完后审查看有没有错误，继续CONTINUE；3.4 Organism填写Organism（病原物）的名字，即序列公开显示时候的标题（如MYVYNV分离物序列“Malvastrum yellow vein Yunnan virus isolate SC226-5, complete genome"），点击CONTINUE后会出现自动检索项目，核对后（有可能会进行选择）继续CONTINUE；3.5 Submission Category提交范畴，是否直接提交或通过第三方Annotation提交（不是太清楚什么意思，可能指的是从EMBL和DDBJ中导入的数据吧），一般为直接提交，如下图示选择Original，继续CONTINUE；3.6 Source modifier选择该病原物的种类，比如质粒、线粒体等；Source modifier下拉菜单及后面的Value设置：进一步选择该病原物获取信息，比如Country、Host、Clone、Collection date、Strain/Isolate等，至少三项（Organelle/Location为细胞器/位置，该项可以不填写），否则该项不通过，尽量信息全面真实，需要继续添加则点击Add，填写完毕查看下方已填写表格进行信息核对，然后CONTINUE；3.7 PrimersPCR引物项目，可选项目，不想填写可CONTINUE；3.8 Features（※）该步骤重要！将用到之前准备的内容，比如序列内ORFs等信息的填写，并根据之前的选项来填写该步骤，比如需要将DNA翻译为氨基酸序列并进行复制粘贴等，该步操作只需将之前准备信息录入即可，比较耗时；点击下方“ADD”键，页面将切换为↓在这里我们需要录入更多与该序列有关的信息，最主要的就是录入之前已经整理好的序列里面的开放阅读框（ORF）信息：Genetic Code设置为”Standard“，5"和3"都勾选上，Protein Name/Protein Description项都填写，将特定区域（ORF）的核苷酸序列翻译为氨基酸序列后（除去末端的终止子）复制到下方的”Amino Acid Sequence“框中，依次录入即可。在这里越详细越好，具体参照实际操作；3.9 Review and Correct对已填写信息进行复核及提交，并被告知在2个工作日之内会收到NCBI电邮，需要进一步对序列进行审查核对；4.至此，基本序列提交已经完工，剩下的事情就是等待审核，大概两个工作日后会收到来自NCBI工作人员的电邮，如有问题会通知你进一步修改信息直到完全无误，包括以后的接受序列号，即你的序列会出现在NCBI里面世界上唯一的一个界面里。

KEGG 网站更容易，输入基因名，点击othorlog genes查看下拉框即可

当已知基因名或ID时，可通过NCBI搜索基因序列。首先登陆NCBI官网，在下拉菜单选择gene，搜索基因名或ID。 NCBI： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 这里选取一个调节根系发育的基因AT5G61350进行示例。在生物信息学中，FASTA格式（又称为Pearson格式）是一种基于文本的、用于表示核苷酸序列或氨基酸序列的格式。 FASTA文件以序列表示和序列作为一个基本单元，各行记录信息如下： 第一行是由大于号">"开头的任意文字说明，用于序列标记，为了保证后续分析软件能够区分每条序列，单个序列的标识必须具有唯一性； 从第二行开始为序列本身，只允许使用既定的核苷酸或氨基酸编码符号。通常核苷酸符号大小写均可，而氨基酸常用大写字母。 具体字母代表的含义如下： 核苷酸序列： 氨基酸序列： 查看fasta，左侧为CDS序列，右侧方框内为序列所在范围，24667873——24670749。 通常认为启动子在基因上游2kb范围内，这个基因的方向从左至右，因此启动子范围就在基因左侧起始位置加2kb，24665873——24667872。如果基因方向是从右向左，那么启动子区域就是右侧位置加上2Kb。 FASTA格式参考： https://www.jianshu.com/p/cd232d34c408

如何在ncbi中寻找编码某一个蛋白的基因序列GI编号是NCBI网站的所有序列相关数据库的流水编号,其最有用的特征就是唯一性.对于每一条递交给NCBI的序列,都会付给一个编号,而且这个编号对应的序列不可更改.这个编号对应这个唯一的一条序列,类似与我们用的身份证号.因此,利用GI在NCBI中查询时,你只要把数据库（蛋白质/核苷酸）选对,只要输入这个号码就可以把相应的序列调出来.值得一提的是登录号（Accession Number）.每一个递交的序列,除了获得一个GI号,还会被赋予一个登录号.递交序列的作者利用登录号对序列进行修改和完善.每一次修改的序列会获得一个新的GI号,登录号不变,但会追加一个流水的版本号.因此,GI号和带版本号的登录号都唯一定位到唯一条序列.搜索输入序列号查询疾病编码查询序列号免费查询系统基因序列在哪里查询序列号查询入口2020查序列号查询

许多期刊在文章发表之前需要在文章中有序列的登录号，并且要求你在文章发表时，序列可以被读者索取。NCBI的GenBank提供了两个投递方式：1、在线投递－BankIt，特点是比较方便。2、本地投递文件生成程序——Sequin。目前NCBI seqin有MAC, PC和UNIX不同版本。其输出文件需要你通过电子发给NCBI.另外，上面所述一般适用于研究单个或多个功能基因的情况。如果大规模的测序如EST、 STS和GSS序列分别有专门的投递途径。另外，提醒你的两个问题：1、对你所投序列所属物种分类（拉丁名）要有所了解，这通常是出错的地方（seqin）2、在你投递序列到发表文章之间，要注意NCBI发给你的电子，它会询问你在什么时间将序列公布。具体细节你可以浏览参考资料所指连接。

现到http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene然后输入ABL[sym] ，代表你是在查找ABL为缩写符号的基因就会得到http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/?term=ABL[sym]第一个就是人类ABL基因，再点开，得到http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/25该基因位于第9号染色体130713881..130887675。下拉到第三栏灰色条“Genomic regions, transcripts, and products”，点击偏右侧的，Go to nucleotide: 最后那个GenBank得到http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_000009.12?report=genbank&from=130713881&to=130887675向下拉，你会看到 gene 1..173795就是说该基因全长然后是mRNA, 你会看到有11段数值，这就是该基因11个外显子的位置。同理，CDs，就是11个外显子的编码区域了。具体的序列，你在下面根据数值段就可以得到了。

如何在NCBI上找某个基因的mRNA序列1 打开NCBI主页2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

上面有注释的啊~或者用fasta格式看，在前几行

在NCBI 上查找基因，挺多人都在问这个。当然，对于经常泡NCBI 的人来说，查找基因是入门的、基础的，对高手来讲根本不是个问题。但新手就不同了。当然了，直到现在，虽说已经会了一些，但在NCBI 查找基因，虽说是基础但也是挺复杂的今天要讲的。今天用“苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase，PAL)”来作为例子，物种是豆科的。1，打开NCBI，选择核苷酸（Nucleotide）数据库，填上Phenylalanine ammonia-lyase，点击GO，搜索2，我们来看结果，总共有1022 个，结果太多了，有时候刚好你要的结果在第一页的话，那就好办。不是的话，你慢慢的找，实在不是办法。特别是网络不好时，上NCBI 又很慢，的确是一种折磨。3，这个时候我们可以再想办法缩少范围，比方你要找的是豆科的，我们来大豆（soybean）来作例子。在搜索时加上soybean，结果将会大大减少。4，这时候结果已经一目了然，这里需要再介绍另外一种搜索的方法。这种方法是比较精确的。首先在taxonomy 数据库查到soybean 的 taxonomy ID，再回到Nucleotide 数据库，搜索” Phenylalanine ammonia-lyase txid3847 “，txid 是taxonomy ID 是缩写，3847 是大豆soybean 的taxonomy ID。这样子，将搜索范围锁定在大豆。5，看下图，出来的结果都是大豆的，这时基本上就大功告成了。找到了大豆苯丙氨酸解氨酶的序列6，进入序列页面，默认是GenBank 格式，你也可以选择Fasta 格式，一般都是保存为Fasta格式。

事实上，在NCBI有很多种办法可以确定某个基因的外显子或者内含子，当然还有UTR区域。今天我们来介绍NCBI的其中一个使用软件Splign来在NCBI上找到一个基因的外显子和内含子。操作步骤如下：1.在Gene数据库，填入基因名HNF-4，我一般的话习惯叫Symbol，每个基因都有个Symbol，即基因名。2.我们来mouse的HNF4基因来作为今天的例子。Symbol会随着版本的升级而变化，当然，以前使用过的基因名也会保留着。而Symbol会对应一个GeneID，无论Symbol如何改变，GeneID是唯一的。这个ID是非常重要的。在这个页面，我们将看到HNF4基因的结构图，从图中给出的信息可以看出，HNF4基因有10个外显子。蓝色部分是UTR区，显示在5"端有一小段序列和3"端有一大段序列是UTR。3.在HNF-4基因的RefSeq区域，我们将可以看到这个基因的参考序列，有mRNA和基因组的。这个区域不一定每个基因都有。NM_开头的序列都是参考序列。4.接下来我们进入Splign的online界面，你可以通过mRNA和基因组的Accession或是它们Fasta格式的序列进行对比，要注意基因组的序列不要太长。推荐直接在下拉框选项里选择，一般常用的生物都在。5.结果一目了然，10个外显子，而且还显示mRNA以及对应的基因组比对的序列，并且还可以知道某个外显子在mRNA序列上的区域。就连UTR区的序列也知道了。

进入NCBI主页，把ALL DATA换成PUBMEB.然后输入关键词就可以了。还有很多可以查文献的网站。比如Wiley Online Library.生物秀等

事实上，在NCBI有很多种办法可以确定某个基因的外显子或者内含子，当然还有UTR区域。今天我们来介绍NCBI的其中一个使用软件Splign来在NCBI上找到一个基因的外显子和内含子。操作步骤如下：1.在Gene数据库，填入基因名HNF-4，我一般的话习惯叫Symbol，每个基因都有个Symbol，即基因名。2.我们来mouse的HNF4基因来作为今天的例子。Symbol会随着版本的升级而变化，当然，以前使用过的基因名也会保留着。而Symbol会对应一个GeneID，无论Symbol如何改变，GeneID是唯一的。这个ID是非常重要的。在这个页面，我们将看到HNF4基因的结构图，从图中给出的信息可以看出，HNF4基因有10个外显子。蓝色部分是UTR区，显示在5"端有一小段序列和3"端有一大段序列是UTR。3.在HNF-4基因的RefSeq区域，我们将可以看到这个基因的参考序列，有mRNA和基因组的。这个区域不一定每个基因都有。NM_开头的序列都是参考序列。4.接下来我们进入Splign的online界面，你可以通过mRNA和基因组的Accession或是它们Fasta格式的序列进行对比，要注意基因组的序列不要太长。推荐直接在下拉框选项里选择，一般常用的生物都在。5.结果一目了然，10个外显子，而且还显示mRNA以及对应的基因组比对的序列，并且还可以知道某个外显子在mRNA序列上的区域。就连UTR区的序列也知道了。

工具/材料 NCBI官网 01 首先，我们打开NCBI官网页面，在页面上方搜索框中，选择要下载的基因序列类别，这里我们需要选择“Nucleotide”选项。 02 接下来，我们就需要输入具体的名称了，这里我输入的是Kinase，代表一种酶，然后点击“search”按钮，即可出现搜索结果。 03 点击进入所需要的搜索结果，在页面中左侧，点击“FASTA”按钮。 04 在接下来打开的页面右侧，点击“Send to”选项，然后选择“File”，点击“Creat File”按钮。 05 最后，我们即可调用浏览器下载该基因序列文件了，选择好文件存储位置之后，点击“下载”按钮。

事实上，在NCBI有很多种办法可以确定某个基因的外显子或者内含子，当然还有UTR区域。今天我们来介绍NCBI的其中一个使用软件Splign来在NCBI上找到一个基因的外显子和内含子。操作步骤如下：1.在Gene数据库，填入基因名HNF-4，我一般的话习惯叫Symbol，每个基因都有个Symbol，即基因名。2.我们来mouse的HNF4基因来作为今天的例子。Symbol会随着版本的升级而变化，当然，以前使用过的基因名也会保留着。而Symbol会对应一个GeneID，无论Symbol如何改变，GeneID是唯一的。这个ID是非常重要的。在这个页面，我们将看到HNF4基因的结构图，从图中给出的信息可以看出，HNF4基因有10个外显子。蓝色部分是UTR区，显示在5"端有一小段序列和3"端有一大段序列是UTR。3.在HNF-4基因的RefSeq区域，我们将可以看到这个基因的参考序列，有mRNA和基因组的。这个区域不一定每个基因都有。NM_开头的序列都是参考序列。4.接下来我们进入Splign的online界面，你可以通过mRNA和基因组的Accession或是它们Fasta格式的序列进行对比，要注意基因组的序列不要太长。推荐直接在下拉框选项里选择，一般常用的生物都在。5.结果一目了然，10个外显子，而且还显示mRNA以及对应的基因组比对的序列，并且还可以知道某个外显子在mRNA序列上的区域。就连UTR区的序列也知道了。

1 打开NCBI主页2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

1、打开NCBI百度搜索键入“NCBI”，点击“搜索”，第一个就是官方主页，点击打开。2、关键字查找以H9亚型流感病毒HA基因下载为例，说明详细过程。既然要下载基因序列，需要在栏目内找到“Nucleotide”（核苷酸），搜索栏内填入“AvianinfluenzavirusH9HA”，点击“search”。3、添加限定词点击搜索后，我们看到页面中间显示了很多关于“AvianinfluenzavirusH9HA”的基因序列，如果其中的一个符合你的要求，就可以下载。如何不符合的要求，可以继续在搜索条内添加限定，比如添加“2010”，即2010年分离到的病毒。3、序列选定找到目标基因序列后，我们要将其下载下来。以给出第一个序列为例，点击序列前面的“小方格”，将其选定。4、下载序列选定后，点击页面右上角的“Sendto”，选择“file”，再将format选择为“FASTA”格式，点击“Createfile”，将序列下载到自定的文件夹内。5、用DNAStar打开下载的序列为FASTA格式，需要使用相关的软件打开，小编经常使用的是DNAStar中的Editseq，这个功能还是很强大的。

在NCBI主页上方search栏左边有一个database选择框，点击下拉三角形选择nucleotide（如图红框）在search栏输入基因名搜索即可。 以人的orc1基因为例， 在搜索结果中选择mRNA和complete cds序列的结果都可以，如下 点击进入序列文件查看详情，以...首先打开NCBI网站首页,然后在search一栏中选择nucleotide,在框中输入你要的基因序列名称,点击search就行.然后会出来很多结果,因为很多基因是同名的,或是一个基因在不同种属中不一样,寻找你要的基因序列就行了.注意的是,要确定你的基因名称是否是统一的,我以前就是找一个基因费了很多事,之后发现是自己没有用通用的.找到基因序列,蛋白序列就很容易了,因为结果中会显示该基因的蛋白序列.你也可以在开始search的时候选protein,找到的就是蛋白序列了.多尝试就好了,其实很简单,英文不错的话,更简单.要有耐心.

NCBI里选择gene，输入基因名称或代码在列表中选择你的基因点击genbank **************************************************************如果你对这个答案有什么疑问，请追问，另外如果你觉得我的回答对你有所帮助，请千万别忘记采纳哟！***************************************************************

一般上面的时间是序列提交到NCBI上面的时间比如你搜索Escherichia coli吧在genomes里面会出现：1 Genome: genome sequencing projects by organism点1进去，出现：Reference genomes: [see all organisms] Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655 Escherichia coli O157:H7 str. Sakai Escherichia coli IAI39 Escherichia coli UMN026 Escherichia coli O83:H1 str. NRG 857C Escherichia coli O104:H4 str. 2011C-3493点开第一个，找到RefSeq下面的NC_000913.2：Type Name RefSeq INSDC Size (Mb) GC% Protein rRNA tRNA Other RNA Gene PseudogeneChr - NC_000913.2 U00096.2 4.64 50.8 4,145 22 89 65 4,497 181 再进去，找到COMMENT，里面一般会说是什么时候提交的，如下：COMMENT REVIEWED REFSEQ: This record has been curated by NCBI staff. The reference sequence is identical to U00096. On Jun 24, 2004 this sequence version replaced gi:16127994.

blast比对，不过你最好找专业的软件比较比较好，比如DNAman，omiga等等

1 打开NCBI主页2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

1、在NCBI上查找基因的mRNA序列。2、Messenger RNA (mRNA）——信使核糖核酸信使核糖核酸携带遗传信息，在蛋白质合成时充当模板的RNA。信使RNA从脱氧核糖核酸（DNA）转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸（RNA）。它在核糖体上作为蛋白质合成的模板，决定肽链的氨基酸排列顺序。mRNA存在于原核生物和真核生物的细胞质及真核细胞的某些细胞器（如线粒体和叶绿体）中。

GI编号是NCBI网站的所有序列相关数据库的流水编号,其最有用的特征就是唯一性.对于每一条递交给NCBI的序列,都会付给一个编号,而且这个编号对应的序列不可更改.这个编号对应这个唯一的一条序列,类似与我们用的身份证号.因此,利用GI在NCBI中查询时,你只要把数据库（蛋白质/核苷酸）选对,只要输入这个号码就可以把相应的序列调出来.值得一提的是登录号（Accession Number）.每一个递交的序列,除了获得一个GI号,还会被赋予一个登录号.递交序列的作者利用登录号对序列进行修改和完善.每一次修改的序列会获得一个新的GI号,登录号不变,但会追加一个流水的版本号.因此,GI号和带版本号的登录号都唯一定位到唯一条序列.

在NCBI 上查找基因，挺多人都在问这个。当然，对于经常泡NCBI 的人来说，查找基因是入门的、基础的，对高手来讲根本不是个问题。但新手就不同了。当然了，直到现在，虽说已经会了一些，但在NCBI 查找基因，虽说是基础但也是挺复杂的今天要讲的。今天用“苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase，PAL)”来作为例子，物种是豆科的。1，打开NCBI，选择核苷酸（Nucleotide）数据库，填上Phenylalanine ammonia-lyase，点击GO，搜索2，我们来看结果，总共有1022 个，结果太多了，有时候刚好你要的结果在第一页的话，那就好办。不是的话，你慢慢的找，实在不是办法。特别是网络不好时，上NCBI 又很慢，的确是一种折磨。3，这个时候我们可以再想办法缩少范围，比方你要找的是豆科的，我们来大豆（soybean）来作例子。在搜索时加上soybean，结果将会大大减少。4，这时候结果已经一目了然，这里需要再介绍另外一种搜索的方法。这种方法是比较精确的。首先在taxonomy 数据库查到soybean 的 taxonomy ID，再回到Nucleotide 数据库，搜索” Phenylalanine ammonia-lyase txid3847 “，txid 是taxonomy ID 是缩写，3847 是大豆soybean 的taxonomy ID。这样子，将搜索范围锁定在大豆。5，看下图，出来的结果都是大豆的，这时基本上就大功告成了。找到了大豆苯丙氨酸解氨酶的序列6，进入序列页面，默认是GenBank 格式，你也可以选择Fasta 格式，一般都是保存为Fasta格式。

在NCBI主页上方search栏左边有一个database选择框,点击下拉三角形选择nucleotide（如图红框）在search栏输入基因名搜索即可.以人的orc1基因为例,在搜索结果中选择mRNA和completecds序列的结果都可以,如下点击进入序...

事实上，在NCBI有很多种办法可以确定某个基因的外显子或者内含子，当然还有UTR区域。今天我们来介绍NCBI的其中一个使用软件Splign来在NCBI上找到一个基因的外显子和内含子。操作步骤如下：1.在Gene数据库，填入基因名HNF-4，我一般的话习惯叫Symbol，每个基因都有个Symbol，即基因名。2.我们来mouse的HNF4基因来作为今天的例子。Symbol会随着版本的升级而变化，当然，以前使用过的基因名也会保留着。而Symbol会对应一个GeneID，无论Symbol如何改变，GeneID是唯一的。这个ID是非常重要的。在这个页面，我们将看到HNF4基因的结构图，从图中给出的信息可以看出，HNF4基因有10个外显子。蓝色部分是UTR区，显示在5"端有一小段序列和3"端有一大段序列是UTR。3.在HNF-4基因的RefSeq区域，我们将可以看到这个基因的参考序列，有mRNA和基因组的。这个区域不一定每个基因都有。NM_开头的序列都是参考序列。4.接下来我们进入Splign的online界面，你可以通过mRNA和基因组的Accession或是它们Fasta格式的序列进行对比，要注意基因组的序列不要太长。推荐直接在下拉框选项里选择，一般常用的生物都在。5.结果一目了然，10个外显子，而且还显示mRNA以及对应的基因组比对的序列，并且还可以知道某个外显子在mRNA序列上的区域。就连UTR区的序列也知道了。

在NCBI里查询某个基因的信息时，我们经常能看到这样的注释： 网站会告诉你关于这个基因的信息最近的更新时间。那么我就在想，那之前的记录还可以查看吗？如果有的话，应该去哪儿查询呢？ 这项技能非常的easy，NCBI官方有一个网页就是介绍如何查询sequence revision history: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/sequencerevisionhistory/ 现在举个例子： 比如上面截图里显示的基因，首先我们先要找到它的Accesion ID。点击页面右侧的RefSeq： 这时会自动跳转到该基因所有已知的isoforms，比如这个基因，就有3个isoforms（见下图），选择你想要查看的isoform，这里我就用第一个作为例子。实际上这个NM和NP开头的数字就分别是核酸和蛋白的ACCESSION，但这里要注意的是，你要使用小数点前面的内容来进行查找。比如这里，如果你想查看该基因核酸序列所有历史版本，你需要的ACCESSION ID是NM_001252313： 重点来了，现在复制这个网址（如果你要查询其他基因，把链接里的问号前ACCESSION ID改一下就行）： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001252313?report=girevhist 这时页面出现： 这是该基因自从被NCBI收录以来所有的更新记录，可以看到最近的一次更新是今年的6月22日。你可以任意查看以往的记录。对于这个基因来说，一共有几十次更新记录。在页面的最下方，还会告诉你这个基因第一次被收录的时间（哇塞好巧，这日期恰好是我生日）： 在这个页面里，你可以任选两个版本进行比较，比如这里我想比较最新的和3月16日更新的版本的差别，这里你可以选择比较FASTA或者选择blast，FASTA比较就是只告诉你基因序列有没有区别，但是不会显示细节： 如果你选择BLAST，再点击Compare，小窗口中会出现该两个版本里基因序列的blast比较结果： 另外如果你随便点击一个早期的历史版本，其中会告诉你这个版本的信息是什么时候更新的，并且会提示你这个记录已经有更新，还有最新版本的链接：

1 打开NCBI主页2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

工具/材料 NCBI官网 首先，我们打开NCBI官网页面，在页面上方搜索框中，选择要下载的基因序列类别，这里我们需要选择“Nucleotide”选项。 接下来，我们就需要输入具体的名称了，这里我输入的是Kinase，代表一种酶，然后点击“search”按钮，即可出现搜索结果。 点击进入所需要的搜索结果，在页面中左侧，点击“FASTA”按钮。 在接下来打开的页面右侧，点击“Send to”选项，然后选择“File”，点击“Creat File”按钮。 最后，我们即可调用浏览器下载该基因序列文件了，选择好文件存储位置之后，点击“下载”按钮。

详细资料见百度百科：　　转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgenic technology）。人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically modified organism，简称GMO）。 　　Genetically Modified——转基因，简称GM。是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。植物转基因　　植物转基因是基因组中含有外源基因的植物。它可通过原生质体融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程技术获得，有可能改变植物的某些遗传特性，培育高产、优质、抗病毒、抗虫、抗寒、抗旱、抗涝、抗盐碱、抗除草剂等的作物新品种。而且可用转基因植物或离体培养的细胞，来生产外源基因的表达产物，如人的生长素、胰岛素、干扰素、白介素2、表皮生长因子、乙型肝炎疫苗等基因已在转基因植物中得到表达。动物转基因　　动物转基因就是基因组中含有外源基因的动物。它是按照预先的设计，通过细胞融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术，有可能育成转基因动物。通过生长素基因、多产基因、促卵素基因、高泌乳量基因、瘦肉型基因、角蛋白基因、抗寄生虫基因、抗病毒基因等基因转移，可能育成生长周期短，产仔、生蛋多和泌乳量高，转基因超级鼠比普通老鼠大约一倍。生产的肉类、皮毛品质与加工性能好，并具有抗病性，已在牛、羊、猪、鸡、鱼等家养动物中取得一定成果。 　　但由于转基因动物受遗传镶嵌性和杂合性的影响，其有性生殖后代变异较大，难以形成稳定遗传的转基因品系。因而，尝试从受体动物细胞中分离出线粒体，以外源基因对其进行离体转化，再将转基因线粒体导入受精卵，所发育成的转基因动物雌性个体外培养的卵细胞与任一雄性个体交配或体外人工授精，由于线粒体的细胞质遗传，其有性后代可能全都是转基因个体。转基因食品　　跨国食品公司，通过基因改造技术(转基因技术)，制造出基因改造食品（转基因食品），因其安全性未确定，尚有争议。通常的做法是，向农作物体的遗传细胞核内的DNA螺旋结构内注入特定转基因物质，使之具有特定的遗传特性。通常是注入转Bt基因和转Ht基因。转Bt基因，使农作物具有抗病虫害的特性。转Ht基因，使农作物具有抗除草剂的特性。 　　将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology）。人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically modified organism，简称GMO）。1974年，波兰遗传学家斯吉巴尔斯基（Waclaw Szybalski）称基因重组技术为合成生物学概念，1978年，诺贝尔生医奖颁给发现DNA 限制酶的纳森斯（Daniel Nathans）、亚伯（Werner Arber）与史密斯（Hamilton Smith）时，斯吉巴尔斯基在《基因》期刊中写道：限制酶将带领我们进入合成生物学的新时代。转基因技术，包括外源基因的克隆、表达载体、受体细胞，以及转基因途径等，外源基因的人工合成技术、基因调控网络的人工设计发展，导致了21世纪的转基因技术将走向转基因系统生物技术 -2000年国际上重新提出合成生物学概念，并定义为基于系统生物学原理的基因工程与转基因技术。几种常用的植物转基因方法　　遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再生植株可分成两大类，第一类需要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类方法不需要通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管通道法，花粉管通道法是中国科学家提出的。1．农杆菌介导转化法　　农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 　　农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，自从技术瓶颈被打破之后，农杆菌介导转化在单子叶植物中也得到了广泛应用，其中水稻已经被当作模式植物进行研究。2．花粉管通道法　　在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由中国学者周光宇提出，中国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。3. 基因枪法　　利用火药爆炸或高压气体加速（这一加速设备被称为基因枪），将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比，基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建也相对简单，因此也是目前转基因研究中应用较为广泛的一种方法。常用的动物转基因技术1．核显微注射法　　核显微注射法是动物转基因技术中最常用的方法。它是在显微镜下将外源基因注射到受精卵细胞的原核内，注射的外源基因与胚胎基因组融合，然后进行体外培养，最后移植到受体母畜子宫内发育，这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段。-这种方法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成的表达结果的不确定性、动物利用率低等，在反刍动物还存在着繁殖周期长，有较强的时间限制、需要大量的供体和受体动物等特点。 　　详细步骤：在显微镜下，用一根极细的玻璃针（直径1-2微米）直接将DNA注射到胚胎的细胞核内，再把注射过DNA的胚胎移植到动物体内，使之发育成正常的幼仔。用这种方法生产的动物约有十分之一是整合外源基因的转基因动物。2．精子介导的基因转移　　精子介导的基因转移是把精子作适当处理后，使其具有携带外源基因的能力。然后，用携带有外源基因的精 　　子给发情母畜授精。在母畜所生的后代中，就有一定比例的动物是整合外源基因的转基因动物。同显微注射方法相比，精子介导的基因转移有两个优点：首先是它的成本很低，只有显微注射法成本的1/10。其次，由于它不涉及对动物进行处理，因此，可以用生产牛群或羊群进行实验，以保证每次实验都能够获得成功。3．核移植转基因法　　体细胞核移植是近年来新出现的一种转基因技术。该方法是先把外源基因与供体细胞在培养基中培养，使外源基因整合到供体细胞上，然后将供体细胞细胞核移植到受体细胞——去核卵母细胞，构成重建胚，再把其移植到假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到转基因的克隆动物。4．体细胞核移植法　　先在体外培养的体细胞中进行基因导入，筛选获得带转基因的细胞。然后，将带转基因体细胞核移植到去掉细胞核的卵细胞中，生产重构胚胎。重构胚胎经移植到母体中，产生的仔畜百分之百是转基因动物。转基因食品（Genetically Modified Foods，GMF）是利用现代分子生物技术，将某些生物的基因转移到其他物种中去，改造生物的遗传物质，使其在形状、营养品质、消费品质等方面向人们所需要的目标转变。以转基因生物为直接食品或为原料加工生产的食品就是“转基因食品”。　　在中国，中国在国际上的生物技术、转基因方面水平不低，除了美国、日本、德国，欧洲的一些发达国家以外，中国在发展中国家可能首屈一指，而且在某些方面也达到了国际先进水平。中国总共有 50 多种植物，包括粮食作物，在做转基因的开发研究，在动物方面也有，鱼的转基因也在做。从 1997 年到 2001 年底，农业部一共受理了转基因生物的申请有 587 项，申请进行环境释放、商业化生产。最后批准环境释放的有 415 项，虽然环境释放可以种，但是只允许很小面积种，而且要有隔离措施。批准商业化生产的有 46 项，商业化生产没有隔离措施，可以随便种，主要是 6 种。一种是棉花。就是抗虫，转 Bt 基因的抗虫棉；还有番茄，抗黄瓜花叶病毒的番茄，还有一种晚熟的番茄；也是抗黄瓜花叶病毒矮牵牛的甜椒；还有一些兽用的饲料添加剂，还有微生物的农用产品。 　　现在我们中国的市场上，真正国产的转基因番茄也就是在湖北或者在广东可能有少量种植，据说不超过 1 万亩。甜椒可能也就限制在辽宁范围，有一点，因为可能还没有通过种子审定，因此商业化生产十分有限。最主要的转基因产品是棉花，棉花不是吃的，不是食品，但是棉花的种子可以榨油。我们做过调查，河北省很多农民是用棉花籽榨油吃的，也是食品，因此他们食用转基因的棉花油。 　　转基因的棉花种的面积比较大。从 1996 年开始种，到 2001 年，棉花种植面积的 30% 以上都是转基因的，转基因棉花当中，有 70% 是美国孟山都公司提供的种子。还有 30% 是我们中国的研究所，中国农科院棉花所，还有很多省里的农科院培育出来的转基因的棉花品种， 30% 这个量还是相当大。所以中国成为世界四大种植转基因生物的国家之一，主要是转基因棉花的分量比较大。 　　中国市场上没有多少转基因的食品，我们自己生产的没有什么，但是不是大家没吃。实际上我们每天基本上跟转基因的食品不离开的。主要原因是我们进口了转基因的食品，进口转基因的大豆比较多。转基因的大豆榨油制成了油，制成了豆制品，因此我们逃不掉的，是要吃的。比如 2001 年进口的 1394 万吨大豆当中，美国有 572 万吨，阿根廷有 502 万吨，这两个国家是主要的。美国当年 63% 是转基因的大豆，阿根廷 90% 以上是转基因的，所以这些进口大豆，实际上大部分都是转基因的。 2002 年，中国国务院的条例发布以后， 2002 年比 2001 就有一些变化。我们进口巴西的大豆增加了 23.7% ，巴西基本上是非转基因的，进口美国的大豆减少了 19% ，进口阿根廷的大豆减少了 44.7% ，在总体上减少了进口 18.7% 。 　　为什么中国还进口转基因大豆？中国现在加入了 WTO ，国际经济全球化，哪儿的东西便宜，哪儿的东西比哪儿的东西要好，他就买哪的。我们东北大豆在市场上，美国大豆也在市场上。过去我们东北大豆当时的价格比美国大豆要高 20% ，但是我们大豆的含油量不如美国大豆，美国大豆含油量达到 21% ，我们只有 18% ，所以榨油商要用美国的大豆，出油率高。但是，这个情况现在有些变化。农业部这两年推广高油大豆，我们的含油量也达到 21% 了。而且我们自己的大豆是非转基因大豆，现在日本人、南韩人都要吃非转基因大豆。我们的大豆叫有机大豆，或者非转基因大豆，现在我们大豆的出口增加了。大连的大豆期货交易所，原来专门交易的是美国的转基因大豆，现在交易是的中国非转基因大豆。

转基因的所谓优点都将成为永恒的缺点，并无法纠正。 胡伯的信写于2011年2月11日，在美国农业部批准不加限制可以种植抗草甘磷转基因苜蓿之前。然而，他的信并没有引起重视。鉴于美国农业部对“这种新的生物体可能是已经造成的重大损害的罪魁祸首”的警告置若罔闻，不得不将它公布出来。 胡伯博士给美国农业部长来信的全文如下，感谢陈一文先生将原信翻译成中文： 尊敬的维尔萨克部长： 由植物和动物高级科学家组成的小组最近提请我注意他们在电子显微镜下发现的一种病原体，它们看来对植物与动物的健康，以及可能亦对人类健康，造成显着影响。基于对有关数据的审查，这种新近发现的生物体在抗孟山都草甘磷“终结者”除草剂（RR）转基因大豆和玉米中普遍、非常严重，且浓度非常高，提出可能与抗草甘磷转基因作物的基因或更可能与草甘膦除草剂的存在联系。这种微生物看来是科学上的新发现！ 这是高度敏感的信息，可能导致美国大豆和玉米出口市场的崩溃，并造成国内食品和饲料供应重大混乱。另一方面，这种新的生物体可能是已经造成的重大损害的罪魁祸首（见下文）。我和我的同事，因此将我们的调查加快谨慎进行，同时寻求美国农业部和其他机构协助查明病原体的来源、发病率、影响以及补救措施。 我们在这个早期阶段及时向美国农业部通知这些调查结果，特别是由于您延迟决定对抗草甘磷转基因苜蓿的批准。当然，如果孟山都草甘磷“终结者”除草剂转基因（RR）的基因，或者草甘膦除草剂（Roundup）本身是这一病原体的推动因素或协作因素，那么这样的批准可能是一场灾难。 根据目前的证据，这个时候合理的行动是将放松管制推迟到有足够数据证明这种病原体与孟山都抗草甘膦除草剂转基因作物种植系统无关，如果确实无关的话。 在过去的40年里，我一直在专业的和军事机构担任科学家，它们对防备包括细菌战和疾病暴发在内的自然和人为生物威胁组织有关的评估。根据我的这种经验，我相信面对的来自这种病原体的威胁们是独特的以及高风险状态的。通俗地说，它应该被视为紧急情况。 这种前所未知的生物体，只有在电子显微镜（放大36,000 X倍）下才能够见到，它的尺寸近似等于一个中等大小的病毒。它能够自我复制，似乎是一种微型--真菌类--生物。如果这样的话，这将是被识别出来的第一个这样的显微真菌菌。有强烈的证据表明，这种传染性的病原体既导致植物的疾病，也会导致哺乳动物的疾病，这极其罕见。

就是通过基因工程技术将一些不属于某一物种的基因导入到该物种中，并在该物种中表达，这样的含有外源基因的食品称为转基因食品！ 就是基因给改变了，与

shi 是的转基因食物1楼正解

基因工程微生物(genetically engineered microorganism, GEM)生态学的研究已成为微生物分子生态学的一项主要研究内容之一.随着分子标记和分子生物学检测手段的引入,传统的微生物生态学研究被注入了新的活力,在分子水平上探讨基因工程微生物与环境及环境中土著生物之间的关系已成为可能.基因工程微生物生态学是一门内容涉及分子生物学、微生物学、生态学等诸多学科的新型交叉边缘学科.本文提出加紧进行转基因生物生态学和转基因生物的风险评价的研究工作,建立适合中国国情的检测手段和评价标准,有助于我国基因工程微生物生态学的健康发展.

ShouldGenetically Modified Food be Stopped?Along with the increased commercialization and planting of a rangeof genetically modified (GM) crops globally, the safety of genetically modifiedcrops and genetically modified food (GMF) has become a hot topic and majorpublic concern.In recent years, the issue of GMF has become one of thehottest debating topics around the society.So, should GMF be stopped?Some think that GMF should not be stopped.GM food is newwith both good prospects for growth and potential threats.Likewise, GMtechnology can allow crops to become resistant to drought and pests as well asproduce a higher yield, whereas a vast majority of people hold that GMF can causediseases which are immune to antibiotics.Moreover, some experts declarethat people who consume to such food stand high chances of gettingcancer.As the long-term effects on health are unknown, many people preferto stay away from GM food.As a scientific researcher, I think GMF should not bestopped.GM technology is one of cores of the knowledge economy in the21th century.GMF is the inevitable product as the result of humanproductivity and GM technology progress.We pin on GM technology heavy hopesthat it will better our life quality and get rid of poverty andhunger.And we cherish the hopes that scientists can do more researchesabout its health effects, and producers can mark GM food to ensure food safetyand consumers" benefits.

Genetic engineering is a set of technologies used to change the genetic makeup of cells, including the transfer of genes within and across species boundaries to produce improved or novel organisms. New DNA may be inserted in the host genome by first isolating and copying the genetic material of interest using molecular cloning methods to generate a DNA sequence, or by synthesizing the DNA, and then inserting this construct into the host organism. Genes may be removed, or "knocked out", using a nuclease. Gene targeting is a different technique that uses homologous recombination to change an endogenous gene, and can be used to delete a gene, remove exons, add a gene, or introduce point mutations.Genetic engineering techniques have been applied in numerous fields including research, agriculture, industrial biotechnology, and medicine. Enzymes used in laundry detergent and medicines such as insulin and human growth hormone are now manufactured in GM cells, experimental GM cell lines and GM animals such as mice or zebrafish are being used for research purposes, and genetically modified crops have been commercialized.

你好，朋友。很高兴能为你解答。Hi！Everyone！Today. I will show you something about GM foods. The full name that GM foods is Genetically Modified Foods. This is a hot topic.let"s start to the present situation of GM foods . According to researchers.People who feel intimidated by math may be less able to understand messages about genetically modified foods and other health-related information.Parrott Distinguished Professor of Communication Arts and Sciences and Health Policy and Administration. said :"My goal is to help people make informed decisions and to do that, they need to understand and comprehend messages,Food policy, in particular, interests me because having enough food to feed people is a really big issue that we"re facing." Scientists argue that genetically modified foods are safe for consumption and overregulated.the overregulation of GM crops actually hurts the environment, reduces global health and burdens the consumer.(switch)Farmers have witnessed the advantages of GM crops firsthand through increases in their yields and profit, and decreases in their labor, energy consumption, pesticide use and greenhouse gas emissions. Farmers growing genetically modified rice in field trials in China report higher crop yields, reduced pesticide use and fewer pesticide-related health problems, according to a study by researchers in China and at Rutgers University and the University of California, Davis.Measured on a per hectare (2.471 acres) basis, the quantity and cost of pesticides applied to the conventional rice was 8 to 10 times as high as that applied to the insect-resistant genetically modified rice. "What we found was when genes for enhancing the amount of antioxidants and vitamin C in fresh produce were transferred by intragenic methods, consumers are willing to pay 25 percent more than for the plain product (with no enhancements). That is a sizable increase," said Huffman, distinguished professor of economics.（switch）The basic idea is that when consumers saw that the intragenic produce had elevated healthful attributes, they were willing to pay more for them.But ,Consumers were not willing to pay more if those enhancements were introduced through transgenic methods. In my opinion, GM food have good prospects. To eliminate the misunderstanding on GM food, scientists should strengthen communication with people. With simple and easy to understand words, tell us that GM food is not so terrible. One day, GM food will benefit mankind.

应该是transgenic technology。将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology）。人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically modified organism，简称GMO）。

geneticallymodifiedorganism基因修饰生物，也缩写为GMO在国外的超市或媒体上，特指转基因食品时，通常用GMO-food

Solving World Hunger Problem(加上Problem) with (by 改为with)GM FoodAs a solution to world hunger, genetically modified food does(do改为does) have some advantages as is shown above . However, it can also (also放在can之后) engender some adverse effects, （thus 删去，让后面的raising。。。做状语）probably raising some controversial problems. To begin with, the genetically modified(加上mofified)food could cause a great deal of potential health concerns. Firstly, the GM food, which could be toxic or give(get改为give，give rise to“导致，造，或用lead to) rise to allergens , is（are 改为is） not safe enough. Even scientists could not prove that（whether改为that。主句已否定，此处不宜再用whether）it is（they are改为it is）totally safe. If(As long as 改为If) people are allergic to（with改为to） GM food, or are(此处的系动词，是承接上文“If people are...”的，故不能用be） poisoned by them, the world hunger would be decreased,and other problems and trouble would emerge.(此句有语病，改为两个并列句) And new toxins or allergens may move （be moved改为主动式） into initial previous safe food（foods改为food） as a result of engineering food crops. In this situation, the nutritional value of the food（foods改为food）may decrease( decrease可作不及物动词，用主动即可). Secondly, once nutrient composition of GM food(foods改为food) change, the structure of people"s nutrition will be likely to lose balance . Thirdly, as British scientific researchers have（has改为have） proved ‘GM DNA could find a way into human gut bacteria"(The guardian,2002), and people（humans改为people） who eat the genetically modified (加上modified)food （foods改为food） could （省去make people，因为前面已有people做主语） be resistant to antibiotic medicines(Living Earth,1997),which could also （could放在also之前） lead to many health concerns. Besides,there is a new analysis of this industry nearly 20-year record in the United States.As is shown from the pie chart, which is about the Contribution of Genetic Engineering to U.S. Corn Yield Increase, genetic engineering only accounts for 14 percent of the increase , their analysis shows that genetic engineering did not increase the yields of crops significant. In other words（the other word改为other words） , reducing world hunger could not totally count on genetical engineering ,genetically modified crops. 又细细改了一次，希望你满意

基因（遗传因子）是遗传变异的主要物质。基因支持着生命的基本构造和性能。储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡过程的全部信息。环境和遗传的互相依赖，演绎着生命的繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、衰、病、老、死等一切生命现象都与基因有关。它也是决定生命健康的内在因素。因此，基因具有双重属性：物质性（存在方式）和信息性（根本属性）。

Genetically modified foods are foods that make specific changes to the DNA of organisms through genetic engineering .翻译为:转基因食品是通过基因工程对生物体的DNA进行特定改变的食品。如果我的回答对您有帮助望您能采纳，谢谢。

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GeneticallyModified——转基因，简称GM。是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变缉工光继叱荒癸维含哩动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。

本课您将学到：“缩写”知多少，年代和年龄的笼统表示法，强调句式 　　基因被称作“遗传密码”，它决定着生物的一切特征。人类的伟大也许就在于敢于挑战自然规律，就连基因也要改变！转基因食品（GM foods），你敢吃吗？ 　　GM stands for（代表） “genetically modified”. This means that the genes in food plants are altered（更改、改变）. Genetic modification is done to make the plants resistant（抵抗的） to insects and chemicals, or to improve quality. 　　很久以来，人们就试图控制植物的生长速度，可知道人们掌握了基因技术，这个目标才得以实现，直到： 　　It was only in the 1990s that scientists（科学家） learned how to control（控制） the genes in food plants. 　　转基因食品是研究出来了，可人们不敢吃，因为： 　　Many people around the world think these new methods（方法） create food that can be harmful to human health and to the Earth"s environment. 　　没办法，政府只好采取措施，在转基因食品上贴上标签（put labels on），以便人们自行选购。 　　你相信这些科学家的研究成果吗？你会选购带有GM标签的食品吗？唉，原来科技进步也是一件“让人欢喜让人忧”的事呢！ 　　「读书笔记」 　　stand for“代表”，英文中许多常用的专有名词都用缩写的形式来表示，便于记忆也便于称呼，就像GM就代表“基因转换”，我们常听说的还有WTO stands for “World Trade Organization”. WTO代表“世界贸易组织”。ABC stands for “American Born Chinese”. ABC代表“美籍华人”。 　　Gene是“基因”，形容词genetic/genetical“基因的、遗传的”，如：a genetic disease遗传性疾病。Genetically在形容词的基础上加上ly变成副词，意思是“从基因方面;从遗传学角度”。Modify意思是“修改”，通常指故意的改动，modified是过去分词，意思是“被改动的”，把这两个词连起来，意思就是“在基因方面被改动的”，这样的食物就是我们所说的“转基因食品”。后面的modification是modify的名词形式。 　　修改基因（Genetic modification）有两方面的作用，一是为了使植物对昆虫和农药产生抵抗力（to make the plants resistant to insects and chemicals），或者提高它们的质量（or to improve quality）。注意resistant的用法，它是一个形容词，意思是“抵抗的”，后面要和to连用，如：The floor of this room is resistant to fire. 这个房间的地板是防火的。 　　第二段的In the 1990s指的是从1990年到1999年间，数字后面加s表示复数，翻译过来就是“二十世纪九十年代”。同样的道理，“十九世纪七十年代”就是1870s.此外，在说到人的年岁时，也可以用类似方法表示，in her forties指的是在她40到49岁期间，也就是“在她四十多岁的时候”，如果要讲得更细致些，比如40出头或快到50了，就可以在岁数前面加上early或late.比如：My mother is in her late forties. 我妈妈快到五十了。We are all in our early twenties. 我们都是二十出头。 　　That在这里可不是什么从句的引导词，而是和前面的it was连用，表示强调it was和that之间的部分，这句话要强调的就是时间，“直至二十世纪九十年代，科学家们才懂得如何控制农作物中的基因”。 　　around=all over意思是“到处”。世界各地的许多人不过一部分人（Many people around the world）对此不理解，人们有那些顾虑呢？Be harmful to sth.“对……有害”，一个常识大家都知道：Smoking is harmful to lungs. 吸烟对肺部有害。这还是有形的伤害，更可怕的是无形的或慢性的伤害，所以人们就担心，吃了这些食物会不会损害身体健康（be harmful to human health）？会不会污染环境? （And做连接词，省略了be harmful，直接接 to the Earth"s environment）。 　　「语法小教室」 　　在交际中，为了使自己的思想为读者或听众所理解，人们往往突出重要内容，这就要用到我们强调重点内容。在说话的时候，我们可以用重音来突出重点，可写在纸上的文字怎么办呢？就需要使用强调句式了。今天，为大家介绍其中的一种： 　　It is/was + 强调部分 + that/who + 其他部分 　　这个句子用于强调句子的主语、宾语和状语，如果强调的部分是时间、地点或事物，用that，如果是人，可用that/who（如强调的部分是宾语，也可用whom）。 　　举几个例子来看看： 　　Julia buys her vegetables in the market. 朱利亚在市场上买菜。 　　强调主语：It is Julia that/who buys vegetables in the market.是朱利亚去市场买的菜。（不是别人去的。） 　　强调宾语：It is her vegetables that Julia buys in the market. 朱利亚去市场买的是菜。（她买的是菜，不是别的。） 　　强调状语：It is in the market that Julia buys her vegetables. 朱利亚是在市场上买的菜。（她去的是市场，不是别的地方。） 　　如果要强调的主语或宾语是复数，系动词要不要跟着变成are/were呢？回答是否定的。强调句式中，be只能是单数形式的is/was，一定要记住哦！

可以写出食物对人们的需求，以及自己对食物的一些要求。

这就是关于转基因食品优缺点的作文：Genetically modified food is science brings us the product, now of cultivated land area of less, genetically modified food will play more and more important role, if the use of transgenic technology can solve the world food shortage problem, it is not quite good? Genetically modified food in the world now is a kind of new things, new things, people need time to promote its accept also need some time, we cannot put new things in the cradle, a stick to it from the beginning, that cannot be eaten of genetically modified food. You think we don"t of hybrid rice is a genetically modified food? But we can open it from? And if they can pass the soybeans genetically modified technique using atmospheric nitrogen inside his produces fertilizers to other crops gene transfer in the mankind, it is. Everything is both sides, especially technology, science and technology is a double-edged sword? Genetically modified food has its disadvantages, like some worry, because it will not change, will destroy genetic evolution, etc. Genetically modified food and nutrition inside it isn"t like that, the propaganda of people worry is understandable, after accepting a new things take time. But we also should see the benefits of them, I think as time slowly past, genetically modified foods will be accepted by people. 希望会对你有帮助吧,谢谢!

实际上现在现在所说的转基因食品是广义的，包括所有对基因人为改动过的食品，不一定是转入外源基因

genetically modified organism 基因修饰生物，也缩写为GMO 在国外的超市或媒体上，特指转基因食品时，通常用GMO-food

转基因的英文是"Genetically Modified Organisms"，缩写为"GMOs"。转基因技术是一种通过改变生物体的基因组，将外源基因导入到目标生物体中，从而使其具有某种特定的性状或功能的技术。转基因技术已经被广泛应用于农业、医学和工业领域。在农业领域，转基因作物被广泛种植，目的是改善作物的产量、抗病性和耐逆性。转基因作物通常被设计成具有抗虫、抗草药和耐旱等特性，以提高农作物的产量和质量。例如，转基因玉米和大豆被广泛用于抗虫害，转基因棉花则具有抗虫和抗草药的特性。转基因技术还可以用于改善作物的营养价值，例如通过在作物中增加维生素A来解决维生素A缺乏症的问题。然而，转基因作物也引起了一些争议。一些人担心转基因作物可能对人体健康和环境产生负面影响。他们担心转基因作物可能导致过敏、毒性和抗生素耐药性等问题。此外，转基因作物也可能对生物多样性产生影响，例如通过传播转基因基因到野生物种中。为了确保转基因作物的安全性，许多国家都制定了严格的监管措施和标签要求。在美国，转基因食品必须经过美国食品药品监督管理局（FDA）的批准，并且需要明确标示。欧洲联盟则采取了更加严格的监管措施，要求转基因食品经过严格的安全评估，并且在食品标签上明确标示。

因为他们和英国发生了一些矛盾，所以和英国已经绝交了，不能够允许任何英国文化进入到自己的国家。