一、请设计一个实验区分E. coli 和Staphylococcus aureus, 简述实验过程和实验原理。

E.coli（大肠杆菌）是一种常见的细菌，属于革兰氏阴性菌。它存在于人和动物的肠道中，有些菌株对人体有益，但也有一些具有致病性。E.coli在环境中易于生存和繁殖，可以通过污染的食物或水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道感染。尽管大多数E.coli菌株对人体无害，但某些菌株产生肠毒素，可引发严重的健康问题，如腹泻、腹痛和发热等。因此，正确处理食品、保持卫生和良好的个人卫生习惯对预防E.coli感染至关重要。

【答案】：当葡萄糖和乳糖同时存在时，乳糖操纵子以低水平进行转录。因为阻遏物与别乳糖(乳糖的一个异构体)形成复合物，别乳糖-阻遏物复合物不能与乳糖操纵子的启动子区城结合，从而使该阻遏物不能阻止转录起始。$缺少乳糖的条件下，将不会有别乳糖生成，乳糖阻遏物与乳糖操纵子启动子区结合，阻止转录。$当乳糖作为唯一的碳源时，该乳糖操纵子以最大的速率转录，在别乳糖存在的条件下，转录也是可能发生的，因为乳糖阻遏物不能结合乳糖操纵子的启动子区城。同样在缺少葡萄糖的条件下，转录速率也增加，因为cAMP产物增加，有更多的CAP-cAMP结合乳糖操纵子的启动子区城，促进转录，使细胞在乳糖作为可利用的唯一碳源时合成大量的酶来维持生长。

由于尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E. coli) OP50是尿嘧啶缺陷性，只能从，涂布于NGM（Nematode Growth Media）中获取尿嘧啶，无法自身合成。所以生长速度会比普通的大肠杆菌慢很多，这样既可以提供线虫食物，又不会过度生长。线虫一般从卵到成虫需要3天时间，而且湿度，氧气，以及各种环境因素会制约线虫的生长。所以需要营养合成缺陷型菌种为其食物

简单的说，就是通过RNA的二级结构对翻译进行调控： 该操纵子位于MRNA的前导序列内，前导序列有4个位点1、2、3、4，他们1和2，2和3，3和4之间都能形成剪辑互补配对的2级结构。而基因的核糖体结合位点位于区域4。（1234按照5`到3` 一次编号）。前导序列1能编码一段前导肽，该位点内有连续的2个色氨酸密码子。 当高浓度色氨酸存在时，色氨酸-TRNA是负载的，可以为该位点提供充足的翻译原料。这时，核糖体可以顺利通过区域1，停留在区域2上，此结构导致区域1和2不能互补配对，而3和4配对，导致4区域的核糖体结合位点被屏蔽，以至于无法翻译基因信息。 而当细胞内色氨酸缺乏时，就没有足够的色氨酸-TRNA渗透进正在1位点翻译的核糖体内，核糖体停留在1位点，暴露2位点，这样2和3就互补配对形成2级结构，从而导致4位点暴露，从而开启核糖体结合位点，使基因得以表达。 嗯，大概就是这样子。。。不妨用纸笔画画图，就明白了。上个图给你看

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端 而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端

必须是mRNA反转录的DNA或类似的DNA基因，必须与大肠杆菌启动子、RBS序列、SD序列、起始密码子正确拼接、应该还有大肠杆菌终止子。最后还要转入大肠杆菌中才可能正确表达。

筛选工业高产菌株一般从以下几个方面入手：1.筛选营养缺陷型菌株原理是解除了代谢途径中的协同反馈，这里选择酪氨酸营养缺陷型菌株，使得代谢支路受到阻遏，只要在培养基中加入少量酪氨酸，苯丙氨酸就可大量合成。2.筛选抗结构类似物突变株原理是解除阻遏或抗反馈抑制，对氟苯丙氨酸是苯丙氨酸的结构类似物,因此,对氟苯丙氨酸抗性菌株所产生的苯丙氨酸也不能与阻遏蛋白或变构酶结合,这样必然会在有苯丙氨酸存在的情况下,细胞仍然不断的合成苯丙氨酸,使其得到过量积累,这就是抗阻遏或抗反馈突变株。3.筛选温度敏感型突变株比如e.coli最适温度是37,突变后由于某酶结构改变，使得在37度下失活，等同于37度下的营养缺陷型，原理同第一条。

可以。大肠杆菌也是从一个复制起点开始双向复制，形成θ形

【答案】：尽管两个基因组都由独特序列的DNA组成，E.coli的基因组约大25倍，因而每条变性的E.coliDNA链复性得花费更长的时间来寻找其正确的互补链。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

如图.

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

可能是E.coli C600比较容易筛选吧，含有Rifampicin抗性。。。

大肠杆菌的的色氨酸合成系统操纵子，其从启动基因开始至转录衰减区附近所转录的信使RNA（mRNA），在细胞内色氨酸浓度高过一定程度时，则在该位置终止，但在色氨酸浓度低时，则通过该点进行mRNA的合成。在此操纵子中，最初的结构基因是从mRNA5′末端数第163个碱基开始的，而转录衰减区存在于稍前方，即约在第130个碱基附近。在此区域的前面，有产生由14个氨基酸所成的小肽的信息，其中有2个为色氨酸的遗传信号。所以当色氨酸缺乏时，此肽的合成在该位置迟滞以至完全停止，而妨碍参与肽合成核糖体向衰减区接近。反之当色氨酸浓度高时，则核糖体接近该区域，随之在mRNA上的衰减区（有回文结构）形成与转录终止相适应的二级结构，转录停止。在其它操纵子上也有同样的小肽的信息，例如组氨酸操纵子在16个氨基酸中有7个为组氨酸的遗传信号，而苯丙氨酸操纵子在15个中有7个为苯丙氨酸的遗传信号。这样氨基酸合成系统的操纵子，利用翻译机制来监测其操纵子所合成的氨基酸的浓度，即具有根据这浓度而确定mRNA是否继续合成的机制。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

培养什么菌的？ 一般比如大肠杆菌有M9培养基，酵母有合成培养基

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。

蛋白质的合成过程在蛋白质合成过程中，mRNA从5′→3′阅读，而肽链从N-端向C-端合成。（一）氨基酸的活化氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，活化成氨酰-tRNA(氨基酸以高能酯键与tRNA的3′-末端腺苷酸的2′或3′的羟基相连的)。AA + tRNA + ATP---AA～tRNA + AMP + PPi氨酰-tRNA合成酶有氨基酸和tRNA两种底物的专一性结合位点。每一种tRNA只专一携带一种氨基酸，而一种氨基酸可分别被几种tRNA专一携带(因为有密码子简并现象)。氨基酸一旦与tRNA结合成AA- tRNA，进一步的去向就由tRNA来决定。tRNA凭借自身的反密码子与mRNA上的密码子相识别，而把所携带的氨基酸定位在肽链的一定位置上。 各种氨酰-tRNA都具备后，就可以进行蛋白质的合成 （二）多肽链的起始合成参与起始的成分：IF1，IF2，IF3，核糖体的小、大亚基，mRNA，fMet-tRNAf，GTP。起始过程：1、IF1，IF3，30S小亚基，mRNA结合并定位；2、GTP，IF2，fMet-tRNAf加入，形成30S起始复合物；3、IF1，IF2，IF3，GDP，Pi释放，50S大亚基加入，形成70S起始复合物。 至此，起始过程完成，fMet-tRNA位于核糖体上的P位点（给位，即肽酰-tRNA结合位点），而A位点（受位，即氨酰-tRNA结合位点）空着，用于接受下一个AA-tRNA。（三）肽链的延伸此阶段包括氨酰tRNA进入核糖体A位点（进入）、肽键的形成（转肽）和核糖体在mRNA上移位（移位）三个步骤。这三步每重复一次，肽链上就增加一个氨基酸，直到mRNA上的终止密码出现在核糖体的A位时为止。1、进入开始延伸过程时，fMet-tRNAf位于核糖体上的P位点，而一个能与AUG后的密码子互补AA-tRNA进入A位点。具体过程：1、AA-tRNA与EF-Tu-GTP结合生成复合物Tu-GTP-AA-tRNA；2、复合物进入A位，GTP水解，EF-Tu-GDP从核糖体上释放， AA-tRNA留在A位；3、在EF-Ts帮助下，EF-Tu-GDP重新形成EF-Tu-GTP，以便于下一轮反应。2、转肽AA-tRNA的游离氨基与fMet的羧基形成肽键，此过程在肽酰转移酶催化下进行。反应后fMet转移到A位点，形成fMet-AA-tRNA，而P位点留下一空载的tRNAf3、移位在延伸因子EF-G（又称移位酶）帮助下，核糖体在mRNA上移动一个密码子的距离，结果使A位点的fMet-AA-tRNA移到P位，P位的tRNAf移出了核糖体，而A位点空出，以便于接受下一分子AA-tRNA。这样，一轮反应结束，肽链延长了一个氨基酸单位。紧接着进行下一轮延伸，直至肽链合成终止。（四）肽链合成的终止和释放肽链的合成过程同时也是核糖体沿mRNA 5′→3′方向移动，并翻译mRNA上密码子的过程。当核糖体移到终止密码子时，没有对应终止密码的氨酰-tRNA可以进入A位，终止因子进入A位，肽链合成停止。有三种终止因子(RF1、RF2、 RF3)参与终止步骤：RF1：识别终止密码UAA、UAG ；RF2：识别UAA、UGA；RF3：促进RF1、RF2的识别 。、RF2结合到核糖体后，使肽酰转移酶构象转变，表现出水解酶活力，催化肽酰基与tRNA的酯键水解，合成的肽链便从核糖体上释放下来。空载的tRNA接着从核糖体上脱落，核糖体便解离成50S和30S两个亚基离开mRNA，一条多肽链的合成便告结束。四、肽链合成后的加工肽链合成后多数还要经过加工处理，才能变为有生物活性的蛋白质分子，这个过程称为翻译后加工作用，内容包括：1、剪切由氨肽酶将N-端fMet（Met）以及多余氨基酸的切除。2、剪接将蛋白质分子内多余的片段切除3、氨基酸的修饰修饰方式多种多样，如：磷酸化、羟基化、糖基化、甲基化、乙酰化等等。4、二硫键的形成在专一性的氧化酶催化下，特定的Cys-SH之间连接形成二硫键。5、与辅基或辅酶结合对于结合蛋白质，与辅基或辅酶结合后才表现出活性。6、形成特定的构象，亚基间的聚合 我现在正在学生物化学，这个是生物化学上的蛋白质的合成步骤。比较专业化，希望能对你有所帮助。

E.coli Electro-Cells E.coli Electro-Cell JM109 制品名 TaKaRa Code 包装量 价格(人民币元) E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300 ■ GenotypeE.coli JM109recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F"[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15]■ 细胞浓度1～2×1010 Bacteria/ml ■ 保存-80℃■制品说明用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。TaKaRa使用独自开发的菌体培养法，制作出了效果极佳的E.coli Electro-Cell JM109。 ■细胞种类α-互补性选择宿主E.coli JM109E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时, 由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109 F"编码的lacZΔM15的结合，显示β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)。利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F"质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，调制单链DNA。■质量标准 使用10 pg的质粒DNA进行转化时：50 μl E.coli JM109 Electro-Cell/10 pg pUC19 plasmid转化时产生的菌落数>1×109 transformants/1 μg pUC19 plasmid F"质粒的稳定性检测对E.coli JM109使用pUC19 DNA进行电穿孔法转化后，在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG, 40 μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。 50 μl的E.coli JM109 Electro-Cell在含有100 μg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产生菌落。 --------------------------------BL21（DE3）pLysS细菌菌株 BL21（DE3）pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。BL21（DE3）pLysS对λDE3（1）是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I，编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21（DE3）pLysS含有pLysS质粒，他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。包装： P9811 500μlhttp://www.promega.com/tbs/tb095/tb095.pdf

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

大肠杆菌乳糖操作子。

肠杆菌科细菌

DNA解旋酶，DNA聚合酶

DNA连接酶的种类有很多，用的较多的是E·coliDNA连接酶和T4DNA 连接酶。从大肠杆菌中获得的DNA连接酶只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳，T4DNA连接酶具有较好的平末端双链连接的作用。 E·coliDNA连接酶所有从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶的称。酶的命名是有规律的。所以不能笼统的根据来源叫。

还有抗性筛选位点，比如氨苄Amp、卡那霉素Kana等等……

两者区别：1、Survival Evolved：《方舟：生存进化（Ark: Survival Evolved）》是一款开放世界的以恐龙为主题的游戏，游戏采用虚幻4引擎打造，画面出彩，题材独特。2、Survival Of The Fittest：是《方舟：生存进化（Ark: Survival Evolved）》里面的一个大逃杀MOD，后来独立出来做成了ARK：Survival Of The Fittest。扩展资料《方舟：生存进化》是Wildcard工作室宣布旗下生存游戏，将于2018年春季登陆iOS、安卓平台。《方舟：生存进化》推出NS平台的数字版，于18年11月30日发售。有实体版，游戏语音为英文，内附有英文及繁体中文字幕。独立工作室Wildcard旗下由虚幻引擎4（Unreal Engine 4）打造的生存类开放世界游戏，由蜗牛代理的方舟生存进化online已于2017年1月1日上线。游戏故事主要讲述，一群人醒来便出现在神秘海滩，为了生存而探索远古开放世界，玩家需要通过合作/竞技来获取生活必需品。人类需要打猎、收获、研究技术，甚至要根据动态天气变化（酷热白昼、冰冷夜晚）搭建住处，而危险的远古动物会随机出现威胁人类生存。参考资料：百度百科－方舟：生存进化

有很多啊

这三个短语意思都不一样. 1、in the end意思“最后、终于”.它的意思相当于finally,at last.它往往表明事情的结局,在句子中一般单独使用. 如:Xiao Ming passed the exam in the end.最后小明通过了那次考试. Ice becomes smaller and smaller until in the end it disappears completely.冰变得越来越小,直到最后完全消失. 2、at the end of +名词短语,意思是“在……末端/尽头”. 如:There is a clothes shop at the end of the street.在这条街的尽头有一家服装店. Li Ming came across a few new words at the end of the article.这篇文章的最后,李明碰到了一些生词. 3、by the end of +表示时间的名词,意为“到……末为止,到……最后”,注意:如果of后面接表示过去时间的名词,那么本句的谓语必须用过去完成时态. 如:How many English words had you learned by the end of last term?到上学期末为止,你学会了多少个英语单词? I had been to the Summer Palace three times by the end of last year.到去年年末我去过颐和园三次了.

问题一：小黄人电影里单眼叫什么 楼主你好 小黄人电影里一共三个小伙伴 最高的那个叫凯文　比凯文矮两只眼的叫鲍勃 单眼的那只脚斯图尔特和英前首相同名 电影里斯图尔特拔出石中剑也成了首相 有图有真相求采纳 问题二：单眼小黄人和双眼小黄人有什么区别 双的是公的.单的是母的. 问题三：为啥有的小黄人只有一只眼睛，有的有两只？单眼小黄人和双眼小黄人到底有啥区别？悬赏50. 谢谢！ 50分 为了整个画面的和谐，你想想，本来他们外表都差不多一个样，如果全是一只眼睛或者是两只眼睛的话，整个画面感会不舒服的 问题四：小黄人叫什么名字 小黄人是3D动画电影《卑鄙的我》中主角格鲁（Gru）使用变种DNA、脂肪酸加香蕉泥做成的生物。这些小黄人数量众多，拥有自己的语言，短胳膊短腿走起路来非常可爱，他们看似做事不专心但工作能力极强，听令于格鲁但却拥有自己的思想。小黄人拥有极其丰富的表演能力，并且几乎什么都能笑。其中的代表有Stuart、Phil、Kevin、Bob、Dave、Jerry、Jorge、Tim、Mark，虽然每个小黄人都有自己的名字，但统称做Minions。小黄人的出现使《卑鄙的我》影片出彩，萌萌的样子使得小黄人在全球拥有一大批粉丝。 问题五：小黄人是单眼的好看.还是双眼的好看 单眼的少，双眼的多，不过都好看。 问题六：小黄人独眼珠叫什么? Stuart 斯图尔特 眼睛：单 头发：塌塌的小中分 身材：标准　　身高：94cm（最矮）　　喜欢：玩耍和大笑　　讨厌：被其他小黄人欺负 问题七：小黄人共有几部每部的名称分别叫什么 神偷奶爸1 神偷奶爸2 小黄人大眼萌。 问题八：这个小黄人叫什么名字 Bob 很萌很蠢的那个 三个里面智商最低 问题九：一只眼睛的卡通，黄色。叫什么，那个动画里的？ 小黄人是3D动画电影《卑鄙的我》中主角格鲁（Gru）使用变种DNA、脂肪酸加香蕉泥做成的机器人。这些小黄人数量众多，拥有自己的语言，短胳膊短腿走起路来非常可爱，他们看似做事不专心但工作能力极强，听令于格鲁但却拥有自己的思想。小黄人拥有极其丰富的表演能力，并且几乎什么都能笑。其中的代表有Stuart、Phil、Kevin、Bob、Dave、Jerry、Jorge、Tim、Mark，虽然每个小黄人都有自己的名字，但统称做Minions。小黄人的出现使《卑鄙的我》影片出彩，萌萌的样子使得小黄人在全球拥有一大批粉丝。

越南歌手范琼英的感人法语歌曲《Bonjour Vietnam》Raconte-moi ce nom étrange et difficile à prononcer　　给我讲讲这个奇怪而又难读的名字　　Que je porte depuis que je suis née　　我从出生之日起就和它有了关系　　Raconte-moi le vieil empire et le trait de mes yeux bridés　　给我讲讲这个古老的帝国和我那些垂眼的人们　　Qui disent mieux que moi ce que tu n"oses dire　　他们比我更好地讲述你不敢讲的事情　　Je ne sais de toi que des images de la guerre　　对于你，我所知道的只是战争的图片　　Un film de Coppola, des hélicoptères en colère　　一部科波拉的电影，一些愤怒的直升机Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Un jour, dire bonjour à ton ame　　会有一天，问候你的灵魂　　Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Te dire bonjour, Vietnam　　对你说：你好，越南　　Raconte-moi ma couleur, mes cheveux et mes petits pieds　　给我讲讲我的肤色，我的头发和我的小脚　　Qui me portent depuis que je suis née　　这些都是我与生俱来的　　Raconte-moi ta maison, ta rue, raconte-moi cet inconnu　　给我讲讲你的房屋，你的道路，讲讲我不知道的东西　　Les marchés flottants et les sampans de bois　　流动的市场和木头舢板　　Je ne connais de mon pays que des photos de la guerre　　对于我的国家，我的认识只通过战时的照片　　Un film de Coppola, des hélicoptères en colère　　一部可波兰的照片，一些愤怒的直升机Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Un jour, dire bonjour à ton ame　　会有一天，问候你的灵魂　　Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Te dire bonjour, Vietnam　　对你说：你好，越南Les temples et les Bouddhas de pierre pour mes pères　　寺庙和石头佛像，这是我的父亲们的事　　Les femmes courbées dans les rizières pour mes mères　　水稻田里弯腰劳作的妇女们，这是我的母亲们　　Dans la prière, dans la lumière, revoir mes frères　　在灯光下，在祭台前，又看到了我的兄弟们　　Toucher mon arbre, mes racines, ma terre　　触摸到我的树，我的根，我的土地Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Un jour, dire bonjour à ton ame　　会有一天，问候你的灵魂　　Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Te dire bonjour, Vietnam　　对你说：你好，越南

无比较级，最高级

一废”-牛龙这个一废众望所归，众多玩家一致认定的极废种类；牛龙的攻击方式分为两种，一是用嘴咬，二是用头上的角去攻击还附带击退的效果；牛龙还分为野生和驯服之后两种。野生牛龙在一级时血量为440，攻击力为45点，然而体型却非常庞大，有种壮而不实之感；驯服之后的牛龙等级为150级，生命值提升2200.攻击加成到300%，用来打嘟嘟鸟都需要两次才可以打死，害。“二废”-梁龙只能勉强作为货车使用，采集果子、木头等资源，攻击没有伤害；梁龙喜欢向玩家表示友好，当在攻击它时除非是快死了才会逃跑，除此之前会一直用头向表达友好，梁龙被攻击也不会进行反击；“三废”-美颌龙美颌龙体型比渡渡鸟都小，生命值很低，属于近战物种，攻击时注意躲避就好；

.。。。。英语确实不懂

in the end 一般是用在开头作总结,意思是‘最后"就相当于finally.如果要加‘of"就不要前面的介词‘in".e.g:The end of the story(这个故事的结尾或结局).

supermarket 超级市场 名词

_根的词语解释是：块根kuàigēn。(1)呈块状的根。_根的词语解释是：块根kuàigēn。(1)呈块状的根。结构是：_(左右结构)根(左右结构)。拼音是：kuàigēn。_根的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、国语词典【点此查看计划详细内容】须根之中，有数个肥大而成块状者，如甘?等。词语翻译英语roottuber,tuberousroot法语tuberculessurlesracinesdesplantes二、网络解释块根块根是由营养繁殖的植株不定根或实生苗侧根膨大形成的，一株上可形成多个块根，它的组成不含下胚轴和茎的部分，完全由根构成，甘薯、何首乌的块根都属此类。甘薯块根外形较不规则，大约在栽插后20~30d,其中有些不定根开始膨大形成块根。何首乌的块根呈纺锤形，表面具4~6条纵棱。一般在块根直径约3cm时，内部结构基本分化完成。其副形成层由初生韧皮纤维束周围的薄壁细胞形成，中柱鞘也恢复分裂能力，向外产生一些薄壁细胞，使块根加粗。药用块根还有天门冬、百部等。关于_根的成语根连株逮错节盘根断根绝种根深柢固落地生根命根子_草除根关于_根的词语连根带梢达地知根落地生根翦草除根深根固柢剪草除根六根清净_草除根根深柢固断根绝种点此查看更多关于_根的详细信息

　　supermarket 是可数名词，要么加冠词，要么用复数。　　如果只是泛泛提及，仅涉及到一个或某个时，用单数 a supermarket；如果指两个以上，用复数supermarkets。　　特别提到已知的这个或那个，用单数 the supermarket；如果提到的是这几个或那几个，用复数the supermarkets。　　不知道你所说的情况是哪一种，只要指的是大家都知道的一家超市，必须加定冠词 the。　　

在战网界面语言选英文自己去听一下。

1.纸质壁(PAPERWALLCOVERINGS)在特殊耐热的纸上直接印花压纹的壁纸。特点：亚光、环保、自然、舒适、亲切。2.胶面壁纸(ⅥNYLWALLCOVERINGS)表面为PVC材质的壁纸⑴ 纸底胶面壁纸特点：色彩多样、图案丰富、价格适宜、施工周期短、耐脏、耐擦洗。⑵布底胶面壁纸(FABRICBACKⅥNYLWALLCOVERINGS)分为十字布底和无纺布底（NONWOVEN)3.壁布(TEXTILEWALLCOVERINGS)或称纺织壁纸表面为纺织材料，也可以印花、压纹。特点：视觉舒适、触感柔和、吸音、透气、亲和性佳、典雅、高贵。⑴ 纱线壁布、用不同式样的纱或线构成图案和色彩；⑵ 织布类壁纸、有平织布面、提花布面和无纺布面；⑶ 植绒壁布、将短纤维植入底纸，产生质感极佳的绒布效果。4.金属类壁纸（METALLICWALLCOVERINGS)用铝帛制成的特殊壁纸，以金色、银色为主要色系。特点：防火、防水、华丽、高贵。5.天然材质类壁纸（NATURALMATERIALWALLCOVERINGS)用天然材质如草、木、藤、竹、叶材纺织而成。特点：亲切自然、休闲、舒适，环保。⑴ 植物纺织类；⑵ 软木、树皮类壁纸；⑶ 石材、细砂类壁纸。6.防火壁纸（RETARDINGⅥNYLWALLCOVERINGS)用防火材质纺织而成，常用玻璃纤维或石棉纤维纺织而成。特点：防火性极佳，防水、防霉，常用于机场或公共建设。7.特殊效果壁纸（SPECIALEFFECTWALLCOVERINGS)⑴ 荧光壁纸：在印墨中加有荧光剂，在夜间会发光，常用于娱乐空间；⑵夜光壁纸：使用吸光印墨，白天吸收光能，在夜间发光，常用于儿童居室；⑶ 防菌壁纸：经过防菌处理，可以防止霉菌滋长，适合用于医院、病房；⑷ 吸音壁纸：使用吸音材质，可防止回音，适用于剧院国、音乐厅、会议中心；⑸ 防静电壁纸：用于特殊需要防静电场所，如实验室等。

截至2021年12月21日只有1部。《阿凡达》（Avatar）是一部由詹姆斯·卡梅隆执导，二十世纪福克斯出品，萨姆·沃辛顿、佐伊·索尔达娜和西格妮·韦弗等人主演的科幻电影，该片于2009年12月16日以2D、3D和IMAX-3D三种制式在北美上映。2021年3月12日，《阿凡达》在中国内地重映。该片主要讲述人类穿上阿凡达的躯壳，飞到遥远的星球潘多拉开采资源。受伤后以轮椅代步的前海军杰克，自愿接受实验并以他的阿凡达来到潘多拉。在结识了当地纳美族人公主涅提妮之后，杰克在一场人类与潘多拉军民的战争中陷入两难。电影中最迷人的是潘多拉的风景，导演展示了一个近乎完美的星球，各种不同形态的植物发着光，声势浩大的瀑布奔流而下，还有色彩艳丽的飞龙等动物，无论是3D效果还是故事都非常棒。詹姆斯·卡梅隆证明了他的确是世界之王，作为视觉特效技术大军、生物设计大军、动作捕捉大军、替身演员大军、舞蹈演员大军、演员大军、音乐和音响大军的总统帅，他用让人目瞪口呆的方式把科幻片带进了21世纪，这就是《阿凡达》。

高度不限，主要是限制数量，叫平台建筑上限。这个服主才能修改，或者单机也可以

1.打开手机钉钉，并登录，找到底部【通讯录】，点击右上角头像加号，如图。2.选择【加入企业/组织/团队】。3.输入【浙政钉】点击后面的【搜索】。4.选择需要加入的组织，点击【加入】。5.等待浙政钉管理人员，审核通过后，自己的钉钉即可展示界面如图。

这个东东真的很难说。要知道现在打着铭牌招摇的太多了。全国只此一家做，所以，你说他是他就是，说它不是呢？

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无纺布（英文名：Non Woven Fabric 或者 Nonwoven cloth）又称不织布，是由定向的或随机的纤维而构成。因具有布的外观和某些性能而称其为布。无纺布具有防潮、透气、柔韧、质轻、不助燃、容易分解、无毒无刺激性、色彩丰富、价格低廉、可循环再用等特点。白棉布是由棉花经过纺织加工而成的布料，可水洗。产品参考

游戏阶段:兵线:兵群的位置。一般来说指敌方的兵群。控线:将兵线控制在某个位置。推线:让兵线向对方推进。拉线:让兵线向我方推进。补刀:对敌方单位进行击杀获取金钱的行为。走位:指躲避对方技能的行为。farm:赚取金钱的动作。一般来说是刷兵和刷野。反野:去对方野区刷野。miss:与我方对线的对手消失。b:回城。gank:突袭。蹲:指gank前的ob阶段。反蹲:指对敌方的突袭者进行的“蹲”。硬控:除沉默外，可以打断对方施法的控制技能。软控:不可以打断对方施法的控制技能。双交:指两个召唤师技能都在冷却。卖:指勾引你的对手对你进行攻击。cd:cool down。技能冷却时间。ob:observe。指发生战斗时在战场边缘寻找机会。指向性技能:指对鼠标指向目标释放的技能。非指向性技能:指对鼠标指向方向释放的技能。aoe:群体技能。全称area of effect。斩杀:指对血量达到足够低的玩家的一击必杀。斩杀效果：技能特征。目标生命值越低，这个技能伤害越高。切后排:指对团战中对c位的击杀。ult:大招。buff:增益效果。debuff:减益效果。红buff:指绯红树怪以及它提供的效果。蓝buff:指远古魔像以及它提供的效果。大龙:即纳什男爵。龙种:指纳什男爵提供的效果。双龙会:同时拥有纳什男爵buff和远古巨龙buff。做视野:指对某个地点插眼或排除对方的眼。