人的基因组比e，coli基因组大约1000倍，但基因的数目仅为e，coli的10倍，解释为什么

E.coli（大肠杆菌）是一种常见的细菌，属于革兰氏阴性菌。它存在于人和动物的肠道中，有些菌株对人体有益，但也有一些具有致病性。E.coli在环境中易于生存和繁殖，可以通过污染的食物或水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道感染。尽管大多数E.coli菌株对人体无害，但某些菌株产生肠毒素，可引发严重的健康问题，如腹泻、腹痛和发热等。因此，正确处理食品、保持卫生和良好的个人卫生习惯对预防E.coli感染至关重要。

【答案】：当葡萄糖和乳糖同时存在时，乳糖操纵子以低水平进行转录。因为阻遏物与别乳糖(乳糖的一个异构体)形成复合物，别乳糖-阻遏物复合物不能与乳糖操纵子的启动子区城结合，从而使该阻遏物不能阻止转录起始。$缺少乳糖的条件下，将不会有别乳糖生成，乳糖阻遏物与乳糖操纵子启动子区结合，阻止转录。$当乳糖作为唯一的碳源时，该乳糖操纵子以最大的速率转录，在别乳糖存在的条件下，转录也是可能发生的，因为乳糖阻遏物不能结合乳糖操纵子的启动子区城。同样在缺少葡萄糖的条件下，转录速率也增加，因为cAMP产物增加，有更多的CAP-cAMP结合乳糖操纵子的启动子区城，促进转录，使细胞在乳糖作为可利用的唯一碳源时合成大量的酶来维持生长。

由于尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E. coli) OP50是尿嘧啶缺陷性，只能从，涂布于NGM（Nematode Growth Media）中获取尿嘧啶，无法自身合成。所以生长速度会比普通的大肠杆菌慢很多，这样既可以提供线虫食物，又不会过度生长。线虫一般从卵到成虫需要3天时间，而且湿度，氧气，以及各种环境因素会制约线虫的生长。所以需要营养合成缺陷型菌种为其食物

简单的说，就是通过RNA的二级结构对翻译进行调控： 该操纵子位于MRNA的前导序列内，前导序列有4个位点1、2、3、4，他们1和2，2和3，3和4之间都能形成剪辑互补配对的2级结构。而基因的核糖体结合位点位于区域4。（1234按照5`到3` 一次编号）。前导序列1能编码一段前导肽，该位点内有连续的2个色氨酸密码子。 当高浓度色氨酸存在时，色氨酸-TRNA是负载的，可以为该位点提供充足的翻译原料。这时，核糖体可以顺利通过区域1，停留在区域2上，此结构导致区域1和2不能互补配对，而3和4配对，导致4区域的核糖体结合位点被屏蔽，以至于无法翻译基因信息。 而当细胞内色氨酸缺乏时，就没有足够的色氨酸-TRNA渗透进正在1位点翻译的核糖体内，核糖体停留在1位点，暴露2位点，这样2和3就互补配对形成2级结构，从而导致4位点暴露，从而开启核糖体结合位点，使基因得以表达。 嗯，大概就是这样子。。。不妨用纸笔画画图，就明白了。上个图给你看

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端 而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端

必须是mRNA反转录的DNA或类似的DNA基因，必须与大肠杆菌启动子、RBS序列、SD序列、起始密码子正确拼接、应该还有大肠杆菌终止子。最后还要转入大肠杆菌中才可能正确表达。

筛选工业高产菌株一般从以下几个方面入手：1.筛选营养缺陷型菌株原理是解除了代谢途径中的协同反馈，这里选择酪氨酸营养缺陷型菌株，使得代谢支路受到阻遏，只要在培养基中加入少量酪氨酸，苯丙氨酸就可大量合成。2.筛选抗结构类似物突变株原理是解除阻遏或抗反馈抑制，对氟苯丙氨酸是苯丙氨酸的结构类似物,因此,对氟苯丙氨酸抗性菌株所产生的苯丙氨酸也不能与阻遏蛋白或变构酶结合,这样必然会在有苯丙氨酸存在的情况下,细胞仍然不断的合成苯丙氨酸,使其得到过量积累,这就是抗阻遏或抗反馈突变株。3.筛选温度敏感型突变株比如e.coli最适温度是37,突变后由于某酶结构改变，使得在37度下失活，等同于37度下的营养缺陷型，原理同第一条。

可以。大肠杆菌也是从一个复制起点开始双向复制，形成θ形

【答案】：尽管两个基因组都由独特序列的DNA组成，E.coli的基因组约大25倍，因而每条变性的E.coliDNA链复性得花费更长的时间来寻找其正确的互补链。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

如图.

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

可能是E.coli C600比较容易筛选吧，含有Rifampicin抗性。。。

大肠杆菌的的色氨酸合成系统操纵子，其从启动基因开始至转录衰减区附近所转录的信使RNA（mRNA），在细胞内色氨酸浓度高过一定程度时，则在该位置终止，但在色氨酸浓度低时，则通过该点进行mRNA的合成。在此操纵子中，最初的结构基因是从mRNA5′末端数第163个碱基开始的，而转录衰减区存在于稍前方，即约在第130个碱基附近。在此区域的前面，有产生由14个氨基酸所成的小肽的信息，其中有2个为色氨酸的遗传信号。所以当色氨酸缺乏时，此肽的合成在该位置迟滞以至完全停止，而妨碍参与肽合成核糖体向衰减区接近。反之当色氨酸浓度高时，则核糖体接近该区域，随之在mRNA上的衰减区（有回文结构）形成与转录终止相适应的二级结构，转录停止。在其它操纵子上也有同样的小肽的信息，例如组氨酸操纵子在16个氨基酸中有7个为组氨酸的遗传信号，而苯丙氨酸操纵子在15个中有7个为苯丙氨酸的遗传信号。这样氨基酸合成系统的操纵子，利用翻译机制来监测其操纵子所合成的氨基酸的浓度，即具有根据这浓度而确定mRNA是否继续合成的机制。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

?这两个一培养不就看出来了么，菌落不一样。革兰氏染色，大肠杆菌红色，金黄葡萄球菌紫色看看形态也不一样的，大肠杆菌，金黄葡萄球菌

培养什么菌的？ 一般比如大肠杆菌有M9培养基，酵母有合成培养基

蛋白质的合成过程在蛋白质合成过程中，mRNA从5′→3′阅读，而肽链从N-端向C-端合成。（一）氨基酸的活化氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，活化成氨酰-tRNA(氨基酸以高能酯键与tRNA的3′-末端腺苷酸的2′或3′的羟基相连的)。AA + tRNA + ATP---AA～tRNA + AMP + PPi氨酰-tRNA合成酶有氨基酸和tRNA两种底物的专一性结合位点。每一种tRNA只专一携带一种氨基酸，而一种氨基酸可分别被几种tRNA专一携带(因为有密码子简并现象)。氨基酸一旦与tRNA结合成AA- tRNA，进一步的去向就由tRNA来决定。tRNA凭借自身的反密码子与mRNA上的密码子相识别，而把所携带的氨基酸定位在肽链的一定位置上。 各种氨酰-tRNA都具备后，就可以进行蛋白质的合成 （二）多肽链的起始合成参与起始的成分：IF1，IF2，IF3，核糖体的小、大亚基，mRNA，fMet-tRNAf，GTP。起始过程：1、IF1，IF3，30S小亚基，mRNA结合并定位；2、GTP，IF2，fMet-tRNAf加入，形成30S起始复合物；3、IF1，IF2，IF3，GDP，Pi释放，50S大亚基加入，形成70S起始复合物。 至此，起始过程完成，fMet-tRNA位于核糖体上的P位点（给位，即肽酰-tRNA结合位点），而A位点（受位，即氨酰-tRNA结合位点）空着，用于接受下一个AA-tRNA。（三）肽链的延伸此阶段包括氨酰tRNA进入核糖体A位点（进入）、肽键的形成（转肽）和核糖体在mRNA上移位（移位）三个步骤。这三步每重复一次，肽链上就增加一个氨基酸，直到mRNA上的终止密码出现在核糖体的A位时为止。1、进入开始延伸过程时，fMet-tRNAf位于核糖体上的P位点，而一个能与AUG后的密码子互补AA-tRNA进入A位点。具体过程：1、AA-tRNA与EF-Tu-GTP结合生成复合物Tu-GTP-AA-tRNA；2、复合物进入A位，GTP水解，EF-Tu-GDP从核糖体上释放， AA-tRNA留在A位；3、在EF-Ts帮助下，EF-Tu-GDP重新形成EF-Tu-GTP，以便于下一轮反应。2、转肽AA-tRNA的游离氨基与fMet的羧基形成肽键，此过程在肽酰转移酶催化下进行。反应后fMet转移到A位点，形成fMet-AA-tRNA，而P位点留下一空载的tRNAf3、移位在延伸因子EF-G（又称移位酶）帮助下，核糖体在mRNA上移动一个密码子的距离，结果使A位点的fMet-AA-tRNA移到P位，P位的tRNAf移出了核糖体，而A位点空出，以便于接受下一分子AA-tRNA。这样，一轮反应结束，肽链延长了一个氨基酸单位。紧接着进行下一轮延伸，直至肽链合成终止。（四）肽链合成的终止和释放肽链的合成过程同时也是核糖体沿mRNA 5′→3′方向移动，并翻译mRNA上密码子的过程。当核糖体移到终止密码子时，没有对应终止密码的氨酰-tRNA可以进入A位，终止因子进入A位，肽链合成停止。有三种终止因子(RF1、RF2、 RF3)参与终止步骤：RF1：识别终止密码UAA、UAG ；RF2：识别UAA、UGA；RF3：促进RF1、RF2的识别 。、RF2结合到核糖体后，使肽酰转移酶构象转变，表现出水解酶活力，催化肽酰基与tRNA的酯键水解，合成的肽链便从核糖体上释放下来。空载的tRNA接着从核糖体上脱落，核糖体便解离成50S和30S两个亚基离开mRNA，一条多肽链的合成便告结束。四、肽链合成后的加工肽链合成后多数还要经过加工处理，才能变为有生物活性的蛋白质分子，这个过程称为翻译后加工作用，内容包括：1、剪切由氨肽酶将N-端fMet（Met）以及多余氨基酸的切除。2、剪接将蛋白质分子内多余的片段切除3、氨基酸的修饰修饰方式多种多样，如：磷酸化、羟基化、糖基化、甲基化、乙酰化等等。4、二硫键的形成在专一性的氧化酶催化下，特定的Cys-SH之间连接形成二硫键。5、与辅基或辅酶结合对于结合蛋白质，与辅基或辅酶结合后才表现出活性。6、形成特定的构象，亚基间的聚合 我现在正在学生物化学，这个是生物化学上的蛋白质的合成步骤。比较专业化，希望能对你有所帮助。

E.coli Electro-Cells E.coli Electro-Cell JM109 制品名 TaKaRa Code 包装量 价格(人民币元) E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300 ■ GenotypeE.coli JM109recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F"[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15]■ 细胞浓度1～2×1010 Bacteria/ml ■ 保存-80℃■制品说明用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。TaKaRa使用独自开发的菌体培养法，制作出了效果极佳的E.coli Electro-Cell JM109。 ■细胞种类α-互补性选择宿主E.coli JM109E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时, 由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109 F"编码的lacZΔM15的结合，显示β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)。利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F"质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，调制单链DNA。■质量标准 使用10 pg的质粒DNA进行转化时：50 μl E.coli JM109 Electro-Cell/10 pg pUC19 plasmid转化时产生的菌落数>1×109 transformants/1 μg pUC19 plasmid F"质粒的稳定性检测对E.coli JM109使用pUC19 DNA进行电穿孔法转化后，在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG, 40 μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。 50 μl的E.coli JM109 Electro-Cell在含有100 μg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产生菌落。 --------------------------------BL21（DE3）pLysS细菌菌株 BL21（DE3）pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。BL21（DE3）pLysS对λDE3（1）是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I，编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21（DE3）pLysS含有pLysS质粒，他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。包装： P9811 500μlhttp://www.promega.com/tbs/tb095/tb095.pdf

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

大肠杆菌乳糖操作子。

肠杆菌科细菌

DNA解旋酶，DNA聚合酶

DNA连接酶的种类有很多，用的较多的是E·coliDNA连接酶和T4DNA 连接酶。从大肠杆菌中获得的DNA连接酶只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳，T4DNA连接酶具有较好的平末端双链连接的作用。 E·coliDNA连接酶所有从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶的称。酶的命名是有规律的。所以不能笼统的根据来源叫。

还有抗性筛选位点，比如氨苄Amp、卡那霉素Kana等等……

Minions 《小黄人》围绕小黄人们的“前格鲁时代”展开叙述，并特别追溯了小黄人的起源。小黄人原本是一种单细胞体生物，之后逐渐进化为专为超级坏蛋提供服务的坏蛋助手。它们服务过的超级坏蛋包括：霸王龙、拿破仑、吸血鬼、北极熊。小黄人总是忠诚地为主人提供各种服务，兢兢业业，毫无怨言——直到它们失手“害死”每一任主人。在痛苦地失去一个又一个主人后，被困在冰洞之内小黄人们愈发焦躁不安，于是小黄人斯图尔特、凯文及鲍勃决定挺身而出，去到花花世界，再次寻找可以效劳的主人。 时值上世纪60年代，超级坏蛋也并不好找。不过总算皇天不负有心人，小黄人三人组无意间看到了“坏蛋大会”广告，该大会声称世界第一女坏蛋斯嘉丽·杀人狂（桑德拉·布洛克配音）会出席大会并发表演讲。为了尽快见到斯嘉丽，小黄人三人组甚至搭上了银行抢劫犯的顺风车。在经历了一系列可想而知的“灾难”之后，小黄人终于如愿以偿地成为斯嘉丽的助手。它们为斯嘉丽执行的第一个任务就是盗取英国伊丽莎白女王的皇冠，任务进展的十分顺利，顺利到呆萌的鲍勃竟然莫名其妙的成为新任国王。但是斯嘉丽对于他们的战果并不满意，她误以为小黄人三人组要自立门户，于是麻烦接踵而至。

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没有最好的职业，这要看你喜欢进攻还是防守了。进攻就选后卫，防守就选大前锋或中锋，要是喜欢全能的那就选小前锋。

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《自由篮球》回归福利大放送 代币商城开业领好礼不知如何解决，为此小编给大家收集整理《自由篮球》回归福利大放送 代币商城开业领好礼解决办法，感兴趣的快来看看吧。潮流竞技网游《自由篮球》回归专属福利大放送！球友们现在回归街头赛场，不仅可以体验全明星卡片、稀有服饰，更可以获得花式动作、庆祝动作等诸多好礼哦~参与阿斯特证券公司活动还有机会直接获得限定角色雅恩/安娜思角色兑换券！与此同时，游戏内的福利活动也在火热进行中！回归的球友们参与专属任务，即可获得700活动喷漆。在活动期间累计签到七天，更可获得回归专属礼包！开启礼包，还能获取更多活动喷漆、洗卡保护券等福利！此外，代币商城开业也有好礼相送！完成比赛即可兑换X-Machina装甲、潮人工作服等好礼，球友们不要错过哦！【回归福利免费放送 雅恩安娜思等你来拿】2月23日维护后3月23日9:00期间，回归体验活动正式开启！满足2023年2月23日维护之后，首次登录游戏或截止2023年2月23日维护前，累计30天以上未登录游戏的账号均可参加。球友只需完成在游戏内活动界面中完成指定任务，直接体验全明星卡片、稀有服饰等好礼！另外，参与与专属回归任务，还能获得海量活动喷漆、洗卡保护券等福利哦！同时，目前阿斯特证券公司活动也在火爆进行中！球友们可以通过抽奖在奖池中获取雅恩兑换券、安娜思角色兑换券等稀有奖励！值得一提的是，球友们在抽奖同时还将获得黑曜石。使用黑曜石，将可兑换阿斯特证券公司的全部角色！切勿错过哦~【代币商城开业 篮球大富翁火热进行】3月3日维护后-3月16日9:00期间，可兑换X-Machina装甲、潮人工作服等好礼的援助商城正式开业！除活动期间首次登录游戏，可获得1000援助代币外，球友们还可通过完成比赛获得更多代币，每日通过比赛可获得代币上限1000个！同时，截止3月9日 9:00前，篮球大富翁将持续开放！球友们每日登录和完成比赛都可获得一定数量的骰子，用来参与篮球大富翁活动！参与活动，不仅可以获得各式奖励和B，还有棋牌对应格子内的秘密金币奖励。累计获得的金币，更是用其兑换符文猫训练服、熊猫运动衫等各种潮流服饰哦~回归福利大放送！代币商城开业领好礼！篮球大富翁火热进行！快来《自由篮球》参与活动赢取奖励吧！

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年末将至，潮流竞技网游《自由篮球》岁末福利大放送！[选秀系统 ]第三赛季正式上线，人气角色“米卡”和“邓肯”将作为“未来之星角色”加入选秀活动！同时，球友们还可以提前领取对应阶段奖励哦！此外，全新活动 [未来大冒险 ]将在维护后正式上线。球友们将化身冒险家，不断进行挑战。完成挑战任务即可获得“高级副能力变更卡”、“黄金核高级制作材料箱子”、“神秘空间边框”等精美道具！更有深受各位球友喜爱的 [自由嘻哈] 及兔年限定活动 [黄金兔子养成活动] 同步开启！“高级闪卡变更券碎片”、“洗卡保护券”、“老虎面具”等精美道具等你来拿！u200bu200bu200bu200bu200bu200bu200b【选秀系统正式上线 人气角色等你拿】本次维护更新后，[选秀活动] 第三赛季将正式开启！人气角色“邓肯”与“米卡”将作为“未来之星角色”，正式加入选秀活动！与此同时，本赛季对选秀系统进行了调整，若球友们仅对当前选秀阶段所对应的奖励感兴趣，可以选择提前结束选秀活动，并获得当前阶段奖励哦！但是领取奖励后，球友将无法再次参与到当前赛季选秀活动中！此外，本次更新取消了选秀结束时间，球友们一定要记得在选秀期间领取相应奖励！如果球友们没有在当前赛季领取奖励，奖励将无法在之后进行领取哦！【改变未来！化身冒险家进行冒险吧！】全新活动 [未来大冒险] 正式上线！在本次活动中，球友们将化身勇敢的冒险家，通过不断的挑战，来探索地下迷宫！当然，当球友们完成挑战后，即可获得“高级闪卡变更券”、“高级副能力变更卡”、“勇士的像素圣剑”及“5星花式动作训练券”等精美道具！不过，身为一名伟大的冒险家，球友们前行的道路上必定会困难重重，“地图雾霾”、“黑暗交易”、“神秘空间”！究竟在这个地下迷宫中该如何前行，等待着各位的又会是什么样的挑战？快到《自由篮球》中一探究竟吧！【自由嘻哈！黄金兔子养成活动上线】深受球友们喜爱的 [自由嘻哈] 再次复刻！消耗喷漆兑换“唱片”，即可抽取“全明星传奇卡片礼包（Z）”、“老虎面具”、“花式动作传说礼包”等超值道具！除夕将至，金兔送福！[黄金兔子养成活动] 正式上线！活动持续至1月26日9:00。活动期间，球友们参与比赛即可获得养成币，使用养成币提升黄金兔的体力或亲密度，就有机会获得“高级闪卡变更券碎片”、“混合游戏机卡带”、“洗卡保护券”等精美道具！选秀活动第三赛季正式开始！化身冒险家逆转未来！自由嘻哈，让我们嗨起来！还有可爱的黄金兔期待着你的到来！现在进入《自由篮球》成为球场上的选秀新星吧~

到百度网去查

《自由篮球》球场秘宝送福利 自由嘻哈福利来袭不知如何解决，为此小编给大家收集整理《自由篮球》球场秘宝送福利 自由嘻哈福利来袭解决办法，感兴趣的快来看看吧。春暖花开，潮流竞技网游《自由篮球》也为球友们带来春季福利！球友们可在球场秘宝活动中兑换包括高级副能力礼包等在内的多种超值礼包，也可通过更新后的篮球电池和胶囊电池，获取包括跑动/耐力强化技能包在内的各种好礼哦！同时，莱拉的体育用品商店也在限时开放中！春季约会服饰自选箱、赛车手服饰自选箱等各种风格的服饰都等着球友前去赢取！此外，自由嘻哈活动在今日火热开启！其中包括花式动作传说礼包等丰富道具，都将在奖池中任球友选择哦~【球场秘宝送福利 篮球电池好礼更新】在3月30日维护后-4月13日9:00期间，球友可在球场秘宝活动中可限时兑换高级副能力礼包、传说卡片礼包（N）、闪卡礼包等豪华超值礼包！兑换次数有限，有需要的球友们千万不要错过哦！此外，帅气的海盗套装服饰限时上架特效篮球电池，而想胶囊电池中也更新了赛车头盔、赛车服两款服饰，以及深受球友喜爱的跑动/耐力强化技能包，各位球友千万不要错过哦！【莱拉体育用品开业 自由嘻哈福利来袭】截止4月13日9:00前，球友们还可前往莱拉的体育用品店兑换自己喜爱的服装道具！本次商品中不但有春季约会服饰自选箱登场，还有赛车手服饰自选箱等多种稀有饰品上线！切勿错过哦！3月30日维护后-4月13日9:00期间，可获得全明星传奇卡片礼包、花式动作传说礼包等多种稀有奖励的自由嘻哈活动将限时开放！球友可在唱片中放置14个奖励后，根据个人喜好选择1或5个的抽取数量。在参与活动过程中，球友还可消耗唱片对奖池进行重置（重置无次数限制）！值得一提的是，进行连续抽取后，下次的重置将变成免费的哦！春季好礼来相送，街头球场精彩对决。莱拉体育用品开业，自由嘻哈福利来袭。快来《自由篮球》参与活动赢取奖励吧！

Garen美服都是直接用名字的，像什么德玛西亚之力、德玛西亚之翼、诺克萨斯之手，都是只有国服才有技能的话由被动开始，依次到大招，都是英文和介绍Perseverance: (Innate): If Garen has not taken damage from any source except minions in the last 9 seconds, he will regenerate 0.5% of his maximum health per second.Decisive Strike (Active): Garen removes all slows affecting him and gains 35% bonus movement speed for a duration. In addition, his next melee attack within 4.5 seconds will deal physical damage, which can critically strike, and silence the target. ■No cost ■Cooldown: 8 secondsCourage (Passive): Garen"s armor and magic resistance are increased by 20% (Active): Garen places a defensive shield on himself, decreasing all damage taken and reducing crowd control by 30% for a duration. ■No cost Judgment (Active): Garen rapidly spins his sword around his body for 3 seconds, dealing physical damage to nearby enemies every half second. Minions and neutral monsters take 75% damage from this ability. Garen can deactivate Judgment early by activating the ability again after 0.5 seconds. Garen ignores unit collision, but his movement speed is slowed by 20% if spinning through minions. Judgment"s damage can critically strike, in which case, only the bonus damage will be multiplied. ■No cost ■Diameter of AoE: 330Demacian Justice (Active): Garen brings down Demacian Justice on his opponent, dealing magic damage, plus additional magic damage based on how much health his opponent is missing. ■No cost ■Range: 400

《自由篮球》俱乐部改版积分补发和问题说明不知如何解决，为此小编给大家收集整理《自由篮球》俱乐部改版积分补发和问题说明解决办法，感兴趣的快来看看吧。亲爱的球友：自由篮球俱乐部系统已在3月23日进行了更新，针对球友们关心的俱乐部积分的问题，我们已根据改版前各俱乐部的等级和积分情况，发放了对应的全新俱乐部积分。还请球友们进入游戏后查看俱乐部积分情况。同时我们给所有俱乐部发放了可以兑换全能力+3（30天）所需的俱乐部积分，俱乐部会长在维护结束后，可直接在增益商店中进行兑换。另外针对改版前已经兑换的增益效果未使用完毕的情况，我们将会统计相关数据之后，对还有剩余增益时间的俱乐部按照相应比例补偿对应的俱乐部积分。（因数据量太大，我们将在后续陆续统计并发放，发放后会进行公告）关于球友们反馈的任务难度和积分获得量问题，我们已在关注。还请球友们多多体验俱乐部系统之后，随时把相关意见和反馈通过微博、微信、客服等渠道发送给我们。我们会参考球友们提出的意见，对俱乐部系统持续进行优化调整。还请各位多多提出意见和建议。《自由篮球》运营团队2023年3月23日

_根的词语解释是：块根kuàigēn。(1)呈块状的根。_根的词语解释是：块根kuàigēn。(1)呈块状的根。结构是：_(左右结构)根(左右结构)。拼音是：kuàigēn。_根的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、国语词典【点此查看计划详细内容】须根之中，有数个肥大而成块状者，如甘?等。词语翻译英语roottuber,tuberousroot法语tuberculessurlesracinesdesplantes二、网络解释块根块根是由营养繁殖的植株不定根或实生苗侧根膨大形成的，一株上可形成多个块根，它的组成不含下胚轴和茎的部分，完全由根构成，甘薯、何首乌的块根都属此类。甘薯块根外形较不规则，大约在栽插后20~30d,其中有些不定根开始膨大形成块根。何首乌的块根呈纺锤形，表面具4~6条纵棱。一般在块根直径约3cm时，内部结构基本分化完成。其副形成层由初生韧皮纤维束周围的薄壁细胞形成，中柱鞘也恢复分裂能力，向外产生一些薄壁细胞，使块根加粗。药用块根还有天门冬、百部等。关于_根的成语根连株逮错节盘根断根绝种根深柢固落地生根命根子_草除根关于_根的词语连根带梢达地知根落地生根翦草除根深根固柢剪草除根六根清净_草除根根深柢固断根绝种点此查看更多关于_根的详细信息

supermarket 超级市场 名词

in the end 一般是用在开头作总结,意思是‘最后"就相当于finally.如果要加‘of"就不要前面的介词‘in".e.g:The end of the story(这个故事的结尾或结局).

.。。。。英语确实不懂

一废”-牛龙这个一废众望所归，众多玩家一致认定的极废种类；牛龙的攻击方式分为两种，一是用嘴咬，二是用头上的角去攻击还附带击退的效果；牛龙还分为野生和驯服之后两种。野生牛龙在一级时血量为440，攻击力为45点，然而体型却非常庞大，有种壮而不实之感；驯服之后的牛龙等级为150级，生命值提升2200.攻击加成到300%，用来打嘟嘟鸟都需要两次才可以打死，害。“二废”-梁龙只能勉强作为货车使用，采集果子、木头等资源，攻击没有伤害；梁龙喜欢向玩家表示友好，当在攻击它时除非是快死了才会逃跑，除此之前会一直用头向表达友好，梁龙被攻击也不会进行反击；“三废”-美颌龙美颌龙体型比渡渡鸟都小，生命值很低，属于近战物种，攻击时注意躲避就好；

无比较级，最高级

越南歌手范琼英的感人法语歌曲《Bonjour Vietnam》Raconte-moi ce nom étrange et difficile à prononcer　　给我讲讲这个奇怪而又难读的名字　　Que je porte depuis que je suis née　　我从出生之日起就和它有了关系　　Raconte-moi le vieil empire et le trait de mes yeux bridés　　给我讲讲这个古老的帝国和我那些垂眼的人们　　Qui disent mieux que moi ce que tu n"oses dire　　他们比我更好地讲述你不敢讲的事情　　Je ne sais de toi que des images de la guerre　　对于你，我所知道的只是战争的图片　　Un film de Coppola, des hélicoptères en colère　　一部科波拉的电影，一些愤怒的直升机Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Un jour, dire bonjour à ton ame　　会有一天，问候你的灵魂　　Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Te dire bonjour, Vietnam　　对你说：你好，越南　　Raconte-moi ma couleur, mes cheveux et mes petits pieds　　给我讲讲我的肤色，我的头发和我的小脚　　Qui me portent depuis que je suis née　　这些都是我与生俱来的　　Raconte-moi ta maison, ta rue, raconte-moi cet inconnu　　给我讲讲你的房屋，你的道路，讲讲我不知道的东西　　Les marchés flottants et les sampans de bois　　流动的市场和木头舢板　　Je ne connais de mon pays que des photos de la guerre　　对于我的国家，我的认识只通过战时的照片　　Un film de Coppola, des hélicoptères en colère　　一部可波兰的照片，一些愤怒的直升机Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Un jour, dire bonjour à ton ame　　会有一天，问候你的灵魂　　Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Te dire bonjour, Vietnam　　对你说：你好，越南Les temples et les Bouddhas de pierre pour mes pères　　寺庙和石头佛像，这是我的父亲们的事　　Les femmes courbées dans les rizières pour mes mères　　水稻田里弯腰劳作的妇女们，这是我的母亲们　　Dans la prière, dans la lumière, revoir mes frères　　在灯光下，在祭台前，又看到了我的兄弟们　　Toucher mon arbre, mes racines, ma terre　　触摸到我的树，我的根，我的土地Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Un jour, dire bonjour à ton ame　　会有一天，问候你的灵魂　　Un jour, j"irai là-bas　　会有一天，我去那里　　Te dire bonjour, Vietnam　　对你说：你好，越南

问题一：小黄人电影里单眼叫什么 楼主你好 小黄人电影里一共三个小伙伴 最高的那个叫凯文　比凯文矮两只眼的叫鲍勃 单眼的那只脚斯图尔特和英前首相同名 电影里斯图尔特拔出石中剑也成了首相 有图有真相求采纳 问题二：单眼小黄人和双眼小黄人有什么区别 双的是公的.单的是母的. 问题三：为啥有的小黄人只有一只眼睛，有的有两只？单眼小黄人和双眼小黄人到底有啥区别？悬赏50. 谢谢！ 50分 为了整个画面的和谐，你想想，本来他们外表都差不多一个样，如果全是一只眼睛或者是两只眼睛的话，整个画面感会不舒服的 问题四：小黄人叫什么名字 小黄人是3D动画电影《卑鄙的我》中主角格鲁（Gru）使用变种DNA、脂肪酸加香蕉泥做成的生物。这些小黄人数量众多，拥有自己的语言，短胳膊短腿走起路来非常可爱，他们看似做事不专心但工作能力极强，听令于格鲁但却拥有自己的思想。小黄人拥有极其丰富的表演能力，并且几乎什么都能笑。其中的代表有Stuart、Phil、Kevin、Bob、Dave、Jerry、Jorge、Tim、Mark，虽然每个小黄人都有自己的名字，但统称做Minions。小黄人的出现使《卑鄙的我》影片出彩，萌萌的样子使得小黄人在全球拥有一大批粉丝。 问题五：小黄人是单眼的好看.还是双眼的好看 单眼的少，双眼的多，不过都好看。 问题六：小黄人独眼珠叫什么? Stuart 斯图尔特 眼睛：单 头发：塌塌的小中分 身材：标准　　身高：94cm（最矮）　　喜欢：玩耍和大笑　　讨厌：被其他小黄人欺负 问题七：小黄人共有几部每部的名称分别叫什么 神偷奶爸1 神偷奶爸2 小黄人大眼萌。 问题八：这个小黄人叫什么名字 Bob 很萌很蠢的那个 三个里面智商最低 问题九：一只眼睛的卡通，黄色。叫什么，那个动画里的？ 小黄人是3D动画电影《卑鄙的我》中主角格鲁（Gru）使用变种DNA、脂肪酸加香蕉泥做成的机器人。这些小黄人数量众多，拥有自己的语言，短胳膊短腿走起路来非常可爱，他们看似做事不专心但工作能力极强，听令于格鲁但却拥有自己的思想。小黄人拥有极其丰富的表演能力，并且几乎什么都能笑。其中的代表有Stuart、Phil、Kevin、Bob、Dave、Jerry、Jorge、Tim、Mark，虽然每个小黄人都有自己的名字，但统称做Minions。小黄人的出现使《卑鄙的我》影片出彩，萌萌的样子使得小黄人在全球拥有一大批粉丝。

这三个短语意思都不一样. 1、in the end意思“最后、终于”.它的意思相当于finally,at last.它往往表明事情的结局,在句子中一般单独使用. 如:Xiao Ming passed the exam in the end.最后小明通过了那次考试. Ice becomes smaller and smaller until in the end it disappears completely.冰变得越来越小,直到最后完全消失. 2、at the end of +名词短语,意思是“在……末端/尽头”. 如:There is a clothes shop at the end of the street.在这条街的尽头有一家服装店. Li Ming came across a few new words at the end of the article.这篇文章的最后,李明碰到了一些生词. 3、by the end of +表示时间的名词,意为“到……末为止,到……最后”,注意:如果of后面接表示过去时间的名词,那么本句的谓语必须用过去完成时态. 如:How many English words had you learned by the end of last term?到上学期末为止,你学会了多少个英语单词? I had been to the Summer Palace three times by the end of last year.到去年年末我去过颐和园三次了.