5'race 只扩增出一条带 测序回来不对,能找到通用引物,找不到特异引物,是什么原因啊

对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.

对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.
我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求?

冰力先锋1年前2

蓝带喇叭 共回答了12个问题 | 采纳率100%

1.如果是非特异性扩增引起的无法扩增目的条带,那么可以提高退火温度,或者换酶,或者先切胶回收较浅的目的条带,再次扩增
2.如果退火温度太高,可以用两步法扩增
3.如果引物GC值太高,可以加DMSO

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PCR引物的问题PCR时,单引物可以扩增模板吗?

安然03171年前2

sinbad9000 共回答了16个问题 | 采纳率81.3%

一般来说,引物都是成对设计的,包括上游引物和下游引物；除非你设计出来的上游引物与下游引物相同,才可用单引物扩增.否则,若用单引物则只能扩出一条链

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巢式PCR,阴性对照出现非特异性扩增问题

巢式PCR,阴性对照出现非特异性扩增问题
第一泳道：第一轮扩增的阳性对照、 第二泳道：阴性对照
第三泳道：marker、 第四、五泳道：第二轮扩增的阳性对照
第六泳道：用第一轮扩增的阴性对照产物做的模板,按理说不应该有那个100bp的抹带.如果是非特那4、5泳道却没有.引物二聚体也不应该有100bp大吧~
这个是什么,应该怎么消除

七潜1年前2

漂流的孤独心 共回答了21个问题 | 采纳率76.2%

第六道的条带并不是扩增产物.
在进行第二轮扩增的时候,需要把第一轮的产物稀释至少100倍在扩增.

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以真核基因mRNA设计引物扩增出的是什么?是DNA还是mRNA?

zingsun1年前2

专上看书网他娘 共回答了16个问题 | 采纳率100%

cDNA

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dna扩增时的marker怎么使用

清醒纪04071年前3

yorkduan 共回答了15个问题 | 采纳率80%

DNA marker是用来初步估算你扩增的DNA大小的.电泳时使用,一般加到扩增产物相邻的电泳孔内电泳.Marker大小一般要求有与扩增DNA分子大小相近.比如,如果扩增片段为1kb,则marker中最好有1kb左右的分子,如果扩增产物为3kb,则需要用有3kb大小的marker.

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PCR基因扩增问题退火温度根据什么判断?

关关雎鸠1年前2

zy23120792 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

根据引物的Tm值来算,一般来说低于Tm值5℃.
当然最好还是做一个梯度试一下.

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为什么用pcr技术扩增目的基因不是用含碱基的核苷酸而是用引物,引物是什么东东,我高中的不要说的太复杂

o2jam101年前1

黄子豪 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

首先,我们来说一下PCR技术所用的酶.所用的酶是Taq DNA聚合酶,现在已知的所有的DNA聚合酶在使单个的脱氧核苷酸聚合的时候都有一个共性,它无法从头开始,只能在一段序列的末尾续接.在生物体内DNA自行复制的时候也是如此,只不过那个引物是生物体内RNA聚合酶合成的一段RNA,在PCR的时候引物是人们合成的一段DNA.PCR技术大致有三步：第一步94°C使DNA变性,双链变单链；第二步65°C退火；第三步72°C延伸 依次循环.Taq DNA聚合酶是从极端微生物体内提取的,可以耐受高温,所以用它.说到引物,就可以说说一些在引物上做文章的技术.定点突变技术,在PCR的时候把引物的某一个核苷酸换成需要的突变核苷酸,PCR之后的产物就是在人为突变引物的后面续接而成的,就可以得到突变的目的DNA.这里只是举一个典型例子,具体的在你今后学《分子生物学》和《生物化学》会逐步学到.

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老师,我想做标准曲线验证一下扩增效率,知道rna的浓度,怎么换算成拷贝数,有人说起码要知道bp数,

老师,我想做标准曲线验证一下扩增效率,知道rna的浓度,怎么换算成拷贝数,有人说起码要知道bp数,
我又不是做的质粒,就是提取标本的rna,然后想倍比稀释做一下曲线,这个bp又是谁的bp呢,ABI7300的标准品要输入拷贝数,我输入RNA的浓度可以吗

haojun20011年前1

西风野狼 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%

你这个情况不需要知道拷贝数目.把样品等比例稀释,比如1:4,或者1:10. 至少做4-5个点.PCR后按照相对浓度和扩增的Ct值做曲线,就可以得到扩增效率了.
如果要知道拷贝数目,必须有已知浓度的含有该序列的质粒来作为批准品做标准曲线.

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PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，其基本原理和过程与细胞内DNA的复制类似．下列关于两者共同点的叙述，不正确的是

PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，其基本原理和过程与细胞内DNA的复制类似．下列关于两者共同点的叙述，不正确的是（　　）
①边解旋边复制
②遵循碱基互补配对原则
③需要引物
④过程可分为变性、复性、延伸等步骤．
A．①⑦
B．⑦③
C．③④
D．①④

3713305411年前1

一叶飘香80 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

解题思路：PCR是体外扩增DNA的技术，该反应需要在一定的缓冲液中才能进行，需要提供：DNA模板，分别于两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行．PCR过程可分为变性、复性、延伸等步骤．

①PCR反应和体内DNA复制都是边解旋边复制，故①正确；
②PCR反应和体内DNA复制都遵循碱基互补配对原则，故②正确；
③PCR反应需要引物，但体内DNA复制不需要引物，故③错误；
④PCR过程可分为变性、复性、延伸等步骤，而体内DNA复制没有这些步骤，故④错误．
故选C．

点评：
本题考点： 用DNA片段进行PCR扩增．

考点点评： 本题考查PCR技术与体内DNA复制的比较，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识要点，准确判断问题的能力．

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RAPD引物在DNA双链上,只与一条连结合扩增,还是2条连都可扩增?

RAPD引物在DNA双链上,只与一条连结合扩增,还是2条连都可扩增?
RAPD不是一条引物吗?一条链上亦多个结合位点怎么扩增的?

四伦1年前2

RA2000 共回答了20个问题 | 采纳率95%

RAPD,即随机扩增多态性DNA技术：既然是随机引物,那么他在整个基因组中都有结合位点,当然结合也是随机的,只要能够互补上去都能够扩增出条带,经电泳检测变可以检出

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在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那

在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（　　）
A. 540个
B. 8100个
C. 17280个
D. 7560个

qiujiayuantysq1年前2

菜子地 共回答了22个问题 | 采纳率86.4%

解题思路：计算DNA分子复制过程中需要的某种游离的脱氧核糖核苷酸数量，先根据DNA分子的碱基互补配对原则计算出DNA分子中该脱氧核糖核苷酸的数量，然后用DNA该脱氧核糖核苷酸的数量乘以增加的DNA分子数．

解；由题意知，目的基因含有1000个碱基对，即2000个脱氧核糖核苷酸，其中腺嘌呤脱氧核糖核苷酸为460个，那么该DNA分子中胞嘧啶脱氧核苷酸=（2000-460×2）÷2=540个，DNA扩增仪中扩增4代，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（2⁴-1）×540=8100个．
故选：B．

点评：
本题考点： DNA分子的复制；DNA分子结构的主要特点．

考点点评： 对于DNA分子复制过程和碱基互补配对原则的综合应用是解题的关键．

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PCR技术能扩增血液中的病毒核酸吗?

pcr技术能扩增血液中的病毒核酸吗?
若要检测一个人是否患***,可以用pcr技术扩增血液中的什么?
a白细胞dna b病毒蛋白质 c血浆抗体 d病毒核酸
难道pcr技术可以直接扩增hiv病毒?大家知道hiv病毒是rna病毒.大家一起学.

szyhdavis1年前4

bgbg123 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

普通PCR：RNA病毒的扩增是要经过逆转录的,把RNA转录为DNA,然后通过引物结合,PCR扩增,在电泳跑胶看条带得到结果!
荧光PCR：现在有一步法的荧光PCR,把逆转录和PCR扩增一起进行,原理和上面一样,只是加了荧光探针,不用跑胶,直接得到结.果.

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RT-PCR扩增条件问题我是做real-timePCR,需要测定六个基因的mRNA表达差异.这六个基因我是分开来扩增的,

RT-PCR扩增条件问题
我是做real-timePCR,需要测定六个基因的mRNA表达差异.这六个基因我是分开来扩增的,因为样本太多.每个样本都达到了平台期的,并且我所加的mRNA的模板数、引物量、dye、mix都是一样的.但是我在扩增的时候,为了达到最大的扩增效率,这六个基因我都分别采取了不用的扩增温度、循环数,这样各组得出来的CT值具有可比性吗?期待尽得到答复,谢谢……

1654781年前1

malan868 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%

应该可以,CT只是和你初始的mRNA表达量有关,当然的是在各种酶和原料充足的的情况下,和循环次数没什么关系 不过有问题的就是你的荧光蛋白发光会受到温度影响的,你只能大概的比较下,表达量大的话还好,如果差异小的,建议重新做一下

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利用PCR技术扩增含目的基因的DNA分子来形成目的基因,需要3步.为什么?

紫蝶_漂雪1年前1

爱的泡泡 共回答了13个问题 | 采纳率100%

PCR技术过程简介
1.将目的基因与引物,以及耐高温的DNA聚合酶加入PCR扩增仪中.加热到90~95℃.让目的基因解旋.
2.降温至55~60℃,让引物与①中的DNA单链结合.
3.加热至70~75℃,让耐高温的DNA聚合酶工作,大量扩增目的基因.

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转化后挑取含有目的片段的单菌落摇菌扩增以后划盘子,几天后挑取部分菌落做PCR无带,不知是何原因?

转化后挑取含有目的片段的单菌落摇菌扩增以后划盘子,几天后挑取部分菌落做PCR无带,不知是何原因?
划盘子后剩余的菌液提质粒测序结果与预期的片段相同，通用引物和自身引物开始都能得出很亮的带，而且质粒酶切后切成两段，也与预期结果相同大小，PCR的阳性对照出现正确结果，目的片段与载体脱离还是保留的菌种失活?

h寒羽良h1年前3

fenbad 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

如果你确认 “转化后挑取含有目的片段的单菌落”这个步骤正确的话,就是你的PCR出问题了么,继续扩增便可.
目的片段与载体脱离还是保留的菌种失活? 应该都不会.我认为你的PCR体系除了问题,换一组酶和buffer,提一下模板,重做吧,会出来的.

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问个很菜的问题：在跑完pcr以后目的基因已经扩增了很多了,然后再切胶纯化后应该就可以用来去测序了,为什么还要进行后面的连

问个很菜的问题：在跑完pcr以后目的基因已经扩增了很多了,然后再切胶纯化后应该就可以用来去测序了,为什么还要进行后面的连接转化重组质粒的抽提和酶切鉴定啊,他们有什么意义?

wenge3211年前2

skycrazy 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%

你胶回收回来后,虽然看上去用来测序的量是够了,但是你的基因总不是只用来测个序吧,还有很多的测序工作需要完成,比如基因表达、保种等等.将基因连接上质粒后,转入细胞内,可以根据不同载体的功能来研究该基因,或者扩增该基因以及带基因的载体.可以将质粒抽出来保种和菌液保种,一切都要给自己留个后路和实验成果不是~酶切鉴定就只是个鉴定而已,看看基因是否连在了载体上.

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胰岛素基因导入大肠杆菌而大量扩增属于分子水平克隆还是细胞水平克隆

通杀1年前1

qzw328 共回答了20个问题 | 采纳率85%

属于分子水平克隆

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引物是否只是PCR扩增中的目标链,它与扩增产生的DNA链序列有什么区别?

朝天两棍1年前1

舒密伽 共回答了20个问题 | 采纳率90%

引物是核算复制的起点片段,体内是RNA,PCR技术使用的是DNA片段,将来成为扩增之后的DNA组成部分,位于其一端,引物的量决定扩增所达到的DNA量

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性染色体只存在于生殖细胞队吗?还有为什么pcR技术扩增目的基因前要已知一段目的基因的核苷酸序列呢

lytly1年前1

耳沉厂 共回答了23个问题 | 采纳率87%

不对,任何体细胞都有性染色体,因为它们都是从同一受精卵增殖分化而来的.PCR需要目的基因做模板才可大量复制.

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一个含有200对脱氧核苷酸的DNA片段,用PCR技术经三次扩增,共需多少个游离的脱氧核苷酸

V胆小鬼V1年前1

dubaiwangll 共回答了20个问题 | 采纳率95%

三次扩增变成2的三次方倍液就是8个拷贝（包括原来那个）
如果不考虑引物的长度损耗,那么就是多了7 x 200对脱氧核苷酸
液就是2800个游离的脱氧核苷酸

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PCR技术扩增的目的是什么?为什么要PCR技术扩增?

kao321年前2

512032lin 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

PCR技术就是人模拟DNA复制过程,体外大量获得自己的兴趣基因,然后PCR产物可以做很多事情,酶切,TA克隆测序等等.根据实验者的用途.PCR技术几乎每个生物学实验者都要做的一个实验.

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假定DNA片段含200对脱氧核苷酸,经PCR技术3次扩增,从理论上计算,除需要引物14个外,还需要游离的脱氧核苷酸多少个

假定DNA片段含200对脱氧核苷酸,经PCR技术3次扩增,从理论上计算,除需要引物14个外,还需要游离的脱氧核苷酸多少个 答案是2520…

bob12031年前1

zhanghx1 共回答了19个问题 | 采纳率78.9%

扩增三次,最后DNA片段为,8个片段,1600对,减去原来的200对,还需要包括引物在内的1400对（2800个）,每个引物20个,共使用14个引物,为280个,最后需要游离脱氧核苷酸2800-280＝2520个.

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利用pcr技术扩增dna需要什么

4egw6sq1年前2

qqw19821029 共回答了19个问题 | 采纳率78.9%

DNA模板、2个引物、TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg+,buffer、无菌水

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PCR 扩增过程中寻找抗旱基因的位置依靠引物,为什么?

bmwjime1年前2

前生缘今世情 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

定位基因在染色体上的位置用图位克隆法啊,就是看目的基因和分子标记之间的位置关系,当然需要各种各样分子标记的引物.

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性染色体只存在于生殖细胞队吗?还有为什么pcR技术扩增目的基因前要已知一段目的基因的核苷酸序列呢

wallacejsh1年前1

zcj1002 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

不对,任何体细胞都有性染色体,因为它们都是从同一受精卵增殖分化而来的.PCR需要目的基因做模板才可大量复制.

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想扩增一段已知基因的序列,约1500bp,不知道引物的位置有何要求,是不是最好靠近两段?

想扩增一段已知基因的序列,约1500bp,不知道引物的位置有何要求,是不是最好靠近两段?
pcr扩增出1500bp的片段,发生错配的概率大不大?

明媚小妖1年前3

kenybaker1104 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%

你想扩增了干嘛 如果是做过表达就是只要包含整个CDS区就行了 用高保真的酶就行了怕错配的话

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目的基因什么时候扩增目的基因是不是连接载体后再扩增?

狂飙族合1年前1

若飞1314 共回答了18个问题 | 采纳率72.2%

对.
目的基因就是因为自己不能复制和转录,所以要用载体.
显然,单独地用目的基因扩增是不可以的.

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PCR在n轮扩增后DNA分子数.

PCR在n轮扩增后DNA分子数.
PCR：1条DNA分子进过n轮扩增后
DNA分子数,含长链或中链的DNA分子数,只含短链的DNA分子数各是多少?

adai7161年前2

炭头王 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

DNA分子数为2的n次方,含长链或中链的DNA分子数为2n,只含短链的DNA分子数为2的n次方减去2n

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DNA在细胞内复制和在体外扩增所需的引物相同吗

zhongchengsa1年前1

北方cc 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

观点:不同.DNA在细胞内复制引物是RNA短链,在体外扩增（PCR）需要DNA单链引物.观点来自： “聚合酶只能催化脱氧核糖核苷酸加到已有核酸链的游离3'-羟基上,而不能使脱氧核糖核苷酸自身发生聚合,也就是说,它需要引物链(primer strand)的存在.”“综上所述,DNA聚合酶的反应特点为:……反应需要有引物3'-羟基存在……”x0d“与其他种类的DNA聚合酶一样大肠杆菌DNA聚合酶I只能在已有核酸链上延伸DNA链,而不能从无到有开始DNA链的合成,也就是说,它催化的反应需要有引物链（DNA链或RNA链）的存在.”（本人注:主要起复制作用的是DNA聚合酶III,不过它同样需要有3'-OH的引物链存在）x0d“如前所述,所有已知的DNA聚合酶都不能发动新链的合成,而只能催化已有链的延长反应.然而RNA聚合酶则不同,它只需要DNA模板存在,就可以在其上合成出新的RNA链.这就是说,DNA合成需要引物,RNA合成不需要引物.那么,每一个冈崎片段是怎样开始合成的?它的引物是什么?现在知道,在DNA模板上需先合成一段RNA引物（催化该反应的酶称为引物合成酶.引物的长度通常是几个核苷酸至10多个核苷酸,DNA聚合酶III可在其上聚合脱氧核糖核苷酸,直至完成冈崎片段的合成.RNA引物的消除和缺口的填补是由DNA聚合酶I来完成的.最后由DNA连接酶将冈崎片段连成长链.）,DNA聚合酶从RNA引物的3'-OH端开始合成新的DNA链.”x0d“DNA的体外酶促合成必须加入少量的DNA才能进行.由于DNA在提取过程中常受到机械切力或酶的作用,从而引起磷酸二酯键的断裂.……显露出3'-羟基的核酸链可作为引物,链延长的信息来自对应的互补链.由此可见,在DNA聚合酶反应中,加入的DNA同时起两者作用：一条链作为引物,另一条链作为模板.” 以上引自：王镜岩等.生物化学(下册).高等教育出版社.第三版.412~418.

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基因复制与体外扩增的异同.求完整作答.

春天19721年前1

我12345 共回答了20个问题 | 采纳率90%

相同点:以亲代DNA为模板,在酶的作用下,以半保留方式合成具有相同序列的新的子代DNA,实现模板包涵的遗传信息的复制.
不同点:1.相关酶及蛋白:体内基因复制需要单链DNA结合蛋白,DNA解链酶,DNA聚合酶Ⅰ、Ⅲ等共同作用；体外扩增一般使用耐高温的TaqDNA聚合酶.2.子代DNA分子形成方式：体内基因复制前导链为5'端到3'端的连续延伸,滞后链为半不连续延伸；体外扩增两条链均为5'端到3'端的连续延伸.3.体外扩增需要经历高温解链（90-96摄氏度）、低温退火（25-65摄氏度）、延伸（70-75摄氏度）三个过程来完成一次扩增；体内复制则是在相对均一的温度下完成解链与延伸.
参考：DNA复制和DNA聚合酶链反应

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利用PCR技术扩增目的基因,引物是什么?

利用PCR技术扩增目的基因,引物是什么?
引物是什么?有什么作用?不要说得太简洁,

mark_0001年前2

娃哈哈1337 共回答了14个问题 | 采纳率78.6%

引物本来就是单链的.书上画成双链才怪.
PCR所用的DNA聚合酶只能顺着已经存在的一小段DNA的尾巴来接着合成,它不会自己起头.引物就是这么一小段用来起头的DNA.
DNA本身很长很长,我们扩增时,只能扩增其中一小段基因.如何确定扩增哪一小段呢?就需要引物来帮忙了.引物具有特殊的核苷酸序列,使它正好能与DNA中某个特定的部位结合起来.你想一想,从直线上截取线段时是不是需要一左一右两个点呢?引物就相当与这两个点,所以PCR需要两个引物.这两个引物,我们通常称之为一对引物,一个叫上游引物,一个叫下游引物.

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如果是题设问某DNA片段含200对脱氧核苷酸,问扩增3次,理论上需要多少个游离的核苷酸?

kkhh551年前3

丰膳出中 共回答了19个问题 | 采纳率100%

200对ddNTP,200 X 2 = 400个
扩增一倍 400 X 2 =800个
扩增两倍 400 X2 X2 = 1600个
扩增三倍 400 X2 X2 X2=3200个
去掉原来的 3200 -400 = 2800个 也就是2的3次方 （8-1）X 400=2800
RI,2520,我假说你的引物 两条,每条都是20,那么一次扩需要2引物,二次扩需要4引物,三次扩需要8引物,加起来 2 + 4 + 8 =14条引物,共消耗14 X 20=280 个固定的NTP
那么2800-280=2520,倒是说得通.

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引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%.这句话如何理解?什么是非特异性扩增区?为什么同源性不能过高?过高会造成什

引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%.这句话如何理解?什么是非特异性扩增区?为什么同源性不能过高?过高会造成什么后果?

明天8861年前1

龙卷风了 共回答了28个问题 | 采纳率75%

非特异扩增区就是,设计引物的时候设计的引物靶序列以外有可能跟引物结合的序列.与非特异性结合位点的同源性越高,引物就越有可能与其结合,而不是结合到你设计的模板靶序列上去,于是就越有可能PCR出你不想要的序列出来.

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a-地中海贫血采用基于PCR的直接扩增缺失基因断裂点技术,检测范围为a-3.7,-a4.2,-SEA三种缺失型

a-地中海贫血采用基于PCR的直接扩增缺失基因断裂点技术,检测范围为a-3.7,-a4.2,-SEA三种缺失型
请问这是不是地中海贫血

土vv1年前2

活菩萨 共回答了16个问题 | 采纳率100%

血红蛋白电泳检测是什么结果,是不是HBF异常才做基因检测的?你这个应该是地贫了,但是没你血常规不知道分度,建议你继续找你的主诊医生看,拿对你的BB比较好,或去当地儿童或妇幼看.

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同样的模板,只是引物不同扩增基因组上不同的片段,为什么条带亮度差别很大

同样的模板,只是引物不同扩增基因组上不同的片段,为什么条带亮度差别很大
我是分段扩增一病毒的基因组，用随机引物反转录得到模板，然后进行PCR，采用不同的引物，结果亮度差别太大，是怎么回事啊

ct88661年前2

hmj_2007 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

这个很正常,引物本身的结构和模板的结合牢固程度,就会影响扩增的效率,导致扩增出来的片段亮度不同.

1年前查看全部

利用反向PCR技术推测一段已知DNA的旁侧序列,在得到含有未知序列的扩增产物以后怎么做?

cornermen1年前1

jiuyis 共回答了17个问题 | 采纳率82.4%

根据已知序列设计测序引物,测序.

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引物扩增片段太小(360bp),跑普通PCR去克隆测序可行不

咖啡不加方糖1年前4

失忆的柏拉图 共回答了13个问题 | 采纳率69.2%

看你是实验目的是什么：
如果是为了对目的基因片段测序,用普通taq酶pcr没问题,而且,也没必要做到克隆里再测,可直接用pcr产物测；
如果是为了做克隆已备后续实验,建议你用高保真的taq酶,普通taq错的随时随地,运气好一次就成了,运气不好,能把人折磨死.

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请问各位大虾,PCR时,72℃延伸1min,能延伸多少碱基对?扩增1300bp的长度,一分钟够吗?

赵卓1年前1

vogue11 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%

延伸时间取决于目的片段的长度和所使用的DNA聚合酶的催化效率.按最常用的Taq酶看,其催化效率约为1200bp/min.扩增1300bp的片段,1分钟不够.如果留点余量的话,可设置为80秒.

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PCR反应体系不同 但反应步骤相同 能不能同时在PCR仪上进行扩增?

PCR反应体系不同 但反应步骤相同 能不能同时在PCR仪上进行扩增?
会有什么不良影响呢？为什么定量就不好？

骠手一1年前2

shihf2001 共回答了14个问题 | 采纳率71.4%

做普通PCR可以的,问题不大.定量就最好不要了.

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在PCR技术中,循环四次后为什么会得到11条目的基因?是不是也算上了第二轮所扩增的目的基因了?

在PCR技术中,循环四次后为什么会得到11条目的基因?是不是也算上了第二轮所扩增的目的基因了?
请说出目的基因的计数过程,

johoney1年前1

醉翁亭记 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

公式：m=2^n-n-1
m为目的基因数,n为循环次数u

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扩增4kb的基因怎么设计引物

pp3101年前1

dan_nad 共回答了16个问题 | 采纳率93.8%

去哪里找最出色的生命科学学术交流论坛?>>> 如果你是直接从DNA中克隆基因的话,设计一对引物,用高保真的Phusion或者Vent酶就可以.NEB的产品很不错.
如果你要从cDNA中克隆的话,考虑到RNA的降解,你不能使用一对引物来克隆.而是设计两对或者多对引物.比如,你你针对序列这几两对引物,前一对引物的下游,和后一对引物的上游,应该设计15个bp的重合.前一对引物的上游和后一对引物的下游则位于整个4kb基因的首位两段.
这样,你用这两对引物先克隆出4kb基因的两个短片段.然后将两个短片段作为模板,以前一对引物的上游引物,和下一对引物的下游引物来在一个PCR反应体系中扩增,获得4kb的全片段.、
如果你要设计多对引物,方法类似,都是上一段的下游和下一段的上游有十几个bp的重合
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补充一下,如果你是从基因组中直接克隆的话,那就是设计一对引物.使用高保真的聚合酶做long PCR,目前的Phusion Taq酶对于4kb的片段是没什么问题的.我自己曾经尝试克隆过3kb的片段,非常的清晰,没有任何拖带.但是成功的关键在于你要设计特异性的引物,建议你设计30-50个bp左右的引物（引物越长,对模板的特异性要求越高）,提高退火温度,来保证引物的特异性.
此外,加长PCR程序中的变性时间,来保证基因组DNA的完全接连,适度延长退火时间,加大引物使用的量,来保证引物和模板的结合.毕竟你是从整个基因组中寻找你的目的基因.

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不同基因组用同一引物扩增的结果会怎样

198410241年前1

58wo4 共回答了14个问题 | 采纳率85.7%

你可以在NCBI中比对这两种基因组mRNA中上下游引物即将扩增的那一段,看看是否一致,若一致,则PCR产物是相同的,不一致的话则不同

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若以N 表示扩增循环数,当一条双链模板循环扩增30次时,反应体系中总分子数多少?非目的产物多少?目的产物多少?

钱江江1年前1

jxw_9911 共回答了22个问题 | 采纳率95.5%

这取决于你的模板和引物的关系,以及扩增效率.
如果引物是从模板的两端开始,也就是扩出的产物和模板一样,那么总的拷贝数为A*（1+Y）^N(其中A为初始拷贝数,Y为扩增效率,N为扩增循环数)
如果是从大的双链DNA模板中扩增一个小片段,期望的目的产物首先在第2个循环后第3个循环时出现,然后扩增产物呈指数增长,同时非特异扩增产物是线性扩增的,需要注意的是非特异产物在下轮会产生一个特异产物.为方便理解我先假设扩增效率Y=1,初始拷贝数A=1,做一下推导.注：以双链算一个分子.
第1轮后：目的产物：0,非目的产物：1
第2轮后：目的产物：0+1,非目的产物：2
第3轮后：目的产物：2+2,非目的产物：3
第4轮后：目的产物：8+3,非目的产物：4
.
第N轮 后：目的产物：(2^N)-N-1,非目的产物：N
（+号前面是目的产物扩增,加号后为非目的产物扩增）
所以体系中总分子数为：(2^N)-N-1 + N +1（模板）=2^N
非目的产物为：N
目的产物为：(2^N)-N-1
如果考虑A和Y的话,就将上面的数字乘A,2用1+Y代替.

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关于pcr扩增上游引物扩增到什么地方终止,怎么终止是上游引物选扩增模板,然后下游引物以新合成的模板为模板扩增?

carol13951年前1

如是忘了多好 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

DNA有终止子的,扩增到终止子的地方就停止了.具体终止子怎么把它终止的,看生化课本吧.不同物种的DNA也不一样.
一般给你碱基序列的那条模板,假设为A链,它的互补链是B链.
第一次延伸：上游引物是识别B链往下延伸的,它延伸出来的碱基序列跟A链一样.下游引物是识别A链往下延伸,它延伸出来的序列跟B链一样.
5'----------------3’A
3------5 上游引物
下游引物5------3
3'----------------5'
第二次延伸：新合成的链同原始的模板一样也可作为模板扩增.

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大肠杆菌16S rDNA鉴定用27F和1492R引物扩增时候的PCR条件是什么?

黑夜之神1年前1

我是爱相随 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

预变性 94℃ 5min 1 cycles
变性 94℃ 30s
退火54℃ 30s
延伸72℃ 1min30s 35cycles
延伸 72℃ 10min 1cycles

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运用PCR技术复制DNA时,DNA的扩增方向是什么?是不是DNA的合成方向总是从5“端向3”端延伸

lvli991年前1

mamingyue 共回答了22个问题 | 采纳率95.5%

用pcr扩增时,就是5'到3',因为所用的酶就只有5'到3'DNA聚合酶
DNA在体内生物合成时,也是5'到3',另外一条反向DNA链看上去是3'到5',其实也是先5'到3'合成冈崎片段后,再进行连接合成.

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英语翻译随着经济的持续发展和基础建设工程的扩增,为了提高生产效率,人们对筑路养路机械的质量和稳定性都有了更高的要求.本文

英语翻译
随着经济的持续发展和基础建设工程的扩增,为了提高生产效率,人们对筑路养路机械的质量和稳定性都有了更高的要求.本文对稳定土拌和机中WBY210型稳定土拌和机的系统组成和功能进行了简单介绍,并在此基础上对起重机常见故障以及故障的原因进行了分析,提出了故障排除和检查的一般方法,并且设计一套液压系统故障自诊断系统方案.以保证工程的正常运行减少经济损失和人员伤亡,也可以为稳定土拌和机的维修人员和售后服务人员参考之用.
关键词 稳定土拌和机 故障检测 自诊断系统

zhongkeyu1年前1

yanlin329 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

With the development of economic and infrastructure engineering amplification, in order to improve production efficiency, people on the road maintenance machinery quality and stability are higher requirements. The stabilized soil mixing machine WBY210 stabilizer system composition and function are introduced, and on the basis of the crane faults and fault reason undertook an analysis, put forward the troubleshooting and examining method, and design a set of hydraulic system fault self diagnosis system. In order to ensure the normal operation of the project to reduce the economic losses and casualties, also can be stabilized soil mixing machine repair personnel and customer service staff for reference.Key words soil stabilization machine fault detection diagnosis system

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PCR扩增过程中,生成的扩增片段大小一样吗?如果不一样,是否影响扩增片段的纯度?

znwll1年前1

paddy_84 共回答了20个问题 | 采纳率100%

如果引物特异性比较高,模板比较纯的话产物也是一样的,如果担心有其他的片段,可以用第一次PCR产物稀释后作为模板继续PCR,这样就能得道比较纯的产物了.

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PCR热循环仪中的扩增DNA Probe不再需要加入一层油的原因

PCR热循环仪中的扩增DNA Probe不再需要加入一层油的原因
过去不用热循环仪是需要在所有反应试剂比如：dNTP,MgCl2,Prime等加完后,最后在表面加入一层油的,而现在热循环仪中不再需要加入,请教长期从事PCR的前辈.

向丽江1年前3

—树心— 共回答了20个问题 | 采纳率95%

以前用的PCR仪是从离心官底部加热的,不加入石蜡油的话,本来微量的溶液就会因为水的挥发而导致体系浓度增高,难以扩增成功.
现在的PCR仪改良了,都是从离心管盖上边加热的,解决了那个麻烦.
你可以打开仪器看看的.

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