nt

在表示关于 的 意思是 一般不能用 of 替换 about 我想了解关于你的一切 如果换成of 的话 句子意思就变了 变成了 我想了解你们大家 all of you 就是你们所有的人

是不是nobody啊 ？里面有些韩语- -

i just want to open the door for alll of you我只是想给你们开门例句:1.You want me to open the garage for you? 你要我帮你开车库门吗？

pron：代词的缩写num：数词 , numeral的缩写int：感叹词的缩写n. 名词 ,noun的缩写v. 动词 , verb的缩写adj. 形容词, adjective的缩写adv. 副词, adverb的缩写art. 冠词, article的缩写prep. 介词 ,前置词,preposition的缩写conj. 连词 , conjunction的缩写u = 不可数名词,uncountable noun的缩写c = 可数名词,countable noun的缩写pl = 复数,plural的缩写

应该是我想要所有的你（你的全部）吧。八九不离十

Iwantallofyou-我想要你的全部（意译：你的一切，无论是好的坏的，我都想要）。我想拥有你-Iwantyoutobemine.

对它扔飞镖，扔完了把它逼到角落去，K死它，我和朋友就是这麽打的，告诉你，后面的难死你，我和朋友打到倒数第2 大关 看清楚点，是 大关

111111222222222222222222222222222222223333333333333333

i want you completely

秘籍么,这里PS:一代的你自己不激活，打了秘籍也不认不过好像那个双倍攻击有效Raphael[双倍攻击]RDSRLDonatello[双倍攻击]DRLDSLeonardo[双倍攻击]LMLSD激活时只能激活一个，如你激活多个，只是最后一个起效给你个秘籍吧秘籍:进入菜单选项(options)，进入password菜单，你会看到5个字母：分别是：M-Michelangelo(米开郎基罗)D-Donatello(达芬奇)L-Leonardo(来昂那多)R-Raphael(拉菲尔)S-MasterSplinter(斯普林特老师)Leonardo[全套装备]LDMSRorRMMLLRaphael[全套装备]DMDMLDonatello[全套装备]DDSMSMichaelangelo[全套装备]RRLMDorDLDSMLeonardo[双倍防御]MRLLMRaphael[双倍防御]LRMDSDonatello[双倍防御]SSSMRMichaelangelo[双倍防御]MRRMLMichaelangelo[双倍能量]MMSLRLeonardo[双倍能量]LSLSRRaphael[双倍能量]SLDSMorMSLLRDonatello[双倍能量]DMDRSRaphael[双倍攻击]RDSRLDonatello[双倍攻击]DRLDSLeonardo[双倍攻击]LMLSDLeonardo[气血全满]SMRDMMichaelangelo[气血全满]DRDSS[开启斯普林特的故事模式]MSRLS[多人模式]LSDRM[新的音效]SMMRSMichaelangelo[防御提高]MSRMM

歌曲名:temper tantrum 3 min歌手:Edson专辑:Unwind with EdsonTemper Tantrum 3 MinEdsonSending out e-mailsWaiting for someonet is to replyThinking of detailsWatching the nail varnish dryMicrowave dinnersBringing the mobile in the bathThink like a winnerThere is something strange about that laughterWhen things are overAnd your outfit smellsLike cigarettes and MuscatelYou were supposed to have a stagNow you are breathing in a bagYou were supposed to wake up in a double bedYou and your overrated friendHad to let it endNow you are waking up wishing you were deadStaying up too lateLeaving the radio onTrying to think straightCold sweat and terrible songsAll those happy peopleCouples entwinedMake you feel lonelier insideYou were supposed to have a stagNow you are breathing in a bagYou were supposed to wake up in a double bedYou and your overrated friendHad to let it endNow you are waking up wishing you were deadAll those happy peopleCouples entwinedMake you feel lonelier insideYou were supposed to have a stagNow you are breathing in a bagYou were supposed to wake up in a double bedYou and your overrated friendHad to let it endNow you are waking up wishing you were deadYou were supposed to have a stagNow you are breathing in a bagYou were supposed to wake up in a double bedYou and your overrated friendHad to let it endNow you are waking up wishing you were deadhttp://music.baidu.com/song/10388509

多纳泰罗 Donatello

　　Beta (Coefficient) 贝塔系数 评估一种证券系统性风险的工具，用以量度一种证券或一个投资证券组合相对总体市场的波动性 贝塔系数利用回归的方法计算。贝塔系数1即证券的价格与市场一同变动。贝塔系数高于1即证券价格比总体市场更波动。贝塔系数低于1即证券价格的波动性比市场为低 ===========================================柳浪闻莺各位芝麻竭诚为您解答您的采纳是我们坚持百度的动力

性质：气体溶解度的一种表示方法，相当于吸收系数，常见于早期的文献中。本森系数的定义为：单位体积的溶剂所吸收的、换算到标准状态(273.15K，0.1MPa)下的气体体积。吸收是在气体分压为0.1MPa和测量温度为T的状态下进行的。

Coefficient 是系数 ，factor 是参数

estimate of coefficient 系数估计; [例句]Two problems on biased estimate of regression coefficient关于回归系数有偏估计的两个问题

英文【coefficient of determination】汉语【决定系数】有的教材上翻译为【判定系数】也称为【拟合优度】。决定系数：在Y的总平方和中，由X引起的平方和所占的比例，记为R2(R的平方)决定系数的大小决定了相关的密切程度。当R2越接近1时，表示相关的方程式参考价值越高；相反，越接近0时，表示参考价值越低。这是在一元回归分析中的情况。但从本质上说决定系数和回归系数没有关系，就像标准差和标准误差在本质上没有关系一样。在多元回归分析中，决定系数是相关系数的平方。表达式：R^2=SSR/SST=1-SSE/SST其中：SST=SSR+SSE，SST (sum of squares for total)为总平方和，SSReg (sum of squares for regression为回归平方和，SSE (sum of squares for error) 为残差平方和。意义：拟合优度越大，自变量对因变量的解释程度越高，自变量引起的变动占总变动的百分比高。观察点在回归直线附近越密集。取值范围：0-1.

洛杉矶磨耗率。具体解释百度百科有

意思是倾斜系数

beta coefficient贝塔系数　　β系数也称为贝塔系数（Beta coefficient），是一种风险指数，用来衡量个别股票或股票基金相对于整个股市的价格波动情况。β系数是一种评估证券系统性风险的工具，用以度量一种证券或一个投资证券组合相对总体市场的波动性，在股票、基金等投资术语中常见。

coefficient [英]ˌkəʊɪˈfɪʃnt [美]ˌkoʊɪˈfɪʃnt n. 系数;（测定某种质量或变化过程的）率;程度;协同因素

I want to be love

　　coefficient matrix　　英 [u02ccku0259u028au0259u02c8fu026au0283u0259nt u02c8meu026atru026aks]　　美 [u02cckou0259u02c8fu026au0283u0259nt u02c8metru026aks]　　[释义]系数矩阵;　　[网络]系数阵; 系数短阵;　　[例句]If the tridiagonal linear linear equations "coefficient matrix is diagonally dominant, the process will not break down.　　当三对角线性方程组的系数矩阵满足对角占优时，该算法在运行过程中不会中断。

在雨中相遇...........

截距系数代表含义：回归截距a表示直线在y轴上的截距，代表直线的起点，回归系数b表示直线的斜率，他的实际意义是说明x每变化一个单位时，影响y平均变动的数量，即x每增加1单位，y变化b个单位。回归分析按照涉及的变量的多少，分为一元回归和多元回归分析；按照因变量的多少，可分为简单回归分析和多重回归分析；按照自变量和因变量之间的关系类型，可分为线性回归分析和非线性回归分析。扩展资料：回归技术用于预测，这些技术主要有三个度量（自变量的个数，因变量的类型以及回归线的形状），它是最为人熟知的建模技术之一，线性回归通常是人们在学习预测模型时首选的技术之一，在这种技术中，因变量是连续的，自变量可以是连续的也可以是离散的，回归线的性质是线性的。线性回归使用最佳的拟合直线（也就是回归线）在因变量（Y）和一个或多个自变量（X）之间建立一种关系。多元线性回归可表示为Y=a+b1*X +b2*X2+ e，其中a表示截距，b表示直线的斜率，e是误差项。多元线性回归可以根据给定的预测变量（s）来预测目标变量的值。

coefficient [u02ccku0259ui"fiu0283u0259nt] n.系数

coefficient就是（小波）系数的意思，上面的图应该是CWT后得到的最大尺度小于250左右的所有小波系数的图像。下图是根据上图小波系数作出的每一尺度小波系数模极值形成的连线，有些文章也叫小波脊线，它在低尺度的位置通常表现了信号奇异点或突变点在信号中的位置，突变点的特征通常包含了信号中的重要信息，所以通常根据这个现象用CWT检测信号中的突变点和其位置。随尺度的增加，同一条脊线的点也随之偏移，研究这种偏移的特征在某些学科中也是研究信号特征的重要方法，所以通常根据这个现象用CWT研究信号随尺度变化的特征。

SPSScoefficient表是回归系数的是：首先来说明各个符号，B也就是beta，代表回归系数。标准化的回归系数代表自变量也就是预测变量和因变量的相关，为什么要标准化，因为标准化的时候各个自变量以及因变量的单位才能统一，使结果更精确，减少因为单位不同而造成的误差。T值就是对回归系数的t检验的结果，绝对值越大，sig就越小，sig代表t检验的显著性，在统计学上，sig<0.05一般被认为是系数检验显著，显著的意思就是你的回归系数的绝对值显著大于0，表明自变量可以有效预测因变量的变异，做出这个结论你有5%的可能会犯错误，即有95%的把握结论正确。回归的检验首先看anova那个表，也就是F检验，那个表代表的是对你进行回归的所有自变量的回归系数的一个总体检验，如果sig<0.05,说明至少有一个自变量能够有效预测因变量，这个在写数据分析结果时一般可以不报告然后看系数表，看标准化的回归系数是否显著，每个自变量都有一个对应的回归系数以及显著性检验最后看模型汇总那个表，R方叫做决定系数，他是自变量可以解释的变异量占因变量总变异量的比例，代表回归方程对因变量的解释程度，报告的时候报告调整后的R方，这个值是针对自变量的增多会不断增强预测力的一个矫正（因为即使没什么用的自变量，只要多增几个，R方也会变大，调整后的R方是对较多自变量的惩罚），R可以不用管，标准化的情况下R也是自变量和因变量的相关

beta coefficient贝塔系数　　β系数也称为贝塔系数（Beta coefficient），是一种风险指数，用来衡量个别股票或股票基金相对于整个股市的价格波动情况。β系数是一种评估证券系统性风险的工具，用以度量一种证券或一个投资证券组合相对总体市场的波动性，在股票、基金等投资术语中常见。

1、首先看coefficients表对应的sig是否小于0.05，如果小于0.05，说明整体回归模型显著，再看下面的回归系数表，如果这里的sig大于0.05，就说明回归模型不显著，下面的就不用再看了。2、其次，在回归模型显著的基础上，看调整的R方是模型拟合度的好坏，越接近1，说明拟合效果越好。3、看具体回归系数表中每个自变量，对应的sig值，如果sig小于0.05，说明该自变量对因变量有显著预测作用，反之没有作用。coefficients表这样看。

coefficient统计中代表变异系数。变异系数，又称“离散系数”(英文:coefficientofvariation)，是概率分布离散程度的一个归一化量度，其定义为标准差与平均值之比。变异系数(coefficientofvariation)只在平均值不为零时有定义，而且一般适用于平均值大于零的情况。变异系数也被称为标准离差率或单位风险。变异系数只对由比率标量计算出来的数值有意义。举例来说，对于一个气温的分布，使用开尔文或摄氏度来计算的话并不会改变标准差的值，但是温度的平均值会改变，因此使用不同的温标的话得出的变异系数是不同的。也就是说，使用区间标量得到的变异系数是没有意义的。举例。已知某良种猪场长白成年母猪平均体重为190kg，标准差为10.5kg，而大约克成年母猪平均体重为196kg，标准差为8.5kg，试问两个品种的成年母猪，哪一个体重变异程度大。此例观测值虽然都是体重，单位相同，但它们的平均数不相同，只能用变异系数来比较其变异程度的大小。由于，长白成年母猪体重的变异系数：C.V = 10.5 / 190 * 100% = 5.53%。大约克成年母猪体重的变异系数：C.V = 8.5 / 196 * 100% = 4.34%。所以，长白成年母猪体重的变异程度大于大约克成年母猪。注意，变异系数的大小，同时受平均数和标准差两个统计量的影响，因而在利用变异系数表示资料的变异程度时，最好将平均数和标准差也列出。

coefficients系数双语对照词典结果：coefficients[英][ku0259u028au026a"fu026au0283u0259nts][美][kou028au026a"fu026au0283u0259nts]n.系数( coefficient的名词复数 ); （测定某种质量或变化过程的）率; 程度; 以上结果来自金山词霸例句:1.Their machines would have lower coefficients of efficiency. 该国的机制效率系数也更低。

coefficient[英][u02ccku0259u028au026au02c8fu026au0283nt][美][u02cckou028au026au02c8fu026au0283nt]n.系数; （测定某种质量或变化过程的）率; 程度; 协同因素; adj.共同作用的; 合作的; 复数：coefficients例句:1.The gini coefficient is a measure of income distribution. 基尼系数是一个反映收入分配差异程度的指标。

Coefficients是coefficient的复数形式coefficient 英[u02ccku0259u028au026au02c8fu026au0283nt] 美[u02cckou028au026au02c8fu026au0283nt] n. 系数; （测定某种质量或变化过程的） 率; 程度; 协同因素; adj. 共同作用的; 合作的; [例句]A coefficient of one means the markets move perfectly in step.系数为1表示各个市场的步调完全一致。

coefficient[英][u02ccku0259u028au026au02c8fu026au0283nt][美][u02cckou028au026au02c8fu026au0283nt]n.系数; （测定某种质量或变化过程的）率; 程度; 协同因素; adj.共同作用的; 合作的; 复数：coefficients例句:1.The gini coefficient is a measure of income distribution. 基尼系数是一个反映收入分配差异程度的指标。

- 百度知道11个回答回答时间：2009年11月8日最佳回答：风雨中的阳光 Sunshine in the rain 风雨中的阳光 Love is still the same 爱依然如故 Sunshine in t...百度知道

SUNSHINE IN THE RAINWhen I"m in Berlin you"re off to LondonWhen I"m in New York you"re doing RomeAll those crazy nights we spend togetherAs voices on the phoneWishing we could be more telepathicTired of the nights I sleep aloneWishing we could redirect the trafficAnd we find ourselves a homeCan you feel the raindrops in the desertHave you seen the sunrays in the darkDo you feel my love when I"m not presentStanding by your side while miles apartSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainEven if we call the highest powerWe can only do one town a timeWords are not enough action speaks louderSecond time aroundCan you feel the raindrops in the desertHave you seen the sunrays in the darkDo you feel my love when I"m not presentStanding by your side while miles apartSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainOh oh la la laOh oh la la laWhen I"m in Berlin you"re off to LondonWhen I"m in New York you"re doing RomeAll those crazy nights we spend togetherAs voices on the phoneCan you feel the raindrops in the desertHave you seen the sunrays in the darkDo you feel my love when I"m not presentStanding by your side while miles apartSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainCan you feel the raindrops in the desertHave you seen the sunrays in the darkDo you feel my love when I"m not presentStanding by your side while miles apartSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rainSunshine in the rainLove is still the sameSunshine in the rain

《Don"t Go to Sleep!》（Stine, R. L.）电子书网盘下载免费在线阅读资源链接：链接：https://pan.baidu.com/s/1tnY_0bnxV2CxcZYsSlJvPA 提取码：1234书名：Don"t Go to Sleep!作者：Stine, R. L.出版年份：2005-10内容简介：It"s a no-snooze situation!Matt hates his tiny bedroom. It"s so small it"s practically a closet! Still, Matt"s mom refuses to let him sleep in the guest room. After all, they might have guests. Some day. Or year.Then Matt does it. Late one night. When everyone"s in bed. He sneaks into the guest room and falls asleep.Poor Matt. He should have listened to his mom. Because when Matt wakes up, his whole life has changed. For the worse. And every time he falls asleep, he wakes up in a new nightmare. . . .

wewanttosleep全部释义和例句>>我们想睡觉Nowwewanttogoandhavebreakfast,thengotosleep现在我们要去吃早饭，然后睡觉

pon。换成in，翻译是我在卧室里睡觉，晚上睡得比较晚，也不能直译，可以这样理解。

iwanttogotosleep.goodnight我想去睡觉。晚安满意请采纳,谢谢

vibrant表示有活力的时候多形容性格personality.有朝气，很快活。偏褒义。energetic在韦氏字典里是vibrant相关词，注意而不是近义词。他有时指人的行为，这一点与vibrant不同。我认为他有一点偏中性，但整体还是褒义。以下是韦氏字典的解释：vibrant:1 a (1) : oscillating or pulsating rapidly (2) : pulsating with life, vigor, or activity *a vibrant personality* b (1) : readily set in vibration (2) : RESPONSIVE, SENSITIVE2 : sounding as a result of vibration : RESONANT *a vibrant voice*3 : BRIGHT 4 *a vibrant orange* –vibrantly adverb energetic:1 : operating with or marked by vigor or effect2 : marked by energy : STRENUOUS3 : of or relating to energy *energetic equation*synonyms see VIGOROUS –energetically -ti-k(*-)l* adverb

vibrant 指事物的 人为的 energetic 指人具有的

【答案】：laid out[译文] 登山者到达山顶后，展现在他们面前的是一幅壮丽的风景。根据句子结构，此处应填一个过去分词短语表示被动意义。根据句意，应填具有“被呈现出来”意思的词。故此处应填laid out。

引导的是career不是人，所以用what不用who

1,Just outside the ruins is a magnificent building surrounded by tall trees. = A magnificent building surrounded by tall trees is just outside the ruins . 一幢周围是高大树木的宏伟的大楼就在废墟的外面. 2,___if I had arrived yesterday without letting you know beforehand? A.Would you surprised B.Were you surprised C.Had you been surprised D.Would you have been surprised 这道题的主句是和过去事实相反,为什么不能选B呢? 因为虚拟语气的时态都是【退一步】,即：与现在事实相反,就用【过去时】；与过去事实相反,就用【过去的过去/过去完成时】,所以正确答案是D.,9,A magnificent building surrounded by tall trees is outside the ruins. 废墟外是一座被高树环绕的宏伟建筑。 虚拟语气中时态必须前退一格， 从句：If主语+had+done ,2,A magnificent building surrounded by tall trees is Just outside the ruins。 一栋被树环绕的华丽建筑正好在废墟外面 第二个选D 不解释了,2,1 There is a magnificent building, just outside the ruins,surrounded by tall trees. 2 D -----虚拟语气，强调过去。,2,A magnificent building surrounded by tall trees is just outside the ruins. 翻译：一个由大树包围的宏伟大楼就在废墟的外面。这是虚拟条件句型，使用原则是：对现在的情况的假设时 从句用过去时，主句用过去将来时 ,2,A magnificent building surrounded by tall trees is Just outside the ruins .,1,1.there is a magnificent building surrounded by tall trees just outside the ruins. 在废墟外面有一个雄伟的建筑，被高大的树木围着。 2.D因为if I had arrived,0,你好！ 1、A magnificent building surrounded by tall trees is just outside the ruins. 翻译:一座被高大树木围绕的宏伟建筑坐落在一片废墟外。 2、选D 主句：主语+should/would/could/might+have done 从句：If主语+had+done 这里是主语...,0,A magnificent building surrounded by tall trees is just outside the ruins. 只是把Just outside the ruins 这个部分提前了，但位于动词还是随主语，而主语是a magnificent building ，对不？surrounded by tall trees是后置定语修饰building。 ...,0,两个英语问题 1,Just outside the ruins is a magnificent building surrounded by tall trees. 这句是倒装句,请还原下结构并翻译. 2,___if I had arrived yesterday without letting you know beforehand? A.Would you surprised B.Were you surprised C.Had you been surprised D.Would you have been surprised 这道题的主句是和过去事实相反,为什么不能选B呢?

A后面是side，表示单数，both和all后面都跟的是复数，所以排除C和D。又因为前面many表示看到了，说明确实有，那么neither表示两者都不，这个就不符合原句意思，与原句相违背了！所以答案选A。

过去分词短语做状语，表被动含义。因为整句主语是the city，城市只能“被”看。整句：从山上看下来，这座城市美呆了！

据说是以前的事,而且是在陈述历史 WAS

合适

两个词完全不一样

majestic 来源于majesty,原指高于一切的国家的主权和尊严. sumptuous 含有luxury 的意思 magnificent 是很常用的形容词（在UK）形容 超常的 outstanding

magnificence n.华丽, 富丽堂皇

magnificent可以划分为四个音节。谢谢希望对你有帮助哦！！

歌曲名:Magnificent歌手:Matt Redman专辑:10,000 ReasonsRick Ross Ft. John Legend - Magnificent(Female voice)J.U.S.T.I.C.E. League(Rick Ross)It"s Da Boss.It gets no better than this...(John Legend Chorus)Swimmin" in womenChampagne sippin"Gold Emblem with 2 M"s in itThis living" is so magnificentStop dreaming" itI"m living" it(Oh I)I can show you show you better thatI can tell u I I can show you Oh I(Rick Ross)I"m tha magnificient with tha sensational styleFar from bein" shallow cause she caught me wit a smileTry to figure out my styleBaby that will take a minute but if all we got is time,you can"t beActin" timid,so we back to playin tennisWe been goin" back and forthShe the one that I adoreSo I tried it in aurarConscience intervened concentrating on my creamI"m tha king,make a move,pawns all tha way to queensI"m a don,i"m a boss,i"m a profit,i"m a g,i"m a CEO which means that I profit off of me (Yea!).All white T"s still rockin" my Nike Airs,fresh outta flight school,causeI"m fly right? (Yea!)Ain"t nothin free, i"m chargin"to breathe airIf it"s not a Maybach,really who da hell cares?My money longMy nigga my money strongIf you ain"t gettin" money dat mean you done somethin" wrong (Boss!)(John Legend Chorus)Swimmin" in womenChampagne sippin"Gold emblem with 2 M"s in it inThis living" is so magnificentStop dreaming" itI"m living" life(Oh I)I can show you show you baby thatI can tell u I I can show you Oh I(Rick Ross)I"m tha magnificient with tha sensational styleDown to all of my automobiles wit no milesYellow corvettes,black rally stripes,and I never phone ahead,all sheDo is hear the pipesProject bitches,upscale kittens,fuck her for a minute then now we countin" digitsMaybach money so I always had a visionI would always tell ma niggas but... ain"t nobody listened.Words work magicHaters wreak havocThere ain"t nothin"on my backBut the delicates of fabrics.I made a transition from the thievesTo the biggest executive Def Jam"s ever seen.Only yours dreamSean John suit and a S. Dot ring Sean Don for my crewBad hoes in pursuit,Masspike on a two,Gunplay he a glue goon wit aAttitude (Holla!)(John Legend Chorus)Swimmin" in womenChampagne sippin",go in tha way,two ends awayThis livin" is so magnificentStop dreaming" itI"m living" life(Oh I) I can show you show you baby that I can tell u,II can show you,Oh I(Rick Ross)I"m tha magnificient with tha sensational styleWhen I decorate a home,marble flooring like Da NileNigga you a clownHere"s the number you should dialYe start wit 305 but we end at 4 pounds.S"ak Pase to Zoe Pound for life is an old townAll them Carol City killersFeel liking you broke downMoney is a must tommy guns on a busAllan Zamren on the case,so you know what you can suckWear red all the time but really i"m colour blindWanna catch my attention niggaThrow up a dollar sign.One time for tha Crips,young g"s buyin cribs and I smoke wit ViceLords when I visit Mississip.The game never changeMoney still a focal,but its time to rape tha gameLike Puffy did TotalLike Rev Run in the tub still smokin"In memory of ShakirBoss gotta shout Oakland!(John Legend Chorus)Swimmin" in womenChampagne sippin"Gold emblem with 2 M"s in it this living is so magnificentStop dreaming" itI"m living" life(Oh I)I can show youShow you baby that I can tell uI I can show you Oh Ihttp://music.baidu.com/song/10400805

后者这个词更高级更文气些,有时写或翻一篇东西可能不同的词表示同样的意思.,1,grand和magnificent有什么区别 它们都可表示“宏伟的,壮丽的”,在这个意思上二者有什么区别?

Just look at this magnificent autumn landscape ! 看看这壮丽的秋景吧！ Zanes reads the book and cries magnificent . 赞思读了书稿拍案叫绝。 His magnificent head sank on his breast . 他那颗漂亮的脑袋低垂到胸前。 It was a magnificent place altogether . 总之，那是个很繁华的地方。 His self-placency was magnificent . 他的那种自满劲头，真是蔚为壮观。 The skyscraper has a magnificent outside . 这座摩天大楼外观宏伟。 Why, the palace looks magnificent ! 哎呀，这座宫殿看起来可真富丽堂皇呀！ It was a gay and magnificent revel . 舞会开得既热闹又豪华。 The moon was high and magnificent in the august night . 八月的晚上，月光皎洁。 The view of the west lake is magnificent . 西湖景色瑰丽。 It"s difficult to see magnificent in a sentence. 用 magnificent 造句挺难的 He was a magnificent mander . 他是一位威严的指挥官。 It"s an unbepevable, a magnificent effort . 这是个叫人难以相信的，成绩辉煌的努力。 They were accorded a magnificent reception in france . 他们在法国受到了盛大的欢迎。 The avenue is magnificent . 这条林荫道异常幽美。 You were magnificent today . 今天您真了不起。 The day was magnificent . 天气非常晴朗。 Thoreau"s is magnificent pterature almost in spite of itself . 梭罗写的几乎是情不由己的好文章。 The magnificent goal spurred the team on to victory . 他们那一球进得漂亮，鼓舞了全队的士气夺取胜利。 It was magnificent . 简直妙不可言。 That is magnificent . 真是呱呱叫。 The big highways are magnificent for the fast driver . 宽阔的公路对驱车高速行驶的人来说的确是好极了的。 He recorded his emotion in elegiac pnes of magnificent dignity . 他把他的感情宣泄在凄惋而庄严的诗句里。 I"m immediately heartened by your magnificent spirit and will-power . 你的伟大的精神和意志力大大鼓舞了我。 A magnificent gleam of triumph sprang into cowper-wood"s eye . 柯帕伍德的眼睛里突然透露出胜利的庄严的光芒来。 The magnificent beau is dancing to the pght of chandepers . 这个衣着华丽的 *** 在枝形吊灯灯光下翩翩起舞。 The sunset was magnificent with the intensity and brilpance . 好一派瑰丽的落日景象，这样浓艳，这样灿烂的色彩。 After the fire , none of the magnificent buildings of the temple remained . 大火过后，寺院里的那些雄伟建筑已荡然无存。 A magnificent spectacle spread itself out before the eyes of the travellers . 在旅行者们的眼前，展开一幅多么美妙的图画呀！ The gardens outside are specially cool and interesting. trees afford a magnificent view . 野外花园，殊有情趣，树木蔚为大观。 People still remember churchill for his rolpng phrases, his magnificent voice . 人们还记得邱吉尔滔滔不绝的演说和宏亮的声音。 It"s difficult to see magnificent in a sentence. 用 magnificent 造句挺难的 The carriage-way round the circular raipng presented such a magnificent hippodrome . 环绕圆形栏杆的车道象座富丽堂皇的竞技场。 What did these o sovereigns give you in exchange for these magnificent presents ? 那两位至尊用什么来和您交换这种珍贵的礼物呢？ Why aren"t you in berpn, old cock? and how"s that magnificent wife of yours ? 你怎么不在柏林了，老朋友？你那风度翩翩的夫人好吗？ I want to first thank you for a superlative dinner and magnificent hospitapty . 我首先要感谢你举行的极为丰盛的晚宴和盛情的款待。 Blunt"s study was a large room decorated in magnificent baroque style . 布伦特的书房是一个按壮丽的巴罗克艺术风格装饰起来的大房间。 A stand of magnificent ghost gums with palpd white trunks and drifting thin leaves . 一片壮丽的橡胶树林，有着苍白的树干和依稀的树叶。 I grabbed at it, and six magnificent diamond rings went rolpng across the floor . 我伸手抓住它，可是六颗华丽的鉆石戒指掉在地上滚动着。 The train passed through the magnificent mountains, past pttle farm-houses and streams . 火车驶过巍巍的高山，驶过一些小小的农舍与河流。 With brilpant pghts blazing everywhere in christmas night , the city looked most magnificent .. 圣诞节的夜晚城里到处灯火辉煌，格外壮观。 In this work i have not embelpshed with swelpng or magnificent words . 在这部著作中，我没有使用铿锵的章句，夸张而华丽的语言，来加以润饰。 They"re all handsome and magnificent and that they wear wonderful robes and crowns . 他们都风度翩翩，温文尔雅，穿着华贵的长袍，戴着冠冕呢。 From the hill one can see the overall view of the magnificent nanjing yangtse river bridge .. 从山上可以清楚地看到雄伟的南京长江大桥的全景。 I was pke a keeper in the zoo distributing half-rations among magnificent animals . 我好象是动物园里的一个饲养员在分配折半的口粮给一些巨大的动物吃。 General de gaulle, whom i did not consult beforehand, was magnificent in his demeanour . 戴高乐将军（我事前没有征求过他的意见）表现的态度是光明磊落的。 Life on the mississippi falls away in its final chapters, though the opening ones are magnificent . 《密西西比河上》开头几章写得有声有色，结尾那几章不免逊色。 He seemed to be in good health, never showing any signs fatigue, and holding his magnificent head high . 他似乎非常健康，毫无倦容，总是把那俊伟的头昂得高高的。 Inside the ebony case was a magnificent silver casket, about elve inches square by eight high . 在这个黑檀箱子里，有一个十二见方，八高的精美绝伦的银匣子。 His white teeth showed in an amused and sneering *** ile, and he stood up, a magnificent figure of a man . 他困惑地冷笑一下，龇著两排白牙，站起身来，嗬，好一条壮汉。 Sir francis clavering made his appearance, and skulked for a while about the magnificent rooms . 弗朗西斯克拉弗林爵士也出席了，他在那些金碧辉煌的屋子里遛了一会。 "what magnificent orders would travel from this family to london, "said edward, "in such an event! " “如果这样，”爱德华说，“多么宏伟的订货单将会从这个家庭飞往伦敦！” It"s difficult to see magnificent in a sentence. 用 magnificent 造句挺难的

Day 285 morning 2021When I was six years old, I saw a magnificent picture in a book, called True Stories from Nature, about the primeval forest. 单词 magnificent 由词根 magn 扩展而来，这个词根一般出现在单词的前面，有点像前缀的感觉。词根是 magn，来自拉丁语 magnus，变形是 magni，意为 great，即“伟大的，壮大的”的意思。需要注意的是单词 magnet（n.磁铁）并不来源于这个词根，它本身也是一个表示“磁”的词根，不过我们也可以根据含义来联系记忆，比如伟大的东西都具有一定的吸引力！magnificent由词根+词根+后缀构成，扩展一下 1）第一个词根是 magn(i)，表示“伟大的，壮大的”的意思，例如： 2）第二个词根是 fic，意思是 make, do，即“做，制作”的意思。它有很多变化形式，如 fac，fact 等，相关的单词也跟“做”有关系，例如： 3）后缀 ent，在这里是一个表示形容词性的后缀，例如： 变形时刻：magnificent = magni（伟大的）+ fic（做）+ ent（关于...的）= 做出来的伟大事情、成果 → 引申为很高尚，很宏伟！通过单词构成来体会，会发现这个单词隐含的意思是指事物的形成很不可思议，引人赞叹！

maganificent 形容词，修饰 scene，作定语。

1. 绚丽的景色例句:1.Boats tour the extensive harbour facilities and the magnificent scenery of nearby waterways. 泛舟游览港口及附近水道的设施，欣赏沿岸的壮丽风景。

还没有见过magnificant，应该是笔误吧

spectacular 壮观 -> 来自 spectacle 展秀 -> 源于拉丁语 specere 注视grand 宏伟 -> 源于拉丁语 grandis 大、伟大、长大成人magnificent 雄伟 -> 源于拉丁语 magnificus （由两个词根 magnus 伟大 + facere 做出 组成）做出伟大之事的。spectacular 如你说的 - 壮丽，是“视觉感官上的壮丽”，如看到大自然奇景。grand 也如你举的例子 - 宏伟，突出的含意是“大”或“大型”。magnificent 看词根，指的是修饰的东西的出现、形成或构造的过程，是很不可思议的伟大的一件事。可以用这个词形容人为的或大自然的奇景，引申的含意是其“形成很不可思议”。

magnificent是壮丽的，含有美丽的意思。spectacular是壮观的，宏伟的，可以形容营业额等。splendid是辉煌的，极好的，灿烂的，可形容人。

壮丽的生活，伟大的生活，正确，O(∩_∩)O~

你好。这几个单词的谐音读法如下:majestic(咩杰死题克)；magnificient(灭格尼飞顺特)；experience(一克皮丽恩死);

magnificent是壮丽的，含有美丽的意思。spectacular是壮观的，宏伟的，可以形容营业额等。splendid是辉煌的，极好的，灿烂的，可形容人。

歌曲名:Into The Wild歌手:Aura Dione专辑:Esthetics Lounge Vol. 8Aura Dione - Into The Wild...I haven""t seen you lately, don""t know what life has made of youI""m always gonna be your friend, what is that to you?I""ve become a stranger, but I want to let you inSo much has changed, I don""t know where to beginI see right through you, from beginning to the endI see right through you, that""s what made us friends.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.I never felt that I was cool enough to be your friendI guess that""s kinda funny, don""t know how the story endsI""ve never been a pleaser, I""ve never been a fanBut I never felt any better, than when you took my handI see right through you, from beginning to the endI see right through you, that""s what made us friends.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.We live, we live, we live, we live, we live, we liveWe live, we live, we live, we live, we live, we liveSo fast, so fastAnd we got lost, in the past.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.We live, we live, we live, we live, we live, we liveWe live, we live, we live, we live, we live, we liveSo fast, so fastAnd we got lost, in the pastSo fast, so fastAnd we got lost, in the past..http://music.baidu.com/song/59570579

歌曲名:Into The Wild歌手:LP专辑:Into The Wild - Live At EastWest StudiosAura Dione - Into The Wild...I haven""t seen you lately, don""t know what life has made of youI""m always gonna be your friend, what is that to you?I""ve become a stranger, but I want to let you inSo much has changed, I don""t know where to beginI see right through you, from beginning to the endI see right through you, that""s what made us friends.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.I never felt that I was cool enough to be your friendI guess that""s kinda funny, don""t know how the story endsI""ve never been a pleaser, I""ve never been a fanBut I never felt any better, than when you took my handI see right through you, from beginning to the endI see right through you, that""s what made us friends.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.We live, we live, we live, we live, we live, we liveWe live, we live, we live, we live, we live, we liveSo fast, so fastAnd we got lost, in the past.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.We live, we live, we live, we live, we live, we liveWe live, we live, we live, we live, we live, we liveSo fast, so fastAnd we got lost, in the pastSo fast, so fastAnd we got lost, in the past..http://music.baidu.com/song/14742325

歌曲名:Magnificent (Live)歌手:Matt Redman专辑:10,000 ReasonsU2 - Magnificent★ lrc 编辑 妙一法师MagnificentOh, oh, MagnificentI was born, I was born to be with youIn this space and timeAfter that, and ever after, I haven"t had a clue, only to regretThis foolishness can leave a heart black and blue, ohOnly love, only love can leave such a markBut only love, only love can leave such a scarI was born, I was born to sing for youI didn"t have a choiceTo lift you upAnd sing whatever song you wanted me toI give you back my voice, from the wombMy first cry, it was a joyful noise, ohOnly love, only love can leave such a markAnd only love, only love can leave such a scarJust a fire, till we die, you and I will magnifyOh magnificent, magnificentmusic......http://music.baidu.com/song/10446464

英语其实和汉语一样，很多单词看偏旁，就知道大概是什么意思significant，开头是信号，标志：signal而，magnificent,开头就是大，最大，max这样记就很好理解了比如说，长城，很壮观，用magnificent说长城是中国的标志，用significant

歌曲名:Into The Wild歌手:LP专辑:Into The WildAura Dione - Into The Wild...I haven""t seen you lately, don""t know what life has made of youI""m always gonna be your friend, what is that to you?I""ve become a stranger, but I want to let you inSo much has changed, I don""t know where to beginI see right through you, from beginning to the endI see right through you, that""s what made us friends.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.I never felt that I was cool enough to be your friendI guess that""s kinda funny, don""t know how the story endsI""ve never been a pleaser, I""ve never been a fanBut I never felt any better, than when you took my handI see right through you, from beginning to the endI see right through you, that""s what made us friends.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.We live, we live, we live, we live, we live, we liveWe live, we live, we live, we live, we live, we liveSo fast, so fastAnd we got lost, in the past.You will always be my first love,You""re with me in heart, space and timeYou""re someone I still think the world ofBut we got lost, we got lost into the wildAnd I got lost, I got lost into the wild.We live, we live, we live, we live, we live, we liveWe live, we live, we live, we live, we live, we liveSo fast, so fastAnd we got lost, in the pastSo fast, so fastAnd we got lost, in the past..http://music.baidu.com/song/14741764

那就是重量级人物啦

magnifnicentadj. 高尚的；壮丽的；华丽的；宏伟的magnificadj. 崇高的；壮丽的，庄严的；夸大的；（亦作 magnifical）两个词，前者是褒义词，后者在意思中，有中性有贬义，特别是表示“夸大的”“浮夸的”“夸张的”

区别：一、意思不同。magnificent释义adj.壮丽的;瑰丽的;伟大的，高尚的;华丽的，高贵的。She is magnificent at making you feel you can talk quite naturally to her.她让你觉得能和她畅所欲言，这是她非常了不起的地方。significant释义adj.重要的;有意义的;有重大意义的;值得注意的n.有意义的事物;象征，标志A small but significant number of 11-year-olds are illiterate.数量不多但仍有相当一部分11岁孩子是文盲。二、形容对象不同。significant形容事务的重要性，magnificent书籍及衣物的精美的，不能形容人。三、重要程度不同。significant 重要的，比important要重要，又比magnificent程度低一点，都有“重要，华丽”的意思，可是作为同级比较的形容词，它们之间的关系其强调的重要或者华丽的程度也不同。扩展资料：反义词：non-essentialadj.不重要的，非本质的inconsequentialadj.不重要的，无足轻重的，不值得考虑的nonsignificantadj.不重要的，无意义的piddlingadj.不重要的，微不足道的unconsideredadj.（词语、话语等）未经考虑的nonsignificant释义adj.不重要的，无意义的1、The structured intervention evaluated in this study produces a small, nonsignificant increase in the rate of spontaneous vaginal birth among women evaluated in labor assessment units.在分娩评价单位中，结构化介入评估在这项研究中产生了微小的、无足轻重的自然阴道分娩率增加。2、When data were categorized based on antibiotics used, which included amoxicillin and cotrimoxazole, the differences remained nonsignificant.对于按照抗生素不同进行分析，应用阿莫西林和磺胺甲基异恶唑同样没有显著差异。参考资料来源：百度翻译-magnificent参考资料来源：百度翻译-significant

magnificent的意思：“高尚的；壮丽的；华丽的；宏伟的”。magnificent是一个英语单词，形容词，作形容词时意为“高尚的；壮丽的；华丽的；宏伟的”。短语搭配：Magnificent Obsession 天老地荒不了情 ; 地老天荒不了情 ; 天荒地老不了情 ; 缘定三生。The Magnificent 杨贵妃 ; 豪勇七蛟龙 ; 雄伟壮观。Magnificent Team 非常警察。Magnificent Foxface 红鳍狐狸。Magnificent Microscopes 神奇的显微镜。Magnificent Desolation 华丽的苍凉 ; 华丽的荒土 ; 壮丽的荒凉 ; 伟大的荒凉。Magnificent Butchkin 潇洒的巴奇奇。Magnificent Dreamer 华丽梦想者。Magnificent Scoundrels 年。双语例句：I like this movie, it is magnificent。我喜欢这部影片，它是宏伟的！For the happiness of human labor, this is how magnificent cause, this goal is how great!为人类的幸福而劳动，这是多么壮丽的事业，这个目标有多么伟大！This movie should be both magnificent and intelligent, but, above all, it should be steadfastly constructive。这部电影应该是宏伟和智能的，但最重要的，应该是它坚定不移地建设性。

magnificant伟丽；

基本服务 基本服务是指TCP/IP协议所包括的基本功能。该协议是为美国ARPA网设计的，目的是使不同厂家生产的计算机能在共同网络环境下运行。 一、万维网WWW Internet最激动人心的服务就是WWW（World Wild Web）,它是一个集文本、图像、声音、影像等多种媒体的最大信息发布服务，同时具有交互式服务功能，是目前用户获取信息的最基本手段。 Internet的出现产生了WWW服务，反过来，WWW的产生又促进了Internet的发展。目前，Internet上已无法统计Web服务器的数量，越来越多的组织机构、企业、团体、甚至个人，都建立了自己的Web站点和页面。 二、电子邮件E－mail 作为Internet用户，可以向Internet上的任何人发送和接收消息，同样可以包括各种形式的媒体，都可被快速传送。 三、文件传输FTP FTP（File Transfer Protocol）是“文件传输协议”的缩写。FTP服务允许用户从一台计算机向另一台计算机复制文件。在通常情况下，我们登录远程主机的主要限制就是要取得进入主机的授权许可。然而匿名（Anonymous）FTP是专门将某些文件供大家使用的系统。用户可以通过Anonymous用户名使用这类计算机，不要求选定的口令。匿名FTP是最重要的Internet服务之一。实际上各种类型的数据存在于某处的某台计算机上，而且都免费供大家使用。 四、远程登录Telnet Telnet是Internet为用户所提供的原始服务之一。Telnet允许用户通过本地计算机登录到远程计算机中，不论远程计算机是在隔壁，还是远在千里之外。只要用户拥有远程计算机的佥账号，就可以使用远程计算机的各处资源，包括程序、数据库和其上的各种设备。 Telnet目前使用的不是很多，主要是由于允许Telnet的计算机一般都为UNIX系统，这对初学者来说是很困难的。Telnet在Internet的电子公告板BBS中的应用相当广泛。 五、网络新闻Usenet 个人通信总是计算机网络上最受欢迎的活动。电子邮件是最早使用的电子通信的形式之一。但是在特定主题下，利用电子邮件，许多人共同讨论就会变得笨拙。为改变这种情况，80年代初期，在Internet中诞生了被称作Usenet的网络新闻。 Usenet中的不同讨论被称为新闻组（News Groups）,发送到新闻组的消息被称为文章（Articles）。Usenet新闻组被划分为许多不同的分支题目领域，每个题目领域在许多不同的讲座组。这些新闻组中有许多讨论学术研究题目的，如科学技术方面的、文学方面的、医学方面的等各方面的主题内容。Usenet几乎是人类生活的全部。 扩展服务方式 扩展服务方式是指在TCP/IP协议基本功能的支持下，由某些专用的应用软件或用户接口提供的接口方式，主要有四类： ①基于电子邮件的服务。其中有： (a)电子公告板(BBS)。只要用户通过某种联结手段，如远程登录，与电子公告板服务的主机相连， (b)新闻群组(News Group)。是一种专题讨论性质的服务。 (c)电子杂志(Electronic Journal)。这是一种电子出版物，内容极其丰富，其杂志出版速度远快于印刷出版。 ②名录服务。分为白页服务和黄页服务。白页服务是查找人名E-mail地址，黄页是查找提供各种服务的主机IP地址。 ③索引服务。包括利用关键字查找信息源的工具Archive，查询所有Gopher服务器的Veronica。还有广域网信息服务WAIS，WAIS可采用自然语言关键字检索方法对Internet的文本数据库进行检索，可联机浏览文件。 ④交互式服务。主要有Gopher和WWW。 (a)Gopher是一种基于多种菜单的交互式检索工具，其最大优点是信息资源的存放地址 和存储方式对用户完全透明。Gophet主菜单有182项，下设子菜单，同时还具有贴书签以及按书签检索的功能，以方便用户的使用。 (b)WWW。是一种基于超文本结构的多媒体检索工具，也是目前最受欢迎、最先进的服务方式，目前WWW服务器数量达2.7万个，用户在100万以上。 Internet的功能和服务使其迅速成为全球性的通信服务系统，有人认为Internet的出现是人 类通信进化的重要里程碑。但要用Internet建立一个完全开放的社会，必须要建设综合信息基础设施，即“信息高速公路”。Internet在我国的发展将会给中国经济发展提供新的机遇。

单组成因素生产系统（one-component system）：所有的组成成分都集中在生产细胞中。经典的反转录病毒生产系统就是由产病毒细胞（VPC）组成，重组反转录病毒由VPC细胞不断分泌至培养上清中。这种生产系统操作最为简单，但是往往产量不高或不稳定。采用这种策略，需要将重组病毒产生所需要的所有元件都稳定地置于生产细胞中。由于许多病毒基因产物本身对细胞有破坏作用或不能在细胞中稳定表达，因此这种策略在许多病毒载体的生产中难以实施。第一节 病毒载体产生的原理病毒载体的产生建立在对病毒的生活周期和分子生物学认识的基础之上。研究病毒载体首先要对病毒的基因组结构和功能有充分的了解，最好能获得病毒基因组全序列信息。病毒基因组可分为编码区和非编码区。编码区基因产生病毒的结构蛋白和非结构蛋白；根据其对病毒感染性复制的影响，又可分为必需基因和非必需基因。非编码区中含有病毒进行复制和包装等功能所必需的顺式作用元件。各种野生型病毒颗粒都具有一定的包装容量，即对所包装的病毒基因组的长度有一定的限制。一般来说，病毒包装容量不超过自身基因组大小的105～110％。基因重组技术的发展使病毒载体的产生成为可能。最简单的做法是，将适当长度的外源DNA插入病毒基因组的非必需区，包装成重组病毒颗粒。比如，本实验室曾将4.5kb的lacZ基因表达盒（CMV-lacZ-polyA）插入HSV1病毒的UL44（糖蛋白C）基因的XbaI位点中，病毒基因组的其余部分不改变，构建成重组病毒HSV1-lacZ100（吴小兵等，1998）。由于UL44基因产物对于HSV病毒在培养细胞中产毒性感染是非必需的，因此，该重组病毒可以在细胞中增殖传代。用这种重组病毒感染细胞，能将lacZ基因带入细胞并高效表达。用同样的方法，将AAV-2病毒的rep和cap基因片段（4.3kb）插入HSV1病毒的UL2（编码尿嘧啶DNA糖基化酶）或UL44（编码糖蛋白C）基因中，构建成具有提供重组AAV载体复制和包装所需的全部辅助功能的辅助病毒rHSV-rc（伍志坚等，1999）。然而，这样的重组病毒作为基因转移载体有许多缺点。首先，许多野生型病毒通过在细胞中产毒性复制而导致细胞裂解死亡；或带有病毒癌基因而使细胞发生转化。因此必须经过改造使其成为复制缺陷性病毒并且删除致癌基因后才能用于基因治疗。其次，插入外源DNA的长度受到很大限制，尤其对于基因组本身较小的病毒如腺病毒伴随病毒（AAV，4.7kb）、反转录病毒（8～10kb）、腺病毒（36kb），如果不去除病毒基因，可供外源DNA插入的容量就十分小。因此，必须删除更多的病毒基因以腾出位置插入较大的外源DNA。 为了增加病毒载体插入外源DNA的容量，除了可以删除病毒的非必需基因外，还可以进一步删去部分或全部必需基因，这些必需基因的功能由辅助病毒或包装细胞系反式提供。病毒载体大体上可分为两种类型： 重组型病毒载体：这类载体是以完整的病毒基因组为改造对象。一般的步骤是选择性地删除病毒的某些必需基因尤其是立早基因或早期基因，或控制其表达；缺失的必需基因的功能由互补细胞反式提供；用外源基因表达单位替代病毒非必需基因区；病毒复制和包装所需的顺式作用元件不变。这类载体一般通过同源重组方法将外源基因表达单位插入病毒基因组中。如在传统的重组腺病毒构建方法中，将外源基因表达盒（exogenous gene expression cassette）插入穿梭质粒（如pXCX2或pFGdX1）的腺病毒同源序列中，与辅助质粒（含有腺病毒基因组的质粒如JM17或pBHG）共转染293细胞，通过细胞内的同源重组获得含有外源基因的重组腺病毒（Graham FL and Prevec L 1995）。无病毒基因的病毒载体（gutless vectors）：这类载体在不同的病毒载体系统中的称谓不同。对于腺病毒，一般称为mini-Ad；在HSV载体系统，一般称为扩增子（amplicon）载体或质粒型载体。重组AAV载体也属于无病毒基因的病毒载体。这类载体系统往往由载体质粒和辅助系统组成。重组载体质粒主要由外源基因表达盒、病毒复制和包装所必需的顺式作用元件及质粒骨架组成。辅助系统包括病毒复制和包装所必需的所有反式作用元件。在辅助系统的作用下，重组载体质粒（包含或不包含质粒骨架）以特定形式（单链或双链，DNA或RNA）被包装到病毒壳粒中，其中不含有任何病毒基因。这类病毒载体的优点在于载体病毒本身安全性好，容量大。缺点在于往往需要辅助病毒参与载体DNA的包装，而辅助病毒又难以同载体病毒分离开来，造成最终产品中辅助病毒污染，从而影响其应用。实际上，无病毒基因的病毒载体可以看作是重组病毒载体的一种极端减毒情况。表1列举了几种常见的病毒载体的顺式作用元件和经典的包装方式。 载体 顺式作用元件 经典包装方式 反转录病毒载体 1） 两个长末端重复序列（LTR）：含有整合和调节转录的必需序列；含有转录增强子和启动子；2） tRNA 引物结合位点p；3）包装信号序列ψ。 载体质粒转染整合了所有必需基因（gag,pol,env）的包装细胞系如PA317，经选择培养获得产病毒细胞系（VPC）；细胞不裂解，病毒不断分泌至培养上清中。腺病毒载体 两个末端倒转重复序列（ITR）；包装信号序列。 载体质粒与辅助质粒共转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒感染293细胞而扩增；细胞每次被感染后发生裂解。腺病毒伴随病毒载体 两个末端倒转重复序列（ITR）；其中包括了病毒复制起点、包装信号及整合和拯救所必需的顺式元件。 AAV载体质粒和辅助质粒共转染293细胞，并加辅助病毒（腺病毒或单纯疱疹病毒）感染。单纯疱疹病毒载体 HSV 病毒复制起点ori； 病毒包装信号pac 。 PTCA重组病毒在互补细胞上传代；扩增子病毒在辅助病毒存在下传代。返回标题第二节 病毒载体的包装系统将外源基因包装到病毒壳粒中，是病毒载体生产的核心技术。一般地，病毒载体的制备包括以下要素：宿主细胞虽然现在已有可能对有些病毒载体（如AAV载体）进行体外（无细胞）包装（Zhou XH et al . 1998; Ding L et al. 1997），但是这种包装系统仍然需要细胞提取物，并且包装效率相当低，远远达不到可生产水平。至今为止，病毒载体的包装主要是在对该病毒敏感的宿主细胞中进行的。宿主细胞不但提供了病毒复制和包装的环境条件，许多细胞成分还直接参与了病毒复制和包装的过程。病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因的表达盒一般地，病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因的表达盒由细菌质粒携带，组成病毒载体质粒，是被包装的对象。由于病毒复制方式的不同，有些病毒载体如单纯疱疹病毒扩增子（HSV amplicon）载体在包装时，整个载体质粒都被包装进入病毒颗粒中；而有些病毒载体如反转录病毒、腺病毒伴随病毒载体的质粒骨架部分并不被包装到病毒颗粒中，只有病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因表达盒被包装到病毒颗粒中。构建重组型病毒载体时，病毒复制和包装所需的顺式作用元件存在于病毒基因组中（病毒基因组可以由具有感染性的病毒颗粒提供，也可以质粒形式提供）。先将外源基因表达盒插入穿梭质粒携带的病毒同源序列中；将重组穿梭质粒转染至细胞中，再用辅助病毒超感染；或将重组穿梭质粒与病毒基因组质粒共转染细胞；重组质粒与病毒基因组在细胞中进行同源重组而产生表达外源基因的重组病毒。 重组腺病毒（Graham FL and Prevec L 1995）和重组单纯疱疹病毒（Pyles RB et al. 1997；Kramm CM et al. 1997）的传统制备方法都是采用这种方式。为了使病毒载体的生产更为方便，病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因的表达盒除了可以用质粒携带以外，也可以用另一种病毒（往往是辅助病毒）或生产细胞来携带。辅助元件包括病毒复制和包装所必需的所有反式作用元件。这些元件一般包括病毒基因转录调控基因、病毒DNA合成和包装所需的各种酶类的基因、病毒的外壳蛋白基因等。辅助元件的表现形式可以多种多样。常用的形式有：① 辅助质粒（helper plasmid），如用于产生重组腺病毒的质粒JM17，用于重组AAV包装的辅助质粒pAAV/Ad（Rolling F and Samulski J 1995）等；② 辅助病毒（helper virus），如用于HSV 扩增子载体包装的辅助病毒HSV1 tsK株；③ 包装细胞系如用于反转录病毒载体包装的PA317细胞。这些表现形式之间可以相互转化或合并。例如，辅助病毒可以转化为辅助质粒：传统的AAV载体生产系统常用腺病毒作为辅助病毒。研究发现，并非腺病毒的所有基因对AAV病毒的产生都是必需的，只需要腺病毒E1a, E1b, E2a, E4和VA RNA 5种基因就行了。因此，将这5种基因置于同一个质粒中，构建成的这种新的辅助质粒就完全可以替代原来的辅助病毒（Xiao X et al. 1998; Grimm D et al. 1998 ），不但提高了包装效率，而且避免了产品中腺病毒污染的问题。上述几种要素的不同组合，便产生了各种各样的病毒载体包装策略。根据病毒载体生产系统的组成因素的多少，可将其分成以下几种：单组成因素生产系统（one-component system）：所有的组成成分都集中在生产细胞中。经典的反转录病毒生产系统就是由产病毒细胞（VPC）组成，重组反转录病毒由VPC细胞不断分泌至培养上清中。这种生产系统操作最为简单，但是往往产量不高或不稳定。采用这种策略，需要将重组病毒产生所需要的所有元件都稳定地置于生产细胞中。由于许多病毒基因产物本身对细胞有破坏作用或不能在细胞中稳定表达，因此这种策略在许多病毒载体的生产中难以实施。双组成因素生产系统（two-component system）这种生产系统一般由"一株病毒/一株细胞"组成。典型的例子是重组腺病毒生产系统。先用共转染的方法获得重组腺病毒毒种，再由该毒种和生产细胞（如293细胞）组成一个双组成因素的生产系统使病毒大量扩增。多组成因素生产系统（multi-component system）是由两种以上的组成因素组成的生产系统。传统的AAV载体生产系统就是由载体质粒，辅助质粒，辅助病毒和生产细胞4种因素组成。这种策略的缺点是影响因素多，操作复杂，产量不容易稳定，不利于大规模生产。 以上各种生产系统也可以相互转化。我们实验室通过将上述AAV载体生产系统的4种因素进行两两合并，即将辅助质粒和辅助病毒合并成一种重组的辅助病毒，将载体质粒和生产细胞合并成AAV前病毒细胞株，成功地将其转化成一种双组成因素的新型高效生产系统（伍志坚等，1999）。一般来说，发展新的包装策略主要是为了以下几种目的：（1） 减少生产系统中的组成因素，简化操作过程；（2）提高生产效率，降低生产成本；（3）避免或降低野生型病毒的产生；（4）避免使用难以与产品病毒分离的辅助病毒。返回标题第三节 病毒载体的纯化方法重组病毒的纯化与基因工程产品的纯化既有许多共性，又有显著的不同之处。病毒可以看作是一个具有特定结构的生物大分子，一般都由位于中心的核酸和包裹于其外的蛋白外壳组成。有些病毒还具有脂质膜和糖蛋白或糖脂。许多分离纯化蛋白质的方法如离心和梯度离心、盐析、柱层析、超滤、透析等方法都可用于病毒的纯化。然而，由于病毒结构的复杂性，纯化时不能采用蛋白质变性和复性的方法，因为一旦病毒蛋白发生变性，或病毒结构发生破坏，在体外就很难再重建成有感染性的病毒颗粒。因此，在病毒的纯化过程中必须保持病毒的结构不受破坏，并且监测其感染活性。病毒的纯化一般分为以下几个步骤：初始物（start material）的收集或制备根据病毒产生方式的不同而采取不同的方式。对于不导致细胞病变和死亡的病毒如反转录病毒，可不断收集产毒细胞（VPC细胞）的培养上清作为初始物；对于在生产病毒过程中宿主细胞发生病变和死亡的病毒如腺病毒，在病毒产生达到高峰时，收集培养上清，并裂解细胞以释放细胞内的病毒。培养上清和细胞裂解液都可作为纯化的初始物。在实验室的小规模制备中，往往采用将培养上清与细胞一起反复冻融3～4次的方法制备细胞裂解液作为初始物。对于初始物体积大于500ml的较大规模的制备，则需要考虑采用不同初始物的损益率。如果收集时大部分（90％以上）目标病毒仍存在于细胞中，为了减少操作大体积初始物带来的不便，可以考虑放弃上清中含有的目标病毒，而通过低速离心收集细胞，重悬于较小体积的缓冲液中进行细胞裂解制备细胞裂解液。对于腺病毒和AAV病毒的大规模制备都可以采用这种方式。如果通过延长培养时间可以使大部分的目标病毒释放到培养液中，也可以只收集培养上清而弃去细胞，从而省去反复冻融的步骤。除了用反复冻融方法裂解细胞外，还可以根据目标病毒的生物学性质采用其它不影响其感染性的方法，如超声法、化学法（如在AAV病毒制备中用脱氧胆酸或氯仿）等。初始物的浓缩当初始物体积较大时，要考虑对其进行浓缩后再分离纯化。浓缩时最好同时能获得初步纯化对于效果。 在不影响目标病毒的感染性的前提下，可选用盐析、超滤、透析等方法进行浓缩。盐析法不仅可以用来浓缩初始物，同时也能达到一定的分离纯化效果。最常用的盐是硫酸铵；许多病毒如腺病毒、AAV病毒和单纯疱疹病毒用聚乙二醇/氯化钠系统沉淀可获得很好的效果并且不影响病毒的感染性。目标病毒的分离纯化氯化铯密度梯度离心法至今仍是分离纯化各种病毒的最常用方法。主要是依据不同病毒具有特征性的浮力密度，使其与细胞裂解液中的其它成分分离开来。收集到目标病毒特异的组分后，用透析法除去其中的氯化铯，获得纯化的病毒。用这种方法有时可获得极高纯度的病毒。目前在临床实验中应用的重组腺病毒大都是用这种方法进行纯化的。然而，这种方法也存在明显的弊病，主要是费时且操作难度较大，重复性较差；并且氯化铯对人体有毒性。因此随着基因治疗研究和应用的发展，用这种方法纯化的重组病毒可能不能适应人体内应用的要求。用柱层析法尤其是亲和层析法分离纯化病毒可能成为用于临床的重组病毒载体大量纯化的主要方向。将病毒的特异性受体、抗体或化学合成的配体偶联在层析基质上并制备成亲和层析柱。将含有目标病毒的初始物经简单处理后直接上柱，最后洗脱和收集目标病毒。这类方法最近在AAV病毒载体的纯化中得到很高评价（Summerford C and Samulski J 1999）。返回标题第四节 病毒载体在基因治疗中的应用自1989年开展第一例人体基因转移（标记基因）以来，据不完全统计，至今已开展了近400项基因治疗临床试验，涉及病人1000余人。2/3以上的临床方案中应用了病毒载体进行基因导入。由于各种的病毒载体具有其特定的生物学特性，这些特性决定了其在基因治疗中的应用。表2列举了常用的病毒载体的特性和适用范围 载体 顺式作用元件 经典包装方式 反转录病毒载体 1） 两个长末端重复序列（LTR）：含有整合和调节转录的必需序列；含有转录增强子和启动子；2） tRNA 引物结合位点p；3）包装信号序列ψ。 载体质粒转染整合了所有必需基因（gag,pol,env）的包装细胞系如PA317，经选择培养获得产病毒细胞系（VPC）；细胞不裂解，病毒不断分泌至培养上清中。腺病毒载体 两个末端倒转重复序列（ITR）；包装信号序列。 载体质粒与辅助质粒共转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒感染293细胞而扩增；细胞每次被感染后发生裂解。腺病毒伴随病毒载体 两个末端倒转重复序列（ITR）；其中包括了病毒复制起点、包装信号及整合和拯救所必需的顺式元件。 AAV载体质粒和辅助质粒共转染293细胞，并加辅助病毒（腺病毒或单纯疱疹病毒）感染。单纯疱疹病毒载体 HSV 病毒复制起点ori； 病毒包装信号pac 。 PTCA重组病毒在互补细胞上传代；扩增子病毒在辅助病毒存在下传代。返回标题第五节 安全性检测总的来说，病毒载体制剂的安全性检测主要涉及以下几个方面（Aderson RW 1996）：有复制能力的病毒（replication competent virus, RCV）RCV一般产生于重组病毒生产过程中基因重组事件。由于RCV具有复制能力，在生产过程中一旦出现，就可能呈现优势生长，从而影响载体病毒的产量；另外，含有RCV的制品用于人体内可能导致严重的病毒感染或急性/慢性病毒血症。RCV是对用于基因治疗的病毒载体制剂安全性检测的特有项目。检测RCV的方法因不同的病毒载体而异。对于反转录病毒载体，检测有复制能力的反转录病毒（RCR）的方法主要是PG4 S+L- 分析法；也可采用其它的变通方法。对于腺病毒载体，检测有复制能力的腺病毒（RCA）主要采用空斑分析方法及PCR方法。辅助病毒对于生产过程需要辅助病毒参与的病毒载体如AAV病毒载体，由于这些辅助病毒本身具有复制能力并对机体细胞有破坏性，因此检测病毒制剂中的辅助病毒如腺病毒或单纯疱疹病毒的残存量十分重要。其它成分的污染检测指标包括细菌、霉菌、支原体、内毒素等及在纯化过程中所用试剂如氯化铯等的残余量。返回标题第六节 病毒载体的发展方向基因治疗研究的快速发展对基因导入系统提出了越来越高的要求。病毒载体的发展也日新月异，包括对已有病毒载体的不断改进和完善，和越来越多的其它病毒被改造成为新的病毒载体。病毒载体的发展方向可归纳成以下几个方面：简便、高效的病毒载体包装系统：考虑到包装的高效性和操作的简便性，越来越多的病毒载体生产系统将采用双组成因素系统。这种系统容易用于病毒载体的大规模生产（Liu XL et al.1999; Conway JE et al. 1999 ）。无病毒基因的病毒载体（gutless viral vector）：去除病毒载体中所有的病毒基因，只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件，是病毒载体的重要发展方向。这种策略可最大限度地扩大载体的容量和减少病毒对细胞的直接毒性和病毒蛋白表达引起的免疫毒性。 腺病毒的微载体（mini-Ad）、AAV载体、HSV扩增子载体都是无病毒基因的病毒载体。这一发展方向需要解决的主要问题是建立高效、安全（无辅助病毒污染）的包装系统。可调控表达外源基因的病毒载体：在许多疾病的基因治疗中，实现外源基因的可调控表达十分重要。如糖尿病的基因治疗，外源的胰岛素基因的表达最好能受血糖水平的调控；肾性贫血的基因治疗，EPO基因的表达最好能受血氧含量的调控等。目前所研究的表达调控系统主要包括各种药物诱导的表达"开关"。其中四环素控制系统（Tet-on和Tet-off）是人工设计的一种基因表达调控模式。这个系统在体外和动物体内实验中都表现出良好的表达调控作用（Fotaki ME et al.1997; Miller N and Whelan J 1997）。然而，由于其中的反式作用蛋白（tTA或rtTA）是异种蛋白，在机体内可能引起毒性作用和免疫反应，因此用于人体前还需考虑其安全性和长期有效性。最近Binley K等（1999）报道了用缺氧反应元件（hypoxia response element ,HRE）腺病毒载体中外源基因的表达。缺氧可激活bHLH/PAS 家族转录因子的表达，它们可结合HRE核心序列上，诱发其下游基因的表达。自我扩增型载体（self-amplifying vector）（Herweijer H and Wolff JA 1997）：目前的基因转移方法基因转移的效率仍相对较低，尤其是在体内。为了提高外源基因表达总水平，除了提高基因转移效率外，另一种方法是尽量提高外源DNA在细胞中的表达水平。用自我扩增型的表达载体是达到此目的的方法之一。这些载体是以正链RNA病毒Sindbis病毒和Semliki Forest 病毒为基础的。用目的基因代替病毒的外壳蛋白编码序列，导入靶细胞中，病毒的复制蛋白大量复制重组的基因组，mRNA水平的大量增加导致高水平的转导基因表达。自我扩增型载体的表现形式可以是RNA，DNA和重组病毒。特异性复制型性病毒载体（specifically replicating vector）：指可在某种特性的组织中产毒性复制，而在其它组织中不增殖的病毒载体。这类病毒载体主要用于特异性裂解肿瘤细胞。如腺病毒突变株Onyx-015是55Kdal E1B基因功能缺失的腺病毒突变株，可以选择性地在p53基因突变的肿瘤细胞中增殖，而在正常组织细胞中不增殖。用这种突变株联合化疗治疗恶性肿瘤II期临床结果令人鼓舞（Kirn D et al. 1998），已进入III期临床试验，从此，许多人工改造的腺病毒突变体被用于肿瘤治疗研究中。如将腺病毒E1基因的表达用甲胎蛋白（AFP）启动子控制，使得该病毒只能在甲胎蛋白阳性的肝癌细胞中增殖导致细胞死亡。也可以将这种病毒的基因组分开装在两个互补的缺陷性腺病毒载体上（Alemany R et al. 1999），其中一个载体除了腺病毒复制和包装所必需的顺式作用元件外，只含有E1区基因，其中E1A基因的表达受AFP启动子的控制；另一个载体为E1区缺失的重组腺病毒。这两个载体同时感染AFP阳性的肝癌细胞时，病毒可不断增殖而引起细胞死亡；对于AFP阴性的细胞，E1A基因不表达，因而病毒不能增殖。类似的设计在HSV载体系统也有报道。除了用甲胎蛋白作为反式激活因子外，各种其它组织特异性表达的蛋白和调控序列都可被用来控制病毒的增殖。嵌合型病毒载体（hybrid viral vector）：是指将不同病毒的基因元件进行组合，形成的重组杂合病毒。如腺病毒与AAV病毒的杂合体病毒，既具有腺病毒的感染性和基因组特性（双链线状DNA），又具有AAV病毒的染色体整合性（Lieber A et al. 1999）。各种病毒基因元件组合形成新的杂合载体的报道层出不穷，如单纯疱疹病毒扩增子与AAV病毒杂合载体（Johnston KM et al. 1997）、腺病毒与EB病毒复制子杂合载体（Tan BT et al. 1999）腺病毒与反转录病毒杂合载体（Caplen NJ et al. 1999）等，不一而足。这些杂合载体使重组病毒的特性多样化，以适应不同基因转移目的的需要。靶向性病毒载体（targeted viral vector）：是指能特异性地结合并感染某种细胞的病毒载体。靶向性病毒载体的产生主要有两种方法。一种方法是将病毒颗粒与某一靶向分子（Harari OA et al.1999 ）或特异性抗体（Bartlett JS et al. 1999）偶联；另一种方法是通过改变病毒外壳蛋白的结构，使其对细胞的亲嗜性发生改变（Reynolds P et al. 1999；Krasnykh VN et al. 1996 ）。参考文献Aderson RW. 1996. Forum"96: Gene Therapy. P21-24Alemany R, Lai S, Lou YC et al. 1999. Complementary adenoviral vectors for oncolysis. Krasnykh VN, Mikheeva GV. Douglas JT et al. 1996. Generation of recombinant adenovirus vectors with modified fibers for altering viral tropism. J Virol. 70:6839-6846.Lieber A, Steinwaerder.DS, Carlson CA et al. 1999. Integrating adenovirus-adeno-associated virus hybrid vectors devoid of all viral genes J Virol. 73:9314-9324Liu XL, Clark KR, Johnson PR. 1999. Production of recombinant adeno-associated virus vectors using a packaging cell line and a hybrid recombinant adenovirus. Gene Ther. 6:293-299Miller N and Whelan J. 1997. Progress in transcriptionally targeted and regulatable vectors for genetic therapy. Hum. Gene Ther. 8:803-815Pyles RB, Warnick RE, Chalk CL et al.1997 A novel multiply-mutated HSV-1 strain for the treatment of human brain tumors. Hum. Gene Ther. 8:533-544Reynolds P, Dmitriev I, Curiel D. 1999. Insertion of an RGD motif into the HI loop of adenovirus fiber protein alters the distribution of transgene expression of the systemically administered vector.Rolling F and Samulski J. 1995 AAV as a viral vector for human gene therapy. Molecular Biotechnology. 3:9-15Summerford C and Samulski J. 1999 Viral receptors and vector purification : new approaches for generating clinical-grade reagents. Nature Med. 5:587-588伍志坚，吴小兵，侯云德. 1999. 具有AAV载体包装功能的重组HSV的产生. 科学通报. 44（5）：506-509吴小兵，董小岩，伍志坚等. 1998. 以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究. 病毒学报. 14:359-364

wildworld？虽然里面的歌词不完全是你说的，而是分段成Don`tbeabadgirl/ifyouwannaleave什么的，不过唱腔倒是符合的

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