为什么在TRIZOL 法抽提核酸时DNA被分配到有机相，而RNA留在水相？

我做过，把你不懂的哪些步骤补充一下吧。

1、RNA抽提原理 简单地讲，RNA抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的RNA游离在裂解体系中的过程，纯化则是使RNA与裂解体系中的其它成分，如DNA、蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。Trizol试剂的出现基本能解决绝大部分样品RNA抽提，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流。 2、了解你的实验样品 如果你研究某个实验样品，并且要抽提它的RNA，以下的信息一定要先行收集：该样品的RNA含量、酶含量、特殊杂质含量。如果你对样品的特点一无所知，当样品稍微有一点复杂时，抽提RNA的实验就会碰到许多问题。以血液为例，如果你不知道鸟的血液中有核细胞的含量是人血的千倍左右，而使用人血一样的起始量去抽提鸟血的基因组DNA，怎么可能成功？失败了又怎么知道原因所在？同时，只有对实验样品有所了解，才能正确选择抽提方法。但同时提醒的是：没有信息是可怕的，更可怕的是将错误的信息当真的了。 3、实验样品量的取用 样品与Trizol的比例。这个问题非常重要，应该获得足够的重视。Trizol的Protocol，提供了一个简单的比例，1ml裂解液可以用于50-100mg组织或5-10X106个细胞；我的建议是，样品量绝对要小于资料所提供的。起始样品用多大，并没有具体的说法。如果不是样品量有限，则以能抽提出满足数次成功实验所需的RNA，作为决定样品起始量的基础，会比较合理的。不要因为1ml裂解液可以抽提 100mg 样品，就一定使用 100mg 样品。裂解液的用量，表面上与抽提的结果 (纯度及得率) 没有关系，然而，在实际操作中，对结果是有比较大的影响的。裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。不同得样品其RNA含量差别很大。

75%酒精洗涤，干燥的时候酒精容易挥发，水应该慢一点，只要酒精全部挥发掉了，就不影响后续PCR等实验，干燥5-10min即可

trizol和试剂盒提rna的区别目的掌握RNA提取的基本技术，了解RNA提取过程中的各种注意事项。二、原理RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术。RNA提取和DNA提取有类似的地方，因为它们都是核酸，都具有较好的水溶性。提取RNA首先破碎细胞，然后用提取液将RNA溶出，反复抽提去除蛋白质 ……

DNA上面有核蛋白，蛋白有水和有机二重性

材料的蛋白太多了自然提取的时候残余的蛋白也多啊。

1、提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解。 2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8，而对于RNA则是接近2.0。如果超过这个值，那么最有可能的就是核酸降解了，因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大，所以会使比值上升。

提取得到的是总DNA，包含病毒的，价格英骏的是900一瓶，100ml/瓶，一般一个样品一次1ml就够了。

RNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录形成的一条单链，主要功能是使遗传信息能够翻译成蛋白行使生物学功能，是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。当我们研究DNA的表达和调控，即我们常说的转录组测序时，首先需要做的就是从组织或细胞中分离和纯化RNA。 抽提RNA时，我们通常遵从 3点原则：1.保证RNA的完整性；2.获得比较纯的RNA；3.操作简便，稳定性强。 RNA用于不同的后续实验，其质量要求不尽相同。cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留；Northern对RNA完整性要求较高，对酶反应抑制物残留要求较低；RT-PCR对RNA完整性要求不太高，但对酶反应抑制物残留要求严格。因此，做转录组测序抽提RNA之前，明确实验目的是进行后续实验的首要条件。 RNA抽提的方法有很多，其中常用的方法为 Trizol抽提法 和 RNA抽提试剂盒 。Trizol抽提方法为传统的抽提方法，RNA试剂盒抽提则比较方便，市面上也有很多该类试剂盒。这两种方法在操作过种种各有利弊。在做转录组测序时，我们可以根据自己的目的选择合适的方法，下面列举出了2种方法的优缺点对比，供参考。 做转录组测序时，我们为了保证抽提出的RNA的质量，每一个细节都需要谨慎操作，下面几点则是我们常常会忽视但是又很重要的小细节。 1.使用正确的细胞或组织储存条件，在样品用液氮速冻后，应该储存在-80℃，做转录组测序的样品在RNA提取之前应避免反复冻融。 2.研磨过程要迅速，彻底匀浆样品。 3.尽量使用无RNase的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换；实验前移液器、工作台、玻璃器皿，尽量用RNaseZap擦拭。 4.建议分装RNA溶液进行保存，避免反复冻融，导致RNA降解。 5.使用Rnase-free的双蒸去离子水或其它缓冲液溶解RNA，否则容易导致RNA降解。 6.转录组测序时，我们一定要结合组织样本本身的特点，选择合适的抽提方案。

1、将组织在液氮中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨；每2E6个细胞加入1mLTrizol。注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。2、研磨液室温放置5min，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒，静置5min，12,000rpm离心5min。3、取上层水相于一新的离心管，按每1ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，剧烈振摇使混匀，4℃，12,000rpm离心10min。4、弃去上清液，按每1ml Trizol液加入至少1ml的比例加入70%乙醇，涡旋混匀 ，4℃×7,500rpm×5min。5、重复以上步骤。6、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10min，加入30μL RNase Free的水中。7、电泳检测。（仅供参考）

因为RNA是一种极易被RNA酶降解的核酸，而我们周围的环境中以及机体内含有丰富的RNA酶，因此必须选用含有丰富RNA酶抑制剂的TRIOL

半定量反转录－聚合酶链反应（semi-quantitativereversetranscriptionandpolymeraseChainreaction,SqRT-PCR）是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量。以半定量RT-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术，较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法更为简便可行。这种方法不另设‘内标准",排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异，而且具有明显的剂量－效益关系和良好的重复性。步骤：1.抽提RNA，2.反转录获得cDNA，3.以cDNA为模板做PCR注意：步骤1，RNA抽提质量一定要好，注意污染。内参的选择，常用的有βactin和GAPDH俩中。步骤3，半定量RT-PCR应该再两管中进行，既内参和目的基因各一管，这样便于控制，做图的时候可以放在一各泳道里跑！指数期和平台期一定要摸清楚！

目的对Trizol法中不同组织研磨方法进行比较 优化新生鼠脑总RNA提取方法 方法取新生24h小鼠脑组织 分别采用常规玻璃组织磨器（常规研磨法）剪刀剪碎法 液氮研钵研磨（液氮研磨法）3种方法对组织匀浆进行分离 采用Trizol试剂提取总RNA 紫外分光法测定浓度和纯度 凝胶电泳验证完整性 结果3种方法均可以提取出总RNA但相对剪碎法和常规研磨法 液氮研磨法提取的总RNA浓度 纯度及完整性更佳（p<0.05）结论液氮研磨法虽然对实验条件有一定要求 但仍然是目前最为可靠的脑组织总RNA提取方法 可以完全满足后续实验需要

rizol和试剂盒提rna的区别目的掌握RNA提取的基本技术，了解RNA提取过程中的各种注意事项、原理RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术，因为它们都是核酸，都具有较好的水溶性。二，然后用提取液将RNA溶出。RNA提取和DNA提取有类似的地方。提取RNA首先破碎细胞

三、Trizol法提取法（这是提禽流感病毒的步骤，供参考）Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。1、取鸡胚尿囊液，加入5-10倍体积Trizol液，混匀；2、室温放置5分钟，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒；3、取上层水相于一新的离心管，按每ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟；4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，混匀，4℃下7500g离心5分钟；5、重复第4步；6、小心弃去上清液，然后室温干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度；7、然后将RNA溶于水中，放置10分钟。[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作，低温可以避免脆弱的RNA被降解；2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。

常见的RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法。 RNA提取时，就变性剂的选择来说，CTAB（CTAB法）比异硫氰酸胍（RIZOL试剂法）和SDS

用biog提取1. 加入200μL裂解液，20 μL 消化液，充分振荡混匀，56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。2. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。3. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。4. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。5. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。6. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入50-200μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。

一般提取RNA的方法有两种，一种是酚氯仿法，用trizol试剂和氯仿，异丙醇进行提取，这种方法提取出来的RNA完整性较好，一种是柱式法，这种方法是很多试剂盒采取的方式，比较方便操作，但是RNA提取出来的质量相对没有酚氯仿的好

RIN(RNA Integrity Number):RNA完整性计数，看你的RNA是不是完整，质量好不好，太低就说明降解严重~~~ 其实提取RNA的条件没那么苛刻，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。 另外，相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差，而沙门菌提取效果就较好;所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，然后浓缩。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法，最后确定也是qiagen 的kit提取，然后浓缩。 另外，有一种可以喷的液体，叫做RNase抑制剂，用于消除表面RNase的污染，在客观条件不是很好的时候很有效。

上层无色,接近透明色的为RNA；中层白色（很薄）的为DNA；下层红色的为蛋白质.基本的层次和颜色是这样的,但是植物材料考虑到色素的问题,颜色会有细微的差异.三相中DNA最薄,另外两相差不多,RNA相比蛋白质厚一点.

氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和DNA脱离，DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离，否则DNA会释放到水相。不管有酚也好，没有酚也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA的亲水基团，与水相接触。所以不要剧烈震荡。异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作，不过个人经验感觉加不加没什么太大区别，也许是我的样品里蛋白不多吧异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍体积。在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候

最后的到RNA的上一步是酒精洗涤,提取的RNA当然不是完全干燥,提取后可以用小号枪头洗出较多的液体,剩下就在空气中自然干燥；但是太干就不容易溶解,因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密.

RNA的提取（仅供参考）准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤：匀浆处理:a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。c. 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：1. 从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。3. 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。

RNA的提取（仅供参考）准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤：1. 匀浆处理:a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。c. 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：1. 从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。3. 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。

可能是家提取液或氯仿提取过程中出现问题，这两个步骤比较关键，最后就是酒精要蒸干

RNA的提取（仅供参考）准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤：1. 匀浆处理:a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。c. 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：1. 从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。3. 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。

RNA的提取（仅供参考）准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤：1. 匀浆处理:a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。c. 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：1. 从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。2. 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。3. 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。

去蛋白，分相

1.买一瓶Trizol2.照着说明书操作3.测浓度、跑电泳

低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。

先加RNA抑制剂，然后冰上提取，操作尽量快。这个公司，武汉勤致杰生物，我用了。根本提不出来，全降解了，付钱之前骗人说多好用，售后的时候态度超级差，毁我样本，给我气收。

Trizol法1、将组织在液氮中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨；每2E6个细胞加入1mLTrizol。注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。2、研磨液室温放置5min，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒，静置5min，12,000rpm离心5min。3、取上层水相于一新的离心管，按每1ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，剧烈振摇使混匀，4℃，12,000rpm离心10min。4、弃去上清液，按每1ml Trizol液加入至少1ml的比例加入70%乙醇，涡旋混匀 ，4℃×7,500rpm×5min。5、重复以上步骤。6、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10min，加入30μL RNase Free的水中。7、电泳检测。

RNA自然分解也许受酸碱性影响，用的什么组织？

异丙醇的沉淀能力比乙醇强，能够从混合物中把较低浓度的核酸沉淀下来。但是，非脂溶性的杂质也会被异丙醇沉淀下来，这时候就要用70%的乙醇（含30%的水）来洗掉一部分杂质。由于异丙醇已经富集了核酸，所以乙醇沉淀起来也更加容易。最后，乙醇比异丙醇要容易干燥得多。当然，跳过异丙醇直接用乙醇也是可以的，但就要沉淀比较久了。前面提取的RNA经异丙醇沉淀后，总会含有一些未除去的蛋白和其它杂质分子，这些蛋白和杂质分子如果不除尽的话，就会直接影响所提取的RNA的纯度和稳定性。为此，就需要用70%乙醇洗涤沉淀(因为在70%乙醇里RNA是不溶的,而一些蛋白和其它杂质分子却可溶),并且最好是洗涤2次，然后高速离心后，倒去上清，即可得到较纯的RNA沉淀。用无水乙醇则达不到这个目的。

看你需要多纯：梯度离心去核溶解细胞后，用玻璃棒去dna.到google protocol 查吧。

　　实验1总DNA提取 　　生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。 　　[实验目的] 　　学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。 　　[实验原理] 　　植物叶片经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如CTAB），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用CTAB法，其主要作用是破膜。CTAB是一种非离子去污剂，能溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mMNaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经过氯仿/异戊醇(24:1)抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。 　　由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。纯的DNA样品A260/280≈1.8，纯的RNA样品A260/280≈2.0，并且1μg/mlDNA溶液A260=0.020。 　　[实验器材] 　　1、高压灭菌锅2、冰箱3、恒温水浴锅4、高速冷冻离心机5、紫外分光光度计6、剪刀7、陶瓷研钵和杵子8、磨口锥形瓶（50ml）9、滴管10、细玻棒11、小烧杯（50ml）12、离心管（50ml）13、植物材料 　　[实验试剂] 　　1、3×CTABbuffer（pH8.0） 　　100mMTris 　　25mMEDTA 　　1.5MNaCl 　　3%CTAB 　　2%β-巯基乙醇 　　2、TE缓冲液（pH8.0） 　　10mmol/LTris·HCl 　　1mmol/LEDTA 　　3、氯仿-异戊醇混合液（24：1，V/V） 　　4、95％乙醇 　　5、液氮 　　[实验步骤] 　　1、称取2g新鲜的植物叶片，用蒸馏水冲洗叶面，滤纸吸干水分。 　　2、将叶片剪成1cm长，置预冷的研钵中，倒入液氮，尽快研磨成粉末。 　　3、待液氮蒸发完后，加入15mL预热（60℃）的CTAB提取缓冲液，转入一磨口锥形瓶中， 　　置于65℃水浴保温0.5h，不时地轻轻摇动混匀。 　　4、加等体积的氯仿/异戊醇，盖上瓶塞，温和摇动，使成乳状液。 　　5、将锥形瓶中的液体倒入50ml离心管中，在4℃下8000rpm离心10min。 　　6、离心管中出现3层，用滴管小心地将上层清液吸入另一干净的离心管中，弃去中间层的细胞碎片和变性蛋白以及下层的氯仿。（根据需要，上清液可用氯仿/异戊醇反复提取多次。） 　　7、收集上层清液，并将其倒入小烧杯。沿烧杯壁慢慢加入2倍体积预冷的95％乙醇。边加边用细玻棒沿同一方向搅动，可看到纤维状的沉淀（主要为DNA）迅速缠绕在玻棒上。 　　8、小心取下这些纤维状沉淀，加1～2mL70%乙醇冲洗沉淀，轻摇几分钟，除去乙醇，即为DNA粗制品。 　　9、将粗制品溶于TE缓冲液。 　　10、在分光光度计上测定该溶液在260nm/280nm紫外光波长下的光密度值。 　　[注意事项] 　　1、液氮研磨时，小心操作，以免冻伤。 　　2、所有操作均需温和，避免剧烈震荡。 　　[思考题] 　　CTAB、EDTA、巯基乙醇的作用分别是什么？ 　　液氮研磨的原理是什么？ 　　实验二质粒DNA的提取 　　质粒DNA是分子生物学实验中广泛应用的载体分子。质粒是细菌独立于染色体外的遗传物质，是环状的`双链DNA分子。由于质粒比较小，并且能进行独立的自我复制，常常被改造为克隆和表达的载体分子。 　　[实验目的] 　　通过本实验掌握碱裂解法提取质粒的基本原理，掌握碱裂解小量提取质粒的实验技术。 　　[实验原理] 　　碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭合环状质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速 　　而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 　　[实验器材] 　　1、恒温培养箱 　　2、恒温摇床 　　3、台式离心机 　　4、高压灭菌锅 　　5、Tip头、Eppendorg管 　　6、含有目的质粒的E.coli菌株 　　[实验试剂] 　　1、溶液I 　　50mmol/L葡萄糖 　　5mmol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）Tris·HCl 　　10mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）（pH8.0） 　　2、溶液II 　　0.4mol/LNaOH,2%SDS,用前等体积混合 　　3、溶液III 　　5mol/L乙酸钾60mL 　　冰乙酸11.5mL 　　水28.5mL 　　4、TE缓冲液 　　10mmol/LTris·HCl 　　1mmol/LEDTA(pH8.0) 　　5、70%乙醇（放-20℃冰箱中，用后即放回） 　　6、EcoRI及其缓冲液 　　7、HindIII及其缓冲液 　　[实验步骤] 　　1、将含有目的质粒的E.coli菌株接种于LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。 　　2、取1ml培养物倒入Eppendorf管中，12000r/min离心30sec。 　　3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。 　　4、将细菌沉淀悬浮于100μL冰预冷的溶液I中，剧烈振荡。 　　5、加200μL溶液II（新鲜配制），盖紧管皿，快速颠倒5次，混匀内容物，将Eppendorf管放在冰上。 　　6、加入150μL溶液III（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀，冰上放置5min。7、12000r/min，离心5min，将上清液转至另一Eppendorf管中。 　　8、向上清液加入等体积的饱和酚，混匀。 　　9、12000r/min，离心5min，将上清液转至另一Eppendorf管中。 　　10、向上清液加入2倍体积乙醇，混匀后，室温放置5~10min。12000r/min离心5min。倒去上清液，把Eppendorf管倒扣在吸水纸上，吸干液体。 　　11、1ml70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥。12、20μLTE缓冲液，使DNA完全溶解，-20℃保存。 　　[注意事项] 　　操作时，避免剧烈震荡。 　　[思考题] 　　1、实验操作中，饱和酚的作用是什么？ 　　2、SDS和NaOH的作用是什么？ 　　[参考文献] 　　《精编分子生物学实验指南》（第四版） 　　[美]FM奥斯伯，RE金斯顿等主编科学出版社2005 　　实验三总RNA提取 　　【目的和要求】 　　1．掌握样品中总RNA的提取的原理和方法。 　　2．熟悉RNA纯度及浓度检测方法。 　　3．了解RNA提取过程中的注意事项。 　　【实验原理】 　　RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在，所以在提取RNA时要利用高浓度的蛋白质变性剂，迅速破坏细胞结构，使核蛋白与RNA分离，释放出RNA。再通过酚、氯仿等有机溶剂处理、离心，使RNA与其他细胞组分分离，得到纯化的总RNA。在提取的过程中要抑制内源和外源的RNase活性，保护RNA分子不被降解。因此提取必须在无RNase的环境中进行。可使用RNase抑制剂，如DEPC是RNase的强抑制剂，常用来抑制外源RNase活性。提取缓冲液中一般含SDS、酚、氯仿、胍盐等蛋白质变性剂，也能抑制RNase活性，并有助于除去非核酸成分。 　　【教学内容】 　　1．总RNA提取的基本原理和常用方法介绍 　　2．进行动物组织或血液样品总RNA提取。 　　3．对提取的RNA的进行纯度和浓度检测。 　　【实验器材和试剂】 　　超净工作台、高速冷冻离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系统、振荡器、移液器、吸头、Ep管、玻璃匀浆器、试管。 　　玻璃器皿洗净后置180℃烘烤8h；不耐高温的器皿（如塑料制品）应用0.1%DEPC浸泡2h,70～80℃烘烤干燥，120℃高压20min，再70～80℃烘烤干燥方可使用。 　　细胞裂解液：异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠（pH7.0）25mmol/L；十二烷基肌氨酸钠0.5%；β-巯基乙醇0.1mol/L（称取柠檬酸钠0.64g，十二烷基肌氨酸钠0.415g，吸取β-巯基乙醇0.7ml，用无Rnase的蒸馏水溶解，定容至50ml。然后取以上配制的溶液(CBS液)33ml，异硫氰酸胍25g,混合，完全溶解后4℃保存备用） 　　TRIzolRNA抽提试剂、2mol醋酸钠、0.1%DEPC、平衡酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）、氯仿、无水乙醇、异丙醇、75%乙醇（用RNase-free水配制）、RNase-free的水。 　　【实验方法】 　　（一）异硫氰酸胍法（PLT） 　　1．取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中，加入预冷的细胞裂解液1ml,在冰浴 　　中迅速匀浆15～30s，以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一试管中。 　　2．加入2mol醋酸钠（pH4.0）120μl，充分混匀。 　　3．加入1.2ml酚：氯仿：异戊醇，充分混匀摇振10s，冰浴15min。 　　4．将混合物转移至1.5mlEp管中，4℃，离心10000r/min,20min. 　　5．移取上层水相至另一Ep管中，加入等体积的异丙醇，静置-20℃，30min沉淀RNA. 　　6．4℃，离心12000r/min，15min. 　　7．弃上清液，加入70%乙醇400μl,洗涤RNA沉淀物；如果RNA沉淀物被悬浮，则4℃离心10000r/min，10min。 　　8．弃上清液，自然干燥，但应避免沉淀完全干燥，否则RNA难以溶解。 　　9．加入100μl无RNase水重悬RNA，或加1ml无水乙醇和1/10体积3mol醋酸钠（pH4.0），-70℃保存。 　　（二）TrizolReagent/总RNA提取试剂 　　TRIzol是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIzol能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。下面介绍由上海美季生物技术有限公司总RNA提取试剂推荐的操作步骤： 　　1.匀浆处理（Homogenization） 　　（1）组织中提取总RNA 　　①植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1mlTRIzol。 　　②动物组织：按10-30mg组织加入1mlTRIzol，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。 　　（2）培养细胞中提取总RNA 　　①贴壁细胞：无须胰酶消化，可直接用TRIzol进行裂解，每10平方厘米培养面积加1mlTRIzol。 　　②悬浮细胞：可直接离心收集、裂解，每1mlTRIzol可裂解5×106动物或酵母细胞，或107细菌细胞。 　　（3）血液中提取总RNA 　　直接取新鲜的血液，加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10,000rpm离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1mlTRIzol。 　　2．分层（PhaseSeparation） 　　（1）样品加入TRIzol后，室温放置5min，使样品充分裂解。 　　注：如不进行下一步操作，样品可放入-70℃长期保存。

人工合成

相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法、提取RNA测浓度时 A260/、一般对于DNA。 另外提取细胞RNA之后。如果超过这个值，有一种可以喷的液体，质量好不好，因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大，然后浓缩，所以会使比值上升.0:RNA完整性计数，看你的RNA是不是完整。比如霍乱用trizol法提取效果极差，太低就说明降解严重~~~ 其实提取RNA的条件没那么苛刻，最后确定也是qiagen 的kit提取。 另外，然后浓缩。 2，为什么要测RNA浓度 1，而沙门菌提取效果就较好，用于消除表面RNase的污染。RIN(RNA Integrity Number)，那么最有可能的就是核酸降解了。如果用trizol法就必须考虑trizol的量;A280 大于3的原因可能是降解，关键是破壁时的内源降解,纯净的时候比值是1，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，在客观条件不是很好的时候很有效;所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，叫做RNase抑制剂.8，而对于RNA则是接近2

博凌科为总RNA提取试剂盒(TRIzol法)使用了经典的TRIzol法总RNA提取试剂，并增添了提取RNA过程中所需要的其它4种组分，1.氯仿；2.异丙醇；3.RNase-free H2O；4.75%乙醇。

底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。DNA和蛋白质在有机相中

RNA提取的时候,一定要注意防止RNA酶作用. 第一点,样本处理和存放最好都放负80冰柜. 第二点,实验过程中你可以使用DEPC水泡过的枪头,离心管,保持手套干净,带好口罩,不要说话. 第三点,假如你用Trizol提取RNA,75%的乙醇也最好采用来菌的DEPC水来配制.晾干酒精这一步时间不要太长. 第四点：琼脂糖凝胶电泳,专漕专用,使用新的电泳缓冲液TBE. 还有呢,也可以在实验前,采用RNase Zap喷喷桌面,也能有一定程度上去除RNA酶的影响. 一般提取的时候多多注意,应该问题不大. 糊弄用可以,但是如果是自己做实验的话最好还是参考一下比较好的文献总结会比较好!

Trizol可以用于提取RNA,但是属于化学试剂，具有一定的毒性。BIOG RNA Bacteria Kit采用复合消化液消化菌体中的蛋白质，使细胞RNA更容易释放出来，因而RNA提取产率较高。

trizol法提取rna 如何去除dna1,裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少； 2，使用的组织材料中含有大量的有机溶剂（如：乙醇/异丙醇等）、高纯度的Buffer、碱性溶剂等； 3，如果提取的RNA中含有DNA时，也可以使用DNase I进行DNA消化。这个如果你做反转录的话，只能是用PCR检测了。电泳基本检测不出来。象现在的试剂盒或者TRIZOL提的RNA，除质量太差，一般含基因组很少。 如果RT－PCR发现结果不对，可以用那种不含RNA酶的DNA酶处理一下。 如果引物能避开的话，有点DNA也没关系。

博凌科为总rna提取试剂盒(trizol法)使用了经典的trizol法总rna提取试剂，并增添了提取rna过程中所需要的其它4种组分，1.氯仿；2.异丙醇；3.rnase-freeh2o；4.75%乙醇。

我本科毕业论文做的是SSH，需要提大量RNA，也碰到了多糖问题。其实trizol法提取总RNA很好，简单又节约时间，但是对于植物材料貌似不是很理想。当初我们改进了方法，用CTAB提取RNA的，然后增加了一步去多糖（提完RNA后）用0.25倍体积的无水乙醇和低浓度的盐将多糖沉淀，同时使RNA留在溶液中。然后再用异丙醇将RNA沉淀出来。其实当初我们参考了很多文献，貌似LiCl过夜沉淀RNA去除多糖效果比较理想的，只是耗时，你可以试一下。想当初，我们也是反复实验的。以上仅供你参考。。。如果想知道CTAB具体的方法，可以站内消息联系。另外，TAKARA公司有一种专门提取富含多糖组织中RNA的试剂，你也可以试一下。

1. 加入1ml TRIzol裂解细胞（用手剧烈摇晃），装入1.5ml Eppendorf管中，冰上放置10min。2. 加入200μl氯仿，震摇15s，冰上放置5min。3. 13500rpm，4℃离心15min。4. 收集上清水相一般为500uL，加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀，冰上放置10min。5. 13500rpm，4℃离心10min,弃上清。6. 加入1ml的75%乙醇，上下颠倒混匀后冰上放置5min，12000rpm，4℃离心5min。7. 弃上清，待残余乙醇挥发殆尽后，沉淀重悬于20μl用DEPC处理水中，存于-70℃。8. 用分光光度计测OD260/280nm波长的吸光值鉴定RNA浓度，以琼脂糖凝胶电泳证实其完整性。 10-5细胞数，提取的浓度一般检测为500-1000ug/mL

TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。TRNzol是可即用的从细胞和组织中提取总RNA的试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRNzol可保持RNA完整性，同时裂解细胞，溶解细胞内含物。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA；中间层用乙醇沉淀可回收DNA；有机相用异丙醇沉淀可回收蛋白。得到的DNA可用做标准，比较不同样品RNA得率。

我本科毕业论文做的是SSH，需要提大量RNA，也碰到了多糖问题。其实trizol法提取总RNA很好，简单又节约时间，但是对于植物材料貌似不是很理想。当初我们改进了方法，用CTAB提取RNA的，然后增加了一步去多糖（提完RNA后）用0.25倍体积的无水乙醇和低浓度的盐将多糖沉淀，同时使RNA留在溶液中。然后再用异丙醇将RNA沉淀出来。其实当初我们参考了很多文献，貌似LiCl过夜沉淀RNA去除多糖效果比较理想的，只是耗时，你可以试一下。想当初，我们也是反复实验的。以上仅供你参考。。。如果想知道CTAB具体的方法，可以站内消息联系。另外，TAKARA公司有一种专门提取富含多糖组织中RNA的试剂，你也可以试一下。

后者加到12000g是没有影响的，因为RNA已经成团沉淀了。如果为了快点干燥RNA，可以在7500g/10min/4℃这个步骤弃上清后再7500g/1min/4℃离心，等管壁残留的75%乙醇全部到管底后用RNase free的枪头吸干，冰上静置5分钟就可以加水溶解了。

2.0到2.1都是正常的数值.也有说法说生物越高等,这个比值也相应会大一些,再大那就是有RNA降解了,导致A260升高.你可以看看《RNA分离与鉴定试验指南——RNA研究方法》.这本书对于RNA质量评价有比较详细的叙述,紫外吸收是其中的第二部分.