空白组和对照组的区别

在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深。Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基－4-硝苯基）－3-(4-硝苯基）－5-(2,4-二磺基苯）－2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。研究方法细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

增殖是一种在生物医学领域内， 非常常见的表型， 甚至可以说是最常见的一种表型。 细胞增殖是高等生物体最为重要的生命特征。 高等动物体内的细胞，主要有两种增殖的方式。第一种是体细胞的增殖方式： 有丝分裂。 有丝分裂也是最常见的一种增殖方式。 在有丝分裂的过程中， 2 倍体的体细胞在经过有丝分裂之后， 产生两个都是 2 倍体的后代细胞；另一种是性生殖细胞所采用的增殖方式， 被称为减数分裂。 减数分裂最大的特点是， 2倍体的性生殖细胞， 经过减数分裂后， 形成 2 个单倍体的后代细胞。 由于细胞在分裂前是 2 倍体， 而分裂后变成了单倍体， 使得细胞内的染色体数目变成了原先的一半， 因此得名“减数分裂” 。 增殖是最为常见的表型。 无论是正常生理条件下， 还是异常的病理条件下， 无论是正常的细胞， 还是异常的细胞， 增殖现象都是普遍存在的。 一.增殖表型如何检测？ 1.分子层面检测增殖表型 有些分子的表达和增殖的表型有密切的关系， 因此， 只要能检测到这些特定分子的表达， 就表征了增殖现象的发生。 这类分子就是增殖的 marker 分子。 常见的和增殖相关的 marker 分子有如下几种： （1） 与增殖相关的分子标志物 A) MCM （微小染色体维持蛋白， minichromasome maintenance protein， MCM） 。 MCM只存在于真核细胞中。 MCM 在有丝分裂的晚期和 G1 期与染色质紧密结合， 在 S 期和G2 期分开。 MCM 蛋白只在细胞的增殖期才能检测到， 它的表达在 G1/S 转换点达到峰值， 在分化期和静息期时， 表达缺失， 因此可以作为细胞增殖的特殊标志物。 B) 细胞核相关抗原 Ki-67。 这个分子是经典的细胞增殖相关分子标志物， 最早在 1983年在增殖细胞中发现， 目前在病理诊断中使用非常地广泛。 Ki-67 的一级结构比较特殊，还没有发现与之同源的蛋白， 所以目前对于 Ki-67 的功能了解得不多。 推测它可能具有如下的几个功能： 1） 推测 Ki-67 可以调节细胞周期； 2） Ki-67 能和 DNA 或者 RNA 发 生相互结合； 3） Ki-67 在细胞分裂期参与合成核糖体。 Ki-67 在细胞的 G0 期不表达，G1 中期到后期出现表达， S 期和 G2 期表达逐渐增加， 有丝分裂期达到高峰， 细胞分裂后迅速降解。 C) 增殖细胞核抗原 PCNA。 PCNA 又称为周期素， 它是 DNA 聚合酶δ的辅助蛋白。 这个分子也是经典的增殖相关分子标志物， 最早在 1978 年就有所报道。 又因为 PCNA 出现在增殖期细胞的细胞核中， 所以被称之为增殖细胞核抗原。 PCNA 的主要功能有： 1）DNA 聚合酶δ的辅助蛋白； 2） 参与 DNA 损伤的修复； 3） 参与细胞周期的调控； 4）和 p21 相互作用。 P21 是 CDK 的抑制因子， 因此 PCNA 通过和 p21 相互作用， 间接影响细胞周期和增殖。 在增殖细胞的细胞周期中， PCNA 的量会发生明显变化， 它在 G0/G1期几乎没有表达， G1 晚期表达大幅度增加， S 期达到高峰,G2/M 期表达下降。 PCNA 也已经广泛应用于临床病理诊断和相关的生物学研究中。 PCNA 和 Ki-67 作为细胞增殖标志物， 所存在的一些缺陷。 PCNA 和 Ki-67在 G1 早期不表达， 因此在整个细胞周期过程中， 存在表达时间上的间隙。 另外 PCNA 在DNA 修复和复制过程中， 发挥了作用， 这会导致结果的“假阳性”。 就是说某些没有发生增殖， 但是发生了 DNA 修复的细胞， 也会上调 PCNA 的表达， 这会让研究者误以为细胞发生了增殖。 Ki-67 也会有类似假阳性现象的存在， 比如说 Ki-67 的表达水平， 会受到外部因素的影响， 比如在营养缺乏的时候。 MCM 蛋白相对于 PCNA 和 Ki-67 而言， 很大的优势在于整个细胞周期中都有表达， 而且它不受 DNA 损伤修复和其他外部因素的影响。 因此有的研究者认为， MCM 蛋白是优于 PCNA 和 Ki-67 的理想的细胞增殖标志物。 但是从实际的应用层面看， 无论是在临床应用当中， 还是在基础科研当中， PCNA 和 Ki-67 的应用， 都更加广泛。 （2） 和干细胞相关的分子标志物 根据肿瘤干细胞的理论， 肿瘤干细胞是肿瘤中， 具有自我更新的能力并且能够产生异质性的肿瘤细胞。 肿瘤干细胞通过自我更新和无限增殖， 维持了肿瘤细胞群的生命力。 因此， 如果通过肿瘤干细胞相关分子标志物的检测， 证实肿瘤干细胞的数量增加， 这就提示肿瘤的恶性程度高， 间接地说明了肿瘤增殖能力的增强。 例如， CD44 是胰腺癌中肿瘤干细胞常用的分子标志物， 因此可以通过检测 CD44 的表达水平， 证实胰腺癌中肿瘤干细胞的情况， 间接地证实肿瘤细胞增殖能力的强弱。 但是采用这种方法是具有局限性的， 因为不同肿瘤的肿瘤干细胞分子标志物是不同的。 而且在很多肿瘤当中， 肿瘤干细胞的标志物， 还存在很大的争议。所以我个人的建议是， 直接检测 PCNA 或者 Ki-67 之类的细胞增殖相关标志物更好更直接；检测肿瘤干细胞相关的分子标志物， 只能间接地说明肿瘤细胞的恶性增殖情况， 只能算是锦上添花而已。 （3） 检测抑癌基因 检测抑癌基因相关的分子标志物也是一类和细胞增殖间接相关的分子标志物。检测这一类分子标志物， 它存在着如下的一种逻辑推理的过程， 首先， 在细胞内抑癌基因的表达水平或者活性明显下降， 就提示肿瘤的恶性程度明显提升， 间接地说明了肿瘤的恶性增殖表型会有所增加。 在这一类分子标志物当中常见的抑癌基因有两个： p53 和 PTEN。 经常可以看到在论文当中， 通过 western 或者 qPCR， 证实 p53 以及 PTEN 分子表达水平降低， 从而间接地说明肿瘤细胞恶性程度上升， 肿瘤的增殖表型也会显著的提升。 2.细胞层面检测增殖表型 （1） 直接检测细胞的增殖状态 A） 最为经典的方法是 MTT 法。 MTT 是一种染料。 它的检测原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan） 并沉积在细胞中，而死细胞没有这个现象。 DMSO 能溶解细胞中的甲瓒， 最后用酶标仪在特定的波长处， 测定光吸收值， 可间接反映活细胞的数量。 MTT 法早已成为研究细胞增殖的经典方法。 后续基于类似的实验原理，还在 MTT方法的基础之上，演化出了各种不同的替代技术，比如 CCK8染色实验等等。 在做 MTT 实验的时候， 通常取 5 个时间点（通常就是 5 天） 。 把 5 天中每一天的吸光度数据都记录下来， 最后形成一条细胞增殖的曲线。 通过比较不同处理方式或者不同实验组之间， 细胞增殖曲线的高低， 就可以判断细胞增殖情况的快慢。 B） 另一种经常用于检测细胞增殖的经典方法是 Brdu 染色法。 Brdu 是胸腺密啶的衍生物，可以标记活细胞中新合成的 DNA， 可以代替胸腺嘧啶， 选择性地整合到复制细胞新合成的DNA 中。 这种渗入可以稳定存在， 随着 DNA 的复制， Brdu 可以进入子代细胞中。 Brdu 特异性抗体可以用于检测 Brdu 在细胞 DNA 中的渗入， 从而判断细胞增殖能力的变化。 通常在使用 Brdu 单克隆抗体之后， 都会结合免疫荧光染色， 显示增殖的细胞， 同时结合其他细胞标记物， 进行双重染色， 可以判断增殖细胞的种类， 增殖细胞的增殖速度， 对研究细胞动力学有重要的意义， 因为组织细胞内没有内源性 Brdu 的存在， 所以这种方法用于检测细胞的增殖， 应用非常广。 另外， 通过 Brdu 染色法可以提供影像学相关的数据， 这比单纯采用MTT 法（只能提供简单的折线图） ， 要更富有视觉效果。 基于 Brdu 染色方法， 又演化迭代出 Edu 的染色方法。 Edu 也是一种胸腺嘧啶核苷类似物， 能够在 DNA 复制时期代替胸腺嘧啶， 渗入正在合成的 DNA 分子中。 而且在检测的时候， 直接采用荧光染料与 Edu 特异性反应， 直接准确地检测出 DNA 复制活性， 能更有效地检测细胞增殖现象。 C) MTT 法或者 Brdu 染色法， 这类技术都属于 End-point assay（终点分析法） 。 因为这类技术对于细胞都有破坏作用， 在检测过程中， 细胞已经死亡， 结构也不再完整。 因此， 有公司（例如罗氏） 研发了实时记录细胞增殖状态的设备和方法， 这种设备成为 RTCA（real time cell analyzer， RTCA） 。 RTCA 这类技术的特点就是实时（real time） 。 RTCA 实时细胞分析仪， 需要用到特定的细胞培养板（被称为 E-plate） ， 在 E-plate 每一个孔的底部都含有特制的电极。 电极的作用就是实时记录孔内的电阻抗（electric impedance） 。 当细胞在孔内发生粘附， 转移， 增殖的时候， 孔内的电阻抗发生变化， 被电 极实时记录， 研究者也就获得了相关的实时数据。 不过需要特别强调的是， 采用这种 RTCA的方法， 不仅仅可以用于细胞增殖的数据的获取， 也可以用来检测细胞的黏附， 细胞的凋亡、细胞的转移等等， 所以它的应用范围是非常广的。 （2） 检测细胞的克隆形成能力 肿瘤细胞由于恶性程度高， 因而还具有一类特殊的增殖能力--被称为克隆形成能力。 正常细胞在增殖的时候， 需要细胞与细胞之间的信号传递。 这些信号的存在， 使得正常细胞增殖过程中， 可以有序地受到调控。 但是肿瘤细胞具有高度的恶性， 它的增殖是不受调控的， 所以即便缺少细胞之间的交互和信号通路， 肿瘤细胞也可以由单独一个细胞， 增殖形成大量的子代细胞， 最终形成一个细胞克隆。 这种现象就被称之为克隆形成能力， 可以通过克隆形成实验， 加以检测。 对于干细胞， 也有一种类似于克隆形成实验的技术， 用于检测干细胞的增殖能力， 这种方法被称为“干细胞悬浮成球试验” （microsphere formation assay） 。 鉴定干细胞需要很多的指标， 能在离体条件下， 形成微球/悬浮球（microsphere） 是鉴定具有干性细胞的方法和指标之一。 3.组织层面检测增殖表型 （1） 检测分子标志物 临床上最容易获得的组织样本， 通常都是石蜡切片。 基于石蜡切片， 可以进行免疫组织化学IHC 的研究， 检测和增殖相关的分子标志物， 比如 PCNA 和 Ki-67。 （2） 细胞形态和组织结构上的差异 在临床组织样本当中， 除了检测和增殖表型相关的分子标志物之外， 还可以通过形态学的方式， 检测细胞形态的多样性和组织结构上的巨大差异。 通过石蜡切片的染色实验， 可以观察到恶性肿瘤细胞一般比正常细胞要大。 而且即便是同一种肿瘤， 在相同的组织部位， 肿瘤细胞的大小和形态也会很不一致， 很不均匀， 有时甚至会出现巨细胞。 在有些肿瘤细胞的细胞核内， 会出现细胞核体积增大的现象， 这就使肿瘤细胞的细胞核与细胞浆的比例异常。 肿瘤细胞的细胞核大小， 形状都很不均一， 甚至会出现巨核、双核、 多核或者是形态奇异的奇异型细胞核。 通过详细的形态学观察可以判定细胞发生了恶性增殖。 正常组织当中， 是由很多不同类型的细胞所组成。 不同类型的细胞在组织内， 以特定的、 有序的排列顺序， 组成了健康的组织。 但是在组织内发生肿瘤之后， 由于肿瘤细胞发生不受控制的恶性增殖， 并且挤压了周围的正常细胞， 导致整个正常组织内细胞的有序排列顺序被破坏， 组织内不同类型细胞的排列结构发生异常。 通过对于组织内部细胞排列顺序和排列结构的检测， 也能够获得肿瘤细胞发生恶性增殖的证据。 4.动物层面检测增殖表型 大部分的疾病类型都有与之相对应的， 可用于研究的动物模型。 在肿瘤研究当中， 用于研究增殖相关表型的动物模型， 最常见的就是移植瘤动物模型。 在移植瘤当中， 为了获取和增殖相关的表型， 通常要记录几个参数， 比较简单的有肿瘤的大小也就是体积， 其次是肿瘤的重量， 这些参数是反应肿瘤大小和细胞增殖特性， 最直观的数据。 有了移植瘤的样本之后， 我们还是可以通过降低维度的方式， 以移植瘤的样本作为检测对象， 检测分子标志物以及检测细胞相关的行为学和形态学。 二.总结 u200b

没有确定的最大和最小值，Cell Counting Kit-8（简称 CCK-8 ）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其 基本原理 为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基 苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

材料表面在 SBF 中形成磷灰石的能力能够反应材料在体内的生物活性，具体检测方法如下：1.SBF 配置由于SBF 溶液对于磷灰石过饱和，所以配备方法不恰当会导致溶液中磷灰石沉淀产生。整个配备过程需要确保溶液无色、透明，容器表面无沉淀出现，如果过程中产生沉淀，倒去溶液，洗净仪器重新配制。准备一个 1000ml 的塑料烧杯。首先于塑料烧杯中装好 700ml 离子交换蒸馏水、一个适当大小磁子，杯口密封以蒸发皿或塑料薄膜。搅拌并调节水温至 36.5±1.5C。按表1所列顺序在 36.5C 恒温下逐个溶解第一到第八个化合物，溶解过程表1 配置1000 ml SBF 溶液时试剂添加顺序、添加量 Order Reagents Amounts Containers Purities（%） Formula weights 1 NaCl 8.035 Weight paper 99.5 58.4430 2 NaHCO3 0.355 Weight paper 99.5 84.0068 3 KCl 0.225 Weight bottle 99.5 74.5515 4 K2HPO4·3H2O 0.231 Weight bottle 99.0 228.2220 5 MgCl2·6H2O 0.311 Weight bottle 98.0 203.3034 6 1.0 M-HCl 39ml Graduated cylinder — — 7 CaCl2 0.292 Weight bottle 95.0 110.9848 8 Na2SO4 0.072 Weight bottle 99.0 142.0428 9 Tris 6.118 Weight paper 99.0 121.1356 10 1.0 M-HCl 0-5ml Syringe — — 2.磷灰石形成能力测试对于密质薄片材料，测出样品尺寸并计算样品表面积精确到 2mm 应用如下公式计算出 SBF 用量：Vs=Sa/10,Vs（ml）是 SBF 的体积量，Sa（mm）表示样品的表面积。对于多孔材料，SBF 的用量应大于上式计算量准备好塑料瓶或烧杯，装入计算出的 SBF 体积量加热到 36.5C， 然后按示意图往里放置样品。 笔记：样品在容器中放置有两种情况，如图 1(a)，1(b)。少数情况下，SBF 溶液会生成同 质磷灰石沉积于样品表面。所以如果样品放置是图 A1(b)种情况，表征实验应该检测样品的 下表面。 四个星期内，分别取出恒温浸透不同时长的各组样品，纯水轻盈洗净。然后将样品放入干燥 器中常温干燥。图1 SBF中样品浸泡示意图 1.四唑盐（MTT）比色法：检测细胞存活和生长的方法除前面所介绍的方法外，还可用四唑盐比色法试验（MTT）。此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。●0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1x10^9个/L的但细胞悬液，将细胞接种于96孔培养板中，每孔100ul。●将培养板置CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下，培养3-5天。●培养3-5天后，每孔加入MTT溶液10ul，继续置培养箱孵育3-6h，终止培养，加10%SDS-HCl 100ul/孔，37℃培养数小时，将细胞内与细胞周围的MTT颗粒充分溶解。●用酶联免疫检测仪测定每孔吸光度（OD），选波长490nm。以时间为横轴，OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。用此法测细胞活力，为保证结果的准确性，最好在试验前测定每种细胞的贴比率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，再确定每孔细胞接种数和培养时间，以保证培养终止时不会过满。另外，实验时设空白对照，比色时，以空白孔调零。3.2.2 CCK-8 法Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。● 制备细胞悬液：细胞计数● 接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。● 37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。●加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。●培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。●测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

EdU可以在DNA复制的时候掺入到新合成的DNA链中，通过一个“Click”反应，把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面，这样我们就能通过检测荧光而知道细胞的增殖情况了！http://www.bioon.com.cn/news/showarticle.asp?newsid=14929&typename=技术前沿详情请见上面这个链接！

其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。优点1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT法；5、对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

2。1、cck8的吸光度读数是针对不同的菌种和不同的培养基均不同，需要自己前期做一个标准曲线。2、也就是用培养基为空白对照，不同生长阶段发酵液为样品测定OD值，并测定这些阶段的活菌数，此后再按照发酵时间对比标准曲线得出单位活菌数。3、一般读数为2最合适，十几的话可能就是培养液中产生了吸光色素之类的。

我们在实验过程中,经常被该如何设计实验而困扰,不知从何下手开展实验,细胞实验作为被经常用到的体外实验,在科研工作中占有很大的比例。下面就盘点一下实验室常用的细胞实验技术1细胞增殖常用来检测细胞增殖的方法是CCK8法和Brdu法。CCK8主要通过分光光度计进行检测,OD只越高,说明存活的细胞越多,增殖能力强。Brdu是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,最后通过荧光强度的变化来判定细胞的增殖能力。

cck8实验算出大于百分之百的存活率正常。细胞毒性通常是指在某一个药物处理浓度下细胞的死亡率，所以在某个浓度下细胞的存活率与100%之间无统计差异，那么就说在该浓度下是无毒的。但是如果笼统的说某个药物是否有毒，是在说该药物相对毒性大小，通常要比较IC50，即半数致死量。化疗药物的IC50通常<10uM，如果要说某个药物无任何毒性，那么其IC50值可能要>1mM。不过这个并没有严格的定义，你可以设计个阳性对照。基本概念意义：细胞增殖是生活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。方式：真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种最为普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。

cck-8孵育时间1~2h足够，孵育前将孔里原来的 液体吸尽，cck-8与新鲜培养基按照1：10比例混匀后，每孔加入100ul,孵育1h，上机检测OD450。

CCK-8计算增殖速率有两种方法，一种是绘制生长曲线，计算线性阶段的吸光度的均值另一种是计算某时间点的（实验组与对照组吸光度的差值）/对照组的比率

不能。1、CCK8可以检测大肠杆菌，但不能在一个板子上检测ros细胞，需要分开测量。2、在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。

6孔板的情况下直接加药，无需更换培养基，记得两组的细胞浓度要稀释到差不多

建议用CCK8，可以直接加CCK8到细胞内

查查与其同源的基因在其它生物尤其是亲缘关系很近的生物体内有没有已经被证明功能的，或者猜想与什么功能有关的。寻找突变体（该基因缺失的个体）或者设计序列沉默该基因，然后观察其表型和正常个体有什么差别。寻找该基因过量表达的个体，观察表型和一般个体的差异，也可以作为一个参考。这些知识给你的研究提供思路，最后你要克隆得到该基因，在一个该基因缺失的突变体（株）内表达该基因，如果你在该个体内检测到表达并且该个体和一般个体性状差异消失，那么证明该个体是控制此性状的基因（之一）。

额。 96个孔除去你加的8个对照品而外，其他的孔全部用来加样品，88孔，88种样品（按照的说法的话，88个孔可以同时检测88个病人的某一指标），也就是可以检测88种样品的结果，如果你每个样品准备做复孔求平均值的话，可以检测44种样品。

DMSO可以提高PCR的特异性，帮助扩增一些难扩的模板。但要摸索，量大的话会抑制扩增，而且最好用于扩增1KB以上模板。

还是比较常用的. 但是因为MTT价格相对CCK-8试剂盒更便宜,实验室更较多采用MTT法.CCK-8法更灵敏,而且不用用DMSO溶解,减少接触有毒试剂的机会. 96孔板培养细胞,检测时每孔加入10%培养基体积的CCK-8,在细胞培养箱中继续孵育0.5-4个小时,时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,检测波长为450nm.

不需要，如果你的药物需要饥饿处理，那就另当别论，就CCK8检测而言是不需要的。

标准曲线法中为消除试剂影响，最适合用十字校验来进行零点校正，通过对十点四个角和方向来进行的这种情况也可以，更好更准确完成校验

终点法。一、实验原理：细胞活力检测试剂盒(CCK-8)可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。二、用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。三、优点：使用方便，无需洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂。CCK-8法能快速检测。CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度。CCK-8法的重复性优于MTT法，产生的formazan是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差。CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高。CCK-8细胞活性检测试剂无需预制，即开即用。

细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒是西安百萤生物生产的一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，SST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜（formazan，参考图1)。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系

cck8实验怎么看有没有细胞毒性CCK-8是一种基于WST-8的检测细胞增殖和细胞毒性的方法。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。数据呢，一般根据原始资料来选择统计分析方法，肿瘤细胞cck8增值这是什么，这个一般是计量资料，如果符合正态分布及方差齐性检验，可以用t检验或方差分析，不符合可以采用非参数检验，即秩和检验。

数据呢，一般根据原始资料来选择统计分析方法，肿瘤细胞cck8增值这是什么，这个一般是计量资料，如果符合正态分布及方差齐性检验，可以用t检验或方差分析，不符合可以采用非参数检验，即秩和检验。

cck8实验怎么看有没有细胞毒性CCK-8是一种基于WST-8的检测细胞增殖和细胞毒性的方法。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。数据呢，一般根据原始资料来选择统计分析方法，肿瘤细胞cck8增值这是什么，这个一般是计量资料，如果符合正态分布及方差齐性检验，可以用t检验或方差分析，不符合可以采用非参数检验，即秩和检验。

不变颜色最好，变了没准是污染了。如果是观察细胞死活状态什么的，推荐用显微镜观察、细胞计数什么的。推荐注意拍照，保存好实验记录。

问题一：默默努力的英语怎么说 Working hard consistently and quietly to do with one"s heart and best effort 问题二：‘"默默等待，默默守候‘"用英文怎么说？ wait silently 问题三：默默的英文名怎么写？ 就是汉语拼音：Mo Mo 注意：两个单词开头字母要大写，而且要分开写。 问题四：默默的英文怎么写拜托各位大神 Quietly 副词 Silently Quietly Dumbly 问题五：我还是会默默点赞,用英文怎么翻译 百度翻译为： 我还是会默默点赞 I will silently praise 问题六：默默等待的英文怎么说 用silent(ly), quiet(ly)这样的词翻译“默默地”，只表达了一种“不出声，安静”的意思。你要表达的“默默地等待”如果是一种“静谧、宁静”而又充满期待的等待，应该翻译成：await in solitude, 这个短语较之其他的就充满诗意了，会让懂英语的人有一种诗意的联想。 问题七：我会一直都在你身边默默的看着你英文怎么翻译 I will always with you without saying a word . 问题八：默默无闻用英语怎么说 10分 unknown to the public; be pletely unknown or unrecognized; be buried in oblivion; cut no figure ;

月明星稀什么意思？月明星稀怎么读？ 参考答案： 拼音：yuè míng xīng xī，简 拼：ymxx 成语解释：月亮明亮时，星星就显得稀疏了。 成语出处：三国·魏·曹操《短歌行》：“月明星稀，乌鹊南飞。绕树三匝，何枝可依？” 成语例句：河湾子修堰坝的工地，月明星稀，小河水静静流入水渠。★李准《李双双》 注音：ㄩㄝˋ ㄇㄧㄥˊ ㄒㄧㄥ ㄒㄧ 月明星稀的近义词：月朗星疏 成语语法：作宾语、定语；指夜晚 常用程度：常用成语 感情*色彩：中性成语 成语结构：联合式成语 产生年代：古代成语 写法注意：稀，不能写作“希”。

超滤是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜， 而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。超滤原理也是一种膜分离过程原理，超滤利用一种压力活性膜，在外界推动力(压力)作用下截留水中胶体、颗粒和分子量相对较高的物质，而水和小的溶质颗粒透过膜的分离过程。通过膜表面的微孔筛选可截留分子量为3x10000—1x10000的物质。当被处理水借助于外界压力的作用以一定的流速通过膜表面时，水分子和分子量小于300—500的溶质透过膜，而大于膜孔的微粒、大分子等由于筛分作用被截留，从而使水得到净化。也就是说，当水通过超滤膜后，可将水中含有的大部分胶体硅除去，同时可去除大量的有机物等。

输入 你好，我是一个人等寒暄之类的话

忘记的英文单词是forget。 forget的用法是： 1、forget to do表示忘记还没做的事情，例如I am sorry I forgot to return the library book，意思是对不起，我忘记归还图书馆的书了。 2、forget doing表示忘记已经做过的事情，例如He forgot going to Shanghai with his parents when he was five years old，意思是他忘记了五岁时曾跟父母去过上海。 3、forget that表示从句，例如Never forget that you are loved，意思是永远不要忘记你所爱的人。

热力环流是由于地面冷热不均而形成的空气环流，它是大气运动的一种最简单的形式。如果地面受热多，近地面空气膨胀上升，这样，近地面的空气密度减小，形成低压;上升的空气到上空聚集起来，使上空的空气密度增大，形成高气压;如果地面受热少，空气冷却收缩下沉，上空的空气密度减小，形成低气压;因为有下沉气流，近地面的空气密度增大，形成高气压。就同一水平面而言，气流总是由高压流向低压。这样，这些空气的水平运动和垂直运动，就构成了简单的热力环流圈。作用:冷热差异导致了空气的垂直运动，使水平方向出现了气压差，引起水平气流的运动。海陆风、山谷风、城市热岛环流、季风等都是热力环流的具体表现。

Grading teacher: I am inside the heart, be in silently hate you.Please give it to my wife if anything should happen to me.In most cases, these take place in remote places and the security forces suffer no casualties.

“蝴蝶效应”之所以令人着迷、令人激动、发人深省,不但在于其大胆的想象力和迷人的美学色彩,更在于其深刻的科学内涵和内在的哲学魅力.混沌理论认为在混沌系统中,初始条件的十分微小的变化经过不断放大,对其未来状态会造成极其巨大的差别.我们可以用在西方流传的一首民谣对此作形象的说明. 　　这首民谣说： 　　丢失一个钉子,坏了一只蹄铁； 　　坏了一只蹄铁,折了一匹战马； 　　折了一匹战马,伤了一位骑士； 　　伤了一位骑士,输了一场战斗； 　　输了一场战斗,亡了一个帝国. 　　马蹄铁上一个钉子是否会丢失,本是初始条件的十分微小的变化,但其“长期”效应却是一个帝国存与亡的根本差别.这就是军事和政治领域中的所谓“蝴蝶效应”.有点不可思议,但是确实能够造成这样的恶果.一个明智的领导人一定要防微杜渐,看似一些极微小的事情却有可能造成集体内部的分崩离析,那时岂不是悔之晚矣?横过深谷的吊桥,常从一根细线拴个小石头开始.　所以学习上我们要： 　　1.着眼全局,防微杜渐； 　　2.明白细节决定成败； 　　3.捕捉到对生命有意义的“蝴蝶”

超滤膜分离技术是指在分子水平上，不同粒径的混合物在通过超滤膜时，利用膜两侧的压力差和筛分原理，实现选择性分离的技术超滤过程多采用错流操作，在小批量中也采用死端操作。超滤基本上是按物质大小而去除的压力驱动膜过程，超滤膜孔径一般在3-100NM之间，能够截留分子量为1000-100000DALTON的物质；所能去除的物质包括糖、生物分子、高分子聚合物、胶体物质等。超滤膜以其标准“切割分子量（MWCO）”来描述其孔径的大小，膜的标称切割分子量通常定义为膜具有90%以上截留的最小分子量物质。由于其高效节能的特点，因此广泛用于矿泉水设备、饮用水净化、工业用水处理、食品、饮料用水净化、除菌、反渗透预处理等方面。超滤膜原理：超滤是一种与RO膜孔径大小相似的筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质，在一定的压力下，当原液流过膜表面时，超滤膜表面密布的许多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的的净化、分离和浓缩的目的。超滤膜分离技术的特点1、在常温和低压下进行分离，不用电，因而能耗低，从而使设备的运行费用低。2、设备体积小、结构简单，故投资费用低。3、超滤分离过程只是简单的加压输送液体，工艺流程简单，易于操作管理。4、超滤膜是由高分子材料制成的均匀连续体，纯物理方法过滤，物质在分离过程中不发生质的变化，并且在使用过程中不会有任何杂质脱落，保证超滤液的纯净。超滤膜用途：超滤过程是最广泛使用的膜过程之一，超滤能完成下列一种或多种功能：①溶液澄清；②溶质的浓缩；③溶质的分离；

"月明星稀一两风，吹醒十年黄粱梦”的意思是：月亮明亮时，星星就显得稀疏了，一两阵风吹醒了十年都不能实现的梦想。月明的意思是月亮很明亮，星稀的意思是星星显得稀疏。一两风是一两阵风的意思，黄粱梦的意思是比喻虚幻不能实现的梦想。所以，"月明星稀一两风，吹醒十年黄粱梦”的意思是：月亮明亮时，星星就显得稀疏了，一两阵风吹醒了十年都不能实现的梦想。

忘记的英文：forget； 例句： I forget how much they paid for it. 我忘了他们用多少钱买的这东西。 I never forget a face. 见过的面孔我从不忘记。 扩展资料 　　When I close my eyes, I forget about everything. 　　我闭上眼睛就忘记一切。 　　Who could forget his speech at last year"s party? 　　谁能忘记他去年在聚会上的.讲话呢？ 　　The accident taught me a lesson I"ll never forget. 　　那事故给我的教训永远也不会忘记。 　　Would they forgive and forget – or show him the door? 　　他们会原谅并忘记他的过失–还是会将他赶出门去？

mie拼音的汉字是灭。拼音：miè。五笔：goi。部首：一。笔画：5。解析：灭是现代汉语规范一级字（常用字），普通话读音为miè，最早见于春秋中期金文，在六书中属于形声字。“灭”字《说文解字》解释为“尽也”。“灭”的基本含义为火熄，如：熄灭；引申含义为完，尽，使不存在，如：灭口。灭亡。在现代汉语中，“灭”还有淹没的含义，如：灭顶之灾。灭造句1、他自动加入到了灭火的队伍中。2、为了灭火，他急中生智，攀绳上了房顶。3、面对熊熊大火，消防队员个个奋不顾身地上前灭火。4、灭火任务已经完成，消防人员便陆续撤离了火场。5、发生火灾后，不要惊慌，要立刻通知消防队并采取相应灭火自救措施。6、还是再去几个人到灭火现场检查一下，以防万一。7、当时灭火工作那样紧张，大家都是挥汗如雨，谁还能想那么多。8、汽车要加油，请先灭火。9、要家家户户准备灭火器，就是要防患未然，避免火灾的发生。10、织布车间内外都要装上灭火器，水火无情，我们可不能麻痹大意啊！

忘记的英文是forget。forget的过去式是forgot。过去分词是forgotten或forgot。现在进行时是forgetting。双写t加ing。过去时是forgetted。双写t加ed。

第三个,副词一般在动词之后,做状语

1.《短歌行》中，月明星稀，乌鹊南飞。绕树三匝，何枝可依？运用了比喻修辞手法。2.“月明”四句既是准确而形象的写景笔墨，同时也有比喻的深意。清人沈德潜在《古诗源》中说：“月明星稀四句，喻客子无所依托。”这说明他看出了这四句是比喻，但光说“客子”未免空泛；实际上这是指那些犹豫不定的人才，他们在三国鼎立的局面下一时无所适从。所以曹操以乌鹊绕树、“何枝可依”的情景来启发他们，不要三心二意，要善于择枝而栖，赶紧到自己这一边来。这四句诗生动刻画了那些犹豫旁徨者的处境与心情，然而作者不仅丝毫未加指责，反而在浓郁的诗意中透露着对这一些人的关心和同情。这恰恰说明曹操很会做思想工作，完全是以通情达理的姿态来吸引和争取人才。3.表达了诗人曹操求贤如渴的思想感情和统一天下的雄心壮志。

蝴蝶效应（The Butterfly Effect）是指在一个动力系统中，初始条件下微小的变化能带动整个系统的长期的巨大的连锁反应。1、“蝴蝶效应”主要还是关于混沌学的一个比喻。也是蝴蝶效应的真实反应。不起眼的一个小动作却能引起一连串的巨大反应。2、罗伦兹认定，他发现了新的现象：事物发展的结果，对初始条件具有极为敏感的依赖性。他于是认定这为：“对初始值的极端不稳定性”，即：“混沌”，又称“蝴蝶效应”。扩展资料：1、效应（Effect），在有限环境下，一些因素和一些结果而构成的一种因果现象，多用于对一种自然现象和社会现象的描述，效应一词使用的泛围较广，并不一定指严格的科学定理、定律中的因果关系。2、“今天的蝴蝶效应”或者“广义的蝴蝶效应”已不限于当初爱德华·诺顿·罗伦兹的蝴蝶效应仅对天气预报而言，而是对于一切复杂系统，在一定的“阈值条件”下，其长时期大范围的未来行为，对初始条件数值的微小变动或偏差极为敏感。3、蝴蝶效应通常用于天气、股票市场等在一定时段难以预测的比较复杂的系统中。蝴蝶效应指一件表面上看来毫无关系、非常微小的事情，可能带来巨大的改变。4、“蝴蝶效应”是混沌运动的表现形式，是指对初始条件敏感性的一种依赖现象：输入端微小的差别会迅速放大到输出端压倒一切的差别，好像一只蝴蝶今天在北京扇动翅膀，可能在大气中引发一系列事件，从而导致某个月纽约一场暴风雨的发生。

默默地伴你左右

美国吧、因为他是黑莓开发的~

【出处】：三国·魏·曹操《短歌行》：「月明星稀，乌鹊南飞。绕树三匝，何枝可依？」 【释义】：月亮明亮时，星星就显得稀疏了。 【读音】：yue ming xīng xī 【例句】： 1.平常，每当这时候，总有父母在巷口迎接，无论是月明星稀，乌雀南飞的日子，还是举杯邀明月，对影成三人的皎洁夜晚，风雨无阻。

mie的拼音如下：1、乜【miē niè】，乜斜【a.】指眼睛因困倦而眯成一条缝；指眼睛略眯而斜着看，多指不满意或看不起的神情，如“他乜乜着眼睛，眼角闪现讥诮的笑意”。2、灭【miè】火熄指熄灭；消失，丧失指灭口、灭亡。不可磨灭；灭族（古代的一种残酷刑罚，一人犯罪，株连他的父母兄弟妻子等亲属，都被一起杀掉）； 指淹没，灭顶之灾。3、吀【miē】古同“咩”。4、咩【miē】， 象声词，羊叫的声音。5、旀【mie】， 句读接读词为旀。韩国新罗地名即旀知县。6、哶【miē】，古同“咩”。7、孭【miē】， 方言，背负指孭仔（背小孩）。8、烕【miè】， 古同“灭”，熄灭；灭亡。读【miè】生僻字。9、搣【miè】， 用手拔，指摩。10、灭【miè】，见“灭”。读【miè】生僻字。11、蔑【miè】，目受伤而不明。无，没有指蔑以复加。 小指蔑视。轻蔑。出自 灭：“而蔑杀其民人，宜吾不敢服也”。 涂染指诬蔑、污蔑。12、薎【miè】，古同“蔑”。13、鴓【miè】，鸟名，冕柳莺的旧称。又为莺科某些鸟的旧称，如褐头鹪莺旧称为“竿鴓”，斑鸫为“红麦鴓”，蚁鴷为“地啄鴓”，树鹨为“树鲁鴓”。14、幭【miè】，古代车前横木上的覆盖物；指头巾。15、懱【miè】，轻视，看不起； 微小； 拭灭，擦净。

forget

普遍联系

热力环流形成过程为：受热地区大气膨胀上升，近地面形成低气压，而高空形成高气压；受冷地区相反，从而在近地面和高空的水平面上形成了气压差，促使大气的水平运动，形成高低空的热力环流。热力环流是大气运动最简单的形式，由于地面的冷热不均而形成的空气环流。其形成过程为:受热地区大气膨胀上升，近地面形成低气压，而高空形成高气压;受冷地区相反，从而在近地面和高空的水平面上形成了气压差，促使大气的水平运动，形成高低空的热力环流。热的地方空气受热膨胀上升，冷处收缩下沉。于是上空相同高度处，热地方单位面积空气柱重量(即气压)大，冷地方高空气压小，高空形成一热一冷的气流。热处气流流失后，整个空气柱减轻，地面形成低压，冷处则形成高压，近地面形成一冷一热的气流。加上上升、下沉气流，构成了热力环流。热力环流与城市规划：热力环流与城市规划。城市内部由于人类活动排放大量余热，与郊区相比呈现"热岛效应"。城市与郊区之间会形成热力环流，为保护城市大气环境，在城市规划时，要研究城市风的下沉距离。一方面将大气污染严重的工业布局在城市风下沉距离之外，以避免工厂排放的污染物流向城区;另一方面，应将工业卫星城建在城市风环流之外，以避免相互污染。关于海陆风：白天吹海风，夜晚吹陆风。主要原因是水的比热容大。水的比热容是4.2×10焦耳每千克摄氏度。热力环流应用于孔明灯、热气球利用了热力环流原理加热；暖气片、电热油灯利用了热力环流原理升高房间温度。

同求..我不知道是不是TC封了