共转染是将两个基因构建到一个载体上,再转染的意思吗,还是两个基因构建到两个载体,再将两个载体转染?
![](images/u2507.png)
共转染是将两个基因构建到一个载体上,再转染的意思吗,还是两个基因构建到两个载体,再将两个载体转染?
但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?
但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?
已提交,审核后显示!提交回复
共2条回复
liuxunjian462 共回答了17个问题
|采纳率88.2%- 共转染就是把2种以上的质粒同时转染到同一个细胞.谁告诉你“但是质粒不相容啊,可以转两个质粒到同一细胞吗?”这个概念的?完全错误.我发表过的一篇文章,专门就是用这个共转染的方法,你可以看看当然,你把2个序列同时克...
- 1年前
鸭梨的滋味 共回答了7个问题
|采纳率- 可以的,共转即两个基因同时转进同一个宿主细胞。要不要构建载体,就要看你的宿主细胞是什么了
- 1年前
相关推荐
- 腺病毒载体与慢病毒载体哪个更好两种载体各有什么优缺点?与普通的转染方法相比较有什么优势?
身轻如燕rr子1年前1
-
Intentionally 共回答了17个问题
|采纳率88.2%慢病毒载体转染效率高,可以构建稳定表达细胞系.但是,有可能发生重组的危险,所以要小心.
腺病毒载体做瞬时表达,转染较容易.但是,转染效率不高.1年前查看全部
- 转导,转染的区别?
jackfang1年前3
-
无关花开 共回答了14个问题
|采纳率100%转染
真核生物,转染就是原核生物中转化的同义词,具有与原核生物的转化完全相同的过程.
原核生物,偶尔也用到转染这个词,当细菌的转化过程中吸收的外源DNA是病毒DNA时就应该称此过程为转染
转导是指通过病毒将一个宿主的DNA转移到另一个宿主的细胞中而引起的基因重组现象.
区别总结
转染:接收和表达噬菌体,外源DNA是噬菌体的DNA
转导:噬菌体外壳蛋白误包装一个宿主的DNA而导入到另一个宿主中,进行重组,外源DNA是另一个宿主.1年前查看全部
- cos-7细胞是真核还是原核细胞?如果要转染入这个细胞的话,构建的质粒必须是pcDNA这个载体吗?
cos-7细胞是真核还是原核细胞?如果要转染入这个细胞的话,构建的质粒必须是pcDNA这个载体吗?
另外请问这个 pcDNA3.1 /CT-GFP-TOPO是什么意思?如何翻译?如果要转染进COS-7细胞的话如何选择表达载体会比较合适些?一苇杭之0011年前1
-
心晴惜雨 共回答了20个问题
|采纳率90%来源是猴肾细胞,当然是真核.只要有真核启动子的表达质粒都可以用来表达.pcDNA3.1 /CT-GFP-TOPO的可能意思是以pcDNA 3.1 为骨架,克隆插入有目的基因,在C端有GFP的融合蛋白.当然也有可能有其他意思,要看序列而定.理解就可以了,文章中是不需要翻译的.1年前查看全部
- 启动子和目的基因起始密码子ATG之间有十几个碱基,构建的质粒用于转染真核细胞对目的基因的表达有影响吗?
启动子和目的基因起始密码子ATG之间有十几个碱基,构建的质粒用于转染真核细胞对目的基因的表达有影响吗?
比如是十四个,不是而且3的倍数.
比如是14个,不是3的倍数。xyg82661年前1
-
莲心依旧 共回答了23个问题
|采纳率87%启动子是转录,起始密码子是翻译,两者有什么关联么?
换而言之转录了之后翻译开始核糖体还是只认最近的这个AUG去结合的啊,不会有影响1年前查看全部
- 如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法
如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法
转染时每个细胞只近入一个质粒还是很多质粒,过度表达的标准是什么呢4991448761年前1
-
amy-txc 共回答了27个问题
|采纳率96.3%转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好.
顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也能看到.
稳转的话一般需要在质粒上构建某个抗性基因,如嘌呤霉素抗性.这样用抗性培养基多次筛选就可以筛选出稳转的细胞株,但是比较难.1年前查看全部
- 请问HEK293细胞如何将质粒转染进去,有没有具体的步骤?我有lipo2000
yunyun12的爷爷1年前1
-
qiaoq0635 共回答了16个问题
|采纳率100%看看lipo的说明书不就知道啦 以6孔板的一个孔为例吧
一管200ul OPTI+5ul lipo 静置5分钟
另一管200ul OPTI+4mg质粒
两管混匀静置20分钟后加到一个孔里
4-6小时后换液1年前查看全部
- 干细胞如何转染质粒
danwuhen1年前3
-
布布-tinna 共回答了27个问题
|采纳率92.6%最保险的方法当然是用慢病毒转染,全交给公司做,周期3个月左右,价格在2万以内.自己做就考验技术和人品了,要能问一些实验借到空白的病毒质和包装质粒,或者买英俊或热电的系统,然后自己构建转染质粒、包装,整个周期2到12个月(真的要看人品),成本如果有现成试剂与质粒应该在3000以内.
其实,其它常规转染方法也可以,就看你的细胞了,先试一下常规转染方法(脂质体2000、电转),不行再用慢病毒.1年前查看全部
- lip2000能转染DNA吗
liblin1年前1
-
Koring 共回答了18个问题
|采纳率94.4%可以啊.按照protocol来做1年前查看全部
- 24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?
24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?
我在24孔板里做293细胞的转染,转染试剂是Invitrogen的Lipofectamine2000.奇怪的是,每次加完DNA- Lipofectamine complex,24个孔当中的后面几个孔(比如最后6个孔)里的细胞就明显有一部分死亡,死亡率是10-30%,通常最严重的是最后两个孔.但是前面的孔里的细胞总是没有问题.用不同的DNA做实验,都发生同样的问题,就是总是后面的孔里细胞死亡,而前面的孔里细胞没问题.是怎么回事呢?不可思毅1年前1
-
Devil313 共回答了20个问题
|采纳率90%博凌科为也遇到过类似的情况,如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的,会在风机下风干的,很快的,这样你在加到后面的孔时,部分细胞已经干了,所以你先加的很好,后面的就有问题.解决办 法就是,你不要一起吸净所有孔的液体,6个孔为一个单位,吸弃孔里的液体,在加DNA-Lipofectamine complex,就可以了.1年前查看全部
- pcdna 3.1 转染哪种细胞
f260255ss1年前1
-
dxueh2005 共回答了18个问题
|采纳率88.9%pCDNA3.1含有复制子——SV40 ori,是来源于SV40病毒的复制子,可以转染所有的人源细胞,其实不止人源细胞,小鼠、猴子等动物的细胞都可以,没有特定的细胞株要求.
pCDNA3.1的主要功能就是在动物细胞或者动物体内表达重组蛋白.
当然,它还含有pUC ori,也可以转化大肠杆菌用于质粒的克隆与制备.1年前查看全部
- 用pcDNA3.1在哺乳动物细胞里表达蛋白,从转染开始算,多长时间可以表达出目的蛋白呢~
遥远的岛1年前1
-
火空火图 共回答了13个问题
|采纳率84.6%既然你是做瞬转的话,一般24h就已经有很多表达了,48h就基本上是表达的最大值了.我们一般就只做到48h就可以收了.1年前查看全部
- 我想做siRNA转染后细胞生长曲线的变化,那么用lipo2000转染应该是稳定转染还是瞬时转染?
地狱天使sw1年前1
-
ssaufei 共回答了19个问题
|采纳率84.2%稳转还是瞬时转染与转染试剂无关,与转进去是什么东西有关.
如果不是插入到基因组内的话,都不能算稳转.
siRNA明显是瞬时转染,一会儿就降解了.如果做shRNA,可以做稳转.1年前查看全部
- Real-Time PCR 检测细胞转染效果时分组问题
Real-Time PCR 检测细胞转染效果时分组问题
分三组,Real-Time PCR实验设计时应包括实验组(导入siRNA),阴性对照(Negative Control)和Mock Transfaction三组.每组至少三个重复.当中的Mock Transfaction组是什么?香猪仔1年前1
-
jamp 共回答了15个问题
|采纳率93.3%应该是转一个非相关载体1年前查看全部
- Lipofectin 2000是怎么样的转染试剂?为什么其转染效率高?
无边无际的天空1年前2
-
无芷婧 共回答了16个问题
|采纳率81.3%脂质体2000
转染效率高 的说法不是针对所有细胞,有些系很难转进去,有些特别敏感的转完之后差不多都死光1年前查看全部
- siRNA转染请问,用lip2000转染化学合成的siRNA,说明书上推荐的用量,其中siRNA终浓度为33nMoil/
siRNA转染
请问,用lip2000转染化学合成的siRNA,说明书上推荐的用量,其中siRNA终浓度为33nMoil/L转染步骤为:
siRNA 1ul(20pM) + 培养基 50uL
lip2000 1uL + 培养基 50uL
那么要是siRNA终浓度为50nMol/L时,
siRNA 为1.25ul(25pM)
请问lip2000 还是用1uL?用来稀释的培养基还是用 50uLyang00551年前2
-
旺财刘 共回答了15个问题
|采纳率93.3%厂家推荐的体积,是维持ip2000 1uL + 培养基 50uL这个比例.这个只是个参考,或者起始比列.
在实际操作当中,你可以同时试一下增高,减小这个比例.看看哪个效果最好,以后就用你试的那个比例.1年前查看全部
- 人们吃了带有蛔虫卵的蔬菜,患了蛔虫病,这种蔬菜属于【 】A.病原体 B.转染病C 传播途径D都
南qq缘1年前2
-
daloy 共回答了15个问题
|采纳率93.3%C,属于传播途径,是通过饮食传播的.1年前查看全部
- 思考题,在哺乳动物细胞转染实验中为提高转染效率需要注意哪些问题
凌下4度1年前1
-
pa42 共回答了10个问题
|采纳率90%提高转染效率要注意的细节太多太多了,选择合适的试剂并正确使用是转染成功的基础
详见:1年前查看全部
- lipo2000转染质粒 为什么
aboom1年前1
-
fenyunfly 共回答了16个问题
|采纳率100%转染细胞不是在超净台做吗?如果操作规范是不会污染的~但用两千确实不怎么安全~毒性大还不能用含抗生素培养基~1年前查看全部
- 转染有Amp抗性基因的质粒后,DH5α感受态细胞不能在Amp阴性的LB 培养板中生长,为什么?
转染有Amp抗性基因的质粒后,DH5α感受态细胞不能在Amp阴性的LB 培养板中生长,为什么?
转染有Amp抗性基因的质粒后,DH5α感受态细胞能在Amp阳性的LB 培养板中良好生长lyx12121年前1
-
xyc5241 共回答了20个问题
|采纳率75%能在含Amp的培养基生长而不能在不含Amp的培养基当中生长吗?这好像不太对,做的时候有做好对照?有重复做下?一步步确保实验的正确性,再寻找可能的原因1年前查看全部
- PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1)转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少.
PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1)转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少.
目的基因和GFP构成融合蛋白,转染后24小时,空载表达GFP70%,但目的基因表达GFP很弱很少,经筛选后,连空载都表达减弱减少,vertuqd1年前3
-
sherrylee87 共回答了22个问题
|采纳率100%只要没有整合到基因组DNA,转染进入的外源性DNA都会随着细胞分裂而被稀释.所以经过10天后表达肯定是会减弱的,这是正常现象.只有当外援DNA整合到基因组后,表达水平才能稳定1年前查看全部
- 区别三个生物学术语:转化转导转染
区别三个生物学术语:转化转导转染
好的话补充奖励分
我要是能看明白就不发了,早读过了gddeyen1年前1
-
王奇牙 共回答了20个问题
|采纳率85%转化发生在细菌之间 转导和噬菌体有关 转染是针对真核生物的1年前查看全部
- 转化 转染 转导和转座的区别
安全北村1年前1
-
xylsok 共回答了16个问题
|采纳率100%转化(transformation):外源遗传物质(质粒DNA)进入细菌引起细菌遗传性状改变.转染(transfection):外源基因通过病毒或噬菌体感染细胞或个体的过程.转导(transduction):是以温和噬菌体为载体,将供体菌的一段...1年前查看全部
- 转染时质粒怎么定量
fuyusheng1年前2
-
magik1 共回答了20个问题
|采纳率90%质粒是先用分光光度计定浓度的,然后根据你转染的方法,转染细胞的多少确定要转多少质粒,然后就可以算加入的体积了.1年前查看全部
- 真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?
真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?
主要是样品的收集问题,我做western阳性对照都出来了,但是待检样做不出来,细胞核上清要分开收么?怎么收集蛋白?越具体越好!好心情2681年前1
-
WOSHIWXX 共回答了18个问题
|采纳率100%上清收了做ELISA 细胞直接裂解提蛋白做WB1年前查看全部
- 线性PEI还是分支PEI的转染效率高?
dj7se7en71年前1
-
21112217 共回答了15个问题
|采纳率86.7%PEI即聚乙烯亚胺,是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体.其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低.
线型PEI与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI要早一些,过去的研究认为在不考虑具体条件,LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低,有利于细胞定位,因此与BPEI相比应该转染效率高一些.但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物,从而提高转染效率,但同时细胞毒性也增大.1年前查看全部
- 怎样用流式细胞仪定量pei/sirna的转染效率
老鼠-枯鱼-蚂蚁1年前1
-
封泪 共回答了16个问题
|采纳率81.3%如果转染的载体同时带有荧光蛋白的序列,直接检测荧光蛋白阳性的细胞就可以了.或者有荧光的tag也可以.1年前查看全部
- 稳转表达的细胞系所转染的基因高表达倍数是稳定的吗
ruddy_23041年前1
-
ia007 共回答了14个问题
|采纳率100%一般稳转的基因表达倍数是稳定的.还要看你稳转用的是什么体系,如果是质粒的话,不宜传太多代数,有可能会丢失.如果是病毒的话,插入基因组中,表达是很稳定的.1年前查看全部
- 列举几种原核微生物基因重组的方法,并简述转化、转导、转染、溶源性转变的差异.
阿四1年前1
-
手背上的牙齿 共回答了23个问题
|采纳率87%主要有转化、转导、接合、原生质体融合
转化:受体菌直接吸收供体菌的DNA片段而获得后者都分遗传性状的现象.
转导:通过缺陷噬菌体的媒介,把供体细胞的小片段DNA携带到受体细胞中,通过交换与整合,使后者获得前者部分遗传性状的现象.
转染:用提纯的病毒核酸(DNA或RNA)去感染其宿主细胞或其原生质体,可增殖出一群正常病毒后代的现象,从表面上看,转染似与转化相似,但实质上两者的区别十分明显.因为作为转染的病毒核酸,绝不是作为供体菌的功能,被感染的宿主也绝不是能形成转化子得受体菌.
溶源转变:当正常的温和噬菌体感染其宿主而使其发生溶源化时,因噬菌体整合到宿主的核基因上,而使宿主获得了除免疫性外的新遗传性状的现象,是一种不携带任何外源基因的正常噬菌体;是噬菌体的基因而不是供体菌的基因提供了宿主的新性状;新性状是宿主细胞溶源化时的表型,而不是经遗传重组形成的稳定转导子;获得的性状可随噬菌体的消失而同时消失.1年前查看全部
- siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
lygren1年前1
-
lijoy_37 共回答了28个问题
|采纳率82.1%无痕3个月前觉得RNA干扰(转录后基因沉默)实验难当下研究基因功能的不二之选,相对于knockout还是easy许多.从特异性序列的设计到引物合成到干扰质粒构建抑或是病毒载体介导的siRNA或miRNA的整套技术路线都已经相对比较成熟了,而且有米的话可以直接找公司合成,当然整个过程自己动手的话分子生物学的实验技术学的东西更多.再到后续的转染或感染细胞,体系的建立很关键,若想达到很好的沉默效果,稳定转染是必要条件.总体来说该项技术的出现为功能基因组学的研究发展带来了不可估量的突破和现实意义!1年前查看全部
大家在问
- 1听下面一段对话,回答第1-3三个小题。 1. Where did this conversation take plac
- 2翻译:圣诞节是在十二月二十五日.
- 30.4x+0.3y-0.2z=4
- 4当k为何值时,关于x的方程x²-(2k-1)x+k²=0有两个不相等的实数根
- 5度分秒 计算(1)90度-17度25分18秒×3(2)40度27分/3我急要
- 6我的姐姐比我瘦的英文怎么说 我的姐姐比我大7岁的英语怎么说
- 7设方程X的平方等于x的所有实数根组成的集合为B
- 8在光滑的水平轨道上有质量为m的物体A,处于静止状态,物体B的质量也为m,由不可伸长的轻绳悬挂于O点,B与轨道接触但不挤压
- 9Lisa has two _____,Sam and Nick.Lisa is 8.Sam is 10 and Nick
- 10百什么百什么的成语
- 11设函数fx=(x/a-1)∧2+(b/x-1)∧2 其中x属于(0,正无穷)
- 12萧萧梧叶送寒风,江上秋风动客情的意思
- 13求助f(x)=2-(x分之3)limx*sin(1/x)
- 14牛顿同志为什么会去思考苹果为什么会从天上掉到地上,而不是往天上升这个问题?
- 15数学经典成语故事求数学经典故事!