lso

also,both,all都是放在be动词，情态动词（can,must等）之后，其他实义动词之前。

also, too, either 与 as well 的用法区别这四个词均可表示“也”，其区别如下：1. too 和 as well 多用于口语中，语气较轻，通常用于肯定句或疑问句，一般不用于否定句，且通常放在句末。如：I like you too [as well]. 我也喜欢你。Are they coming too [as well]? 他们也来吗?too 有时也紧跟在主语后(注： as well 不这样用)，此用法较正式。如：I, too, know where he lives. 我也知道他住在什么地方。注意：在 Me too, You too这类简略答语中，通常不用 as well或also。如：A：I"m tired. 我累了。B：Me too. 我也是。2. also 比 too 和 as well 正式，一般也不用于否定句，它在句中的位置通常是紧靠动词，即放在行为动词之前，特殊动词之后。有时为了强调也放在句末(但不常见)。如：He also came. / He came also. 他也来了。She is young and beautiful，and also rich. 她年轻漂亮，而且有钱。说明：also 有时用于句首(其后通常有逗号)，相当于连词 and。如：Also, his mother was dead. 再说，他母亲又过世了。3. either(也)通常只用于否定句，且要放在句末。如：I don"t know, either. 我也不知道。He hasn"t finished it, either. 他也还没有做完。注意：有时在肯定句之后跟一个否定句，可能用 too，also。如：He came, but she didn"t also came. 他来了，但她没有也一起来。He went to Washington, but not to New York too. 他去了华盛顿，但并不是也去了纽约。比较He didn"t buy a computer, and she didn"t either. 他没买电脑，她也没买。He bought a computer, but she didn"t too. 他买了台电脑，但她没有也买台电脑。

either,too,also的区别为：指代不同、语法不同、侧重点不同。一、指代不同1、either：(用于否定词组后)也。2、too：(用于形容词和副词前)也。3、also：此外;也。二、语法不同1、either：either作代词时,意为“(二者之中)任何一个”,在句中作主语或宾语,表示单数概念; 作主语时谓语动词一般用单数形式,但在否定句中常用复数形式。2、too：too的基本意思是“也”“还”“而且”,用于肯定句,否定句用either。3、also：also是较正式的用词，多用于书面语，基本意思是“也”“还”,表示两件事的性质相近或两件事情发生的时间相同，也可表示刚说过的话也适用于另一个人或物。三、侧重点不同1、either：either用于否定句，放在句末，之前加逗号。2、too：too语气较轻，多用于口语，在肯定句中使用，通常位于句末。3、also：also比too正式一些，语气较重，只用于肯定句，一般紧靠动词。

also adv.而且;此外;也;同样 用法：also用于实义动词之前；also用于be动词之后；also用于第一个助动词之后；also有时放在句首，但是also一定不能放在句子的最后。 扩展资料 　　She was not only intelligent but also very musical. 　　她不仅聪明，而且极具音乐天分。 　　This dictionary is also available in electronic form. 　　这部词典也有电子版本的。 　　His on-screen father is also his father in real life. 　　他那荧幕上的父亲也是他现实生活中的父亲。

also通常在句中位置是助后实前

also 也接触多了就知道了,要有悟性

可玩

您好，if 这个单词在英语中通常用于两种情况：1）译为【是否】时，if 用于（名词性从句）；2）译为【如果】是，if 用于（条件状语）或是（条件状语从句）您提供的两个句子都是（条件状语从句）的范畴。

回答和翻译如下：Females also stressed the importance of detail in the telling of males in this matter,claiming that men"never know the details"."Men just don"t do the he-said-she-said thing,"one informant told me,"and it"s no good unless you actually know what people said."Another said:"Women tend to speculate more...They"ll talk about why someone did something,give a history to the situation."For women,this detailed speculation about possible motives and causes,requiring an exhaustive raking over "history",is a crucial element of gossip,as is detailed speculation about possible outcomes.English males find all this detail boring,irrelevant and,of course,unmanly.女人们还强调了细节在告诉男人这件事中的重要性，声称男人“永远不知道细节”。一个告密者告诉我，男人就是不做他说的-她说的“事”，除非你真正知道人们说什么，否则没有用。另一个说：“女人往往会猜测更多……她们会谈论某人为什么做某事，例如对女人来说，这种关于可能的动机和原因的详细推测，要求对“历史”进行详尽的耙闻，是八卦的一个关键因素，对可能的结果进行详尽的推测也是如此。英国男人觉得所有这些细节都枯燥无味，毫无意义，当然也缺乏男子气概。

EarlCarlsonEarlCarlson是一名布景师，代表作品有《ArchieBunker"sPlace》、《全家福》等。外文名：EarlCarlson职业：布景师代表作品：《ArchieBunker"sPlace》、《全家福》合作人物：BillHobin电视剧作品

我认为是因为主语是动名词短语 eattingDangshenandHuangqi 而不是DangshenandHuangqi判断出来要用复数。另：eat要双写t =）

不好。这个球拍是90拍面出身的，95和100的都是委曲求全，喜欢费德勒，但是驾驭不了90拍面的人买的。如果你想买，还是买95好了，但是我也打过95，不太舒服。建议你选择L3，L4，PD，wilson stream这些。都是1000左右。

假货的几率在一半以上。注意拍喉出有无中国总代理的“卓威标志”是评判真伪的唯一金标准。港版=来路不明

这要看楼主你的习惯和水平了。两个拍子面积不同构架有略微差别。虽然都是BLX但是面积的差别让结构发生了轻微的改变，100的甜点更大，95的小一些，95会比100更容易发力，显得更有力量，但防守上就未必有100那么舒适，所以楼主这个好，要看你更适合哪个。每款拍子都是好的，关键是怎么好。

不知道.买Blx90或者95吧.我就用90超级难控制

wilson 在 淘宝上有旗舰店呀 ~

编号: T7004拍面大小:95 sq.in. /613 sq.cm长度:27 inches /69 cm空拍重量:10.2 oz /289 g穿线重量:10.7 oz /304 g平衡点:1pts Head Light挥拍重量: 318球拍硬度: 60拍框宽度: 21材料: Karophite Black / Basalt力度水平: 低-中挥拍速度: 中-快柄皮: Wilson Pro Hybrid线床: 18*20拉线磅数: 50-60这款Wilson网球拍是BLX 6.1团队中适合年轻球手或仅仅是倾向于较轻重量的球手喜爱的一款球拍。289克的空拍重量和近乎平衡的设计使其有更好的改造空间以及更适合大多数选手操控的性能，而BLX科技为其带来了更好的手感和精准性能，使6.1系列受到更广泛球手的喜爱。Wilson BLX Six-One 95 team是各种年龄和水平的专业型球手青睐的对象。

　　根据wilson 网球拍 的市场据有率和知名度的进步，市场上仿制 wlson网球拍的冒充伪劣产物也跟着呈现，良多消费者在购置网球拍的时分，都不晓得若何辨别网球拍的真假。普通有品牌的新型球拍或明星选手拿的球拍，由于价位较高或较抢手，只需价差够且有利可图就轻易被仿冒，像Wilson等就为仿冒球的首要对象，而在球拍类型中又以握把设计是传统PU或一体成型球拍的是最轻易被仿冒的，而明星球员所拿的球拍在握把设计大多是传统的PU握把，仿冒起来并不坚苦，只需找支相似的粗胚模，再上一样的色漆及标记，就可做出拍身外观简直如出一辙的球拍了。目前，大成仓网球商城就以wilson blx系列的网球拍为例，通知列位网球喜好者，在购置网球拍的时分若何判定能否为正品网球拍。 　　简略便利的区分仿冒球拍的办法：第一：看看网球拍的做工能否细腻，作为知名网球品牌，网球拍所用的资料，所运用的科技都是冒充者无法制造出来的，看看色漆涂装外观的完满水平。球拍的击球面必需是平的，由弦线上下替换编织或联合构成，其构成花样应完全一致。每条弦线必需与拍框联接，特殊是穿线后个中心密度不克不及小于其他任何区域的密度。弦线不该有隶属物或突起 物：若有隶属物，只限于用以限制或避免弦线的 磨损、震动或涣散重力， 其巨细和安插均应合理。 　　其二：也是最首要的，就是要留意要有防伪标记，留意看网球拍上面的雷射标记，及署理商的包管书，但市情上照样会有水货，这就要留意雷射标记或握把皮带、后面部位的商标Mark及品管标记等，必然要留意整支球拍标记的完好性。

wilson没有3LX系列，只有BLX系列，即火山岩纤维科技。你把他看成3，是因为牌子上那个B是艺术字体。2012出的那个系列，我们一般称为BLX2。这个衍生系列跟BLX非常接近，只是岩纤维使用的更多。BLX系列、310克的拍子只有一款，BLXSixone95，黑红配色。与这款相对应，在BLX2里面出现两款，BLX2Sixone95，309克；和BLX2ProStaffSixone95，313克。这两款性能接近，而且都是红白配色，看你个人喜好了。稍微值得一提的是，BLX2ProStaffSixone95做成了方拍框，这种拍框从理论上来说，控制更好。

DeniseWilsonDeniseWilson是一名演员，主要作品有《王子与滑板少年》。外文名：DeniseWilson职业：演员合作人物：AryeGross代表作品：《王子与滑板少年》

LSOH与CMR标准不冲突。【LSOH】无卤低烟(LowSmokeHalogenFree,LSOH1、对于低烟无卤（LSOH）缆线，通常水平双绞线要求符合IEC 60332.1标准，垂直干线缆线要求符合IEC 60332.3C标准。2、采以低烟无毒(LSOH)的材质，符合UL2043空间规范中小企业网路安全 小型企业网路安全 防火墙中央集中管理软体 防火墙报表3、低烟无卤线缆的测试要求，符合三方面要求：【阻燃性要求：】低烟无卤缆线必须具有阻燃性。其阻燃等级有两个，分别要求符合IEC 60332.1（单根电缆垂直燃烧测试）和IEC 60332.3C（成束电缆垂直燃烧传播测试）。其中IEC 60332.1的阻燃要求使用普通的缆线阻燃要求，而IEC60332.3C则要求比较高，属于干线级的阻燃要求。【烟密度要求：】低烟无卤缆线要进行烟密度测试。它是在一个密闭的空间中用火燃烧线缆，待火焰熄灭后测试最终的室内烟密度，要求在有烟的情况下，透光能力能够达到60%，这样就确保人们在烟雾中能够看见道路。【毒性要求：】目前的毒性测试方法有数种，如小白鼠试验等等。在低烟无卤缆线中采用的是卤酸气体释放量测试（用于低卤测试）和气体酸度测试（用于无卤测试）。其测试原理是对低烟无卤材料在高温下（分别为800℃和935℃）所产生的气体进行分析的方法确定卤素含量。有些资料上介绍IEC 60332.1等同于UL的CM级要求（IEC 60332.2是细径缆线的测试方法，即不能使用60332.1测试时使用的替代测试方法）、IEC60332.3C等同于UL的CMR级要求。【CMR标准】CMR代表的是燃烧等级,此燃烧等级为大规模燃烧测试(成束燃烧),测试的标准实验室,目前美国UL总部有一所,此燃烧设备模拟楼房。 国内模拟建的实验室上海领先有一所。此标准同GB标准有明显区别,国内一般标注CM等级的线,都达不到CM燃烧标准。 LSZH,LS0H:Low Smoke Zero Halogen 低烟”

题主所给复述句的主要结构是对的，只是有一点语法错误：在believed后面要用不定式，即在其后加上to be即可：The distinctive Cockney brand of English is believed (by some ) to be also in danger of dying out.

play a part in sth/doing sth. 在……起到作用dialect. 方言，土话 social dialect. 社会方言speak with 和speak to 的区别speak with和...谈话, 和...商量both sides will talk or speakach otherspeak tov.对...说话, 说到, 责备, 证明Only one side speak The USA is a large country in which ……are spoken. in which 的用法， This is the city where/in which I met John.此处的which指the city，去掉in，the city 就变成了主语，跟之后的I产生主语冲突，一山不容二虎就是这个道理，去掉in后，大致是这个样子的1.This is the city which held the Olympic Games.当the city不再是主语时，是这样的2.This is the city in which the Olympic Games was held.它的原型是这样的，3.The Olympic Games was held in this city. move a lot,a lot 的用法非常广泛，这里的意思一看就懂，虽然很多人都搬走了，可见英语的用法很灵活，要慢慢积累，打字好累，采纳下吧

小修需要一个星期左右。“AnnalsofEconomicsanFinance”《经济学与金融年刊》。该期刊由武汉大学和北京大学联合主办，邹恒甫任主编。已故的“一代经济学大师”董辅_先生对邹恒甫的学术水平和办教育的成就都给予极高的评价。他说：“在武汉大学的历史上，经济学的革命有两次，一次是1947年张培刚（被誉为发展经济学之父）先生从哈佛回到了武大，第二次就是现在，邹恒甫从哈佛回来。”著名的经济学家林毅夫曾对世界银行的人说：“改革开放以来，对中国经济学教育做得最多、贡献最大，没有人可以与邹恒甫相比。”名气极大的经济学家郎咸平说：“邹恒甫在中国经济学界是我唯一敬重、景仰的经济学家，完全可以用唯一这个词。”极为自负的郎咸平，据说除了对诺贝尔物理学奖得主杨振宁和数学泰斗丘成桐等极少数大师表示尊敬之外，在没有值得郎咸平尊重的中国经济学家群体里，惟有邹恒甫是一个例外。

这个审稿最少需要3个月。在IDEAS全世界一千三百多经济金融会计管理统计学术期刊中，邹恒甫主编的SSCI刊物AnnalsofEconomicsandFinance已经是第92名。“AnnalsofEconomicsanFinance”《经济学与金融年刊》。该期刊由武汉大学和北京大学联合主办，邹恒甫任主编。该刊按照国外一流经济学期刊的模式，聘请著名华人经济学家担任副主编(co—editor)，采用匿名审稿的制度。该期刊已被美国国会图书馆正式收录，同时也被最权威的美国经济文献库JEL收录，已成为国际经济学界公认的主流经济学杂志之一。邹恒甫，素以低调著称。他在国外主要杂志上发表了40多篇有影响力的论文。由于他在宏观经济学领域所作的突出贡献，在去年年初全球10多万名经济学家和5500名著名经济学家的大排名中名列世界第247位。邹恒甫的一些经济学观点，曾经得到过国际经济学大师巴罗、雅克-让·拉丰包括诺贝尔经济学奖得主赫克曼在内的高度赞扬。巴罗在同邹恒甫的激烈争辩中成为至交。雅克-让·拉丰评价邹恒甫有“令人信服的杰出的学术成就”。赫克曼在多种场合赞扬邹恒甫在收入分配和财政政策研究领域等方面的重要成就。

我想你应该问的是bind和compulsory的区别吧bind是动词，经常使用其被动形式bound，表示口头强迫某人做出某个承诺，比如：He had been bound to secrecy. 他被迫承诺坚守秘密。compulsory是形容词，是法律强制要求必须这么做。比如compulsory education 表示义务教育。有时候可以和mandatory互用。

因为他们的合约到期了，换成海德了。海德把明年才上市的网球拍定做给小德用，待遇也好。签到海德的原文： Some sources around the internet have heard rumours that Nole will be switching to Head rackets next year. Although there is no concrete evidence to back this up yet, there is a high likelihood of this happening since Djokovic"s contract with Wilson ends this year and Head would love to be able to pick up another top ten player (especially one in the top 3). If the deal does happen, it would mean Head would have both the #3 and #4 ranked players in the world and since both Djokovic and Murray are both very young this is a great move. In terms of what he will use, it is anyone"s guess but I would think Head would give Djokovic his own line of rackets.

如果also放句首,是also,i can do it.also解然而,一般also放句中,too 放句尾.either用于否定句,位于句末. 我是英语教师,不明可再问.

不是l 是i episodes[英]["epu026asu0259u028adz][美]["epu026asou028adz]n.插曲，片断( episode的名词复数 ); 一集;

翻译：Readers also tended to share articles that were exciting or funny, or that in或者说，读者也倾向于分享令人兴奋或有趣 的文章

　　It为主语， also denies是谓语动词， same sex couples为间接宾语， certain federal benefits为直接宾语， that married heterosexuals receive.为定语从句，以certain federal benefits为先行词。使用的短语是deny sb. sth.“意思为剥夺某人某事物”。全句意思如下：　　它（某政策或法案）也剥夺了一些同性恋夫妇应该享有的联邦福利，而这些福利是异性恋已婚夫妇通常享有的。

1-3 DDC

谚语 。

基因靶位操作的原理与策略汪亚平 朱作言The Principle and Strategy of Gene TargetingWANG Ya-Ping ZHU Zuo-Yan(Institute of Hydrobiology,The Chinese Academy of Sciences,Wuhan430072) 基因靶位操作(gene targeting)是80年代发展起来的一项重要分子生物学技术, 是通过外源DNA与染色体DNA间的同源重组，定点修饰、改造基因组特定位点的技术。1 同源重组 同源重组是基因靶位操作技术的分子生物学基础。DNA同源重组在基因转化和遗传多样性发生中具有重要作用，受到了众多研究者的重视。从60年代开始，在真菌系统中对同源重组机制进行了系统研究〔1〕，相继提出了多个同源重组模型。1.1 Holliday 模型〔2〕 Holliday等60年代提出的模型是第一个被普遍接受的同源重组模型，该模型以杂合DNA链的形成和随后的DNA修复解释真菌中的基因转化现象，从而建立了同源DNA顺序间遗传信息交换的基本概念。Holliday模型中的基本要素，如Holliday结构和交叉平移等对以后的许多同源重组模型产生重要影响。Potter等〔3〕对DNA重组的电镜观察结果，为该模型的Holliday结构提供了直接证据。1.2 Meselson-Radding 模型〔4〕 Meselson和Radding 在Holliday模型的基础上作了一些改进，认为DNA单链的形成及其向相邻DNA双链的侵入为非对称产生，提出Meselson-Radding 模型。DNA单链形成可在一条DNA双链中首先产生，随着缺刻处DNA链的修复合成，游离出的单链末端侵入相邻DNA双链中，与同源部分配对结合，被替换的DNA链形成一个逐渐增大的D-loop。D-loop断开后产生的单链末端交叉侵入相邻DNA双链中，DNA自由末端共价连接形成Holliday结构。Meselson-Radding模型首次将DNA合成与重组联系起来，这种DNA杂合链形成机制似乎更贴切地解释了非对称重组现象〔1〕。1.3 双链断裂修复模型 在酵母系统的重组研究中，发现载体DNA双链断裂可大大提高同源重组的效率，Holliday和Meselson-Radding模型都不能很好地解释这一现象。基于这一发现，Szostak 等提出了双链断裂修复(DSBR)模型〔5〕。在这一模型中，重组发生在DNA双链断裂区，断裂区的修复以对应的同源DNA链为模板，修复的断裂区实质上成为转化区域。DNA末端共价连接，形成两个Holliday结构，每一结构都有两种解决方式，或形成交换双链，或形成非交换双链。基因转化不需要DNA杂合链的形成和以后的改错修复过程。DSBR模型与Meselson-Radding模型还有另一个重要区别，前者的双链断裂区是信息接受区域，后者的DNA断裂区是遗传信息的提供者。1.4 单链退火模型 1984年，Lin等提出完全不同的单链退火(SSA)模型〔6〕。在SSA模型中，重组在DNA双链断裂处开始，在单链特异性核酸外切酶的作用下，断裂点两侧逐渐形成DNA单链区域，这一过程持续到两个断点处出现互补DNA单链。互补DNA单链退火，非互补末端被切除，单链缺口修复连接，完成DNA重组。SSA模型没有其它模型所需的双链DNA的识别配对过程，不形成Holliday结构作为重组的中间过渡形式。因此，重组毫不例外地产生DNA双链交换，并丢失非退火区域单链DNA顺序。该模型提供了理解同源重组机制的全新视角。 除上述模型外，不同研究者提出了一引起其它重组模型。Rao等的研究发现，在RecA蛋白的参与下，单链DNA分子进入DNA双螺旋主沟，在同源区域形成稳定的三链结构〔7〕。其它研究小组也发现过类似的三链DNA结构，认为DNA分子的三链结构可能在同源序列识别和重组中起重要作用〔8〕。 同源重组除可在DNA分子间进行外，还可在RNA分子间或RNA与DNA分子间进行。Stuhlmann等研究发现，逆转录病毒RNA在逆转录中发生高频同源重组〔9〕，这一现象在其它RNA病毒中也被证实〔10, 11〕。Derr等在酵母S. cerevisiae中的研究进一步发现，RNA分子可通过cDNA途径介导基因组DNA同源重组，提出RNA介导重组模型(RNA-mediated recombination)〔12〕。RNA分子间及RNA介导的同源重组可能提供基因组变异的新途径。2 基因靶位操作 70年代后期和80年代中期，以酵母S. cerevisiae 为模式系统，建立了基因靶位操作技术的基础〔13〕。基因靶位操作技术的建立依赖于几个重要方面的突破：外源DNA导入酵母细胞方法的建立；有效选择标记基因(如LEU2和URA3基因)的开发利用和同源重组转化子筛选系统的建立；靶位载体同源序列DNA双链断裂提高同源重组效率现象的发现。模式研究确立了基因靶位操作的重要技术参数，并逐渐形成成熟的研究策略。2.1 插入型载体和置换型载体 基因靶位操作载体有两种类型，即插入型载体和置换型载体，区别在于载体DNA同源序列双链断裂位点的位置不同。插入型载体的断裂位点在同源目的顺序内，选择基因可在载体的任何位置，载体与染色体靶位点进行一次交换完成同源重组，其结果是整个载体整合到染色体靶位点上（图1, A）；置换型载体的断裂位点在同源目的顺序的两侧或外侧，选择基因在同源目的顺序内，载体同源目的顺序与染色体靶位进行两次交换完成同源重组，重组的结果是由载体的同源目的顺序取代染色体靶位顺序（图1, B）。图1 基因精细突变策略(A.进退策略;B.标记交换策略) 关于两种不同载体类型的同源重组效率，有研究发现插入型载体有更高的重组效率，其重组机制接近于双链断裂修复重组模型，而置换型载体的重组机制尚不清楚〔14〕。Deng等对鼠ES细胞的Hprt位点的22个不同载体序列进行了同源重组效率比较，发现两类基因靶位操作载体并不存在重组效率上的差异〔15〕。2.2 基因剔除和基因精细突变 用传统的遗传学方法和体外生物化学方法研究基因表达调控和产物生理功能受到诸多因素的限制，基因靶位操作技术的出现，使体外突变的基因导入生物体基因组成为可能，可在细胞和生物体水平上研究基因的表达调控及其生理功能。应用基因靶位操作技术定点改造基因组特定基因主要采用两种方式：基因剔除和基因精细突变。2.2.1 基因剔除 基因剔除是在体外进行目的基因的功能缺失突变，突变基因通过基因靶位操作方法导入染色体基因组中，剔除内源野生型基因，实现染色体靶位基因的功能缺失突变。基因剔除主要采用两种方案：其一，在克隆的目的基因的5"端和3"端形成两个突变，每一突变将独立产生基因功能丧失，通过插入型载体，将突变目的基因导入染色体基因组中。这一方法要求在目的基因两端产生有效突变，特别是3"端的有效突变有较高的技术难度，突变基因产物往往保留部分功能活性，因此，基因靶位操作前要对突变的有效性进行检测。目的突变基因和染色体靶位基因，串联的同源基因顺序可能二度重组，产生恢复突变。由于上述原因，这类基因剔除方案现已多不采用〔16〕。其二，将选择标记基因直接插入载体目的基因中，这一过程通常伴随目的基因顺序的部分丢失，从而产生插入和丢失突变。载体导入靶细胞前在目的突变基因顺序两侧断开，以置换型载体方式将突变基因导入染色体基因组中。与插入型方案比较，置换型载体方案目的基因体外突变方便，由于突变程度加剧，基因靶位操作前不需要突变的有效性检验，基因靶位操作转化子不易产生恢复突变。2.2.2 基因精细突变 基因剔除方法使基因组中特定基因产生功能缺失，是研究某一基因的基本功能、了解基因在细胞和胚胎发育过程中作用的有效方法。然而，基因结构与基因功能之间存在复杂的结构功能联系。如人类遗传病发生的基础多是核苷酸水平上的突变，基因剔除方法尚不能很好地研究基因精细结构方面的变化。另外，基因剔除方法还存在一些潜在的不利因素，如滞留在基因组中的正向选择标记基因不仅会造成所在染色体区域较大范围的中断，而且它携带的启动子或 增强子也可能会使邻近基因的转录失调，产生难以预料的表型〔17〕。在基因剔除方法的基础上，发展了多种改进策略，以满足基因精细结构研究的需要。 (1)进退策略: 进退策略由Hasty和Valancius首先提出，它包括两次同源重组过程。第一次以插入型载体同源重组到基因组靶位点中，完成目的突变基因和标记基因的导入，在选择培养基中得到转化细胞克隆。第二次同源重组在基因组中的目的突变基因和染色体靶位基因之间自发产生，其结果是载体骨架、标记基因和一个同源基因顺序环出，基因组中可能保留导入的目的突变基因，这一自发性同源重组过程称之为回复。回复的频率视不同染色体靶位点而有所差异〔17〕。回复转化子在相应选择培养基中筛选克隆。用PCR或Southern杂交方法可检测回复转化子是否包含目的突变基因(图1, A)。Hasty等应用进退策略，在鼠ES细胞同源异型基因族Hox-2.6基因3"端引入一个翻译终止码，得到短截43个氨基酸的突变蛋白〔17〕。Valancius等采用类似的方法，在鼠ES细胞Hprt-中插入了一个4碱基的插入突变〔18〕。 (2)标记交换策略: 1993年，Askew等提出一个新的基因组定点突变策略〔19〕，即标记交换策略。它包括两个过程，首先，用置换型载体将选择标记基因导入基因组靶位点，在相应的选择培养基中筛选转化子细胞克隆。第二步将目的突变基因顺序以置换型载体导入靶细胞中，在选择培养基中得到同源重组转化子，实现染色体靶位基因的定点突变，同时剔除靶位基因中原先插入的选择标记基因（图1, B）。 Askew等采用标记交换策略，在鼠ES细胞基因组非选择性基因α2异构Na, K-ATP酶基因中引入两个密码子突变和3个无表型突变〔19〕。标记交换策略中，第一步选择基因的标记和第二步目的突变基因置换具有相对独立性，被标记的细胞系可与多种目的突变基因进行交换，因此，应用此策略可建立染色体靶位基因的多种遗传缺陷动物模型，在基因结构与功能研究中具有重要意义。 (3)Cre-loxP重组系统策略〔20〕: Gu等提出的Cre-loxP重组系统策略是进行基因组定点突变的新途径。Cre-loxP重组系统包括Cre重组酶和loxP位点两个部分，Cre重组酶由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码，loxP位点是Cre酶作用的特异性重组位点，由两个13-bp的反向重复顺序和8-bp间隔区域构成。Cre重组酶可切除同向重复的两个loxP位点之间的DNA片段和一个loxP位点，保留一个loxP位点〔21〕。Cre-loxP重组系统可在哺乳类细胞和转基因鼠中介导loxP位点特异性重组〔22, 23, 24〕。Gu等进一步提出由同源重组和位点特异性重组组成的两步重组策略，第一步，通过置换型载体进行同源重组，向基因组靶位点引入选择标记基因，并在其两侧引入两个同向排列的loxP位点。第二步，通过Cre重组酶介导的loxP位点特异性重组，切除位于两个loxP位点之间的所有顺序，而位于其外侧的结构顺序则均被保留。这一策略可通过位于两个位点之间或之外的结构顺序的不同设计，达到对靶位基因不同的修饰结果。Gu等在鼠ES细胞中首次应用该策略，定点缺失突变了免疫球蛋白重链基因中的JH～Eμ顺序，并通过胚胎细胞嵌合体技术，得到该基因突变型小鼠。Cre-loxP重组系统除介导特异性缺失功能外，还具有介导定点整合的重要特性。已有研究证实，Cre-loxP重组系统可介导外源DNA向病毒载体中的定点整合〔25〕。应用Cre-loxP重组系统可以精确预定DNA缺失的片段长度，并可使之在很大范围内变化。在表达Cre重组酶的胚胎细胞中，几乎所有的loxP位点间的顺序被切除〔26〕。另外，与其它策略相比，转化的ES细胞经历的筛选时间较短，对ES细胞的胚胎重建能力影响较小〔20〕。基于上述特点，这一策略在研究基因顺式调控元件方面具有重要意义。2.3 哺乳类细胞中的基因靶位操作 基因靶位操作技术应用于哺乳类细胞经历了两个时期。早期的研究着眼于外源标记基因的同源重组，最初的研究中，将两个具不同缺失突变的neo基因共转染细胞，两个不同缺限型neo 基因同源重组，形成一个野生型neo基因和一个双重突变的neo基因，并随机整合到细胞基因组中，产生G418抗性细胞克隆。进一步的研究发现，使其中的一个转化载体线性化可大大提高G418抗性细胞克隆数目，这和在酵母基因靶位操作中看到的情形一致。这些研究结果显示，外源DNA在哺乳类细胞中能进行高效率的同源重组〔16〕。为进一步研究外源DNA顺序与染色体DNA顺序间的同源重组效率，将缺陷型标记基因以随机重组的方式整合到细胞染色体基因组中，如neo和HSV-tk等基因，建立基因组中可选择的标记基因靶位。在上述转化细胞中导入该标记基因的另一类型突变顺序，在相应的选择培养基中筛选重组子克隆。研究证实，导入细胞内的外源DNA顺序可与内源靶位DNA顺序进行同源重组，但同源重组率极低，大约在10-5～10-6之间。 另一类模型研究则以哺乳类细胞内源可选择标记基因作为定点突变的靶位。Hprt基因是一个理想的内源标记基因，Hprt基因与X染色体连锁，在雄性胚胎来源的ES细胞中以单拷贝存在，因此，只需要单一拷贝基因突变即可获得可选择性表型。Hprt+细胞和Hprt-细胞可分别在HAT培养基和6-TG培养基中筛选。Doetschman等应用基因靶位操作技术，成功地修复了小鼠Hprt- 突变型ES细胞，在HAT培养基中获得Hprt+细胞，并证实野生型突变由基因同源重组所至，同源重组效率为1.4×10-6[〔30〕。由于Hprt基因突变表型可以直接筛选，该基因被用于多种基因靶位操作模型研究〔31, 32〕。 哺乳类细胞基因靶位操作面临两大困难〔33〕。一方面，哺乳类细胞基因组庞大(109bp以上)，比酵母复杂得多，加之哺乳类细胞培养技术上的限制，哺乳类细胞中基因靶位操作成功率极低；另一方面，哺乳类细胞似乎有极强的随机整合外来DNA片段的能力，同源重组与非同源重组的比率大约为10-3～10-4 〔29, 30, 31, 34, 35〕。因此，建立高效可行的基因靶位操作转化子筛选系统，是哺乳类细胞基因靶位操作的重要前提和技术保障。作者单位：中国科学院水生生物研究所,武汉430072参考文献 1 Sedivy J M, Joyner A L.Homologous recombination: molecular mechanisms. in gene targeting. Oxford University Press, 1992, 23～51 2 Naldman A S. Molecular mechanisms of homologous recombination, in gene targeting. Manuel A, Ed., CRC Press, 1995, 45～64 3 Potter H, Dressler D. On the mechanism of genetic recombination: electron microscopic observation intermediates. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, 73: 3000～3004 4 Meselson M S, Radding C M. A general model of genetic recombination. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, 72: 358～361 5 Szostak J W, Orr-weaver T L, Rothstein R Jet al.The double-strand break-repair model for recombination. Cell, 1983, 33: 25～35 6 Lin F-L, Sperle K, Sternberg N. Model for homologous recombination during transfer of DNA into mouse L cells: role for DNA ends in the recombination process. Mol. Cell. Biol., 1984, 4: 1020～1034 7 Rao B J, Duter C M. Stable three-stranded DNA model by RecA protein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88: 2948～2988 8 Stasiak A. Three-stranded DNA structure: is this the secret of DNA homologous recombination? Mol. Microbio., 1992, 6: 3267～3276 9 Stuhlmann H, Berg P. Homologous recombination of copackaged retrovirius RNAs during reverse transcription. J. Virol., 1992, 66: 2378～2388 10 Liao C L, Lai M M. RNA recombination in a coronavirus: recombination between viral genomic RNA and transfected RNA fragments. J. Virol., 1992, 66: 6117～6124 11 Edwards M C, Petty I T, Jackson A O. RNA recombination in the genome of barley stripe mosaic virus. Virology, 1992, 189: 389～392 12 Derr L K, Strathern J N, Garfinkel D J. RNA-mediated recombination inS. cerevisae.Cell, 1991, 67: 355～364 13 Botstein D, Fink G L. Yeast: an experimental organism for modern biology. Science, 1988, 240: 1439～1443 14 Hasty P, Rivera-perez J, Bradley A. The role and fate of DNA ends for homologous recombination in embryonic stem cells. Mol. Cell. Biol., 1992, 12: 2464～2474 15 Deng C, Capecchi M R. Reexamination of gene targeting frequency as a function of the extent of homology between the targeting vector and the targeting locus. Mol. Cell. Biol., 1992, 12: 3365～3371 16 Sedivy J M, Joyner A L. Gene targeting, in gene targeting. Oxford University Press, 1992,77～122 17 Hasty P, Ramirez-Solis R, Krumlauf Ret al.Introduction of subtle mutation into the Hox-2.6 locus in embryonic stem cells. Nature, 1991, 350: 243～246 18 Valancius V, Smithies O. Testing an "in-out" targeting procedure for making subtle genomic modifications in mouse embryonic stem cells. Mol. Cell. Biol., 1991, 11: 1402～1408 19 Askew G R, Doetschman T, Lingrel J B. Site-directed point mutations in embryonic stem cells: a gene-targeting tag-and-exchange strategy. Mol. Cell. Biol., 1993, 13: 4115～4124 20 Gu H, Zou Y R, Rajewsky K. Independent control of immunoglobulin switch recombination at individual switch regions evidence through Cre-loxP-mediated gene targeting. Cell, 1993, 73: 1155～1164 21 Abremski K, Hoess R, Sternberg N. Studies on the properties of P1 site-specific recombination: evidence for topologically unlinked products following recombination. Cell, 1983, 32: 1301～1311 22 Sauer B, Henderson N. Site-specific DNA recombination in mammalian cells by the Cre recombinase of bacteriophage P1. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85: 5166～5170 23 Lakso M, Sauer B, Mosiugeset al.Targeted oncogene activiation by site-specific recombination intransonic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89: 6232～6236 24 Orban P C, Chui D, Marth J D. Tissue- and site-specific DNA recombination in transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89: 6861～6865 25 Sauer B, Whealy M, Robbins Aet al.Site-specific insertion of DNA into a pseudorabies virus vector. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84: 9108～9112 26 Lakso M, Pichel J G, Gorman J Ret al.Efficientin vivomanipulation of mouse genomic sequences at the zygote stage. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93: 5860～5868 27 Thomas K R, Capecchi M R. Introduction of homologous DNA into mammalian cells induces mutations in the cognate gene. Nature, 1986, 163: 34～38 28 Song K Y, Schwartz F, Maeda N,et al.Accurate modification of a chromosomal plasmid by homologous recombination in human cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84: 6820～6824 29 Lin F-L, Sperle K, Sternberg N. Recombination in mouse L cells between DNA introduced into cells and homologous chromosomal sequences. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82: 1391～1395 30 Doetschman T, Gregg R G, Maeda Net al.Targeted correction of a mutant Hprt gene in mouse embryonic stem cells. Nature, 1987, 330: 576～578 31 Thomas K R, Capecchi M R. Site-directed mutagenesis by gene targeting in mouse embryonic stem cells. Cell, 1987, 51: 503～512 32 Reid,L.H, Gregg,R.G, Smithies,Oet al.Regulatory elements in the introns of the human Hprt gene are necessary for its expression in embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 87: 4299～4303 33 Bertling W M, Gene targeting, in gene targeting. Manual, A. ,Ed. CRC Press, 1995, 1～44 34 Smithise O, Gregg R G, Boggs S Set al.Insertion of DNA sequences into the human chromosomal β-globin locus by homologous recombination. Nature, 1985, 317: 230～234 35 Thomas K R, Folger K R, Capecchi M R. High frequency targeting of genes to specific sites in the mammalian genome. Cell, 1986, 44: 419～428

The negative aspects are also apparent.消极方面也很明显。重点词汇解释：1、negativeadj. 负的；消极的；否定的；阴性的n. 否定；负数；底片vt. 否定；拒绝2、aspectn. 方面；方向；形势；外貌3、apparentadj. 显然的；表面上的扩展资料：aspect的用法：aspect表示事物等的方面时，专指由意外情况或特殊原因造成的表面变化。aspect 表示外貌；外表时，多用于文学作品中。用于人时指某人所特有的外貌。用于（事）物时指某（事）物给人造成的特殊印象。暗示人或物的外貌，外观由于观察者角度或看法的改变而产生了剧变。aspect表示朝向；方位时，一般指窗户或建筑物的正立面所朝的方向。

大概是负面影响也很明显

It can not only broaden your horizon but also make you confident.confidence是名词，让某人怎么样，怎么样是宾补用形容词如果一定要用名词的话，前面的make换成：strengthen另外，没有主语，broaden 和 make 这两个动词都是受制于can（即能拓宽、能让你），因此将can提前到not only 之前，这样他们就能share这个can了

歌曲名:Hosanna歌手:Brooke Fraser&Hillsong UNITED专辑:Iworship ConnectHosanna - Starfield - I Will GoImported by Kelvin ChuI see the king of gloryComing on the clouds with fireThe whole earth shakesThe whole earth shakesYeeeahI see his love and mercyWashing over all our sinThe people singThe people singHosannaHosannaHosanna in the highestHosannaHosannaHosanna in the highestI see a generationRising up to take their placeWith selfless faithWith selfless faithI see a near revivalStirring as we pray and seekWe"re on our kneesWe"re on our kneesHosannaHosannaHosanna in the highestHosannaHosannaHosanna in the highestHeal my heart and make it cleanOpen up my eyes to the things unseenShow me how to love like you have loved meHosannaHosannaHosanna in the highestHosannaHosannaHosanna in the highestHosannaHosannaHosanna in the highestHosannaHosannaHosanna in the highestHosanna in the highesthttp://music.baidu.com/song/8000378

With life just begun, my sleeping new sonHas eyes that roll back in his headThey flutter and dart, he slows down his heartAnd pictures a world past his bedIts hard to believeAs I watch you breatheYour mind drifts and weavesWhen you dream,What do you dream about? When you dream,What do you dream about? Do you dream aboutMusic or mathematicsOr planets too far for the eye? Do you dream aboutJesus or quantum mechanicsOr angels who sing lullabies? His fontanelle pulses with lives that hes livedWith memories hell learn to ignoreAnd when it is closed, he already knowsHes forgotten all he knew beforeBut when sleep sets inHistory beginsBut the future will winWhen you dream,What do you dream about? When you dream,What do you dream about? Are they colour or black and white,Yiddish or englishOr languages not yet conceived? Are they silent or boisterous? Do you hear noises justLoud enough to be perceived? Do you hear del shannons runaway playingOn transistor radio waves? With so little experience,Your mind not yet cognizantAre you wise beyond your few days? When you dream,What do you dream about? When you dream,What do you dream about?

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【翻译】The bug could also be a burglar alarm ,from which comes the expression to bug, that is, "to install an alarm."那个漏洞/窃听器可能也是防盗报警器，从这个防盗报警器发出命令去窃听，也就是“安装警报器”。

你也是一个讨人喜欢的人。。。

原文]gelsomino…azzurro[译文]gelsomino…azzurro这是个意大利语言有没有洗衣机夜不知道希望能帮到你谢谢！