基因

核糖体? 翻译都是在核糖体中进行的 也就是在这时候才会在合成时候发生基因突变...应该是...

基因工程育种则是一种利用现代生物技术进行的目的性更强的育种研究，比如BT抗虫棉，就是将Bt基因转入棉花中，进而筛选培育出能够抵抗棉铃虫侵害的棉花品种。太空育种主要是利用太空的环境条件如各种射线等照射种子、幼苗等使其发生基因突变，然后根据突变造成的相应表型变化进行选择利用，由于突变是随机的，因此突变造成的性状变化也是多种多样的，只有通过大量的选择才能获得有利的性状进而用于育种研究。

【答案】A【答案解析】试题分析：转基因抗虫棉是将苏云金芽孢杆菌的毒蛋白基因转移到棉花的体细胞内，从而获得具有抗虫性状的转基因抗虫棉，属于基因工程的应用范畴。三倍体无籽西瓜是利用染色体变异的原理进行的多倍体育种；青霉素高产菌株是利用基因突变的原理进行的诱变育种；杂交培育高产水稻是利用基因重组的原理进行的杂交育种。考点：育种方法点评：本题考查了学生对不同育种方法的归纳、记忆，属于对识记层次的考查。

现在看来应该安全

cccccc

A、肺炎双球菌转化是S型细菌的DNA分子整合到R型细菌体内，发生了基因重组，A错误；B、转基因技术得到抗虫棉是利用基因重组的原理，将外源基因转入植物细胞中，发生了基因重组，B错误；C、减数分裂过程中，同源染色体分离的同时，非同源染色体自由组合，所以发生了基因重组，C错误；D、诱变育种得到高产青霉菌利用的原理是基因突变，不会发生基因重组，D正确．故选：D．

A、图中抗虫棉的培育采用了基因工程技术，而基因工程的原理是基因重组，A正确；B、基因工程中用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶，此外目的基因的复制需要解旋酶和DNA聚合酶，目的基因表达过程需要解旋酶、RNA聚合酶等，但培育抗虫棉的过程不需要纤维素酶，B错误；C、培育成功的该植株细胞中含有一个携带目的基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子（Aa），根据基因分离定律，在该转基因自交产生F1代中，仍具有抗虫特性的植株（A_）占总数的34，C正确；D、氨基酸是由mRNA上相邻的三个碱基决定的，所以图中合成的多肽，其前三个氨基酸为甲硫氨酸（AUG）丙氨酸（GCU）丝氨酸（UCU），D正确．故选：B．

科学家把一种生物的某个基因转入到另一种生物的遗传物质中，培育出的生物就有可能表现出转入基因所控制的性状，使得这种转入基因的生物发生了能遗传的编译，这一技术被称为转基因技术．因此我国科学家已经培育出一种抗虫棉花，它含有苏云金芽孢杆菌中控制合成毒素的基因，科学家们采用的技术是转基因技术． 故选：B．

通过转基因技术培育出的抗虫棉是新物种运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有优良遗传形状的物质．利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种．也可以利用其它生物体培育出人类所需要的生物制品，用于医药、食品等方面．经转基因技术修饰的动植物在媒体上常被称为“转基因动植物”．科学家成功地培育出“抗虫棉”新品种，他在生产过程中会产生一种特殊的蛋白质，杀死害虫．减少了农药对环境的污染．综上所述A、B、D选项不符合题意，只有C选项符合题意．故选：C

A、耐寒的小黑麦是多倍体育种，原理是染色体变异，A错误； B、抗虫棉是基因工程育种，目的基因是苏云金杆菌的抗虫基因，B正确； C、太空椒是诱变育种，原理是基因突变，C错误； D、试管牛是胚胎工程育种，涉及到体外受精和早期胚胎发育、胚胎移植，D错误． 故选：B．

A、我国科学工作者培育的转基因抗虫棉的抗虫基因来源于苏云金芽孢杆菌中的毒蛋白基因，该基因的表达产物毒蛋白能够抗虫，故A正确；B、培养转基因抗虫棉的抗虫基因不是棉铃虫变异形成的致死基因，故B错误；七、培养转基因抗虫棉的抗虫基因不是来自线虫，而是来自苏云金芽孢杆菌，故七错误；小、培养转基因抗虫棉的抗虫基因不是普通棉的突变基因，故小错误．故选A．

基因操作的工具 用什么样的工具才能准确无误地对基因进行剪切和拼接呢？这是从事基因工程研究的科学家首先遇到的难题。例如，通过基因工程培育抗虫棉时，就需要将抗虫的基因从某种生物(如苏云金芽孢杆菌)中提取出来，“放入”棉的细胞中，与棉细胞中的DNA结合起来，在棉中发挥作用。这里遇到的难题主要有两个：首先是苏云金芽孢杆菌的一个DNA分子有许多基因，怎样从它的DNA分子的长链上辨别出所需要的基因，并且把它切割下来。其次是如何将切割下来的抗虫基因与棉的DNA“缝合”起来。为了突破这些难关，科学家进行了许多试验，最后他们发现了一种“基因剪刀”和“基因针线”，可以用来完成基因的剪切和拼接。 基因的剪刀——限制性内切酶 基因的剪刀指的是DNA限制性内切酶(以下简称限制酶)。限制酶主要存在于微生物中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子(如图)。例如，从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。目前已经发现了二百多种限制酶，它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，就能被某种限制酶切割下来。 基因的针线——DNA连接酶 从图中可以看出，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫做黏性末端。可以设想，如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，然后让两者的黏性末端黏合起来，似乎就可以合成重组的DNA分子了。但是，实际上仅仅这样做是不够的，互补的碱基处虽然连接起来，但是这种连接只相当于把断成两截的梯子中间的踏板连接起来，两边的扶手的断口处还没有连接起来(如图)。要把扶手的断口处连接起来，也就是把两条DNA末端之间的缝隙“缝合”起来，还要靠另一种极其重要的工具——DNA连接酶。 基因的运输工具——运载体 要将一个外源基因，如上面所说的抗虫基因，送入受体细胞，如棉细胞，还需要有运输工具，这就是运载体。作为运载体的物质必须具备以下条件：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选。目前，符合上述条件并经常使用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等。 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌染色体DNA的百分之一(如图)。质粒能够“友好”地“借居”在宿主细胞中。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。但是，质粒的复制则只能在宿主细胞内完成。 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等细菌中都有质粒。因为土壤农杆菌很容易感染植物细胞，所以科学家培育转基因植物时，常常用土壤农杆菌中的质粒做运载体。

首先将抗虫基因导入棉花植株，得到转基因的抗虫棉花催苗移栽，，，，，，

工具（限制酶，DNA连接酶，载体） 过程:用限制酶将抗虫基因和载体切割，使其形成相同的粘性末端，用DNA连接酶将抗虫基因和载体结合，然后用农杆菌转化法导入植物细胞，再经过检测与鉴定，得到抗虫棉，然后利用植物组织培养培养出抗虫棉植株

没错 早就有了

1、在棉花的植株上提取叶肉细胞2、在苏云金杆菌上提取相应基因3、将提取基因导入植物叶肉细胞的DNA（利用基因重组技术）4、通过培养既培养出愈伤组织，进行再分化5、最后通过组织培养技术，得到含抗虫基因的棉花植株应该是这些吧，学的时间太长了，都快忘记了，请见谅。

目前只有棉花和木瓜。我国“抗虫棉”研究在“七五”期间开始进行，“八五”期间，在“863”计划资助下，人工合成的CryIA(b)和CryIA(c)杀虫基因导入我国棉花主栽品种获得成功，成为继美国之后，第二个拥有自主研制抗虫棉的国家。“九五”开始，“抗虫棉”的研究又被国家“863”计划立为重大项目，进一步开展单价基因、双价基因及多价基因抗虫棉的研究，同时还将根据现有单价抗虫棉可能存在的棉铃虫产生抗性的问题，在生产中使用的持久性问题，环境释放的安全性问题，遗传分离与稳定性问题等作深入的研究。总之，培育持久性双价抗虫棉或既抗鳞翅目又抗同翅目害虫的多价抗虫棉，使之产业化，应用于棉花生产，以解决棉花害虫给棉花生产带来的巨大损失，减少化学农药的使用量，保护环境和生态平衡。国产转基因抗虫棉[1] 已有多个品种[2] 通过审定。1998年5月和7月，GK95－1和GK-1分别通过品种审定，被定名为“晋棉26号”和“国抗1号”。1999年1月，GK－12也在山东省通过品种审定，被定名为“国抗12号”。2000年11月，GK22通过江苏省农作物品种审定委员会审定，定名为“国抗22号”。2001年年初，GK19通过新疆自治区品种审定委员会审定。2001年3月，SGK321通过河北省品种审定委员会审定，并于2002年1月27日通过了国家抗虫棉品种审定，成为目前国内惟一通过品种审定的双价抗虫棉品种，也是世界上第一个通过品种审定的双价转基因抗虫棉新品种。在此之前，SGK321已经通过了农业转基因生物安全性评价，并获准在晋、冀、鲁、豫、皖进行了商品化生产。而木瓜现在市面上的基本都是转基因的了。

最后一问是 100 %

【答案】A【答案解析】试题分析：我国科学工作者培育的转基因抗虫棉的抗虫基因来源于苏云金芽孢杆菌中的毒蛋白基因，该基因的表达产物毒蛋白能够抗虫，故选A。考点：转基因抗虫棉点评：本题考查了转基因抗虫棉目的基因的来源，属于对识记层次的考查。

A、单倍体育种是利用花药离体培养技术先培养出单倍体，后秋水仙素或低温处理为多倍体（纯合体），显著缩短育种年限，A错误；B、转基因技术是将目的基因移植到受体细胞，利用相关技术培养出具有目的性状的个体，B正确；B、多倍体育种是利用秋水仙素或低温处理植株，使之成为染色体组加倍个体，其各种器官较大，营养物质含量高，C错误；D、杂交育种利用基因重组，获得具有优良性状个体，D错误．故选：B．

A、基因工程中核心步骤是构建基因表达载体，即将抗虫基因和运载体构建基因表达载体，A正确；B、目的基因在抗虫棉中与棉花的核DNA分子结合起来才遵循基因的分离定律，B错误；C、图中Ⅰ为质粒，从大肠杆菌中获取后需要经过加工才能作为运载体使用，C错误；D、删除培育成功的抗虫棉体内的四环素抗性基因不会影响抗虫基因的表达，但会影响目的基因的检测，D错误．故选：A．

（1）生生物体的形态特征、生理特征和行为方式叫做性状，物的性状由基因控制；例如“抗虫棉能产生杀死害虫的毒素”这一性状是由导入的抗虫基因控制的．（2）当细胞内控制某种性状的一对基因都是显性或一个是显性、一个是隐性时，生物体表现出显性基因控制的性状；当控制某种性状的基因都是隐性时，隐性基因控制的性状才会表现出来．已知不抗毒素基因用B表示，抗毒素基因用b表示，则棉田害虫中不抗毒素害虫的基因组成是BB或Bb，抗毒素害虫的基因组成是bb．（3）不抗毒素害虫的基因组成是BB或Bb，抗毒素害虫的基因组成是bb，则它们杂交产生的后代的基因组成是Bb或bb．（4）生物的变异是普遍存在的，同一地区若长期种植抗虫棉，若干年后，抗虫棉的抗虫效果将减弱，因为害虫会产生抵抗该毒素的变异，并将这种变异遗传给下一代，并逐代积累下去．故答案为：（1）抗虫基因（2）BB或Bb；bb（3）Bb或bb（4）减弱；害虫会产生抵抗该毒素的变异并逐代积累下去

Ⅰ、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导人受体细胞，④目的基因的检测与鉴定．（1）目的基因导入植物细胞常用的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法；目的基因导入微生物需要用Ca2+处理，使其成为感受态细胞；（2）检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因用DNA分子杂交技术，检测目的基因是否转录出相应的mRNA用分子杂交技术，DNA分子杂交技术可用于可用于疾病诊断、监测环境污染、身份鉴定等．Ⅱ、（1）由图可知，图1中有植物组织培养过程和植物体细胞杂交过程．（2）诱导原生质体融合化学试剂用聚乙二醇，物理方法用．（3）植物体细胞杂交的优点是克服了不同生物远缘杂交不亲和的障碍．Ⅲ、（1）由图可知，图中涉及核移植、胚胎移植等技术．（2）胚胎干细胞是由早期胚胎（桑椹胚或囊胚的内细胞团）或原始性腺中分离出来的一类细胞．（3）通过ES细胞的体外诱导分化，培育出人造组织器官，解决了临床上存在的供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题．本题答案：Ⅰ．基因表达载体的构建（1）农杆菌转化法??????显微注射法?????Ca2+?????感受态细胞（2）DNA分子杂交技术、分子杂交技术???DNA分子杂交技术还可用于疾病诊断、监测环境污染、身份鉴定等Ⅱ．（1）植物组织培养????植物体细胞杂交（2）聚乙二醇（PEG）????（3）克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍Ⅲ．（1）体细胞核移植技术，胚胎移植技术??????（2）桑椹胚????内细胞团（3）避免器官移植后发生免疫排斥的问题

要注意光照，及时疏松土壤，温度不要太高，要及时的清理积水，注意田间管理和水肥管理，要及时除草。

A、转基因抗虫棉的培育过程：①在棉花的植株上提取叶肉细胞②在苏云金杆菌上提取相应基因③将提取基因导入植物叶肉细胞的DNA（利用基因重组技术）④通过培养既培养出愈伤组织，进行再分化⑤最后通过组织培养技术，得到含抗虫基因的棉花植株，A正确； B、植物组织培养过程依据的原理是植物细胞具有全能性，B正确； C、原生质体融合和动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，属于细胞膜的结构特点，C错误； D、植物愈伤组织的形成是经过脱分化产生，与细胞有丝分裂有关，杂交瘤细胞的培养是细胞本身增多的过程，也与细胞有丝分裂有关，D正确． 故选：C．

转基因的4个步骤，1，获取目的基因抗虫棉的毒蛋白基因是来自与“苏云金牙胞杆菌”的Bt毒蛋白所以首先要将该基因提取出来提取的方法...【简述...就简单讲噢】人工合成，或从自然界获取2，基因表达载体的构建用同一种限制性核酸内切酶处理Bt毒蛋白的基因和质粒（也可以是其他运载体，选修三，自己看吧...有3~4种）载体上除了要有“目的基因”，还要有“标记基因”“启动子”“终止子”3，导入受体细胞（当然就是棉花啦）导入方法，农杆菌转化法（棉花是双子叶植物，用这个最方便）【导入分动物，细菌，单子叶植物，裸子植物和双子叶植物】4，目的基因的表达与检测将那个植物细胞进行组织培养（选修三细胞工程有，或选修1菊花组织培养那一课也有）等植物长到一定年龄...（因为是抗虫棉，直接把棉铃虫放上去，过几天看看虫死没就可以了）

1、在棉花的植株上提取叶肉细胞2、在苏云金杆菌上提取相应基因3、将提取基因导入植物叶肉细胞的DNA（利用基因重组技术）4、通过培养既培养出愈伤组织，进行再分化5、最后通过组织培养技术，得到含抗虫基因的棉花植株应该是这些吧，学的时间太长了，都快忘记了，请见谅。

抗虫棉在中国是用花粉管通道法培育出来的在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。

转基因单价抗虫棉原理是将一种细菌来源的、可专门破坏棉铃虫消化道的Bt杀虫蛋白基因经过改造，转到了棉花中，使棉花细胞中存在这种杀虫蛋白质，专门破坏棉铃虫等鳞翅目害虫的消化系统，导致其死亡，而对人畜无害的一种抗虫棉花。转基因双价抗虫棉原理是将杀虫机理不同的两种抗虫基因（Bt杀虫基因和修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因）同时导入棉花，由于这两种杀虫蛋白功能互补且协同增效，使双价抗虫棉不但可以有效延缓棉铃虫对单价抗虫棉产生抗性，还可增强抗虫性。扩展资料：转基因抗虫棉生育特点：1、营养生长势稍弱棉花植株体内的外源抗虫基因在其表达过程中，对自身的内源激素的含量与分布产生了较大的影响，导致抗虫棉生长点赤霉素含量下降，分布减少，因此在同等条件下抗虫棉的营养生长势不及常规棉。在生产上表现为植株略矮、株型较紧凑、叶片稍小等。2、对某些气候因素较为敏感近几年的研究表明，抗虫棉特别是常规抗虫棉（非杂交棉）对高温较为敏感，在高温条件下花粉败育或授精不良，导致蕾铃大量脱落或棉铃较小、畸形等；部分抗虫棉品种则对水分较为敏感，抗湿性较差，在生产上表现为根系发育不良，后期易早衰。3、对钾营养需求较高抗虫棉对钾的需求大于常规棉，在同等条件下比常规棉高20%左右。因此，如钾肥投入不足，造成棉花发育不良、蕾铃脱落增加、铃重和品质下降，缺钾严重的导致棉花脱叶早衰。参考资料来源：百度百科——抗虫棉

你好！因为有了抗原刺激产生了抗体。所以，用相应抗原去刺激细胞并检测抗原的数量，如果翻译出了蛋白质（也就是抗体）则在某段时间了抗原会显著减少，反之没翻译出如有疑问，请追问。

这个属于分子水平的检测，利用抗原抗体杂交原理来检验产物的有无。例如，抗虫棉体内的抗虫基因产生了毒蛋白，利用已有的棉铃虫的毒蛋白的抗体来检验抗虫棉体内是否产生了毒蛋白，如果产生了，则，抗体遇到抗原是会发生凝集反应明白了没

建议使用CNKI,维普，读秀，SCI等PubMed中文使用手册（一）PubMed简介：PubMed是美国家医学图书馆(NLM)下属的国家生物技术信息中心(NCBI)开发的、基于WWW的查询系统。PubMed是NCBI Entrez 数个数据库查询系统下中的一个。PubMed 是提供免费的MEDLINE、PREMEDLINE与其他相关数据库接入服务，MEDLINE是一个拥有1亿字条的巨大数据库。PubMed也包含着与提供期刊全文的出版商网址的链接，来自第三方的生物 学数据，序列中心的数据等等。PubMed提供与综合分子生物学数据库的链接与接入服务，这个数据库归NCBI所有，其内容包括：DNA与蛋白质序列，基因图数据、3D蛋白构象，人类孟德尔遗传在线。（二）页面介绍:（更新很快，但其内容变化一般不大）在你的浏览器中的URL地址框中健入http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/并单击回车键后，你将进入Pubmed的主页面。如图：主页面左侧框的介绍（注：Cubby和tutorial为最新加入的）MeSh Browser你可以用它来分层流览MesH表Single Citation Matcher通过填表的形式输入期刊的信息可以找到某单篇的文献或整个期刊的内容。Batch Citution Matcher用一种特定的形式输入期刊的信息一次搜索多篇文献。Clinical Queries这一部分为临床医生设置，通过过滤的方式将搜索的文献固定在4个范围：治疗、诊断、病原学与预后。Old PubMed (使用以前的PubMed查询方式)关于每一项的具体使用方法, 后面将会有详细介绍。3) Related ResourcesOrder Documents提供一种收费性质服务，可以使用户在当地得到文献的全文拷贝（费用与发送方式各不相同）。Grateful Med是对另一个NLM基于网络的查询系统的链接。Grateful Med也提供MEDLINE的接入，并且还有一些其他的数据库如AIDSLINE、HISTLINE等等。Consumer Health提供与MEDLINEplus的链接，MEDLINEplus是与消费者健康信息相关的国家医学图书馆的网络节点。Clinical Alerts此部分的目的是加快NIH资助的临床研究成果的发布。2. 主页面底部的介绍Diclaimer 在这里可以得到版权的相关信息，不承诺责任与担保的声明，与NLM下载的相关政策。Write to the Help Desk发e-mail给NLM消费者服务部。NCBI|NLM|NIH这里是对创建和维护PubMed的机构网页链接。下面将举例说明查询的主体部分，也就是页面上部的使用方法。假如我们这次的工作是查找与gallstone、pain有关的文献。在对话框中输入查询词。比如我们这次输入的是gallstone pain，然后单击“go”按钮或按回车键，PubMed将会自动开始检索，并将检索到的相关条目显示在屏幕上。你可以随时向查询框输入查询词，点击“go”按钮开始新的查询。“clear”按钮可以帮你清除查询框中的内容，然后开始一个新的查询。在查询框前search提示后有一个下拉式菜单，你可以在这里选择其他的信息资源或NCBI的数据库。Structure 搜索分子结构数据库(MMDB)The Molecular Modeling Database，这个数据库保存的是由X线晶体成像、NMR分光光度法建立的三维分子结构。Genome 提供所有基因与染色体纪录与图片的查询服务，这个库中数以百万的基因序列是由庞大的基因排序工作得来的。PopSet 这个数据库中的内容是由相关种族、人类发展、突变研究得来的人类进化与人种差异的结果。下面我们将详细介绍查询结果屏幕。显示选项（Display Option）在Display后面有一个下拉式菜单，在这里可以选择各种显示选项。简要格式（Summary）在缺省设置下PubMed采用这种显示格式，他所显示的内容包括以下几项：作者：纪录中的所有作者都奖杯显示出来。相关：列出相关内容，如文章、蛋白质、核苷酸等（列出的文章不以摘要格式显示）。文章题目：英语以外的语种的题目将被翻译成英语，并且加上括号。来源：提供文献所在期刊名的缩写，出版时间，卷，页数，也包括语种（针对非英语文献），出版类型。没有摘要的文献将显示“No abstract avilaible”标识数字：提供PubMed标示（PMID）与MEDLINE唯一标识（UI）。简报格式（ Brief）显示的条目内容包括作者姓名、文献名的前10个字母、PubMed唯一标识。摘要格式（Abstract）将会显示以下几项内容：文献题目、作者、第一作者单位（地址）、期刊来源（期刊名简写、出版日期、卷、页数）、如果必要加上标注、出版类型、非英语文章加上标注、摘要、备注、PubMed与MEDLINE的唯一标识。图例格式（Legend）：显示文献出处、名称、作者、第一作者单位（地址）、摘要、PubMed与MEDLINE的唯一标识。引证格式（Citation）提供如下信息：文献出处、文献题目、作者、第一作者单位（地址）、如果必要加上标注、出版类型、摘要、红体显示题目中的错误字串、备注、MeSH词、人名作为主题、（如果存在）化学物质、（如果存在）巨大数字、PubMed与MEDLINE的唯一标识。MEDLINE格式（MEDLINE） 用两字符的形式显示MEDLINE纪录中所有的内容，使用这种格式可以把记录下载到管理书目的软件程序。查询概要（Retrieval Summary）查询概要显示了查到所有条目的数量，以及需要多少页来显示，缺省情况下20条/页。Show后的下拉式菜单可以选择相应得每页显示的条目数。Page选择页数，PubMed根据你的选择而显示不同页的内容，所选中的页数以红色显示，单击〉〉或〈〈显示其他页码。详细内容（Details）单击Details按钮可以显示你正在进行的查询方案，包括查询词、MeSH表映射与PubMed词语索引的映射；错误信息，比如禁用词、截断警告、错误拼写等；在编辑框中可以编辑一个新的查询方案，然后重新提交；在这里还可以保存查询方案。你可以在Details的对话框中修改查询方案，然后点击“Search”按钮进行新的查询。Result下的数字是查询结果，并且可以链接到现今的查询结果。PubMed实际上是一个更大数据库PubRef的子集，PubMed的查询一般不包括PubRef中的条目，除非你在编辑框中将“AND notpubref”删除。在Details中保存一个查询方案：单击URL按钮，PubMed将返回到查询结果窗口，经过修改的查询方案将显示在对话框中，并且查询方案也被嵌入URL中，然后使用你的浏览器的书签功能将现在的URL保存成一个书签，保存后，可以编辑书签功能将此书签改为比较容易记忆的名字，使用方法与其他的书签相同。定期查找功能 如果你想每隔一段时间进行一次同样的查询，以找到最新的文献，可以这样作：第一步如保存查询方案，通过选择书签的方式重新运行查询方案，然后，在Limit中的Entrezdate下拉菜单将时间限定在搜索范围。加入剪切板（Add to clipboard）剪切板可以帮你保存察看你在一个或多个查询里所查到的内容；剪切板中最大的保存数目是500条；如果你连续在PubMed或其他Enterz数据库中不进行任何操作达1小时，剪切板中的内容将会消失。要将条目加入剪切板，先将所需要的条目前的复选框选中，然后单击“Add to clipboard”按钮，一旦你将一条内容加入剪切板，纪录数字的颜色将会改变。保存（Save）功能是保存查询到的条目。如须保存所有的查询结果，先在Display下的下拉菜单中选择所需显示格式，单级“Save”按钮。如果要保存特定的条目，现在条目前的复选框选中，点击“Save”按钮。最大的保存的数量是5000，如果你想保存超过这个书目的内容，PubMed将显示一条提示你修改查询的信息。文本（Text）使用文本功能可以将条目以纯文本的方式重新显示，把那些Web与HTML的内容去除，当看完纯文本的内容后，按浏览器的“Back”回到以前的Web页面。你可以使用此功能将PubMed侧框与按钮除掉，在用打印机打印。纯文本版本将会显示你所选中的条目的内容，如果没有选中任何条目，所有的条目内容都江北显示出来。定购（Order）通过一些中间商得到文献的全文。练习题：找出与Shingles、facial paralysis 有关的文献，用包括摘要与MeSH词的方式显示。找出与hypertension nosebleed有关的文献，在一页中显示所有查到的结果。参考答案（可能会有不同）特征栏特征栏可以选择一些其他的功能Limit 单击特征栏上的Limit显示Limit页，这里你可以设定：将搜索范围设定在一个特定的域。将搜索范围设定在特定的年龄组、性别组、人类或动物学范围。也可以将搜索限定在某一语种出版的或某一特定的文章类型（如综述）。设定只搜索包含摘要的文献。设定搜索Entrez数据库或Publication数据库。设定搜索范围为PubMed数据库的某一子数据库（如Abridged Index Medicus 或AIDS相关的条目）。下面将逐一进行介绍：Field Selection（域选择）你可以把搜索词限定在一个特定的域，缺省设置是所有的域；打开下拉菜单选择你所需的域名。Only items with abstract（只搜索包含摘要的条目）如果将这个复选框选中，将只搜索包含摘要的文献。Publication Type（出版类型）其后的下拉菜单是常用的出版类型列表。Language（语言）将近40种语言列在此菜单里，都是在搜索时经常用到的。Age（年龄）选择人类学研究的年龄组。Gender（性别）在此下拉菜单选择人类学研究的性别组。Human or Animal（人类或动物）在此下拉菜单选择研究对象。Subset（子集）你可以将自己的搜索限制在下列4个组中的一个。条目处理阶段Publisher：出版商发送来的原样PreMEDLINE：正要往MEDLINE中加入的纪录MEDLINE：所有MeSH表索引的纪录主题词过滤AIDS：NLM‘Saids数据库期刊组AIM：Abridged Index Medicus（120种英文期刊）Dental：牙医学期看的子集Nursing：护理学期刊的子集PubRef：这是一项将搜索词范围扩大的服务，选择此项将会搜索更广范围的科学期刊（如物理、天文等）而不是限定在PubMed中，这个选项也可以帮用户搜索到出版商网址上的文献全文。Date(日期) PubMed 中包括自1966年来出版的文献，新条目周二到周四加入。在PubMed中有两种日期表示方式：Entrez日期是条目最初被加入PubMed的日期，Publication（出版）日期是文献出版时的日期。PubMed已Entrez日期顺序来显示你的查询结果的，最新被加入的纪录第一个被显示出来。Limiting by Date（日期限定）使用Entrez下拉式菜单，可以把你的搜索范围设定在30天到10年，出版日期下拉菜单有Publication Date 与Entrez Date两项，以确定使用那种日期记法来设定搜索范围。使用From、To框输入一个时间段；以YYYY/MM/DD的格式输入日期（月和日可不填）Limit Indicator Limit旁边的复选框如果处于选中状态则表示限定条件生效，如果开始搜索，生效的限定条件将会以黄色框Display按钮的上面。注意再进行其他搜索前将Limit前的复选框去掉，以消除限定条件。Preview/Index（预览/索引）使用特征栏的Preview/Index可以做到：在显示条目之前显示所查到的文献数。随时通过增加查询单词来修改查询方案。在特定的搜索域中向方案里加入查询词。从Index中查看并选择词语来修改查询方案。在你修改查询时查看方案。下面将详细加以介绍：Preview(预览)使用此功能可以在显示条目之前显示所查到的文献数。在输入框中键入搜索词，然后单击Preview，PubMed返回的信息是条目的数量。通过增加一个或多个单词来修改查询方案。向查询框中加入另一个词语点击Preview，你可以继续向框中加入多个词语，点击Preview直到你希望得到的内容,当修改查询时可以看到搜索方案与查询结果的数量。Preview显示的是历史记录中最近的三条记录，使用History可以看到最近100次的查询结果。History中的Clear History按纽也可以清除Preview/Index中的内容。向下滚动Preview/Index找到“Add to Query or View Index”部分，使用下拉菜单确定一个搜索域，向文本框中加入词语，单击Preview，向查询框中加入词语并且可以看到查询结果。现在我们向查询框中加入MeSH词Nurse，使用下拉菜单确定一个搜索域，向文本框中填加一个词，单击Preview，你可以一直这样加入单词，单击Preview，直到完成你的搜索方案。Preriew自动使用“AND”运算符来将单词合为一体，即要求同时查询包含两个词的文献。使用布尔运算符按纽。使用布尔运算符将你要查找的词语连接起来，OR代表的是要查找的文献包括第一个搜索词或第二个词，NOT为“否”，包括第一个搜索词而不包括第二个词的文献。每加入一个搜索词都要点击Preview来列出搜索结果的数量。查询举例让我们查找一下有关碳水化合物(Carbohydrate)或大豆(Soybeans)对骨质疏松症影响的文献。使用下拉菜单确定一个搜索域 ，向文本框中加入一个词语，单击AND按纽，我们可以预览结果或者接续向文本框中填加搜索词，我们想找到有关Soybeans的文献，继续往下作，使用下拉菜单选择一个搜索域，向文本框中加入Soybeans，单击Preview来查看搜索结果Index（索引）中选择搜索词使用索引按钮可以从特定域中选择以索引的单词，并把他们加入查询方案之中。Index（索引）中你可以查看某一个特定搜索域中词语列表。在这里也可以使用布尔运算符来建立一个查询方案。举例说明：我们在下拉菜单中选择MeSH Terms作为搜索域，键入搜索词Strikes，点击Index按钮，PubMed以字母序显示所选定搜索域中相关的词语，使用滚动条来上下移动列表。在单词右边的括号里显示的是包括此词语的文献的数量。使用Up、Down按钮按页上下翻动列表。对话框显示了搜索词与搜索域，Result显示了文献的数量。注意：Preview缺省是AND将查询词语连在一起的。你可以使用布尔运算符按自己的要求将他们结合起来，但你在使用布尔运算符将查询词语输入对话框以后，必须点击Preview才能看到查询结果。查询举例：将以Legilation and Jurispradence为副标题的Strikes Employs与以Satistics and numerical为副标题的Strikes Employs点击高亮显示，单击AND按钮将选择的查询词加入对话框，选择缺省的设置是以OR连接起来的。按住Ctrl键，可以在列表中连续选择多个查询词，当你所有需要的查询词都被高亮显示后，单击AND或OR将他们加入对话框，这时在PubMed的对话框中是这样的内容：“Strikes,employee/legislation and jurispredence” OR “Strikes,employee/statistics and numerical data””让我们使用Index再把这次搜索修改一下，我们想把搜索缩小到有关Nurse与已设内容范围，在输入框中键入Nurse后点击Index，在索引中选择Nurse并单击AND将其加入对话框中。点击Preview按钮查看查询结果的数量，对话框中显示的是搜索词、搜索域与布尔运算符。History（历史记录）历史记录中保存的是你所有的查询方案与查询结果，只有当你运行了一次查询之后，History中才有内容。History屏幕将会显示：你的查询方案、查询时间、查询到的文献数量。使用History（历史记录）你可以在查询方案中使用查询序数（the search Statement Number）,如#1、#2、#3等等。例子：#1 AND #2、#7 AND #14。如上个例子显示的，布尔运算符的字母必须大写。History的一些小知识：History内所能记录的最大查询数是100一旦查询数量超过100，PubMed会将最早的查询除去，加进最新的一次查询。如果两次查询内容相同，PubMed会将头一次的去除。注意：查询序数不能用在Detail中的保存到URL功能中，这是因为尽管查询方案被保存了，但你的History在你1小时没有动作后将会消失，这时你保存的方案中的查询序号也就会失效。点击 Clear History可以将History中的所有内容清除。Clipboard（剪切板）剪切板可以帮助你保存或查看在一个后多个查询中选择的条目，然后就可以打印、保存、订购剪切板中的内容了。将条目左边的复选框选中，单击”Add to clipboard”就可以将其加入剪切板中，一旦某条被加入，剪切板的记录号码将会改变颜色。剪切板使用的小知识如果你没有用复选框选择任何条目，而去点击Add to clipboard，PubMed将会向其中加入500个条目。剪切板中最大的储存数是500条。剪切板中的内容如果你一小时没有任何操作将会消失。使用剪切板 点击特征条上的Clipboard来观看剪切板中的内容，如果想删除剪切板中的某些项目，先将其左面的复选框选中，然后点击Remove from clipboard按钮；要想清空剪切板，不选任何条目，单击Remove from 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酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多，二是转化效率偏低。所谓假阳性就是：在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下，报告基因被激活。主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用，或者这种融合蛋白的激活作用被外来蛋白激活。另外AD融合靶蛋白如果有DNA的特异性结合，则也可单独激活报告基因的表达。因此，为排除假阳性就需要作严格的对照试验。应对诱饵和靶蛋白分别作单独激活报告基因的鉴定。目前几个公司推出的酵母双杂系统都采用了多个报告基因，且每个报告基因的上游调控区各不相同，这可减少大量的假阳性。另外，报告基因通常整合到染色体上，可以使基因表达水平稳定，消除了由于质粒拷贝数变化引起基因表达水平波动而造成的假阳性。即使根据严格的对照实验证明确实发生了蛋白间的相互作用，还应对以下方面进行分析：（1）这种相互作用是否会在细胞内自然发生，即这一对蛋白在细胞的正常生命活动中是否会在同一时间表达且定位在同一区域。（2）某些蛋白如是依赖于遍在蛋白的蛋白酶解途径的成员，它们具有普遍的蛋白间的相互作用的能力。（3）一些实际上没有任何相互作用的但有相同的模体（motif）如两个亲a-螺旋的蛋白质间可以发生相互作用。十年来，酵母双杂交技术一直在消除假阳性方面不断改进，并且已取得较好的效果〔2，3〕。在酵母双杂交的应用中有时也会遇到假阴性现象。所谓假阴性，即两个蛋白本应发生相互作用，但报告基因不表达或表达程度甚低以至于检测不出来〔4〕。造成假阴性的原因主要有两 方面：一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的载体。二是蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感的菌株及多拷贝载体。目前假阴性现象虽不是实验中的主要问题，但也应予以重视。转化效率是酵母双杂交文库筛选时成败的关键之一，特别是对低丰度cDNA库进行筛选时，必须提高转化效率。转化时可采用共转化或依次转化，相比之下共转化省时省力。更重要的是如果单独转化会发生融合表达蛋白对酵母细胞的毒性时，共转化则可以减弱或消除这种毒性。一种更有效的方法是将诱饵蛋白载体与靶蛋白载体分别转入不同接合型的单倍体酵母中，通过两种接合型单倍体细胞的杂交将诱饵蛋白与靶蛋白带入同一个二倍体细胞。目前很多机构建立了大量的cDNA文库和基因组文库，但这些文库大多无法直接用于双杂交系统的筛选。而文库的质量对于转化和筛选又非常关键。因此，大量构建适用于酵母双杂交的文库非常必要。现已出现一种采用体内重组技术来达到这个目的的方法。

原核表达系统 表达调控方式 组成型,诱导型 表达产物定位 分泌型,不分泌型(细胞内,细胞膜,周质空间) 产物纯化方式 是否融合蛋白,是否一步亲和纯化 产物溶解状况 可溶,包含体,分泌型 在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌)，通过IPTG诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物，而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点：如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控，有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用，过量表达可能导致非生理反应，目的蛋白常以包涵体形式表达，导致产物纯化困难；而且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性较低 为克服上述不足，许多学者将原核基因调控系统引入真核基因调控领域，其优点是 ①根据原核生物蛋白与靶DNA间作用的高度特异性设计，而靶DNA与真核基因调控序列基本无同源性，故不存在基因的非特异性激活或抑制 ②能诱导基因高效表达，可达105倍，为其他系统所不及； ③能严格调控基因表达，即不仅可控制基因表达的“开关”，还可人为地调控基因表达量 因此，利用真核表达系统来表达目的蛋白越来越受到重视。目前，基因工程研究中常用的真核表达系统有酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。2RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。 RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶，至少具有以下三种活性：1、 依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链2、 Rnase水解活性：水解RNA杂合体中的RNA3、 依赖DNA的DNA聚合酶活性：以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA 用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。实验方法如下http://show.bioon.com/protocol/smallclass.asp?typeid=1724&newstype=RT-PCR3 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。许多细菌除了染色体外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)（补充：部分质粒为RNA）。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进细菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。 目前，已发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的0.5%～3%。根据相对分子质量的大小，大致上可以把质粒分成大小两类：较大一类的相对分子质量是40×106以上，较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质，可以把质粒分为两类：一类是严紧型质粒，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细胞内只有1～2个质粒；另一类是松弛型质粒，当染色体复制停止后仍然能继续复制，每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关，某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型，而在变形杆菌内则属松弛型。 在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体，如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr)，并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点，不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切点，就会使抗四环素基因失活。这时，含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素，但对四环素敏感。没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素，而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似，只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对)。4 基因诊断（gene diagnosis）是以探测基因的存在，分析基因的类型和缺陷及其表达功能是否正常，从而达到诊断疾病的一种方法。它是继形态学、生物化学和免疫学诊断之后的第四代诊断技术，它的诞生与发展得益于分子生物学理论和技术的迅速发展。 常用基因诊断技术： 一、Southern印迹法（Southern blot） 基本原理是：硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变性处理，覆以上述滤膜，再于其上方压上多层干燥的吸水纸，借助它对深盐溶液的上吸作用，凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的DNA，将原位地固定于膜上。 当含有特定基因片段已原位转移到膜上后，即可与同位素标记了的探针进行杂交，并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行，袋内放置上述杂交滤膜，加入含有变性后探针的杂交溶液后，在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜上的单链基因DNA分子按碱基到互补原理充分结合。结合是特异的，例如只有β珠蛋白基因DNA才能结合上β珠蛋白的探针。杂交后，洗去膜上的未组合的探针，将Ⅹ线胶片覆于膜上，在暗盒中日光进行放射自显影。结合了同位素标记探针的DNA片段所在部位将显示黑色的杂交带，基因的缺失或突变则可能导致带的缺失或位置改变。 二、聚合酶链反应 近年来，基因分析和基因工程技术有了革命性的突破，这主要归功于聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）的发展和应用。应用PCR技术可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小时内体外扩增数十万至百万倍。扩增的片段可以直接通过电泳观察，也可用于进一步的分析。这样，少量的单拷贝基因不需通过同位素提高其敏感性来观察，而通过扩增至百万倍后直接观察到，而且原先需要一、二周才能作出的诊断可以缩短至数小时。 三、扩增片段长度多态性 小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后电泳来检出，并用于致病基因的连锁分析，这种诊断方法称为扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP）连锁分析法。PCR扩增后，产物即等位片段之间的差别有时只有几个核苷酸，故需用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鉴定。此法多用于突变性质不明的连锁分析. 四、等位基因的特异寡核苷酸探针诊断法 当基因的突变部位和性质已完全明了时，可以合成等基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide,ASO）用同位素或非同位素标记进行诊断。探针通常为长20bp左右的核苷酸。用于探测点突变时一般需要合成两种探针，与正常基因序列完全一致，能与之稳定地杂交，但不能与突变基因序列杂交；另一种与突变基因序列一致，能与突变基因序列稳定杂交，但不能与正常基因序列稳定杂交，这样，就可以把只有一个碱基发生了突变的基因区别开来. PCR可结合ASO，即PCR－ASO技术，即先将含有突变点的基因有关片段进行体外扩增，然后再与ASO探针作点杂交，这样大大简化了方法，节约了时间，而且只要极少量的基因组DNA就可进行。 五、单链构象多态性诊断法 单链构象多态性（signle strand conformation polymorphism,SSCP）是指单链DNA由于碱基序列的不同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同，从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查基因突变时，通常在疑有突变的DNA片段附近设计一对引物进行PCR扩增，然后将扩增物用甲酰胺等变性，并在聚丙烯酰胺凝胶中电泳，突变所引起的DNA构象差异将表现为电泳带位置的差异，从而可据之作出诊断。

（一） 基因工程与医药卫生1． 生产基因工程药品（1） 用基因工程方法生产的“工程菌”可以高效率地生产出高质量，低成本的药品。①用大肠杆菌生产的胰岛素：治疗糖尿病的特效药。②用大肠杆菌及酵母菌生产的干扰素：抗病毒的特效药。其化学本质为糖蛋白。③乙肝疫苗：将乙肝病毒中的有关基因分离出来，引入细菌的细胞中，再采用发酵的方法，或者引入哺乳动物的细胞中，再采用细胞培养的方法，就能让细菌或哺乳动物的细胞生产出大量的疫苗。（2）我过自行生产的几种基因工程药品：白细胞介素-2，干扰素，乙肝疫苗。人生长激素等。2．用于基因诊断和基因治疗（1）基因诊断：①概念：用放射性同位素（如32P），荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本的遗传信息，达到检测疾病的目的。②DNA探针：是单链的。作用是从基因文库中准确地提取出目的基因。由于DNA双链的核苷酸序列是彼此互补的，当DNA分子杂交时首先将双链DNA加热或升高PH值，使双链解开，根据所需的核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链，并用同位素标记，即成为探针。用这一探针查基因文库中已变性的DNA 片段，如果有一个DNA片段能和探针片段互补结合而合成双链（分子杂交），说明这一片段即含有所需的基因。③原理：DNA分子杂交。④优点：快速简便。⑤实例：用β-珠蛋白的DNA探针可以检测出镰刀状细胞贫血症，用苯丙氨酸羟化酶基因探针可以检测出苯丙酮尿症，用白血病患者细胞中分离出的癌基因制备的DNA探针，可以用来检测白血病。（2）基因治疗：把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。目前作到的只是引入外源基因使其表达，以补充缺失的或失去正常功能的酶，而不能作到用正常基因去替换突变的基因。（二）基因工程与农牧业，食品工业1．农业方面：（1）通过基因工程技术获得高产，稳产和具有优良品质的农作物。（2）用基因工程的方法培育出具有各种抗拟性的作物新品种。如抗虫，抗病毒，抗除草剂，抗盐碱，抗干旱，抗高温等。2．牧业方面：利用基因工程技术培育具有抗病能力，高产仔率，高产奶率和高质量皮毛的动物等3．食品工业：开辟新的食物来源。用微生物来生产人类所需要的营养物质。（三）基因工程与环境保护1．环境检测：如用DNA探针可以检测饮用水中病毒的含量，特点是快速，灵敏，精确。2．环境净化：科学家用基因工程的方法培育出了能同时分解四种烃类化合物的“超级细菌”以及“吞噬”汞和降解土壤中DDT的细菌，还有能够净化镉污染的植物等。

基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.

　　选择目的基因,并设计相应引物；　　用引物PCR扩增目的基因片段；　　选择合适（抗性标记、酶切位点等）的克隆载体（为了保真扩增）,并将PCR片段连接入克隆载体中；（一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连）　　将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有抗生素的培养基上生长扩增；　　从大肠杆菌中提取质粒（即前面的连接产物）,酶切鉴定和测序鉴定均无误后将目的基因片段切下并与新的表达载体连接,然后再次转化入大肠杆菌中扩增,再提质粒,即得到想要的目的基因片段克隆.

Ti质粒

基本的基因工程技术步骤简单来说五个字：切、接、转、增、检。“切”就是将加入酶切位点的外源基因和拥有相同酶切位点的载体进行限制性内切酶酶切反应，克隆质粒可以单酶切也可以双酶切，要是做表达质粒就需要双酶切以确定正确的基因表达方向；“接”就是将前面用内切酶处理后有着相同粘性末端的外源基因和质粒载体通过连接酶连接起来，形成重组质粒；“转”就是将重组好的质粒载体转染宿主细胞，有热激还有电转等方法；“增”就是转入了重组质粒载体的宿主细胞增殖培养，通过抗性基因或其他筛选方式筛选含有目的质粒载体的阳性单克隆细胞增殖培养；“检”就是检验了，做克隆就是提取质粒之后PCR方法检验目的重组质粒和携带基因正确性，做表达就是通过表达蛋白相应检测方法检测外源基因表达情况，一般情况做克隆也是用于后面做表达，也就是一般步骤就是走一遍这五个字的克隆，再走一遍这五个字的表达。可能不是非常准确差不多这意思吧，再往细里说东西有点多了，得细问了。

简略回答 不懂追问：1. 基因沉默一般用siRNA或者质粒 ， siRNA是双链RNA，其中一条链与靶基因的mRNA序列互补。将此双链RNA转染至细胞 能够沉默靶基因的表达shRNA质粒 转染进细胞能够表达shRNA（发卡结构） 和双链RNA差不多 只不过是发卡结构。发卡的一条臂与靶基因mRNA互补。 shRNA质粒可以做稳定转染 达到持续干扰的效果 人工合成的siRNA不能稳定转染2. 转染。 就是通过转染试剂 将外源核酸（比如siRNA 质粒等）导入细胞的过程

对主角的形态进行拆分，用数值表示问题解的最小构成单位即表示基因本身，基因串即表示一个个体。以字符串的形态存储耳朵颜色，形状，眼睛颜色形状，皮肤颜色，花纹以及尾巴颜色，形状的相关数据，通过多点交叉，然后产生新的子代个体，接下来进行图像组合，调整每一个部件的相对位置，组合成完整的个体。适应度由玩家交互的次数决定，玩家对自己最喜爱的宠物的关心最多，然后依次递减，适应度最高的个体有大几率繁衍下一代且携带优秀基因（玩家喜爱度更高），实现进化。

pooling 英["pu:lu026au014b] 美["pu:lu026au014b] v. 集中…共同使用，共用( pool的现在分词 ); [例句]Pooling of expertise and resources with partners.和伙伴共享和汇集技术专长和资源。[其他] 原型： pool

Col1a2-sCreER转基因小鼠，简单说就是利用sCreER重组酶方法进行Col1a2基因敲除的转基因小鼠sCreER就是可自我剪切的诱导型CreER（self-cleaved inducible CreER, sCreER）重组酶，是一种新的可通过自我剪切将诱导型CreER转变成持续活化的Cre，实现时间可控的高效遗传操作。Col1a2是基因名称，能够编码“胶原蛋白I型alpha 2链”这个蛋白。

概述荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。原理PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5"端-3"端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

引物当然要有酶切位点啦，这个是必要的，还需要有保护碱基还有和目的基因对应的差不多有20个碱基

概述荧光定量pcr(realtimefluorescencequantitativepcr，rtfqpcr)是1996年由美国appliedbiosystems公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对pcr产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。原理pcr扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时,探针结合在dna任意一条单链上;pcr扩增时，taq酶的5"端-3"端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条dna链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与pcr产物形成完全同步。

假如模板分子有一个，那么经过一轮pcr，就变成2个，这两个经过又一轮pcr，变成了4个，依次……，发现经过40轮，变成了2的40次方个，伴随着每轮pcr有荧光探针的水解，根据荧光情况判断原始产量，推算初始模板量。

想想萤火虫吧，它为什么能发光？它身上不可能有灯泡吧。那就是荧光蛋白。很多蛋白在紫外光激发下都能产生荧光的，这是物理中吸收能量，释放能量的过程。至于荧光PCR检测。如楼上几位所说的，就是用荧光基团嵌合到DNA中，根据荧光的亮度判断DNA的量，从而达到一种定量的检测。

荧光定量pcr会加入带有荧光基团的探针，探针是能和目的基因结合的单链dna，如果合成双链dna后，荧光基团就会激活发光，所以实时检测反应物的荧光强度，反应的就是双链dna的浓度，由于合成双链dna的速率和模板浓度有关，所以和参考曲线比较以后是可以计算出模板的相对浓度，当模板是信号rna是，其反应的就是基因发达的量。

为什么许多“致命”基因实际上是无害的？每个人的基因组中平均都有54个这样的变异，它们看似会让人患病，甚至致人于死地，但实际上并没有造成危害。Sonia Vallabh希望D178N变异也属于这种情况。2010年，Sonia Vallabh送走了她的母亲，她死于一种名叫致死性家族失眠症的神秘疾病，错误折叠的朊蛋白聚集在一起，摧毁了她的大脑。第二年，Sonia接受了检查，发现她也拥有朊蛋白基因PRNP的拷贝，而且携带了可能造成她母亲疾病的变异D178N。这是个货真价实的死刑判决：致死性家族失眠症的平均发病年龄是50岁，而且病情进展很快。但当时26岁的Vallabh不愿不经抗争就接受命运。因此，她和她的丈夫Eric Minikel分别辞去了他们在法律和运输咨询方面的工作，重回校园攻读生物学博士学位。他们希望能学到关于致死性家族失眠症的一切，以及如何阻止它的发生。他们最重要的任务之一是确定D178N变异是否一定会致病。过去，很少有人会询问这样的问题，但医学遗传学正在经历一个自我拷问的阶段。进入本世纪以来，快速进展的基因组学研究发现了上千种与疾病和残疾有联系的基因变异，其中许多结论都很可靠，但也有许多曾被认为危险、甚至致命的变异实际上是无害的。有史以来规模最大的遗传学研究之一，人类外显子组整合数据库（Exome Aggregation Consortium, 简称ExAC）揭开了这些披着狼皮的羊的真面目。ExAC的概念非常简单，它将六万多人基因组中蛋白质编码区域的序列（也就是外显子组）包含在了一个数据库中，让科学家能够对其进行比较，了解外显子组的变异程度。但这一资源对生物医学研究却有着极为深远的影响，不但能帮助科学家排除错误的疾病—基因关联，还能产生新的发现。通过深入研究不同人群中的变异频率，研究者便能了解许多基因，以及它们编码的蛋白质的功能。ExAC颠覆了人类遗传学研究，哥伦比亚大学的遗传学家David Goldstein表示。研究者可以从应该会产生有趣效应的变异入手，研究携带这种变异的人身上会发生什么，而不是从疾病或性状出发倒溯其遗传根源。“这是一种全新的研究方式，”他说。ExAC也为面临遗传诊断的家庭提供了更优质的信息。举例来说，人们强烈怀疑D178N会导致朊病毒疾病，因为许多朊病毒疾病患者都携带有这一变异，但在其他人中很少出现。但在ExAC建立之前，没有人知道它究竟有多罕见。如果它的出现频率比朊病毒疾病更高，就意味着Vallabh患病的概率比此前的预测低得多。

国内外用于检测N-myc、L-myc及C-myc的方法大多采用各种杂交技术。由于应用放射性同位素，需要各种防护措施，不安全又复杂，且一次只能检测Myc基因家族中的一个基因，临床上很难常规应用。PCR－琼脂糖凝胶电泳技术简单、易行、快速，但由于灵敏度低，不能分开只相差3个bpDNA的L-myc和N-myc，所以只能检测C-myc的相对扩增，而不能检测N-myc或L-myc扩增或二者的同时扩增。而且，如果有N-myc或L-myc扩增或二者同时扩增时，即使有C-myc扩增，也会出现假阴性结果。我们首先把PCR技术与中性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描技术结合起来，并用硝酸银试剂使凝胶上的Myc基因双链染成黑褐色。这样的实验结果特异性高，方法简单，成本低，又避免了放射性同位素的一切弊端，很适合于临床应用。聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率高于琼脂糖凝胶电泳，具备分离只相差一个核苷酸的不同DNA片段的特性。在中性聚丙烯酰胺凝胶中，双链DNA片段的电泳迁移率主要由DNA片段长短决定，而与其碱基组成和顺序基本无关。基于以上原理，我们设计了此实验，目的是能把琼脂糖凝胶电泳上没有分开的只相差3bp的N-myc和L-myc分开，作到一次可同时检测3种Myc基因的扩增情况。实验表明：用PCR-中性聚丙烯酰胺凝胶电泳和用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测C-myc基因结果基本相符，说明本研究建立的方法结果可靠。Myc基因是较早发现的一组癌基因，Myc基因的异常扩增或表达，参与了很多肿瘤的发生和发展。本研究方法对进行3种Myc基因在肿瘤形成过程中作用机理的研究，提供了简便易行的实验手段。

许多资料表明C-myc位点在所有受检的B细胞肿瘤中有重排，Casares等发现定位在8号染色体上的C-myc与定位在14号染色体上的Ig重链基因有同样的14.2Kb的ecori 酶切片段，因而发生8∶14易位可能是何杰氏淋巴瘤的一个普通标志。N-myc在人神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和小细胞肺癌中有扩增，扩增的程度与肿瘤的发病进程 有关。Schwab等报告20%的神经母细胞瘤有N-myc扩增，其中大多数是侵袭性肿瘤。Seeger等报告基因拷贝数的多少预示疾病的进程，总的来说，带有一个拷贝数的Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ、Ⅳ.期神经母细胞瘤常规治疗效果较好，带有多个拷贝的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病人，病情将不断加重。c-myc首先被发现与小细胞肺癌有关，30%的病例c-myc扩增，复发病人 中，myc扩增者的生存期短于没有扩增的病例，研究还发现接受化疗的肿瘤病人易引起myc扩增。有关myc基因扩增与其它肿瘤的关系也有许多报道。目前认为胃癌、乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、何杰金氏病及头部肿瘤等都有myc基因的扩增或过度表达。喉癌组织中具有C－myc癌基因扩增，其平均扩增倍数为正常喉组织的2.3。

到我空间有介绍

这个你可以在NCBI的数据库中找，在Gene的Database中输入以上TAG的名称，就可以得到。

伴有癌基因N-myc（恩－密克）这是专有英文词 网路上我查不到全称

属于癌基因的是abl。扩展知识：基因是指携带有遗传信息的DNA序列，是控制性状的基本遗传单位。癌基因是基因的一类，指人类或其他动物细胞（以及致癌病毒）固有的基因，又称转化基因，激活后可促使正常细胞癌变、侵袭及转移。癌基因激活的方式包括点突变、基因扩增、染色体重排、病毒感染等。癌基因激活的结果是其数目增多或功能增强，使细胞过度增殖及获得其他恶性特征，从而形成恶性肿瘤。1、病毒癌基因病毒癌基因指反转录病毒的基因组里带有可使受病毒感染的宿主细胞发生癌变的基因。2、细胞癌基因在正常人及高等动物中，细胞癌基因是普遍存在的，因此又称原癌基因。在每一个正常细胞基因组里都带有原癌基因，但它不出现致癌活性，只是在发生突变或被异常激活后才变成具有致癌能力的癌基因。1、细胞外生长因子作用于细胞膜上的受体或直接被传递至细胞内，通过蛋白激酶活化转录因子，引发一系列基因的转录激活。2、跨膜生长因子受体接受细胞外的生长信号并将其传入细胞内。3、细胞内信号传导分子将接收到的信号由胞内传至核内，促进细胞生长。4、核内转录因子某些癌基因表达蛋白定位于细胞核内，与靶基因的顺式调控元件相结合直接调节靶基因的转录活性。ras基因家族是最常见的癌基因家族，对正常细胞的增殖和分化起重要调节作用，是目前所知最保守的一个癌基因家族。myc基因是目前研究最多的一类核蛋白类癌基因，包括C-myc、N-myc、L-myc、R-myc4种。myc基因在恶性肿瘤中的显著特征之一就是经基因扩增和基因突变的方式激活，出现双微染色体和染色体的均染区。激活后的myc基因大量表达myc蛋白，对细胞生长分化起重要作用。src家族产物具有蛋白酪氨酸激酶活性，能促进增殖信号的转导，定位于细胞内面或跨膜分布。sis家族编码的p28，能刺激间叶组织的细胞分裂增殖。myb家族核内转录因子。

c-myc基因定位于染色体8q24、IgH、IgK、Igλ链的基因位点分别在14q32、2P13和 22q11，在BL细胞中往往出现C-myc基因位点与Ig基因位点之间的易位，即C-myc易位 到Ig位点的高活性转录区，从而组成一个高转活性的重排基因，启动C-myc转录，使 C-myc表达增强，促进细胞恶变，最后导致肿瘤的发生。C-myc基因（C-myc）正常值：不表达或低表达。

　　c-myc基因是myc基因家族的重要成员之一，c-myc基因既是一种可易位基因，又 是一种多种物质调节的可调节基因，也是一种可使细胞无限增殖，获永生化功能，促 进细胞分裂的基因，myc基因参予细胞凋零，c-myc基因与多种肿瘤发生发展有关. 　　一、c-myc癌基因结构及表达 　　c-myc基因是禽类髓细胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的细胞同源序列，从MC-29病毒 中分离的V-myc是gag-myc融合体，它由1358个bp的gag基因与1568个bp的V-myc基因共 同组成.C-myc基因由3个外显子及2个内含子组成，第一个外显子不编码，只起调节作 用，只有外显子2和3与V-myc相对应，编码一个439个氨基酸的蛋白质.C-myc基因由启 动子P1或P2起始转录并在第一内含子中尚有一个潜在启动子P，当第一个内含子发生 断裂时，P可被激活而成为一个异常转录起始点，但蛋白合成起始位点不变，并与正 常C-myc基因产物相同.在各种不同动物中，C-myc基因和第2.3外显子具有高度保守 性，而第1外显子则有较大的差异.小鼠和人的外显子1只有70%的同源性.人类C-myc基 因定位于8q24.在生理学上，C-myc基因的表达一般与细胞的生长状态有关，如有生长 因子刺激成纤维细胞，可导致C-myc表达增强，相反，在细胞分化时C-myc表达降低， 在细胞培养过程中，用C-myc表达结构或反义寡脱氧核酸进行研究，发现C-myc在细胞 G0期到S期的过程中也起作用.表明C-myc表达的变化与细胞的增殖及分化状态有关， 其表达产物在调节细胞生长、分化或恶性转化中发挥作用. 　　二、C-myc基因的表达产物及功能 　　C-myc基因的产物为62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由C-myc基因的外显子2和3共 同编码的由439个氨基酸组成的蛋白质，定位细胞核内，为核蛋白，依C-one编码产 物，功能分类，C-myc癌基因属核蛋白基因，具有转化细胞的能力，并具有与染色体 DNA结合的特性，在调节细胞生长、分化及恶性转化中发挥作用.C-Myc蛋白在结构上 可分为转录激活区，非特异DNA结合区，核靶序列，碱性区，螺旋一环一螺旋(HLH)及 亮氨酸拉链区，在已知的转录因子中可介导蛋白的寡聚化，这两个区同时存在是 C-myc蛋白所特有的，在其它蛋白质中，很少发现.在C-Myc蛋白中，螺旋一环一螺旋 紧随着碱性区，揭示其以特异性序列方式和DNA相互作用.在以原核生物为实验对象的 研究表明，该碱性区以一个自由环存在，当以特殊方式结合到DNA上时，则变成螺 旋，该区是C-Myc蛋白与DNA特异序列的结合部位. 　　在C-Myc中还存在着与抑制细胞分化、自身抑制有关的区域及肿瘤转化所必需的 区域.Smith等研究了C-Myc的亮氨酸拉链区，该区介导各种转录因子的二聚作用.在亮 氨酸重复部位的突变能显蓍降低C-myc抑制鼠红白血病(MEL)细胞分化能力，同样地， 此区的插入突变能消除C-Myc的转化活性.正是这些C-myc结构成分的表达阻止了细胞 进入细胞周期，从而抑制许多细胞系的分化.Cronch等对C-Myc亮氨酸拉链区的亮氨酸 进行致突变，发现这些突变不能自身抑制，说明了亮氨酸拉链区在自身抑制中的重要 性.Stone等研究认为，C-Myc分子的中间1/3以及N-端，C-端是肿瘤转化所必需的，是 C-myc基因与肿瘤转化有关的C-myc区段.正是由于这些C-Myc功能区域的存在，从而使 C-Myc在胞浆内合成后，与其它蛋白形成寡聚体，再转移到核内，并结合到特异性的 DNA序列上，从而激活和抑制许多靶基因的转录，引起细胞生长和分化的改变，发挥 其生理调节功能及恶性转化作用. 　　近年来对疗程性细胞死亡Programmed Cell death. PCD)研究的深入，发现Myc蛋 白参与诱导细胞凋零.C-myc基因表达的失调是多种细胞凋零的主要诱因，细胞发生凋 零的速度及其对诱导因素的敏感性均依赖于细胞Myc蛋白的含量.尚未成熟胸腺细胞中 Myc基因的高表达是胚胎胸腺细胞凋零死亡的诱因.而且在凋零细胞的死亡阶段，也观 察到C-myc基因的高水平表达，如果用反义寡核苷酸阻断C-myc基因的表达，则细胞凋 零受到严重干扰.Evan研究发现，C-myc表达的失调也会启动去除生长因子后培养细胞 的成熟前凋零.他们对小鼠IL-3依赖性髓样细胞素32D进行观察，发现在洗去IL-3后， 可立即观察到C-myc基因表达下调.结果使培养细胞停止于G1期，将携带C-myc基因的 载体转染32D细胞，获得稳定表达C-myc基因的32D细胞克隆，结果这种细胞去除H-3 后，不停止于G1期，而是启动以凋零为特征的程序性细胞死亡.结果揭示细胞凋零是 清除固定突变及细胞周期调控失衡的细胞的重要机制，一旦细胞发生障碍，C-myc基 因会启动凋零程序，相反，则导致肿瘤形成. 　　三、myc癌基因与人类肿瘤 　　myc基因定位于染色体8q24、IgH、IgK、Igλ链的基因位点分别在14q32、2P13和 22q11，在BL细胞中往往出现C-myc基因位点与Ig基因位点之间的易位，即C-myc易位 到Ig位点的高活性转录区，从而组成一个高转活性的重排基因，启动C-myc转录，使 C-myc表达增强，促进细胞恶变，最后导致肿瘤的发生. 　　C-myc基因主要通过扩增和染色体易位重排的方式激活，与某些组织肿瘤的发 生、发展和演变转归有重要关系.在不同的人体肿瘤细胞系中，包括粒细胞性白血病 细胞系，视网膜母细胞瘤细胞系，某些神经母细胞病细胞系，乳腺癌细胞系及某些肺 癌细胞系，已发现C-myc或C-myc相关序列的扩增，在人结肠癌细胞系中也观察到 C-myc基因的扩增.C-myc癌基因已在成骨肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、脂肪肉瘤、横纹 肌肉瘤中发现扩增，当扩增达到30倍时，染色体上表现HSR和DMS，而且C-myc过量表 达与肿瘤的早期复发有关，在致瘤中，已发现ras与myc、sis与myc、myc与fos偶联激 活，协同致瘤等. 　　许多资料表明C-myc位点在所有受检的B细胞肿瘤中有重排，Casares等发现定位 在8号染色体上的C-myc与定位在14号染色体上的Ig重链基因有同样的14.2Kb的ecori 酶切片段，因而发生8∶14易位可能是何杰氏淋巴瘤的一个普通标志.N-myc在人神经 位母细胞瘤.视网膜母细胞瘤和小细胞肺癌中有扩增，扩增的程度与肿瘤的发病进程 有关.Schwab等报告20%的神经母细胞瘤有N-myc扩增，其中大多数是侵袭性肿瘤.Seege r等报告基因拷贝数的多少预示疾病的进程，总的来说，带有一个拷贝数的Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ、Ⅳ.期神经母细胞瘤常规治疗效果较好，带有多个拷贝的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病人，病 情将不断加重.c-myc首先被发现与小细胞肺癌有关，30%的病例c-myc扩增，复发病人 中，myc扩增者的生存期短于没有扩增的病例，研究还发现接受化疗的肿瘤病人易引 起myc扩增.有关myc基因扩增与其它肿瘤的关系也有许多报道.目前认为胃癌、乳腺 癌、结肠癌、宫颈癌、何杰金氏病及头部肿瘤等都有myc基因的扩增或过度表达.

c-myc基因既是一种可易位基因，又 是一种多种物质调节的可调节基因，也是一种可使细胞无限增殖，获永生化功能，促进细胞分裂的基因，myc基因参与细胞凋零，c-myc基因与多种肿瘤发生发展有关。

c-myc基因是禽类髓细胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的细胞同源序列，从MC-29病毒 中分离的V-myc是gag-myc融合体，它由1358个bp的gag基因与1568个bp的V-myc基因共 同组成.C-myc基因由3个外显子及2个内含子组成，第一个外显子不编码，只起调节作用，只有外显子2和3与V-myc相对应，编码一个439个氨基酸的蛋白质.C-myc基因由启 动子P1或P2起始转录并在第一内含子中尚有一个潜在启动子P，当第一个内含子发生 断裂时，P可被激活而成为一个异常转录起始点，但蛋白合成起始位点不变，并与正常C-myc基因产物相同.在各种不同动物中，C-myc基因和第2.3外显子具有高度保守性，而第1外显子则有较大的差异.小鼠和人的外显子1只有70%的同源性.人类C-myc基 因定位于8q24.在生理学上，C-myc基因的表达一般与细胞的生长状态有关，如有生长因子刺激成纤维细胞，可导致C-myc表达增强，相反，在细胞分化时C-myc表达降低，在细胞培养过程中，用C-myc表达结构或反义寡脱氧核酸进行研究，发现C-myc在细胞 G0期到S期的过程中也起作用.表明C-myc表达的变化与细胞的增殖及分化状态有关，其表达产物在调节细胞生长、分化或恶性转化中发挥作用。

C-myc基因的产物为62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由C-myc基因的外显子2和3共 同编码的由439个氨基酸组成的蛋白质，定位细胞核内，为核蛋白，依C-one编码产 物，功能分类，C-myc癌基因属核蛋白基因，具有转化细胞的能力，并具有与染色体 DNA结合的特性，在调节细胞生长、分化及恶性转化中发挥作用.C-Myc蛋白在结构上 可分为转录激活区，非特异DNA结合区，核靶序列，碱性区，螺旋一环一螺旋(HLH)及 亮氨酸拉链区，在已知的转录因子中可介导蛋白的寡聚化，这两个区同时存在是 C-myc蛋白所特有的，在其它蛋白质中，很少发现.在C-Myc蛋白中，螺旋一环一螺旋 紧随着碱性区，揭示其以特异性序列方式和DNA相互作用.在以原核生物为实验对象的 研究表明，该碱性区以一个自由环存在，当以特殊方式结合到DNA上时，则变成螺 旋，该区是C-Myc蛋白与DNA特异序列的结合部位.在C-Myc中还存在着与抑制细胞分化、自身抑制有关的区域及肿瘤转化所必需的 区域.Smith等研究了C-Myc的亮氨酸拉链区，该区介导各种转录因子的二聚作用.在亮 氨酸重复部位的突变能显蓍降低C-myc抑制鼠红白血病(MEL)细胞分化能力，同样地， 此区的插入突变能消除C-Myc的转化活性.正是这些C-myc结构成分的表达阻止了细胞 进入细胞周期，从而抑制许多细胞系的分化.Cronch等对C-Myc亮氨酸拉链区的亮氨酸 进行致突变，发现这些突变不能自身抑制，说明了亮氨酸拉链区在自身抑制中的重要 性.Stone等研究认为，C-Myc分子的中间1/3以及N-端，C-端是肿瘤转化所必需的，是 C-myc基因与肿瘤转化有关的C-myc区段.正是由于这些C-Myc功能区域的存在，从而使 C-Myc在胞浆内合成后，与其它蛋白形成寡聚体，再转移到核内，并结合到特异性的 DNA序列上，从而激活和抑制许多靶基因的转录，引起细胞生长和分化的改变，发挥 其生理调节功能及恶性转化作用.对程序性细胞死亡Programmed Cell death. PCD)研究的深入，发现Myc蛋白参与诱导细胞凋亡.C-myc基因表达的失调是多种细胞凋亡的主要诱因，细胞发生凋亡的速度及其对诱导因素的敏感性均依赖于细胞Myc蛋白的含量.尚未成熟胸腺细胞中 Myc基因的高表达是胚胎胸腺细胞凋亡坏死的诱因.而且在细胞凋亡阶段，也观察到C-myc基因的高水平表达，如果用反义寡核苷酸阻断C-myc基因的表达，则细胞凋亡受到严重干扰.Evan研究发现，C-myc表达的失调也会启动去除生长因子后培养细胞的成熟前凋亡.他们对小鼠IL-3依赖性髓样细胞素32D进行观察，发现在洗去IL-3后， 可立即观察到C-myc基因表达下调.结果使培养细胞停止于G1期，将携带C-myc基因的 载体转染32D细胞，获得稳定表达C-myc基因的32D细胞克隆，结果这种细胞去除H-3 后，不停止于G1期，而是启动以凋亡为特征的程序性细胞死亡.结果揭示细胞凋亡是清除定点突变及细胞周期调控失衡的细胞的重要机制，一旦细胞发生障碍，C-myc基 因会启动凋零程序，相反，则导致肿瘤形成。

1.PCR-琼脂糖凝胶电泳结果：实验设计的引物扩增Myc 3种基因，经PCR扩增，喉癌组织及正常组织细胞DNA在琼脂糖凝胶上均可见2条小于300 bp 的电泳带。第1条带为N-myc( 230bp)和L-myc(227 bp)2个DNA片段合成带，因两者只相差3 bp，故琼脂糖凝胶电泳不能将其分开而呈现1条带；第2条电泳带为C-myc基因(244 bp)。 将电泳结果拍照后的底片在激光扫描仪进行扫描，得出2条带的峰面积值。正常组织细胞的C-myc带比N-myc和L-myc合成带密度弱，比值小于1，求出正常组织细胞的C×(N+L)均值为0.6 。C-myc扩增倍数=喉癌的C×(N+L)×0.6，考虑实验中的综合因素，定为1.5倍以上有C-myc扩增。结果显示：喉癌中有42%的C-myc扩增，正常组织细胞没有C-myc的扩增。2.PCR-中性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果：由于中性聚丙烯酰胺凝胶电泳对DNA的分离特性，经PCR扩增后的Myc基因电泳带显示3条。第1条带为L-myc(227 bp)，第2条为N-myc(230 bp)，第3条为C-myc(244 bp) 。将扩增出特异性Myc基因电泳带的凝胶片，直接在激光扫描仪上进行扫描，得出3条带的峰面积值。然后用各自的峰面积值除以各自的碱基数，作为该基因的单拷贝数，将L-myc、N-myc和C-myc三者中最小的单拷贝数设定为1，比较其他2个基因的相对倍数。正常组织细胞L-myc∶N-myc∶C-myc均值为1.0∶2.2∶3.8。结果32例喉癌中47%有L-myc和C-myc的扩增，41%有N-myc扩增。C-myc的扩增率与用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本一致(χ=0.254，P>0.614)。 1.标本：32例喉癌组织取自我院耳鼻咽喉科住院病人，7例正常喉组织取自我科同期住院的非癌症病人，3例正常白细胞取自我院血库人全血。所有标本均经病理证实。根据喉癌组织病理分化程度不同，分为高、中、低分化癌。2.PCR引物：5′-CCCAGCGAGACATCTGGAAGAA-3′，5′-GAGAAGCCGCTCCACATGCAGTC-3′。扩增Myc基因家族的3个基因，即C-myc(244 bp)，N-myc(230 bp)，L-myc(227 bp)，由上海复旦大学遗传学研究所合成。3.试剂：TaqDNA聚合酶、dNTP为Promega公司产品；蛋白酶K为Merke公司产品；硝酸银为沈阳试剂二厂产品；Marker PUC 18质粒DNA HeaⅢ酶切片段为Sigma公司产品。 1.模板DNA提取：参照参考文献[3]方法进行。2.PCR扩增：PCR扩增总反应体积50 μl，应用模板DNA 50 ng，在DNA扩增仪操作(Perkin Elmer Cetus)，循环周期为94℃1分钟，55℃1分钟，72℃2分钟，经过30个循环后，补加72℃7分钟。3.琼脂糖凝胶电泳步骤：取PCR产物5 μl加1μl上样缓冲液(0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯氰FF，40%蔗糖水溶液)之后备用。制备2%琼脂糖凝胶倒入水平式电泳槽中。待胶凝固后加样，用1×TAE缓冲液作为电极缓冲液，溴化乙锭染色，电压低于5V/cm，时间约为2小时。电泳结束后，凝胶直接在紫外透射仪上观察结果。照像，拍片后的底片在激光扫描仪上进行扫描。4.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤：取PCR产物5 μg加1 μl上样缓冲液之后备用。制备8%非变性聚丙烯酰胺凝胶，灌注于20 cm×20 cm×0. 1 cm垂直板电泳槽中， 待凝胶聚合后加样，用1×TBE缓冲液作电极缓冲液，室温下电泳1瓦特约14小时，待指示剂溴酚蓝移到边缘时停止电泳。将电泳后的凝胶移至方盘中进行硝酸银染色。染色过程如下：用双蒸馏水(dH2O)洗凝胶3次后浸泡于染色液(硝酸银1g，加dH2O至500 ml)中30分钟，去掉染色液，用dH2O漂洗3次凝胶，然后浸泡于显色液(NaOH15g，38%甲醛3.8 ml，加dH2O至500ml)中约10分钟，当显出棕黑色DNA区带时，用dH2O洗1次凝胶后，浸于停影液(冰醋酸25 ml，加水至500 ml)中约30分钟，然后把凝胶移至固定液(乙醇25 ml，冰醋酸2.5 ml加dH2O至500 ml)中固定。固定后的凝胶在看片灯上观察结果、拍照片，凝胶直接在激光扫描仪进行扫描。，3者在第2外显子中有2个区域高度同源，3个基因分别表达各自独立的蛋白，它们的生理作用基本一致。研究表明，在许多肿瘤细胞中有Myc基因扩增或异常表达，但在不同的肿瘤组织和癌细胞系中，Myc基因家族的成员在扩增或表达方面有些差异。因此，深入研究Myc基因3个成员与人类肿瘤的关系非常有意义。本研究建立的PCR-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-激光扫描技术，可同时检测肿瘤组织中3种Myc基因的扩增情况，在肿瘤发生发展过程中，为进行3种基因各自作用机理的研究提供了简易的实验手段。

c-myc基因是禽类髓细胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的细胞同源序列，从MC-29病毒 中分离的V-myc是gag-myc融合体，它由1358个bp的gag基因与1568个bp的V-myc基因共 同组成.C-myc基因由3个外显子及2个内含子组成，第一个外显子不编码，只起调节作 用，只有外显子2和3与V-myc相对应，编码一个439个氨基酸的蛋白质.C-myc基因由启 动子P1或P2起始转录并在第一内含子中尚有一个潜在启动子P，当第一个内含子发生 断裂时，P可被激活而成为一个异常转录起始点，但蛋白合成起始位点不变，并与正 常C-myc基因产物相同.在各种不同动物中，C-myc基因和第2.3外显子具有高度保守 性，而第1外显子则有较大的差异.小鼠和人的外显子1只有70%的同源性.人类C-myc基 因定位于8q24.在生理学上，C-myc基因的表达一般与细胞的生长状态有关，如有生长 因子刺激成纤维细胞，可导致C-myc表达增强，相反，在细胞分化时C-myc表达降低， 在细胞培养过程中，用C-myc表达结构或反义寡脱氧核酸进行研究，发现C-myc在细胞 G0期到S期的过程中也起作用.表明C-myc表达的变化与细胞的增殖及分化状态有关， 其表达产物在调节细胞生长、分化或恶性转化中发挥作用。

过度表达，见于各种肿瘤，如肺癌，胃癌，乳腺癌，结肠癌，宫颈癌，某些神经母细胞病，粒细胞性白血病 ，视网膜母细胞瘤，成骨肉瘤，软骨肉瘤，脊索瘤，脂肪肉瘤，横纹肌肉瘤，何杰金氏病及头部肿瘤等都有myc基因的扩增或过度表达。建立同时检测Myc基因3个成员L-myc 、N-myc及C-myc异常扩增的简便方法。方法　采用聚合酶链反应(PCR)技术，用一对引物同时扩增Myc基因3个成员第2外显子中的高度保守区，扩增产物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描。结果　此法可以检测Myc基因家族中3个成员的扩增情况。 经检测，正常组织细胞没有Myc基因扩增，32例喉癌组织中47%有L-myc和C-myc扩增，41%有N-myc 扩增，与正常比差异均有显著意义(χ=6.764,7.609, 5.961;P均<0.05)。C-myc扩增率与用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本相符(χ=0.254,P>0.05) 。结论　此法对检测肿瘤组织中Myc基因3个成员提供了简易、特异、 无放射污染，并且适于临床应用的、优于PCR-琼脂糖凝胶电泳的方法。

myc基因是较早发现的一组癌基因，与之同源的病毒癌基因存在于MC29及其它一些具有高度致癌性的猿逆转录病毒中。myc基因高水平表达时可转化啮齿类成纤维细胞。

原癌基因又称为“myc”基因。myc基因家族成员有3个：cell-myc(c-myc)、human-myc(N-myc)和myc-related-gene(L-myc)。它们具有类似的结构和功能。人类c-myc原癌基因定位于8q24区，由3个外显子和2个内含子组成。第1外显子无编码序列，是转录控制区，只起调节作用。外显子2和3是转译区，编码包含439个氨基酸残基的蛋白质，分子量为49kD。外显子1,2,3共同编码分子量为65 kD的蛋白质，定位于核内，为核转录调节因子。该蛋白质位于N端143个氨基酸区域富含脯氨酸、谷氨酸残基，为转录激活区(transcription activation domain，TAD)；第320-328氨基酸处含有将胞质中合成的Myc蛋白质转运至核内的信息，为核定位区；位于C端355～439位氨基酸，包含有形成二聚体的特征性结构，为二聚体形成结构域:包括碱性结构域(B)，螺旋一回转一螺旋结构域(HLH)及亮氨酸拉链区(LZP)。C-myc蛋白通常和细胞内其他蛋白质结合，其中最主要的是具有BHLHLZ结构的蛋白MAX。C-myc和MAX形成MYC-MAX异二聚体，在核内通过和具有CACGTG核心序列的靶基因结合，反式激活靶基因的转录，从而发挥c-myc作用。近年发现的具有类似结构的蛋白MAD1和MAD2(MXIL1)也能和MAX形成异二聚体，竞争MAX与MYC的结合，对MYC-MAX异二聚体具有拮抗作用，从而调节MYC的功能。

myc基因包括C - myc，N -myc，L - myc，分别定位于8号染色体，2号染色体和1号染色体。结构上由不编码蛋白质的第1外显子和编码蛋白质的第2，3外显子构成。myc基因属于编码核蛋白的癌基因，3个基因都编码一种与细胞周期调控有关的核内DNA结合蛋白。myc基因家族及其产物可促进细胞增殖，永生化，去分化和转化等，在多种肿瘤形成过程中处于重要地位。myc基因家族中的3个成员对肿瘤形成及在肿瘤类型方面存在差异。认为，C - myc的扩增与肿瘤发生与转归密切相关，N - myc的扩增对肿瘤的预后判断有意义，L - myc扩增与肿瘤的易患性和预后在不同的肿瘤中表现不一样。研究表明，myc基因产物，尤其是c - myc在诱导细胞凋亡过程中也起重要作用。

myc基因是较早发现的一组癌基因,包括C - myc，N -myc，L - myc ，分别定位于8号染色体，2号染色体和1号染色体。结构上由不编码蛋白质的第1外显子和编码蛋白质的第2、3外显子构成。myc基因首次在Burkitt淋巴瘤中发现，可通过染色体易位而活化，最常见的是通过8号染色体与14号染色体间易位，使得8号染色体上的myc基因或其相邻区域与14号染色体的免疫球蛋白重链融合而被活化。myc基因还可以通过染色体2：8或8：22间易位与免疫球蛋白轻链序列融合而被活化。尽管不同肿瘤中影响myc基因的易位断裂点的具体位置可能有所不同，但染色体易位的共通之处是改变了myc基因正常的表达调控机制。除了染色体易位可破坏myc基因的表达调控之外，在某些肿瘤类型中myc基因还受DNA扩增的影响。myc基因在小细胞肺癌中有较高频率扩增，在很多其它类型上皮癌如乳腺癌和结直肠癌中也有扩增。

因为这种治疗方式可以避免许多问题，可以避免身体的器官受到伤害，所以可以降低化疗的风险，基因的治疗方式是通过基因防止癌细胞扩散。

LEA= late embryogenesis abundant胚胎成熟基因家族，有利于种子抵抗环境中的水压

亲子鉴定里的基因突变是指孩子遗传父母的DNA基因在某一个点上产生了基因突变，对身体没有影响。

Sonic hedgehog音猬因子分类：生物学词汇 详细解释： 7月《自然遗传》发表先后在中科院上海生命科学研究院和上海交通大学的贺林实验室论文，发现IHH基因突变导致“A－1型短指(趾)症”。这个病的发病率不太高，但是IHH基因是发育里很有趣的一个基因。Hh是英文“刺猬”(hedgehog)简写而来的，这类基因最早是在果蝇里发现，70年代末80年代德国女遗传学家纽斯兰－沃哈德(C. Nusslein-Volhard)和美国遗传学家维西毫斯(E. Wieschaus)用果蝇饱和突变的方法发现了许多影响发育的基因，后来许多科学家接着他们的工作在其他动物发现这些基因有普遍重要性。Hh是他们发现的多个基因中的一个。果蝇和其它动物一样身体分成多个节段，幼虫的每个节段内一部分有毛、一部分无毛，Hh基因突变使无毛部分变成有毛部分，所以被戏称为“刺猬”基因。果蝇HH基因是美国霍普金斯大学毕淇(P. Beachy)实验室在90年代初克隆的，在果蝇只有一个Hh基因，以后多个实验室在高等动物发现有三个Hh基因。第一个高等动物的Hh被命名为sonic HH(SHh)，因为正好有一个儿童游戏叫这个名称，其它二个分别以不同刺猬种属命名为“印度刺猬”(IHh)和“沙漠刺猬”(DHh)。SHh的功能最清楚，在发育中起许多关键作用，包括神经系统中线形成、眼睛发育、小脑细胞分裂。斯坦福大学司格托(M. Scott)发现SHh受体突变导致人最常见的皮肤癌。研究Ihh和DHh的较少。96年哈佛医学院特宾 (C. Tabin)实验室提出Ihh控制骨头的发育，99年哈佛的麦克马亨(A. McMahan)发现剔除小鼠IHh基因后有许多异常，包括骨头缩短。贺林实验室发现Ihh基因突变可以引起短指(趾)症，将动物研究结论伸展到了人。

丝氨酸蛋白酶编码基因tvsp1从T.virens中成功克隆并进行功能分析。丝氨酸蛋白酶在防治影响棉花幼苗的水稻纹枯病菌（R.solani）中具有重要的作用。tvsp1基因已经利用克隆载体pET-30在E.coli中获得表达，所产酶能降解真菌细胞壁（Pozo et al.，2004）。T.harzianum单端孢霉二烯（trichodiene）合成基因 tri5 也已被分离克隆和表达到pGEMT载体中。tri5基因负责trichodiene酶的合成，trichodiene酶则抑制病原体细胞中蛋白质和DNA的合成及它们的生长。trichothecene酶显示出对尖孢镰刀菌（Fusarium spp.）的植物性毒素活性。在其他木霉菌株中tri5基因的存在也已被证实（Gallo et al.，2004）。编码外切-β-1，3-葡聚糖的细胞壁降解酶基因tag83从T.asperellum获得分离和鉴定。使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）对该基因进行了表达分析。比较研究了各种类型的碳源，如淀粉、纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖和立枯丝核菌的细胞壁，对葡聚糖酶活性的影响。tag83基因与纹枯病菌的表达显示出葡聚糖酶对病原体的寄生活性（Marcello et al.，2010）。编码抗真菌的葡聚糖1，3-β-葡萄糖苷酶基因gluc78被从T.atroviride中分离、克隆和测序。该基因对病原体的细胞壁降解有显著效果。gluc78基因被克隆到pGEM-T载体进行表达，分析对病原体R.solani和P.ultimum的活性（Donzelli et al.，2001）。葡萄糖阻遏基因cre1被从T.harzianum中分离鉴定。该基因可以抑制纤维素酶和木聚糖酶编码基因，而纤维素酶和木聚糖酶是病原体细胞壁降解涉及的主要酶类（Saadia et al.，2008）。编码果胶酸内切水解酶 endopolygalacturonase的基因 ThPG1 从 T.harzianum 中被分离和鉴定。通过比较野生型和突变型菌株研究了该酶在植物病原体水稻纹枯病菌和终极腐霉的细胞壁降解过程中的作用。β-微管蛋白是大多数细胞的结构组件，可与苯并咪唑类杀菌剂相互作用，在生物防治过程中发挥重要作用。T.harzianum中的β-微管蛋白基因已被分离和鉴定。使用反向PCR和巢式PCR，β-微管蛋白基因的编码区和上下游序列被扩增鉴定。通过Swiss-model自动比较蛋白建模服务器确定了β-微管蛋白基因的三维模型（Li et al.，2007）。丝氨酸蛋白酶在真菌生物学和生物防治活动中发挥了关键作用。一种新的丝氨酸蛋白酶基因SL4l从T.harzianum中被克隆并在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中成功表达（Liu et al.，2009）。富含半胱氨酸的Sm1基因从T.virens中获得了分离和表达，该基因显示出对双子叶植物和单子叶植物疾病的防御活性（Buensanteai et al.，2010）。Tvsp1基因是编码T.viride体外分泌的丝氨酸蛋白酶基因，其过表达能够显著提高对棉花立枯病的防效，其缺失对生长和发育没有不利影响（Pozo et al.，2004）。MoranDiez等（2009）通过PCR克隆得到ThPG1 基因的全长cDNA，采用邻接树法（NJ）绘制了系统发育树。编码内切β-1，6-半乳聚糖酶的Tv6Gal基因被从T.viride中分离克隆，并在E.coli中表达。半乳聚糖酶属于阿拉伯半乳聚糖家族，参与细胞间的黏附、细胞扩展和细胞死亡过程（Kotake et al.，2004）。从土壤中分离的木霉SY是高产木聚糖酶菌株。编码木聚糖酶的基因Xyl通过RT-PCR被克隆。在纤维素作为唯一的碳源时，Xyl呈高表达（Min et al.，2002）。T.virens的G蛋白a亚基基因TgaA和TgaB被克隆和鉴定。这种基因对纹枯病和白绢病具有拮抗活性（Mukherjee et al.，2004）。

花青素 学名:OPC 花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。花青素(anthocyanins)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。经由苯基丙酸类合成路径(phenylpropanoid pathway)和类黄酮生合成途径(flavonoids biosynthetic pathway)生成。影响花青素呈色的因子包括花青素的构造、pH値、共色作用(copigmentation)等。果皮呈色受内在、外在因子和栽培技术的影响。光可增加花青素含量；高温会使花青素降解。花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播 (Stintzing and Carle, 2004)。常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。部分果实以颜色深浅决定果实市场价格。花青素属于酚类化合物中的类黄酮类(flavonoids)。基本结构包含二个苯环，并由一3碳的单位连结(C6-C3-C6)。花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。以天竺葵色素(pelargonidin)、矢车菊素(cyanidin)、花翠素(delphinidin)、芍药花苷配基(peonidin)、矮牵牛苷配基 (petunidin)及锦葵色素(malvidin)六种非配醣体(aglycone)为主。花青素因所带羟基数(-OH)、甲基化(methylation)、醣基化(glycosylation)数目、醣种类和连接位置等因素而呈现不同颜色 (范和邱, 1998)。颜色的表现因生化环境条件的改变，如受花青素浓度、共色作用、液胞中pH値的影响 (Clifford, 2000)。本文目的为了解影响花青素生合成的因子，以作为田间栽培管理的参考。 橙色和黄色是胡萝卜素的作用。1910年在胡萝卜中发现了β-胡萝卜素，以后共发现另外2种胡萝卜素异构体，分别是：α、β、γ三种异构体。1958年β-胡萝卜素获得专利（US2849495，1958年8月26日，专利权人：Hoffmann La Roche），目前主要从海洋中提取，也可人工合成。 自然界有超过300种不同的花青素。他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡罗卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、 牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）. 花青素颜色随PH值发生变化，从当PH值为3时的覆盆子红到当PH值为5时的深蓝莓红。在大多数应用中，这些色素具有良好的光、热和PH稳定性，并且能够承受巴氏和UHT热处理。花青素广泛地应用在饮料、糖果、果冻和果酱中。紫甘薯花青素在不同PH值下的颜色变化见右下图：紫甘薯花青素在不同PH值下的颜色变化 近年来对作为多酚的花青素对健康可能带来的好处的关注越来越集中。将来花青素的这种特性在功能食品和保健食品中有可能得到日益应用。目前市场上有比较成熟的花青素产品，这些花青素主要是越橘花青素、蓝莓花青素、蔓越橘花青素、接骨木花青素、黑莓花青素和黑豆皮花青素等，含量均为25%或40%。国内西安天一生物技术有限公司的 薛西峰先生做了详细的提取工艺研究，并于2001年开始大规模生产25%的花青素成品。[编辑本段]花青素的作用 花青素类色素广泛存在于紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子皮、樱桃、红橙、红莓、草莓、桑葚、山楂皮、紫苏、 黑(红)米、牵牛花等植物的组织中。 花青素为人体带来多种益处。从根本上讲，花青素是一种强有力的抗氧化剂，它能够保护人体免受一种叫做自由基的有害物质的损伤。花青素还能够增强血管弹性，改善循环系统和增进皮肤的光滑度，抑制炎症和过敏，改善关节的柔韧性。下面列出花青素的部分功效： 1.有助于预防多种与自由基有关的疾病，包括癌症、心脏病、过早衰老和关节炎； 2.通过防止应激反应和吸烟引起的血小板凝集来减少心脏病和中风的发生； 3.增强免疫系统能力来抵御致癌物质； 4.降低感冒的次数和缩短持续时间； 5.具有抗突变的功能从而减少致癌因子的形成； 6.具有抗炎功效，因而可以预防包括关节炎和肿胀在内的炎症； 7.缓解花粉病和其它过敏症； 8.增强动脉、静脉和毛细血管弹性； 9.保护动脉血管内壁； 10.保持血细胞正常的柔韧性从而帮助血红细胞通过细小的毛细血管，因此增强了全身的血液循环、为身体各个部分的器官和系统带来直接的益处，并增强细胞活力； 11.松弛血管从而促进血流和防上高血压（降血压功效）； 13.防止肾脏释放出的血管紧张素转化酶所造成的血压升高（另一个降血压功效）； 14.作为保护脑细胞的一道屏障，防止淀粉样β蛋白的形成、谷氨酸盐的毒性和自由基的攻击，从而预防阿尔茨海默氏病； 15.通过对弹性蛋白酶和胶原蛋白酶的抑制使皮肤变得光滑而富有弹性，从内部和外部同时防止由于过度日晒所导致的皮肤损伤等等。 (此文原文有误导之处，经过国外网站资料考证 关于花青素是否能够保护人体免受一种叫做自由基损害目前还不明确，而且理论上的125岁 并不是光自由基一方面就可以做到的 还有很多外在因素，并且花青素有被中和的可能，请大家客观对待，以免受某些保健食品的引用片面影响。特编辑此文) 16花青素还具有抗辐射的作用，花青素颜色因PH值不同会发生变化，大部分花青素具有良好的光、热、PH值稳定性，对于白领或是长期处于日晒、电辐射环境中的人群，花青素的功效可是不可或缺的。 [编辑本段]花青素的研究应用 现代人发现，尽管抗生素和维生素的研究已经非常深入，但也解决不了诸如心脑血管疾病、糖尿病、癌症等现代疾病以及亚健康状况，更不能解决人的延年益寿、抗衰老的问题。科学研究：如果一旦解决了自由基的侵害问题，那么人体细胞就可以真正自由成长，人的平均寿命一定会达到125岁。所以人的寿命长短直接取决于人们抗氧化抗自由基能力的强弱，而花青素的发现为全世界的人找到了抗氧化抗衰老的最简单有效的办法。 花青素的发现和应用使人类从20世纪的抗生素、维生素时代，进入到21世纪的花青素时代！ 随着科技的发展，人们对食品添加剂的安全性越来越重视，合成色素的使用种类和数量已经大幅度下降，因此，开发和应用天然色素已成为世界食用色素发展的总趋势。 花青素是一类广泛存在于植物中的水溶性色素，属于类黄酮化合物。在植物中常见的有6种，即天竺葵色素(P g)、矢车菊色素(Cy)、飞燕草色素(Dp)、芍药色素(Pn)、牵牛花色素(Pt)和锦葵色素(Mv)。自然条件下游离的花青素极少见，常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷，花色苷中的糖苷基和羟基还可以与一个或几个分子的香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸等芳香酸和脂肪酸通过酯键形成酰基化的花色苷。已知天然存在的花色苷有250多种，存在于27个科、73个属的植物中。 已开发的花青素葡萄皮色素是开发最早且最丰富的花青素类色素，由葡萄科果实的果皮或葡萄酒酒厂的废料-- 葡萄渣，以水或乙醇萃取，后经精制、真空浓缩而得，主要成分有锦葵色素-3-葡糖啶、丁香啶、二甲翠雀素、甲基花青素、翠雀素等，广泛用在饮料、冷饮、蛋糕、果酱等的生产上，用量0.002%~0.3%。 玫瑰茄色素(玫瑰茄红)，由锦葵科木槿属一年生草本植物玫瑰茄的花萼提取精制而来，100g干花萼可制得 1.5g总花色苷，主要成分有飞燕草素-3-接骨木二糖苷、矢车菊素-3-接骨木二糖苷和少量的飞燕草素-3-葡糖苷、矢车菊素-3-葡糖苷，玫瑰茄红是食用红色(至紫色)色素，适用于pH值在4以下，不需高温加热的食品，如糖浆、冷点、冰糕、果冻等，用量在0.1%~0.5%。 高粱红色素是取自紫黑色或红棕色高粱种子的外果皮，主要成分是芹菜素和槲皮黄苷。高粱红对光、热稳定，在酸性和碱性条件下均可呈红棕色，染色力强，是食用红棕色色素，因其性质稳定，故应用广泛。 另外国际上已开发应用的花青素类色素花生衣红色素、落葵红、黑加仑红、天然苋菜红、紫玉米色素、桑葚红色素、红米红(黑米红)、紫苏色素、红球甘蓝色素、蓝锭果红等。花青素类色素在酸性环境中呈现红色，色泽亮丽，并且对光、热、氧稳定性好(葡萄皮色素除外)，是日用品调色的最佳天然色素之一。而国内除红球甘蓝色素、紫苏色素、蓝锭果红、紫玉米色素未得到批准之外，其他的都得到了广泛的应用。 应用研究和存在的问题花青素同其他天然色素一样无毒无副作用，安全性能高，着色色调自然，更接近天然物质的颜色，且具有保健功能。但是与合成色素相比较，花青素类色素也存在一些缺陷，花青素对pH值、温度、光照、金属离子十分敏感，稳定性差，如色调会随pH的变化而发生明显变化，在酸性环境中显红色，中性时显紫色，碱性时显蓝色。 花青素分子中存在高度分子共轭体系，具酸性与碱性基因，易溶于水、甲醇、乙醇、稀碱与稀酸等极性溶剂中，溶剂中通常用含有少量盐酸或甲酸的甲醇做溶剂提取，其中的酸能防止非酰基化的花色苷的降解，然而在蒸发浓缩时这些酸会导致色素的降解，在一些植物中，少量的酸会使酰基化的花色苷部分或全部的水解，在对从葡萄中提取花青素的多种方法进行了比较试验证明，当溶剂中的HCI达到0.12mol/L时就能使酰基化的花色苷部分水解。简单的提取纯化工艺很难达到含量≥24%的标准，而欧洲国家利用他们自己拥有的提取纯化技术，可使提取物的花青素含量≥36%。 近年来对花色苷类色素的抗氧化性及生理功能有较多的研究报道，并研究了它们的抗氧化性与化学结构之间的关系，然而，花色苷在活体组织中的抗氧化功能却很少得到证实，因此更有待于我们进行深入研究以下问题：人体吸收花色素苷的相关机制以及花色素苷的转化产物对人体所起的作用，药物动力学，物种形式或组织结构的分布情况。 未来有潜力的花青素类色素花青素类色素广泛存在于葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子皮、樱桃、红橙、红莓、草莓、桑葚、山楂皮、紫苏、紫甘薯、黑(红)米、牵牛花等植物的组织中。20世纪80年代，日本就从红球甘蓝的叶子中提取分离出4种花青素，并将其作为食品着色剂(红至红紫色)，广泛用于糖果、果汁、汽水、冰淇淋、话梅的生产上。紫苏色素主要成分是紫苏素、紫苏宁，是存在于紫苏科中具有紫色叶的品种的天然红色素，日本在1993年就规定其为食品添加剂，并用于口香糖、果汁饮料等，认为其具有预防过敏、防龉齿、消炎等作用。紫苏是我国传统药用植物，是我国卫生部卫防字(1987)57号文公布的第二部分33个药食两用的品种之一。近年来从紫甘薯中提取花青素成为国际上热门研究项目，因为紫甘薯产量高，容易栽培，是经济地获取花青素的理想途经，尤其是高花青素紫甘薯品种的育成，为规模化生产花青素提供了优质原料！ 紫甘薯 随着研究的不断深入，通过人工酰基化以提高花青素稳定性的工作也取得很大进展。另外，植物组织培养技术也可以用于花青素类色素的其他生产。花青素因其亮丽的色泽、抗氧化和其他保健功能，必将 投入工业化生产，以丰富人们的工作和生活 谢谢！

代谢通路是kegg数据库里的pathway数据库。可以通过全基因组预测了编码基因后，进行pathway数据库注释，从注释结果的功能信息中通过关键字查找。一般都能找到。如果找不到，有可能是关键字不对或者基因组中没有这样的代谢通路功能基因。一般现在的科技服务公司如果做了kegg pathway数据库注释的话，都会做代谢通路图的注释，可以从结果文件中的代谢通路图查找，找到想要的代谢通路图后，再分析哪些基因在基因组上存在。

怎么在pathway中显示上调基因和下调基因如果你的样品是高等生物的话，基于已知的知识库结合你定量实验分析TF的话，有很多软件能够判断其上下调的特异性调节情况的。低等生物或者植物的话可能更多地结合序列预测等信息就比较麻烦点了。光有bingdingsite信息只能帮助判断能否regulate，但是不能确定向那个方向regulate。这个没别的办法，只有做实验才能确定到底是上调还是下调。现有关于protein-DNAinteraction的public数据库基本没有direction信息。商业数据库像MetaCore和IPA还是好用很多。如果有特定的TF要看，可以去GEO看看有没有这个TFmutant或者knock-out的数据。如果有的话，至少能多点信息帮助判断，不过要注意物种或条件差异。

David或KEGG 如何对一组基因做pathway分析花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。花青素(anthocyanins)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。经由苯基丙酸类合成路径(phenylpropanoid pathway)和类黄酮生合成途径(flavonoids biosynthetic pathway)生成。影响花青素呈色的因子包括花青素的构造、pH値、共色作用(copigmentation)等。果皮呈色受内在、外在因子和栽培技术的影响。光可增加花青素含量；高温会使花青素降解。花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播 (Stintzing and Carle, 2004)。常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。部分果实以颜色深浅决定果实市场价格。花青素属于酚类化合物中的类黄酮类(flavonoids)。基本结构包含二个苯环，并由一3碳的单位连结(C6-C3-C6)。花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。以天竺葵色素(pelargonidin)、矢车菊素(cyanidin)、花翠素(delphinidin)、芍药花苷配基(peonidin)、矮牵牛苷配基 (petunidin)及锦葵色素(malvidin)六种非配醣体(aglycone)为主。花青素因所带羟基数(-OH)、甲基化(methylation)、醣基化(glycosylation)数目、醣种类和连接位置等因素而呈现不同颜色 (范和邱, 1998)。颜色的表现因生化环境条件的改变，如受花青素浓度、共色作用、液胞中pH値的影响 (Clifford, 2000)。本文目的为了解影响花青素生合成的因子，以作为田间栽培管理的参考。橙色和黄色是胡萝卜素的作用。1910年在胡萝卜中发现了β-胡萝卜素，以后共发现另外2种胡萝卜素异构体，分别是：α、β、γ三种异构体。1958年β-胡萝卜素获得专利（US2849495，1958年8月26日，专利权人：Hoffmann La Roche），目前主要从海洋中提取，也可人工合成。自然界有超过300种不同的花青素。他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡罗卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、 牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）.花青素颜色随PH值发生变化，从当PH值为3时的覆盆子红到当PH值为5时的深蓝莓红。在大多数应用中，这些色素具有良好的光、热和PH稳定性，并且能够承受巴氏和UHT热处理。花青素广泛地应用在饮料、糖果、果冻和果酱中。紫甘薯花青素在不同PH值下的颜色变化见右下图：紫甘薯花青素在不同PH值下的颜色变化近年来对作为多酚的花青素对健康可能带来的好处的关注越来越集中。将来花青素的这种特性在功能食品和保健食品中有可能得到日益应用。目前市场上有比较成熟的花青素产品，这些花青素主要是越橘花青素、蓝莓花青素、蔓越橘花青素、接骨木花青素、黑莓花青素和黑豆皮花青素等，含量均为25%或40%。国内西安天一生物技术有限公司的 薛西峰先生做了详细的提取工艺研究，并于2001年开始大规模生产25%的花青素成品。

功能(GO)或者通路(Pathway)富集分析时，都会涉及到 Background; 做分析时，分析工具会提供一些数据供使用者选择或者使用自定义的gene list。 例如，在RNAseq或Microarray；有时候工具提供的 Background时物种所有的基因，现在也没有同一的标准用来自己构建Background。 # Background 构造方法： # 两个概念+例子 Background frequency：Background 基因集包含注释到某个GO term的基因数目。 sample frequency：需要分析的gene 集包含注释到某个GO term的基因数目。 一个例子，现有S. cerevisiae(现注释有6442个基因)的10个基因需要做富集分析，如果这个10基因有5个基因注释到了GO term-DNA修复(S. cerevisiae有100个基因注释到DNA修复 )；那么现在DNA修复的样本频率(sample frequency)是5/10；背景频率(background frequency)就是100/6442。 例子中，10个基因是确定的；使用全基因组注释的基因是6442；若是检测中只检测到5000个基因，那么Background gene集选用5000，背景频率也会变化(100 个DNA修复相关的基因都被检测到了)，在统计检验时P值大小也会变化。除此之外，100 个DNA修复相关的基因也可能不会全部都在检测结果中。 GO term或Pathway 是否在实验结果的差异基因集中富集常使用的统计学检验基于超几何、卡方或二项式分布。基于基因组中基因注释到某个GO term的概率不变，查看差异基因集有多少基因可以注释到同一个GO term, 从而得到P值。 # Background 构造方法讨论 参考：

　　一般现在的科技服务公司如果做了kegg pathway数据库注释的话，都会做代谢通路图的注释，可以从结果文件中的代谢通路图查找，找到想要的代谢通路图后，再分析哪些基因在基因组上存在。　　谢通路是kegg数据库里的pathway数据库。可以通过全基因组预测了编码基因后，进行pathway数据库注释，从注释结果的功能信息中通过关键字查找。一般都能找到。如果找不到，有可能是关键字不对或者基因组中没有这样的代谢通路功能基因。

原材料被a基因编码的蛋白质1转化为产物A，再被b基因编码的蛋白质2转化为产物B…以此类推这个过程叫做pathway，中断任何一环都无法继续