大肠杆菌

主要有3种 分别是灼烧灭菌 高温蒸汽灭菌 干热灭菌大肠杆菌测定 伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板，在(36土1)℃培养18h -24 h 。每个平板至少挑选2个菌落。挑取上述菌落纯培养物接种3.6.3生化培养基和乳糖发酵管，(36士1)0C培养24h 后观察结果。大肠杆菌与非大肠杆苗鉴别试验方法靛基质试验:滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 m L于靛基质试验培养基中混合，静置，观察结果。出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。甲基 红(MR)试验:滴加甲基红指示剂0.2 m 1于MR-VP培养基中混合，观察结果。出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。维 培(VP)试验:滴加VP试剂甲液0. 2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1mL混匀，静置，观察结果。在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次出现红 色也为阳性反应。西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。大肠杆菌鉴定结果靛基质 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 鉴定＋－ ＋＋ －－ —－ 典型大肠艾希氏杆菌非典型大肠艾希氏杆菌＋－ ＋＋ －－ ＋＋ 典型柠檬酸盐杆菌非典型柠檬酸盐杆菌－＋ －－ －－ ＋＋ 典型产气肠杆菌非典型产气肠杆菌如出现表1以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。结果报告1M Vic 试 验结果为++一一、一+一一和乳糖发酵管产气者，查其EC肉汤产气管数及其稀释倍数，对照附录B(资料性附录)中MPN检索表报告样品中大肠埃希氏杆菌MPN /a (mL)值

可以干扰素就是用基因工程研制的

［标签:标题］篇一：实验1人肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。3.说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。实验材料1.配制LB液体培养基，蛋白腺0.5g,酵母提取液0.25g,氯化钠0.5g,加水50mL溶解。2.配制LB固体培养基，蛋白陈0.5g,酵母提取液0.25g,氯化钠0.5g,琼脂lg,加水50niL 溶解（配制LE固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。实验步骤1.培养基灭菌。在两个150mL的三角瓶中分别装入50niL LB液体培养基和50niL LB固体培养基（刚配好， 尚未凝固），加上封I I膜（一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。既可以通气，又不使细菌进入。）。 将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15mm（有压力时开始计时）。同 时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、蹑子等）等一块灭菌。2.倒平板，倒斜面。灭菌后。待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿 等放在灭菌后的超净工作台上。超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min, 关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镇子夹出酒 精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。待固体培养基冷却到60°C时（手放上还有些热的时 候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封「1膜，右手 其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10u301c 20niL倒入1个培养皿中。倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底， 待凝，使之形成平面。倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL°试管斜靠在平放的铅 笔上，冷却凝固。3.液体培养基用于大肠杆菌的扩大培养。将人肠杆菌和有液体培养基的三角瓶放在左手中，靠近酒精灯火焰；右手拿着接种坏，并 用右手无名指和小指夹住斜面的棉塞和三角瓶封II膜。接种环在火焰上烧红，再深入到斜面， 使环接触培养基冷却后，再取菌种。将菌体放入三角瓶的封II膜和斜面的棉塞复原。三角瓶 在37°C摇床上震荡培养12h （转速200转/分）。这一步骤由老师完成。4.划线分离，分离菌种。在酒精灯火焰上灼烧接种坏，将摇床上培养12h的菌液（老师代做）打开，接种坏部分深 入到菌液中（只一次）。然后，在固体培养基的平板上连续划，接种环只在菌液中笼菌液一 次，划线后盖好培养基。将培养皿倒置（盖在下面），放在37°C恒温培养箱中培养12-2411 后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已经被分离。划线的目的是分离菌种。用接种环以无菌操作取细菌悬液一坏，在平板培养基的一边，做第一次平行划线2u301c3条。转动培养皿约70度角，用烧过冷却的接种坏，通过第一次划线部分，做第二次平行划线。用同法通过第二次平行划线，做第三次平行划线。注：每卞一次的划线之前都需要将接种环灼烧灭菌，待接种坏冷却后，接种环需通过上一次的划线获得菌种后再进行下一次的划线分离（如图E、C,我们这么做就是为了使第一次划线后的菌种浓度降低，以达到得到单菌落（分离菌种）的目的）。5.菌种保存在无菌操作下将单菌落用接种坏取出，再用划线法接种到斜面上，37°C培养24h后，4°C冰 箱保存。4°C是一个保菌温度。篇二：大肠杆菌的培养与分离一、大肠杆菌1.大肠杆菌属于革兰氏 性菌，为 型的肠道杆菌。2. 结构:属于 生物。3. 用途:是在 技术中被广泛采用的工具。4. 与人类的关系:它生活在人类的 中，一般对人 （“有”还是“无”）害。有一些菌株对人体能产生危害，因为它们可以侵蚀 并产生 。任何大肠杆菌如果进入人的 系统，都会对人体产生危害。答案：1u2022阴兼性厌氧2.原核3.基因工程4.肠道无肠黏膜毒素泌尿二、细菌的培养和分离1.细菌的培养：（1）细菌的繁殖:细菌以 的方式繁殖,分裂速度很快，约 分裂一次。（2） 培养细菌的方法：培养细菌，需要将转移到 中,一般用 来转移带菌的培养物。（3）用不同培养基培养细菌的差别：接种后，培养细菌的培养基类型接种方法接种后培养的时间（单位:小时）培养结果液体培养基接种坏直接接种培养8h后每毫升培养基中有 个细菌固体培养基 用接种环在培养基上用的方式接种（该法还可以用于 ）培养10-20 h后一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞，这些细胞形成 2.细菌的分离：（1）分离的方法与特点:分离细菌有 和 2种。前者方法简单，后者操作复杂,但是 更易分开。答案：1.(1)分裂20 nun (2)已有细菌的培养物新的培养基接种坏(3)几亿划线分离细 菌紧紧聚集在一起菌落2.(1)划线分离法涂布分离法单菌落(2)划线分离固体平面划线培养三、 灭菌操作1.灭菌操作的原因:为了获得 的培养物，其关键是防止外来 的入侵污染。因此，在培养微生物时必须进行 操作。2.无菌操作的条件：(1)首要条件是 必须是无菌的；(2) 必须是无菌的；(3) 的过程必须是无菌的等。答案：1u2022纯净杂菌无菌2.⑴各种器皿(2)各种培养基(3)菌转移操作四、 大肠杆菌的培养和分离实验1u2022实验目的：(1)进行大肠杆菌的 ，利用 培养基进行细菌培养的操作；(2)进行大肠杆菌的 ，用 培养基进行细菌的 培养；(3)说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。2.实验步骤(1)灭菌:用 在 力卞对lb液体培养基、lb固体培养基和培养皿进行灭菌mine(2)自 向 中转移并分装固体培养基：待冷却至 左右，将三角锥形瓶中的 培养基，在 上分装至几个 中,制成 培养基。(3)将大肠杆菌自 转移到 中的 培养基中培养：将大肠杆菌用 在无菌操作下接种至三角锥形瓶中的 培养基中，在摇床振荡培养 ，完成大肠杆菌的培养。(4)将菌液在 培养基上进行 分离：从前一步培养得到的菌液中获取菌种，用 以 法接种至第二步所制得的培养基中，在 °C恒温箱中培养 h后观察菌落。(5)菌种保存:在无菌操作下将 用 取出，再用 法接种在 上, 培养 后 冰箱保存。3.分离实验的结果及相应结论：观察中若看到在 的末端出现 ，则表明菌已被分离了。4. 大肠杆菌分离的用途: 的通用方法，也是用于 的最简便方法之一。答案扩增液体(2)分离固体平面划线2.(1)高压锅1kg 15⑵三角瓶 培养皿60 °C固体超净台培养皿固体平面(3)斜面 三角瓶液体接种坏液体37 °C 12 h (4)固体平面划线接种坏划线固体平面37 12u301c24 (5)单菌落接种坏划线斜面37 °C 24114 °C3.划线不连续的单个菌落4.消除污染杂菌筛选高表达量菌株核心解读hexmjiedul.微生物、细菌与人肠杆菌之间有怎样的关系？(1)概念内涵:其关系图解见下(2)结构上:三者都是结构简单，形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的,具体如 下：2.培养大肠杆菌的lb培养基中有各种物质，为什么选择这些物质，这些物质有什么作用呢？(1)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质一一培养基。 虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素,即水、无机盐、碳源(提供碳元 素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身 不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。见下表：微生物的营养要素定义功能类型化合物类型常用物质碳源凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营养物质称为碳源构成细胞物质，供 给微生物生长发育所需要的能量无机碳(自养型微生物用)无机物co2> nahco3> caco3等 有机碳(异养型微生物用)蛋白质、核酸类牛肉膏、蛋白腺、花生粉饼、明胶、氨基酸等 糖类脂质等葡萄糖、蔗糖、淀粉等氮源凡是构成微生物的细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源主要是提 供合成原生质和细胞其他结构的原料,一般不作能源无机氮钱盐nh3、(nh4)2so4硝酸盐kiio3112空气有机氮牛肉膏、蛋白腺、醇母膏、尿素、明胶等生长因子一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源自行合成的所需极 微量的有机物一般是酶和核酸的组成成分酵母膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦 芽汁等，复合维生素水作用:组成成分;反应介质;物质运输媒体;热的良导体无机盐作用:维持渗透压、ph等(2)大肠杆菌的lb培养基微生物的营养要素本实验中人肠杆菌lb培养基配方培养基配方与微生物营养要素的对 应 关系lb液体培养基lb固体培养基氮源、碳源、无机盐、生长因子、水琼脂1 g蛋白K 0.5 g主要提供人肠杆菌的氮源、碳源需求酵母提取物0.25 g主要提供生长因子nacl 0.5 g提供无机盐水501111提供水(3)此外配方中还要注意ph等。3.该实验中这些操作的原因(1)三角锥形瓶中的lb固体培养基灭菌后，需要冷却到60 °C左右时，才用来转移和分装，制 成固体平面培养基，为什么?你用什么简易方法快速估计该温度？因为三角锥形瓶中的lb固体培养基中有琼脂，它在98 °C以上熔化，在44匸以下凝固，当冷 却到60 °C左右时，不会因温度过高烫手而不易操作;也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中 的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。 简易估计温度的方法:可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手 转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60 °C左右了。(2)进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴 留在盖子上;如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿 中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的 目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。篇三：大肠杆菌的分离与培养教案生物实验技能考核教案题目《人肠杆菌的分离和培养》教案学院—化学和生命科学学院班级—生物科 学102班 __ —姓名—杜艳花 学号联系电话一18758912261 (612261)指导老师张萍华口期：2013 年 7月4日《人肠杆菌的分离与培养》教案一、 实验教材分析本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。本次课程主要包 括了本次实验的目的、人肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实 验步骤等内容。在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。 并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊 细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化, 同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。因此, 本节课起着承前启后的重要作用。￥5.9百度文库VIP限时优惠现在开通,立享6亿+VIP内容立即获取实验,大肠杆菌的培养和分离［标签:标题］篇一：实验1人肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。3.说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。实验材料1.配制LB液体培养基，蛋白腺

1.原理：稀释或划线分离,出现单菌落,根据菌株菌落状态挑取所需菌株. 2.实验材料：待分离菌株,各种药品 3.用具接种环,培养皿,试管,灭菌锅,超净工作台,酒精灯,恒温培养箱 4.步骤：配制大肠杆菌琼脂培养基,灭菌,倒平板,取出待分离菌株,在超净台,挑取划线至培养皿,平板倒置于培养箱培养,37摄氏度,一般2天左右.待长出单菌落,挑取所需菌株至斜面培养基,冰箱保藏. 5.价值：分离纯化或复壮菌种.

在进行蓝白斑筛选的时候，出现了两个奇怪现象：一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点，看起来不像是细菌。不知道是什么原因，我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的，应该没有杂菌的。

革兰氏染色阳性呈兰紫色，阴性呈桃红色。以此判断将菌种放在载波片上，按1结晶紫（1-2min）2碘酒(1min)3酒精(30-50sec)4砂黄(1min)的顺序染色.其中每步都要用水洗，并用吸水纸擦干

大肠杆菌在生物技术中的应用：大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。

你只需要区分农杆菌和大肠杆菌，这就太简单了，设计一对能扩16SrDNA的引物（比如27F：5"-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3" ；1492R：5"-TACCTTGTTACGACTT-3"），抽提两种菌的基因组DNA，做PCR，然后拿去测序。将得到的序列在NCBI网站BLAST，就可以看到哪个菌跟大肠杆菌同源性高，哪个跟农杆菌同源性高了。至于原理，你可以看看以下链接，一句两句话说不清楚。

所谓的转化是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。细胞处于能够吸收DNA的状态称感受态，处于感受态的细胞称作感受态细胞。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（即带有异源DNA分子的受体细胞）。

增菌培养：加大肠到胆盐乳糖培养基中增菌培养，MUG实验：培养18-24h后接种到MUG培养基中培养；结果观察：366nm紫外下有蓝白色荧光，阳性。无蓝白色荧光，阴性

是改变细胞膜的通透性，不是细胞壁。氯化钙能够改变 细胞膜 的通透性，从而使细胞成为感受态。

生物制法：首先剪切胰岛素基因，再将胰岛素基因转入人的大肠杆菌内，再创造大肠杆菌裂殖的有利环境，对大肠杆菌进行大规模培养，使之产生大量的治疗糖尿病的药物——胰岛素。基因制法:在基因工程人胰岛素的生产过程中,一般是先表达胰岛素原,然后对胰岛素原复性,复性后的胰岛素原通过酶切得到有活性的胰岛素.其中胰岛素原的复性效率是决定最终收率的关键因素,正确折叠与错误折益胰岛素原的分子量完全相同,结构非常相似,采用RT-HPLC可对其进行分离检定.Sergeev等利用反相色谱建立了复性液中胰岛素原的检测方法.如果要对正确折叠与错误折盛胰岛素原的结构进一步说明,可将其用蛋白酶V8酶解,然后用RP-HPLC-MS作肤图谱.Damn等用S.aureusproteaseV8酶解胰岛素原,然后用R"FHPLC做肚谱图,并结合质谱法对重组胰岛素原的折受过程进行了监测.我们的书上就是这么说的

生物制法：首先剪切胰岛素基因，再将胰岛素基因转入人的大肠杆菌内，再创造大肠杆菌裂殖的有利环境，对大肠杆菌进行大规模培养，使之产生大量的治疗糖尿病的药物——胰岛素。 基因制法: 在基因工程人胰岛素的生产过程中,一般是先表达胰岛素原,然后对胰岛素原复性,复性后的胰岛素原通过酶切得到有活性的胰岛素.其中胰岛素原的复性效率是决定最终收率的关键因素,正确折叠与错误折益胰岛素原的分子量完全相同,结构非常相似,采用RT-HPLC可对其进行分离检定.Sergeev等利用反相色谱建立了复性液中胰岛素原的检测方法.如果要对正确折叠与错误折盛胰岛素原的结构进一步说明,可将其用蛋白酶V8酶解,然后用RP-HPLC-MS作肤图谱.Damn等用S.aureus protease V8酶解胰岛素原,然后用R"FHPLC做肚谱图,并结合质谱法对重组胰岛素原的折受过程进行了监测.我们的书上就是这么说的

生物体对密码子的偏爱性：不同的生物，甚至同种生物不同的蛋白编码基因，对于同一氨基酸所对应的简并密码子，使用频率并不相同，也就是说生物体基因对简并密码子的选择具有一定的偏爱性。决定这种偏爱性的因素有三：A. 生物基因组中的碱基含量 在富含AT的生物（如单链DNA噬菌体fX174）基因组中，密码子第三位上的U和A出现的频率较高，而在GC丰富的生物（如链霉菌）基因组中，第三位上含有G或C的简并密码子占90%以上的绝对优势。 B. 密码子与反密码子相互作用的自由能适中的作用强度最有利于蛋白质生物合成的迅速进行；弱配对作用可能使氨酰基tRNA分子进入核糖体A位需要总费更多的时间；而强配对作用则可能使转肽后核糖体在P位逐出空载tRNA分子耗费更多的时间。 如GGG、CCC、GCG、GGC、AAA、UUU、AUA、UAU等使用少； 如GUG、CAC、UCG、AGC、ACA、UGU、AUC、UUG等使用多； C. 细胞内tRNA的含量。②密码子偏爱性对外源基因表达的影响 由于原核生物和真核生物基因组中密码子的使用频率具有不同程度的差异性，因此，外源基因尤其是哺乳动物基因在大肠杆菌中高效翻译的一个重要因素是密码子的正确选择。一般而言，有两种策略可以使外源基因上的密码子在大肠杆菌细胞中获得最佳表达： A. 外源基因全合成 B. 同步表达相关tRNA编码基因 2．载体的选择 所用表达载体必须是大肠杆菌表达载体，含有大肠杆菌RNA聚合酶所能识别的启动子（如PL、tac、T7等）和SD序列。 (1)核糖体结合位点 外源基因在大肠杆菌细胞中的高效表达不仅取决于转录启动的频率，而且在很大程度上还与mRNA的翻译起始效率密切相关。大肠杆菌细胞中结构不同的mRNA分子具有不同的翻译效率，它们之间的差别有时可高达数百倍。mRNA翻译的起始效率主要由其5‘ 端的结构序列所决定，称为核糖体结合位点（RBS）(2)大肠杆菌核糖体结合位点的特征 位于翻译起始密码子上游的6-8个核苷酸序列5" UAAGGAGG 3"，即Shine-Dalgarno（SD）序列，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3"端区域3" AUUCCUCC 5"并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译；

目录 1 概述 2 疾病名称 3 英文名称 4 大肠杆菌性肺炎的别名 5 分类 6 ICD号 7 流行病学 8 病因 9 发病机制 10 大肠埃希杆菌肺炎的临床表现 11 大肠埃希杆菌肺炎的并发症 12 实验室检查 13 辅助检查 14 诊断 15 鉴别诊断 16 大肠埃希杆菌肺炎的治疗 16.1 一般治疗 16.2 抗感染治疗 16.2.1 β内酰胺类 16.2.2 氨基糖苷类 16.2.3 喹诺酮类 17 预后 18 大肠埃希杆菌肺炎的预防 19 相关药品 附： 1 治疗大肠杆菌性肺炎的中成药 2 大肠杆菌性肺炎相关药物 这是一个重定向条目，共享了大肠埃希杆菌肺炎的内容。为方便阅读，下文中的 大肠埃希杆菌肺炎 已经自动替换为 大肠杆菌性肺炎 ，可 点此恢复原貌 ，或 使用备注方式展现 1 概述 大肠埃希杆菌（Escherichia co1i，又称大肠杆菌）肺炎近年来明显增加，是引起社区获得性革兰阴性杆菌肺炎的仅次于肺炎克雷白杆菌的第二位常见病原菌，占革兰阴性杆菌肺炎的12%～45%，占全部肺炎病原的2.0%～3.3%。它是医院内获得性肺炎的主要病原菌之一，其发病率为4.2～9.0/1万，占革兰阴性杆菌肺炎的9.0%～15.0%。20世纪60年代该病的病死率高达60%，80年代后明显下降，有报道为29%。 大肠杆菌性肺炎临床表现与一般急性肺炎相似，可表现为寒战、发热、咳嗽、咳痰、胸痛、发绀及呼吸困难等。痰常为黏稠或脓性，可有腥臭味。部分病人伴胃肠道症状如恶心、呕吐、腹痛、腹泻。严重病人可有嗜睡等意识障碍和末梢循环障碍。 2 疾病名称 大肠杆菌性肺炎 3 英文名称 Escherichia co1i pneumonia 4 大肠杆菌性肺炎的别名 大肠埃希菌肺炎；大肠杆菌肺炎；大肠埃希杆菌肺炎 5 分类 呼吸科 > 感染性疾病 > 细菌性肺炎 6 ICD号 J15.5 7 流行病学 大肠埃希杆菌为条件致病菌。主要发生于老年衰弱患者，原有各种慢性基础疾病、危重病患者、气管插管、长期使用皮质激素及其他免疫抑制剂治疗者，长期使用抗生素而致菌群失调者，以及各种免疫球蛋白缺陷患者等，为本病的易感人群。 8 病因 大肠埃希杆菌于1885年德国科学家Escherich发现，属肠杆菌科，埃希杆菌属，革兰染色阴性，兼性厌氧，菌体大小为（1.0～1.5）μm×（2.0～6.0）μm，无荚膜，多数菌株有鞭毛，4～6根，为周鞭毛，不生芽孢，可分解葡萄糖和其他糖类，使其发酵产酸和产气，硝酸盐还原试验阳性，氧化酶阴性，产生吲哚，不利用枸橼酸。营养要求低，在普通培养基上生长良好，最适生长温度为37℃，在42～44℃仍能生长。该菌为肠道正常菌群，人和动物粪便中大量存在，广泛分布于自然界。含质粒编码抗生素抗性、大肠毒素、肠毒素、菌毛等，表面有O、H、K抗原，目前已发现药物和其他菌群的抑制，自20世纪80年代后大肠埃希杆菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的比例迅速增加，国外报道ESBLs的产生率2.2%～28%，国内为5%～32.4%。 9 发病机制 大肠埃希杆菌为条件致病菌。发病原因为机体免疫防御功能下降，吸入口咽部定植菌或由腹部脏器如胃肠道和泌尿生殖道感染，通过血行传播等。主要发生于老年衰弱患者，原有各种慢性基础疾病、危重病患者、气管插管、长期使用皮质激素及其他免疫抑制药治疗者，长期使用抗生素而致菌群失调者，以及各种免疫球蛋白缺陷患者等，为本病的易感人群。在教学医院等综合性医院中，病人粪、尿和口咽部分泌物等标本中携带的含多重耐药基因的大肠埃希杆菌的传播，给治疗带来困难。 大肠杆菌性肺炎的病理与其他革兰阴性菌肺炎相似，主要呈现肺下叶的支气管肺炎改变，以两侧病变多见。病程6天以上者常有肺小脓肿、胸腔积液甚至脓胸改变。炎症累及气管支气管黏膜较少，可能因为多数大肠杆菌性肺炎为血源性途径所致。肺泡内有浆液和中等量的单核细胞填充。病程早期红细胞渗出多见，后期可见中性粒细胞、巨噬细胞。可有肺泡壁增厚，可见坏死病变。部分病例可伴有大肠埃希杆菌引起的胆囊炎、肾盂肾炎或脑膜炎等病变。 10 大肠杆菌性肺炎的临床表现 大肠杆菌性肺炎的临床表现与一般急性肺炎相似，可表现为寒战、发热、咳嗽、咳痰、胸痛、发绀及呼吸困难等。痰常为黏稠或脓性，可有腥臭味。部分病例伴胃肠道症状如恶心、呕吐、腹痛、腹泻。严重病例可有嗜睡等意识障碍和末梢循环障碍。肺部体征可有双侧肺下区呼吸音减低并有湿啰音，肺部实变体征少见。40%患者可伴发脓胸并可见相应体征，多发生在病变严重的一侧。 11 大肠杆菌性肺炎的并发症 肺脓肿、胸腔积液或脓胸，休克、心肺功能不全。 12 实验室检查 外周血白细胞和中性粒细胞增多，核型左移。痰、胸腔积液、血液甚至尿等多种标本可培养分离出大肠埃希杆菌。胸液检查可为浆液渗出性或脓性。 13 辅助检查 普通透视检查X线表现为多叶弥漫性斑片状浸润阴影，以两下肺为主，偶有实变征象，常可发现中等大小的脓腔形成和胸腔积液，脓胸也多见。 14 诊断 可引起肺炎的革兰阴性杆菌种类繁多，临床表现相似，辅助检查缺乏特异性，故诊断大肠杆菌性肺炎须临床结合病原学。有肺炎的症状表现，原有慢性疾病、长期使用抗生素或使用免疫抑制剂病史，伴有消化道症状，甚至精神症状，病情进展快且可并发脓胸，应考虑本病。痰涂片检查可区分病原体是否为革兰阴性杆菌，痰培养阳性应排除口咽部定植菌的污染，故首先应采取合格的痰标本，即痰涂片白细胞和上皮细胞比例大于2.5为合格痰。合格痰培养两次以上分离到大肠埃希杆菌且为优势菌，或定量培养分离菌浓度≥10CFU/ml，或采用TTA、PSB、BAL、LA等防污染下呼吸道标本采样技术采集到的标本分离到大肠埃希杆菌可确诊本病。如胸液和血标本培养出大肠埃希杆菌也可确立诊断。条件允许时可使用DNA探针或PCR方法。若肺炎继发尿路感染，且尿路和痰培养大肠埃希杆菌均阳性时，则也有诊断价值。 15 鉴别诊断 大肠杆菌性肺炎与其他细菌肺炎的鉴别诊断主要依靠病原学的确立，有时单靠临床表现鉴别较困难。 16 大肠杆菌性肺炎的治疗 大肠杆菌性肺炎的治疗的基本原则是积极处理基础疾病的同时选用合适的抗生素，同时及时处理并发症。 16.1 一般治疗 止咳、祛痰、止痛、止血，适量补充液体。维持水、电解质和酸堿平衡。注意保暖，保证休息，进食足够营养和易消化的食物。缺氧时给予氧疗。积极处理原发病和基础疾病。 16.2 抗感染治疗 可根据病情轻重不同，选用不同药物和制订治疗方案。同时，不同地区的社会经济情况、治疗条件、病原体、抗生素供应和耐药情况等不完全相同，故应根据具体情况选用适当药物，合理用药。临床上可分为经验治疗和根据药物敏感试验针对性治疗。 16.2.1 （1）β内酰胺类 头孢菌素或广谱青霉素联合氨基糖苷类抗生素是治疗大肠杆菌性肺炎的常用治疗方案。头孢菌素国内曾以第一代的头孢唑林、头孢拉定及第二代的头孢呋辛应用较多，但近年来耐药比例迅速增加。第三代头孢菌素如头孢噻肟（2～12g/d）、头孢哌酮（2～8g/d）、头孢他啶（2～6g/d）等，作为经验性治疗对重症感染、难治性感染等颇有价值。可单用或与其他药物合用。青霉素中的氨芐西林临床应用较早，但目前大肠埃希杆菌对此药耐药率很高，治疗效果不理想。新一代的广谱青霉素如哌拉西林以及与酶抑制剂的混合的复合制剂如氨芐西林 舒巴坦钠（6～12g/d）、哌拉西林/三唑巴/三唑巴坦钠（哌拉西林/他唑巴/他唑巴坦）（13.5g/d）等对大肠埃希杆菌及其他革兰阴性杆菌有较好的杀菌作用，值得临床应用。对院内获得性难治性感染亦可采用亚胺培南（1.5～4g/d）及氨曲南（1.5～6g/d）。 16.2.2 （2）氨基糖苷类 庆大霉霉素[3～5mg/（kg·d）]、妥布霉素[3～5mg/（kg·d）]、阿米卡星[15mg/（kg·d）]及奈替米星[4～6mg/（kg·d）]等均可用于大肠杆菌性肺炎的治疗，尤其是后两者，临床耐药率较低且毒副作用较少，经验用药时可作首选联合用药之一，主张每天1次用药，老年人减量。 16.2.3 （3）喹诺酮类 环丙沙星（0.2～0.4g/d）、氧氟沙氟沙氟沙星（0.2～0.4g/d）、左氧氟沙氟沙氟沙氟沙星（0.2～0.4g/d）、司氟沙星（司帕沙星）（0.2g/d）等对大肠埃希杆菌有强大的抗菌作用，对医院内获得性或耐药菌引起的大肠杆菌性肺炎也是比较理想的选用药物，但近年来耐药比例有所增加。 在给予抗生素治疗前尽早取得合格的标本进行病原学培养，培养出大肠埃希杆菌后应及时行体外药物敏感试验，如有可能应尽可能行β内酰胺酶及超广谱β内酰胺酶（ESBIs）的检测，根据药敏结果选用敏感抗生素，但应注意对ESBIs阳性的大肠埃希杆菌，由于存在接种物效应（inoculum effect），即使体外药物敏感试验对某些β内酰胺类抗生素敏感，但在体内应用时并不能取得预期的疗效，根据NCCLS1997年标准，只要确认为产ESBLs菌，则应认为其在临床上对所有头孢菌素类和氨曲南耐药，应尽量避免单用此类抗生素治疗。而且往往同时对氨基糖苷类抗生素及喹诺酮类抗生素同时耐药，此时可据药敏选用亚胺培南或含β内酰胺酶抑制剂的第三代头孢菌素、头霉烯类、阿米卡星及氟喹诺酮类抗生素治疗。必要时联合用药，抗生素的应用疗程为10～14天。 对发生肺脓肿、胸腔积液或脓胸的患者应加大抗生素的剂量和疗程，脓胸形成者应进行引流，抗生素胸腔内注射，防胸膜增厚及粘连。并发休克、心肺功能不全者，应给予相应处理，必要时给予机械通气治疗等，并加强护理，有条件者可住入呼吸监护病房。 17 预后 大肠杆菌性肺炎占肺炎病原的2%～3.3%。医院内大肠杆菌性肺炎肺炎发病率占革兰氏阴性杆菌肺炎9.0%～15.0%。近年来大肠杆菌性肺炎发病率和病死率已明显下降。 18 大肠杆菌性肺炎的预防 除了应提高患者的抵抗力外，在医院环境中，对病人应适当的隔离，病人的粪便应消毒，并加强院内厕所、小龙头、小杯等的消毒和管理。对医护人员应严格无菌观念，使用植入性器械都应严格操作原则。 19 相关药品 氧、葡萄糖、青霉素、头孢唑林、头孢拉定、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢他啶、氨芐西林、哌拉西林、三唑巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、氨曲南、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、奈替米星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、司氟沙星 治疗大肠杆菌性肺炎的中成药 清气化痰丸 菌、白喉杆菌、炭疽杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、枯草杆菌、脑膜炎双球菌、霍乱弧菌、... 化虫丸 物（1:2浓度）对伤寒杆菌，副伤寒甲、乙杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞杆菌，金黄色葡萄球菌均有明显的抑制... 银翘散 、鼠疫杆菌、人型结核杆菌、霍乱弧菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、奇异变形杆菌等多种... 安宫牛黄散 病毒有显著灭活作用。麝香酊的稀释液试管内能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、猪霍乱弧菌。臣药水牛角对多种... 乌梅丸 水煎剂对福氏痢疾杆菌、志贺痢疾杆菌、沙门杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、脑膜炎双球菌... 更多治疗大肠杆菌性肺炎的中成药 大肠杆菌性肺炎相关药物 注射用他唑巴坦钠哌拉西林钠 多数质粒芥导的产和不产b内酰胺酶的下列细菌：大肠杆菌、克雷伯氏菌属(催产克雷伯氏菌、肺炎克雷伯氏菌... 莪术油注射液 症】用于病毒引起的感冒、上呼吸道感染、小儿病毒性肺炎；消化道溃疡，甲型病毒性肝炎，小儿病毒性肠炎及... 注射用硫酸阿奇霉素

正实验中,常用甲基绿使DNA染成绿色,用二苯胺使DNA染成蓝色。而人教版高中生物学教材中则显示大肠杆菌细胞内DNA被染成红色,这是使用DNA的另一种染色方法——Feulgen(福尔根)染色法对DNA染色的结果。该法的原理是:DNA经酸(1mol/LHCl)水解后,其上的嘌呤碱基与脱氧核糖之间的糖苷键打开,进而使脱氧核糖与磷酸之间的磷酯键断开,结果在脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,生成紫红色化合物,使细胞内含有DNA

作者＼食力编辑　叶佩珒 近期美国及加拿大发生O157:H7型大肠杆菌食物中毒病例，与食用到受污染的萝蔓生菜有关，由于台湾的萝蔓生菜来源99%都来自于美国进口，因此食药署对美国、加拿大萝蔓生菜之输入规定，必须检附美国及加拿大食品安全主管机关证明文件，未检附则暂停输入查验申请，也呼吁台湾民众这段期间减少食用生菜。 爱吃生菜的人注意了！平常喜欢吃沙拉，或者烤肉时一定要配上几片萝蔓生菜的朋友皮该绷紧了！ 近期美国及加拿大发生O157:H7型大肠杆菌食物中毒病例，与食用到受污染的萝蔓生菜有关，此菌的对于人体可能造成的伤害有致死的风险存在 ，因此建议美国、加拿大民众不要食用萝蔓生菜，且食品业者不要贩卖、供应萝蔓生菜。 由于台湾的萝蔓生菜来源99%都来自于美国进口，食品药物管理署（简称食药署）自2018年11月23日至2018年12月7日，对美国、加拿大输入之萝蔓生菜，输入必须检附美国及加拿大食品安全主管机关证明文件，未检附则暂停输入查验申请，也呼吁台湾民众这段期间减少食用生菜。 美国及加拿大爆发萝蔓生菜受O157:H7型大肠杆菌污染事件 食药署于2018年11月22日表示，美国食品药物管理署（FDA）及疾病管制署（CDC）、加拿大公共卫生局（PHAC）于2018年11月20日发布警告指出，近期美国及加拿大发生O157:H7型大肠杆菌食物中毒病例与食用到受污染的萝蔓生菜（又称萝美生菜）有关，并建议美国、加拿大民众不要食用萝蔓生菜，且食品业者不要贩卖供应萝蔓生菜。 根据CDC的报告显示，全美11个州有32人因食用受污染生菜而致病，而加拿大也爆出O157:H7型大肠杆菌食物中毒病例，但并未表明爆发的来源与美国是否相同。 值得注意的是， 根据CDC指出，2018年6月美国即已传出有5人因吃了感染大肠杆菌的罗蔓生菜致死，因此虽然此次（11月）的大肠杆菌污染爆发事件并未造成死亡病例，仍不该轻忽O157:H7型大肠杆菌食物中毒的风险性。 O157:H7型大肠杆菌有致死的风险存在 听到食物遭大肠杆菌污染，民众可能会见怪不怪，认为顶多拉拉肚子而已，然而，出血性大肠杆菌与平常听到的大肠杆菌可不能相提并论！ 「肠道出血性大肠杆菌」是可以产生类志贺氏毒素的细菌（又称STEC），目前已知血清型约100多种，而较常见的肠道出血性大肠杆菌为O157:H7型。受STEC感染的症状因人而异，但通常包括严重的胃痉挛和出血性腹泻，大多数人会在5～7天内渐渐恢复健康，但感染严重时则可能危及生命。 大约5～10%的被诊断患有STEC感染的人会发生可能危及生命的并发症，称为溶血性尿毒症（HUS）。HUS的症状包括发烧，腹痛，感到异常疲倦，排尿次数减少等症状，大多数患有HUS的人会在几周内康复，但有些人会受到永久性伤害或死亡。 其中， 5岁以下的儿童，65岁以上的成年人和免疫系统较弱的人比其他人更容易患上严重的疾病 ，因此，这类群众更应避免食用未煮熟的碎牛肉、摄食未消毒完全的乳制品与生食过量的生菜。 另外，食药署表示2018年1月1日至2018年11月22日台湾共进口492万公斤的萝蔓生菜，而从美国进口的比例共占了99%，说明台湾大多数的萝蔓生菜皆来自于美国，因此更应注意此次的污染危机。 「萝蔓生菜」加强输入管控措施，业者也应自行注意产品安全 食药署表示将持续观察本事件美国、加拿大主管机关之调查情形，并请美方、加方尽速提供相关资讯且要求美方、加方应落实输台食品源头管理，确保产品卫生安全。 食药署自2018年11月23日至12月7日（出口日），对进口货品分类号列「0705.11.00.00-5结球莴苣，生鲜或冷藏」、「0705.19.00.00-7其他莴苣，生鲜或冷藏」、「0709.99.90.90-8 其他蔬菜，生鲜或冷藏」且品名含「romaine」或等同自字义之产品，输入必须检附美国及加拿大食品安全主管机关证明文件，未检附则暂停输入查验申请。 另外，食药署业已通知国内输入、通路与餐饮业者，应落实自主管理，确认输入、贩售、供应之产品符合食品安全卫生条件，如发现有危害食品安全卫生之虞时，应依食品安全卫生管理法主动停止制造、加工、贩卖及办理回收，并通报直辖市、县（市）主管机关。 民众应避免生食，自行保障食用安全 由于食药署并未进行强制下架，除了少数几间量贩店进行预防性下架外，民众还是能在购买到萝蔓生菜，食药署食品输入管理科科长吴宗熹表示：「目前架上所贩卖的生菜基本上是安全的，但由于检验不能检出每株生菜的安全性，民众最佳保护自己的方式就是避免生食。」 说明生食的产品的安全风险一定都是比较高的，尤其对于微生物的污染更是难以避免，因此食药署呼吁消费者家中如有已购买且尚未食用之美国、加拿大萝蔓生菜，建议不要食用，或煮熟再食用，若有身体不适情形，应尽速就医。 【食力foodNEXT】授权转载　原文出处【不是一般的大肠杆菌？美加进口萝蔓生菜受感染 建议暂时少吃】 推荐阅读： 来碗蔬菜汤！不只防癌还能提高免疫力 泡汤务必将身体洗净，避免成大肠杆菌温床

大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法： 碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。 2、37℃振荡培养过夜。 3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。 4、加0.lml溶液I（1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0）充分混合。 5、加入0.2ml溶液 II（0.2 mM/L NaOH，1％ SDS），轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min . 6、加入0.15m1预冷溶液III（5 mol/L KAc，pH4.8），轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min . 7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管 8、加入等体积的异戊醇，混匀后于？0℃静置10min. 9、再以10，000rpm离心20min，弃上清。 10、用70％乙醇0.5ml洗涤一次，抽干所有液体。 11、待沉淀干燥后，溶于0.05mlTE缓冲液中 煮沸法 1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中，4℃下12000g离心30秒。 2、弃上清，将管倒置于卫生纸上几分钟，使液体流尽。 3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中， 涡旋混匀。 4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液（10mg/ml）， 涡旋振荡3秒钟。 5、将eppendorf管放入沸水浴中，50秒后立即取出。 6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。 7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。 8、取20ml进行电泳检查。 [注意] 1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA. 2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度，浓度高时，细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。 3. 提取的质粒DNA中会含有RNA，但RNA并不干扰进一步实验，如限制性内切酶消化，亚克隆及连接反应等。

表达不清

大肠杆菌是常见的肠道常驻菌，同时也是一种研究常用的微生物，被广泛地用于分子生物学、基因工程、制药等领域。具体来说，大肠杆菌不仅可以用于基因克隆、表达、纯化及蛋白质结构与功能研究等基础性科学研究，还可以作为一种细胞工厂来发酵大量生产生物制品。大肠杆菌的鉴定是其中一项重要步骤，其中之一就是鉴别以下四个大肠杆菌菌株：野生型Trp-His-TrP-Hi，下面让我们来一起详细了解这四个大肠杆菌菌株的鉴别方法。第一个大肠杆菌菌株：野生型（Wild-type）野生型大肠杆菌是指与常见菌株相比没有任何经过基因工程改变的变异，其结构、生物学特性与常见菌株相同。鉴别野生型大肠杆菌的方法可以通过观察细菌在营养平板中的生长速度、菌落颜色以及在含有不同抗生素的培养基上的生长状态来分辨。在营养平板上，野生型大肠杆菌通常会在18小时内在37℃的环境下生长，而如果在不同培养条件下，如温度高于40℃，PH低于6.0，或含有过高浓度的盐和糖分等条件下，生长速度则会大打折扣，和其他大肠杆菌菌株一样也会失去生命力。第二个大肠杆菌菌株：Trp-His（缺失Tryptophan-Histidine）Trp-His大肠杆菌是没有色氨酸和组氨酸的，这是由于其遗传物质发生了变异，缺失的物质服务于作为抗细菌物称之为五环素的合成物质。因此，Trp-His大肠杆菌的鉴别方法也是通过观察菌株生长的情况来分辨。如果在含有细菌缺失的氨氮盐培养基中，缺失有效氨基酸的大肠杆菌将不能生长。第三个大肠杆菌菌株：TrP-Hi（缺失Tryptophan-Phenylalanine）TrP-Hi大肠杆菌也被称为“F-噬菌体”，因为它缺少了合成噬菌体所必需的两种氨基酸，可以将其生长在含有卡那霉素的平板上，卡那霉素能够抑制多种抗战，而对于F+菌株则不会有影响。第四个大肠杆菌菌株：野生型Trp-His-TrP-Hi野生型Trp-His-TrP-Hi大肠杆菌是上述三种菌株的结合体，它既缺失了色氨酸，也缺失了苯丙氨酸和组氨酸，同时也没有菌噬菌体。因此，鉴别野生型Trp-His-TrP-Hi大肠杆菌的方法和上述三种方法类似，通过菌株在含有不同培养基中的生长状态，以及它们的生长速度来判断。综上所述，鉴别以上四个大肠杆菌菌株的方法，需要了解它们各自的特点以及它们的生长状态。当然，除了这四个特定的大肠杆菌菌株外，对于其他常见的常驻菌，也应该具备基本的方法来进行鉴定。而对于大规模生产的菌株，则更加需要农业学和微生物学等专业学科的支持，以确保产品安全和质量。

？？？我不知道你要这个实验做什么呢。。。太专业了吧？你才高二 还需要了解这个啊？不是很有必要。。。

1：DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株 基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F"[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株 该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。 基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验 基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或 SCS110 大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响. 部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。 大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化。 而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法： （1）选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响； （2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E.coli JM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。8：E.coli JM110 要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110 如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别 用途 特征 Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)ply菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达DH5α菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–特点：一种常用于质粒克隆的菌株。 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ-The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues，useful for plasmid rescue procedures。ELECTROMAX DH10B T1 CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率的E. coli，可以完美应用于大多数实验应用。DH10B基因型具有以下特点：? lacZΔM15 用于重组克隆的蓝/白斑筛选? 消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统，允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2)? endA1突变，可以增加质粒产量和数量? 高效率转化大小为150 kb的质粒，用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B? T1R)。DH10B?的基因型：F · mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ · rpsL (StrR) nupGDH10B? T1R的基因型：F · mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ · rpsL (StrR) nupG tonA另：我一直用top10 做普通的转化用 很稳定

肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。

大肠杆菌本来就很臭。用什么培养基养都是臭的。

尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E. coli) OP50，涂布于NGM（Nematode Growth Media）培养基。由于该种大肠杆菌是尿嘧啶缺陷性，只能从培养基（NGM）中获取尿嘧啶，无法自身合成。所以生长速度会比普通的大肠杆菌慢很多，这样既可以提供线虫食物，又不会过度生长。线虫一般从卵到成虫需要3天时间，如果用普通的大肠杆菌，由于没有限制，会过度生长，而且湿度，氧气，以及各种环境因素会制约线虫的生长。

NGM培养基是涂布大肠杆菌(E.coli)OP50的。如果有其它大肠杆菌混在里面，或者是染了其他的菌就会出现发臭。

NA的种类： 　　在生物体内发现主要有三种不同的RNA分子在基因的表达过程中起重要的作用。它们是信使RNA（messengerRNA，mRNA）、转运RNA（tranfer RNA，tRNA）、核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）。RNA含有四种基本碱基，即腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶。此外还有几十种稀有碱基。 　　RNA的一级结构主要是由AMP、GMP、CMP和UMP四种核糖核苷酸通过3"，5"磷酸二酯键相连而成的多聚核苷酸链。天然RNA的二级结构，一般并不像DNA那样都是双螺旋结构，只有在许多区段可发生自身回折，使部分A-U、G-C碱基配对，从而形成短的不规则的螺旋区。不配对的碱基区膨出形成环，被排斥在双螺旋之外。RNA中双螺旋结构的稳定因素，也主要是碱基的堆砌力，其次才是氢键。每一段双螺旋区至少需要4～6对碱基对才能保持稳定。在不同的RNA中，双螺旋区所占比例不同。【RNA的二级结构】细胞内有三类主要的核糖核酸，即：mRNA、rRNA、tRNA。它们各有特点。在大多数细胞中RNA的含量比DNA多5～8倍。【大肠杆菌RNA的性质】 　　mRNA 　　生物的遗传信息主要贮存于DNA的碱基序列中，但DNA并不直接决定蛋白质的合成。而在真核细胞中，DNA主要贮存于细胞核中的染色体上，而蛋白质的合成场所存在于细胞质中的核糖体上，因此需要有一种中介物质，才能把DNA 上控制蛋白质合成的遗传信息传递给核糖体。现已证明，这种中介物质是一种特殊的RNA。这种RNA起着传递遗传信息的作用，因而称为信使RNA(messenger RNA，mRNA)。 　　mRNA的功能就是把DNA上的遗传信息精确无误地转录下来，然后再由mRNA的碱基顺序决定蛋白质的氨基酸顺序，完成基因表达过程中的遗传信息传递过程。在真核生物中，转录形成的前体RNA中含有大量非编码序列，大约只有25%序列经加工成为mRNA，最后翻译为蛋白质。因为这种未经加工的前体mRNA(pre-mRNA)在分子大小上差别很大，所以通常称为不均一核RNA（heterogeneous nuclear RNA,hnRNA）。 　　tRNA 　　如果说mRNA是合成蛋白质的蓝图，则核糖体是合成蛋白质的工厂。但是，合成蛋白质的原材料——20种氨基酸与mRNA的碱基之间缺乏特殊的亲和力。因此，必须用一种特殊的RNA——转运RNA（transfer RNA，tRNA）把氨基酸搬运到核糖体上，tRNA能根据mRNA的遗传密码依次准确地将它携带的氨基酸连结起来形成多肽链。每种氨基酸可与1-4种tRNA相结合，现在已知的tRNA的种类在40 种以上。 　　tRNA是分子最小的RNA，其分子量平均约为27000（25000-30000），由70到90个核苷酸组成。而且具有稀有碱基的特点，稀有碱基除假尿嘧啶核苷与次黄嘌呤核苷外，主要是甲基化了的嘌呤和嘧啶。这类稀有碱基一般是在转录后，经过特殊的修饰而成的。 　　1969年以来，研究了来自各种不同生物，:如酵母、大肠杆菌、小麦、鼠等十几种tRNA的结构，证明它们的碱基序列都能折叠成三叶草形二级结构（图3-23），而且都具有如下的共性： 　　① 5"末端具有G（大部分）或C。 　　② 3"末端都以ACC的顺序终结。 　　③ 有一个富有鸟嘌呤的环。 　　④ 有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。 　　⑤ 有一个胸腺嘧啶环。 　　rRNA 　　核糖体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。在大肠杆菌中，rRNA量占细胞总RNA量的75%-85%，而tRNA占15%，mRNA仅占3-5%。 　　rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome），如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体的结构就会发生塌陷。原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为沉降系数（sedimentation coefficient），当用超速离心测定一个粒子的沉淀速度时，此速度与粒子的大小直径成比例。5S含有120个核苷酸，16S含有1540个核苷酸，而23S含有2900个核苷酸。而真核生物有4种rRNA，它们分子大小分别是5S、5.8S、18S和28S，分别具有大约120、160、1900和4700个核苷酸。 　　rRNA是单链，它包含不等量的A与U、G与C，但是有广泛的双链区域。在双链区，碱基因氢键相连，表现为发夹式螺旋。 　　rRNA在蛋白质合成中的功能尚未完全明了。但16 S的rRNA3"端有一段核苷酸序列与mRNA的前导序列是互补的，这可能有助于mRNA与核糖体的结合。 　　　　snRNA 　　除了上述三种主要的RNA外，细胞内还有小核RNA(small nuclearRNA，snRNA)。它是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体（spilceosome）的主要成分。现在发现有五种snRNA，其长度在哺乳动物中约为100-215个核苷酸。snRNA一直存在于细胞核中，与40种左右的核内蛋白质共同组成RNA剪接体，在RNA转录后加工中起重要作用。另外，还有端体酶RNA(telomeraseRNA)，它与染色体末端的复制有关；以及反义RNA(antisenseRNA)，它参与基因表达的调控。 　　有的RNA分子还具有生物催化作用。　　上述各种RNA分子均为转录的产物，mRNA最后翻译为蛋白质，而rRNA、tRNA及snRNA等并不携带翻译为蛋白质的信息，其终产物就是RNA。　　2006诺贝尔医学奖成果RNA干扰机制解读 　　1990年，曾有科学家给矮牵牛花插入一种催生红色素的基因，希望能够让花朵更鲜艳。但意想不到的事发生了：矮牵牛花完全褪色，花瓣变成了白色！科学界对此感到极度困惑。 　　类似的谜团，直到美国科学家安德鲁·法尔和克雷格·梅洛发现RNA（核糖核酸）干扰机制才得到科学的解释。两位科学家也正是因为1998年做出的这一发现而荣获今年的诺贝尔生理学或医学奖。　　根据法尔和梅洛的发现，科学家在矮牵牛花实验中所观察到的奇怪现象，其实是因为生物体内某种特定基因“沉默”了。导致基因“沉默”的机制就是RNA干扰机制。 　　此前，RNA分子只是被当作从DNA（脱氧核糖核酸）到蛋白质的“中间人”、将遗传信息从“蓝图”传到“工人”手中的“信使”。但法尔和梅洛的研究让人们认识到，RNA作用不可小视，它可以使特定基因开启、关闭、更活跃或更不活跃，从而影响生物的体型和发育等。 　　诺贝尔奖评审委员会在评价法尔和梅洛的研究成果时说：“他们的发现能解释许多令人困惑、相互矛盾的实验观察结果，并揭示了控制遗传信息流动的自然机制。这开启了一个新的研究领域。” 　　科学家认为，RNA干扰技术不仅是研究基因功能的一种强大工具，不久的未来，这种技术也许能用来直接从源头上让致病基因“沉默”，以治疗癌症甚至艾滋病，在农业上也将大有可为。从这个角度来说，“沉默”真的是金。美国哈佛医学院研究人员已用动物实验表明，利用RNA干扰技术可治愈实验鼠的肝炎。 　　目前，尽管尚有一些难题阻碍着RNA干扰技术的发展，但科学界普遍对这一新兴的生物工程技术寄予厚望。这也是诺贝尔奖评审委员会为什么不坚持研究成果要经过数十年实践验证的“惯例”，而破格为法尔和梅洛颁奖的原因之一。 　　诺贝尔生理学或医学奖评审委员会主席戈兰·汉松说：“我们为一种基本机制的发现颁奖。这种机制已被全世界的科学家证明是正确的，是给它发个诺贝尔奖的时候了。”　　补充　　核糖核酸（缩写为RNA，即Ribonucleic Acid)，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。 　　RNA由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤，G鸟嘌呤，C胞嘧啶，U尿嘧啶。其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。 　　与DNA不同，RNA一般为单链长分子，不形成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。 　　在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA）, rRNA（核糖体RNA）, mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录；tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子）的识别者和氨基酸的转运者；rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。 　　在病毒方面，很多病毒只以RNA作为其唯一的遗传信息载体（有别于细胞生物普遍用双链DNA作载体）。 　　1982年以来，研究表明，不少RNA，如I、II型内含子，RNase P，HDV，核糖体大亚基RNA等等有催化生化反应过程的活性，即具有酶的活性，这类RNA被称为核酶（ribozyme）。 　　20世纪90年代以来，又发现了RNAi（RNA interference，RNA干扰）等等现象，证明RNA在基因表达调控中起到重要作用。 　　在RNA病毒中，RNA是遗传物质，植物病毒总是含RNA。近些年在植物中陆续发现一些比病毒还小得多的浸染性致病因子，叫做类病毒。类病毒是不含蛋白质的闭环单链RNA分子，此外，真核细胞中还有两类RNA，即不均一核RNA（hnRNA）和小核RNA（snRNA）。hnRNA是mRNA的前体；snRNA参与hnRNA的剪接（一种加工过程）。自1965年酵母丙氨酸tRNA的碱基序列确定以后，RNA序列测定方法不断得到改进。目前除多种tRNA、5SrRNA、5.8SrRNA等较小的RNA外，尚有一些病毒RNA、mRNA及较大RNA的一级结构测定已完成，如噬菌体MS2RNA含3569个核苷酸。

E.coli Electro-Cells E.coli Electro-Cell JM109 制品名 TaKaRa Code 包装量 价格(人民币元) E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300 ■ GenotypeE.coli JM109recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F"[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15]■ 细胞浓度1～2×1010 Bacteria/ml ■ 保存-80℃■制品说明用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。TaKaRa使用独自开发的菌体培养法，制作出了效果极佳的E.coli Electro-Cell JM109。 ■细胞种类α-互补性选择宿主E.coli JM109E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时, 由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109 F"编码的lacZΔM15的结合，显示β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)。利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F"质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，调制单链DNA。■质量标准 使用10 pg的质粒DNA进行转化时：50 μl E.coli JM109 Electro-Cell/10 pg pUC19 plasmid转化时产生的菌落数>1×109 transformants/1 μg pUC19 plasmid F"质粒的稳定性检测对E.coli JM109使用pUC19 DNA进行电穿孔法转化后，在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG, 40 μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。 50 μl的E.coli JM109 Electro-Cell在含有100 μg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产生菌落。 --------------------------------BL21（DE3）pLysS细菌菌株 BL21（DE3）pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。BL21（DE3）pLysS对λDE3（1）是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I，编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21（DE3）pLysS含有pLysS质粒，他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。包装： P9811 500μlhttp://www.promega.com/tbs/tb095/tb095.pdf

转化（transformation）是将一种生物（供体）的遗传物质（通常为DNA）转入另一种生物（受体）并使其在受体中得以保存和繁殖的过程。大肠杆菌不是天然感受菌，在低温（0~5℃）环境下经CaCl2处理，细胞壁变松变软后能摄入外源DNA，这种状态称为感受态细胞（competentcell）。经CaCl2处理后大肠杆菌与外源DNA混合进行42℃短时间的热激可利于外源DNA转化，然后再经过恢复和筛选，选择转化子。生物帮上面有这方面的详细内容，millipore,默克密理博,,millipore公司,反渗透纯水系统,millipore纯水系统。

转化（transformation）是将一种生物（供体）的遗传物质（通常为DNA）转入另一种生物（受体）并使其在受体中得以保存和繁殖的过程。大肠杆菌不是天然感受菌，在低温（0~5℃）环境下经CaCl2处理，细胞壁变松变软后能摄入外源DNA，这种状态称为感受态细胞（competent cell）。经CaCl2处理后大肠杆菌与外源DNA混合进行42℃短时间的热激可利于外源DNA转化，然后再经过恢复和筛选，选择转化子。生物帮上面有这方面的详细内容， http://www.bio1000.com/zt/product/millipore.html millipore,默克密理博,,millipore公司,反渗透纯水系统,millipore纯水系统。

Trans1-T1 Phage Resistant化学感受态细胞适用于高效的DNA的克隆和质粒扩增，减少克隆DNA同源重组的发生，提高质粒DNA的产量和质量。