pcr原理是什么？

荧光定量pcr原理是：在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。开始时，探针完整地结合在DNA任意一条单链上，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，检测不到荧光信号；PCR扩增时，Taq酶将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。荧光定量PCR的应用1、核酸定量分析对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测。2、基因表达差异分析比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等)，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。3、SNP检测检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的SNP检测将会变得简单而准确。

PCR原理三步骤 变性-退火-延伸。双链DNA在90～95℃变性，变为DNA单练，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸进行复制。

所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。其原理是在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

PCR是用来获取大量DNA片段的，恒温就是保持在一定的温度下。

荧光定量PCR原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值。荧光域值（threshold）是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍，即threshold。Ct 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。Ct值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值如下图所示。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。荧光定量检测荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。

qpcr原理是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流。应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。由于qPCR是实时定量检测致病病原体基因核酸，因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。扩展资料实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性最好的定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。参考资料来源：百度百科-QPCR

聚合酶链式反应（英文全称：Polymerase Chain Reaction）,聚合酶链式反应 简称PCR.聚合酶链式反应（PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点.它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术. 编辑本段发展简史 　　人类对于核酸的研究已经有100多年的历史.20世纪60年代末70年代初,人们致力于研究基因的体外分离技术.但是,由于核酸的含量较少,一定程度上限制了DNA的体外操作.Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想.但是,当时的基因序列分析方法尚未成熟,对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未发现,寡核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段,这种想法似乎没有任何实际意义. 　　1985年,美国科学家Kary Mullis在高速公路的启发下,经过两年的努力,发明了PCR技术,并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文.从此,PCR技术得到了生命科学界的普遍认同,Kary Mullis也因此而获得1993年的诺贝尔化学奖. 　　但是,最初的PCR技术相当不成熟,在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看不中用”的实验室技术.1988年初,Keohanog通过对所使用的酶的改进,提高了扩增的真实性.而后,Saiki等人又在黄石公园从生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶,使得PCR技术的扩增效率大大提高.也正是由于此酶的发现使得PCR技术得到了广泛地应用,使该技术成为遗传与分子生物学 分析的根本性基石.在以后的几十年里,PCR方法被不断改进：它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片段.到目前为止,PCR技术已有十几种之多,例如,将PCR与反转录酶结合,成为反转录PCR,将PCR与抗体等相结合就成为免疫PCR等. 编辑本段技术原理 　　DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径.双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝.在聚合酶链式反应 实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链.因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制. 　　但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展.发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床. 编辑本段工作原理 　　类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火（复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时聚合酶链式反应 间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板.每完成一个循环需2～4分钟,2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍. 编辑本段反应特点 　　特异性强 　　PCR反应的特异性决定因素为： 　　①引物与模板DNA特异正确的结合； 　　②碱基配对原则； 　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性； 　　④靶基因的特异性与保守性. 　　其中引物与模板的正确结合是关键.引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的.聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合（复性）可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度.再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高. 　　灵敏度高 　　PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=10-6）水平.能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU（空斑形成单位）；在细菌学中最小检出率为3个细菌. 　　简便、快速 　　PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2～4 小时完成扩增反应.扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广. 　　对标本的纯度要求低 　　不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板.可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测. 编辑本段反应五要素 　　参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 　　引物：引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增. 　　设计引物应遵循以下原则： 　　①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右. 　　②引物扩增跨度：以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段. 　　③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带.ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列. 　　④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3"端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带. 　　⑤引物3"端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败. 　　⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处. 　　⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性.引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会. 编辑本段反应体系与反应条件 　　标准的PCR反应体系： 　　10×扩增缓冲液10ul 　　4种dNTP混合物各200umol/L 　　引物各10～100pmol 　　模板DNA0.1～2ug 　　TaqDNA聚合酶2.5u 　　Mg2+1.5mmol/L 　　加双或三蒸水至100ul 　　PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+) 编辑本段PCR反应条件的选择 　　PCR反应条件为温度、时间和循环次数. 　　温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点.在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至40 ～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸.对于较短靶基因（长度为100～300bp时）可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸（此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性）. 　　①变性温度与时间：变性温度低,解链不完全是导致PCR失败的最主要原因.一般情况下,93℃～94℃min足以使模板DNA变性,若低于93℃则需延长时间,但温度不能过高,因为高温环境对酶的活性有影响.此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性,就会导致PCR失败. 　　②退火（复性）温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素.变性后温度快速冷却至40℃～60℃,可使引物和模板发生结合.由于模板DNA 比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞.退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度.对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想.引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： 　　Tm值（解链温度）=4(G+C)+2(A+T) 　　复性温度=Tm值-(5～10℃） 　　在Tm值允许范围内, 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合, 提高PCR反应的特异性.复性时间一般为30～60sec,足以使引物与模板之间完全结合. 　　③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性： 　　70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 　　70℃ 60核苷酸/S/酶分子 　　55℃ 24核苷酸/S/酶分子 　　高于90℃时, DNA合成几乎不能进行. 　　PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合.PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够 的.3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min.延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现.对低浓度模板的扩增,延伸时间要稍长些. 编辑本段酶及其浓度 　　目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶.催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U（指总反应体积为100ul时）,浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少. 　　dNTP的质量与浓度　dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系,dNTP粉呈颗粒状,如保存不当易变性失去生物学活性.dNTP溶液呈酸性,使用时应配成高浓度后,以1M NaOH或1M Tris.HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5,小量分装, -20℃冰冻保存.多次冻融会使dNTP降解.在PCR反应中,dNTP应为50～200umol/L,尤其是注意4种dNTP的浓度要相等（ 等摩尔配制）,如其中任何一种浓度不同于其它几种时（偏高或偏低）,就会引起错配.浓度过低又会降低PCR产物的产量.dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低. 　　模板（靶基因）核酸　模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本.SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀； 蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀核酸.提取的核酸即可作为模板用于PCR反应.一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR扩增.RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法,要防止RNase降解RNA. 　　Mg2+浓度　Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响,在一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为200umol/L时,Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜.Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少. 编辑本段工作步骤 　　PCR反应的基本过程 标准的PCR过程分为三步（如图所示）： 　　1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下, 　　氢键断裂,形成单链DNA 　　2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低,引物与 　　DNA模板结合,形成局部双链. 　　3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活 　　性）的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延 　　伸,合成与模板互补的DNA链. 　　每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍. 　　现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度. 编辑本段循环参数 　　1、预变性（Initial denaturation）． 　　模板DNA完全变性对PCR能否成功至关重要,一般95℃加热3-5分钟. 　　2、引物退火（Primer annealing） 　　退火温度一般需要凭实验（经验）决定. 　　退火温度对PCR的特异性有较大影响. 　　3、引物延伸 　　引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）. 　　延伸时间随扩增片段长短及所使用Taq酶的扩增效率而定. 　　4、循环中的变性步骤 　　循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性： 　　变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败. 　　5、循环数 　　大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增. 　　6、最后延伸 　　在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链. 　　PCR-PCR常见问题 编辑本段电泳检测时间 　　一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失. 　　假阴性,不出现扩增条带 　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 　　模板：①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模 板核酸变性不彻底.在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处 理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改. 　　酶失活：需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性.需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭. 　　引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因.有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度 高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为：①选定一个好的引物合成单 位.②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决.如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度.③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效.④引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等. 　　Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特 异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带. 　　反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul.或100ul,应用多 大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败. 编辑本段物理原因 　　变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性；退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率.有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一. 　　靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某 段缺失使引物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的.假阳性出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高.引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列.靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性.需重新设计引物. 　　靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性.这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒.所用离心管及样进枪头等均应一次性使用.必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸.二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性.可互相拼接,与引物互补后,可扩增出PCR产物,而导致假阳性的产生,可用巢式PCR方法来减轻或消除. 　　出现非特异性扩增带 　　PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有：必要时重新设计引 物.减低酶量或调换另一来源的酶.降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性,65℃左右退火与延伸）. 　　出现片状拖带或涂抹带 　　PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带.其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起.其对策有：减少酶量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.适当降低Mg2+浓 度.增加模板量,减少循环次数. 编辑本段克隆PCR产物 　　1）克隆PCR产物的最优条件是什么? 　　最佳插入片段：载体比需实验确定.1：1（插入片段：载体）常为最佳比,摩尔数比1：8或8：1也行.应测定比值范围.连接用5ul 2X连接液,50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶,插入片段共10ul.室温保温1小时,或4℃过夜.在这2种温度下,缺T-凸出端的载体会自连,产生蓝斑.室温保温1小时能满足大多数克隆要求,为提高连接效率,需4℃过夜. 　　2)PCR产物是否需要用凝胶纯化? 　　如凝胶分析扩增产物只有一条带,不需要用凝胶纯化.如可见其他杂带,可能是积累了大量引物的二聚体.少量的引物二聚体的摩尔数也很高,这会产生高比例的带有引物二聚体的克隆,而非目的插入片段.为此需在克隆前做凝胶纯化. 　　3）如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验? 　　A）涂布未转化的感受态细胞. 　　如有菌落,表明氨苄失效,或污染上带有氨苄抗型的质粒,或产生氨苄抗型的菌落. 　　B）转化完整质粒,计算菌落生长数,测定转化效率. 　　例如,将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化.用SOC稀释到1000ul后,用100ul铺板.培养过夜,产生1000个菌落.转化率为：产生菌落的总数/铺板DNA的总量. 　　铺板DNA的总量是转化反应所用的量除以稀释倍数.具体而言转化用10ng DNA,用SOC稀释到1000u后含10 ng DNA,用1/10铺板,共用1 ng DNA.转化率为： 　　1000克隆X10（3次方） ng /铺板1 ng DNA ug=10（6次方）cfu/ ug 　　转化pGEM-T应用10（8次方）cfu/ ug感受态细胞 　　如没有菌落或少有菌落,感受态细胞的转化率太低. 　　C）如用pGEM-T正对照,或PCR产物,产生>20-40蓝斑（用指定步骤10（8次方）cfu/ ug感受态细胞）,表明载体失去T.可能是连接酶污染了核酸酶.T4 DNA连接酶（M1801,M1804,M1794）质量标准好无核酸酶污染,不应用其它来源的T4 DNA连接酶替换. 　　D）用pGEM-T或pGEM-T Easy载体,连接pGEM-T正对照,转化高频率感受态细胞（10（8次方）cfu/ug）,按照指定的实验步骤,可得100个菌落,其中60%应为白斑,如产生>20-40蓝斑,没有菌落或少有菌落,连接有问题. 　　4）对照实验结果好,却没有回收到目的片段,实验出了什么问题? 　　A）连接用室温保温1小时,能满足大多数克隆,为提高效率,需4℃过夜. 　　B）插入片段带有污染,使3`-T缺失,或抑制连接,抑制转化.为此,将插入片段和pGEM-T正对照混合,再连接.如降低了对照的菌落数,插入片段需纯化,或重新制备.如产生大量的蓝斑,插入片段污染有核酸酶,使pGEM-T或pGEM-T Easy载体3`-T缺失. 　　C）插入片段不适于连接.用凝胶纯化的插入片段,因受UV过度照射,时有发生.UV过度照射会产生嘧啶二聚体,不利于连接,DNA必需重新纯化. 　　D）带有修复功能的耐热DNA聚合酶的扩增产物末端无A,后者是pGEM-T或pGEM-T Easy载体克隆所需.加Taq DNA聚合酶和核苷酸可在末端加A.详情查pGEM-T pGEM-T Easy载体技术资料（TM042）. 　　E）高度重复序列可能会不稳定,在扩增中产生缺失和重排,如发现插入片段高频率地产生缺失和重排,需用重组缺陷大肠杆菌菌株,如SURE细胞. 编辑本段PCR反应的分类 SOEing-PCR（重叠PCR） 　　重叠区扩增基因拼接法,是基于普通PCR 技术衍生出的一种基因融合和定点突变的有效方法.众所周知,由于引物只需要与模板有效结合,尤其是5"端序列不必与模板完全配对,因此扩增引物的5"端可以添加一种甚至是两种酶切位点,以便于后期克隆.SOEing 法正是利用这一特点,向两个独立基因掺入一段新的序列以达到两个基因出现一个重叠区的目的,3"端的结合使基因融合或定点突变得以实现. RT-PCR（逆转录PCR） 　　RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR）,是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.

聚合酶链反应（PCR）的基本原理是一种酶促合成反应。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下，在DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增延伸。试验先通过加热变性，使DNA双螺旋的氢链断裂，解离成单链DNA；然后通过退火，突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链；然后再在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸底物和镁离子存在的条件下，在聚合酶催化下，以引物为起始点，使DNA链延伸。扩展资料：PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5"-3")的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。反应特点：特异性强；灵敏度高；简便、快速；纯度要求低。参考资料：叶顺章. 聚合酶链反应在性病诊断中的应用[J]. 中华皮肤科杂志, 1996(3):147-148.百度百科-聚合酶链式反应

PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物. PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物 PCR扩增仪 延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段. 在环境检测中,靶核酸序列往往存在于—个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个基因,杂交就显得不敏感.使用PCR技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构.PCR技术常与其他技术结合起来使用,如RT-PCR、竞争PCR、槽式PCR、RAPf)、ARDRA等.

不用较这个真,懂的原理就行了.本质上一样的.

PCR产物的电泳检测时间 　　一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失. PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 酶切分析： 根据PCR产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究. 　　分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据,也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法. 　　Southern印迹杂交： 在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针,与PCR产物杂交.此法既可作特异性鉴定,又可以提高检测PCR产物的灵敏度,还可知其分子量及条带形状,主要用于科研. 　　斑点杂交： 将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上,再用内部寡核苷酸探针杂交,观察有无着色斑点,主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析. 　　氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀 核酸.提取的核酸即可作为模板用于PCR反应.一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR扩增.RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法,要防止RNase降解RNA. 温度与时间的设置： 　　基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点.在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至40 ～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸.对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性). 实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一.因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： 1. 戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套； 2. 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染； 3. 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底.若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； 4. 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度； 5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管； 6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性； 7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器.如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区； 8. 重复实验,验证结果,慎下结论.

1、蝠鲼（Mobula），又被称为魔鬼鱼与毯魟。是软骨鱼纲、蝠鲼科，体呈菱形，宽达6m余。体青褐色。口宽大。眼下侧位，能侧视和俯视。头侧有1对有胸鳍分化的头鳍，向前突出。背鳍小，胸鳍翼状。尾细长如鞭，具尾刺。平时底栖生活，但有时上升表层游弋，并做远程洄游，行动敏捷。以浮游甲壳类和小鱼为食。卵胎生。 2、分布于热带和温带各海区，中国见于东海、南海和台湾沿海。常见的如日本蝠鲼（Mobula japonica）、双吻前口蝠鲼（Manta birostris）。

古代火折子的原理是复燃。将已经燃烧的东西与空气隔绝，会处于一种不燃但是也没有熄灭的状态，等到再遇到氧气的时候，就会燃烧起来。火折子是通过氧气而操作使用，这种原理一直被应用到现在。火折子是用很粗糙的土制纸卷成紧密的纸卷，用火点燃，然后将其熄灭，这个时候虽然没有火苗，但是能看到红色的亮点仿佛在隐隐燃烧，就像是灰烬中的余火，能保持很长时间不灭。在需要点火的时候，只要一吹，就能让它复燃，不过吹火折子也是需要技巧的，需要突然、短促、有力。火折子里面是磷以及一些易氧物质，气温高的情况下，用嘴吹，或者快速甩，就会和氧气充分接触，然后发生剧烈反应而燃烧。火折子外面是一种一种极容易被点燃的草纸，乡下从前多是用来点烟做火引的。火折子虽然是一种小日用品，但是足以见证古代劳动人民的思想和智慧。在古代，还没有各种关于点燃条件的系统知识，古人就能发明出这种小物件，足以见得古人的智慧是难以预测的。

necklace的读音是：英["nekl?s]。necklace的读音是：英["nekl?s]。necklace的详尽释义是n.(名词)项链项圈脖链儿绞索轮胎项圈。necklace名词复数:necklaces；过去式:necklaced；过去分词:necklaced。一、详尽释义点此查看necklace的详细内容n.(名词)项链项圈脖链儿绞索轮胎项圈v.(动词)给（某人）戴火项链（将燃烧的轮胎挂在脖子上将其杀死）二、英英释义Noun:jewelry consisting of a cord or chain (often bearing gems) worn about the neck as an ornament (especially by women)三、网络解释1. 项鍊：这个 beads 虽然名为珠珠,长的却像是项炼 (necklace),但是大家都说 beads,因为这些项炼主要都是用一颗一颗的珠珠所串成的. 而 beads 的主要颜色则是紫色、绿色和金色,这也正是 Mardi Gras 的三个主题色彩. 把这种 beads 戴在身上,2. necklace2. 项圈,项链：responsible 有责任的,(应)责任的 |necklace 项圈,项链 | arrange 安排3. 项链的：earring 耳环的 |necklace 项链的 | navel jewellery 肚脐饰品的四、例句I value this necklace at $5,000.我估计这条项链值五千美元。The girl is wearing a bead necklace.女孩戴了一条珠子项链。五、经典引文She removed..her necklace, gold bangles and rings.出自：R. K. Narayan六、情景对话Before Leaving Home-(离家前)A：Susan, good evening. Why are you so dressed up??苏珊，晚上好。你怎么打扮成这样？B：I am on my way out to a New Year"s banquet. How do I look? Is my make-up OK?我要去参加一个新年宴会。我看上去怎么样？我的妆可以吗？A：You look great. Your make-up is perfect.你看上漂亮极了。你的妆也是无可挑剔的。necklace的解释B：Do you think I should wear a different dress?你觉得我要换件礼服吗？A：No, the one you have on looks fabulous, especially with your hair like that.不用，你穿这件衣服非常漂亮，尤其是配着你的发型。necklaceB：Thanks for saying. Do you have any ideas whichnecklace I should wear?谢谢你这么说。你觉得我应该戴哪条项链呢？necklace的意思A：With that dress I"d say your white diamondnecklace would look perfect.我不得不说这条白钻项链配你的衣服堪称完美B：Thanks for helping out?. Now that I"m ready, what are you doing tonight?谢谢你的帮忙。我已经准备好了，你今天晚上干什么？A：Not much, just a house party? with some friends.没什么。只是在家里和朋友们聚一聚。B：Sounds fun. Anyone I know?听起来很有趣。有我认识的人吗？A：Yeah, most of the people are from our office.有，大多数人是我的同事。necklace在线翻译B：Sounds Like I"m missing out on? a good time. Oh, well, there is always next year.听起来我要错过一段开心的时刻了。算了，还有明年呢。A：I"m sure you"ll have fun no matter where you go. Remember to take your bag.我保证无论你去哪里都会玩得很开心的。记得带上你的包。necklace的相关临近词necrosis、neck、necklaced、Necklace dove、Necklace Nassa、necklace issue、necklace model、necklace-like、necklace problem、necklace pendant、necklace-shell、Necklace T-graph点此查看更多关于necklace的详细信息

1、necklace英[u02c8neklu0259s]美[u02c8neklu0259s]，n.项链;vt.给(某人)戴火项链(将燃烧的轮胎挂在脖子上将其杀死)。 2、[例句]When did you first miss the necklace?你最早发觉项链不见了是什么时候？

火折子中含有硝、硫磺、松香，樟脑等易燃物质，在常温下很易燃，当人们对火折子吹气是，加速了火折子内的氧度气流动，其内部成分产生自燃。气温高的情况下，用嘴吹，或者快速甩，它就会与氧充分接触而起剧烈反应而燃烧。真正的火折是一种极容易被点燃的草纸，乡下从前多是用来点烟做火引的。扩展资料：一般的火折子的纸只是普通未打孔的纸钱（烧给死人的钱纸）也可是草纸。制作时把纸裁成比竹筒还长的长度来剪下来，在卷起来，松紧度适中，卷成于竹筒内般粗大小，最后插进竹筒里。然后点燃，并盖住通风的盖子。到需要用时，把盖子拔掉，然后对着火折子轻轻吹，当然要吹的有技巧才行。以前乡下多用于抽水烟和生火的。

「邻居、邻近地区」英文 应该怎么说呢？比方说你住家附近的邻居跟附近邻近地区，该怎么用英文表达呢？其实，邻居的英文叫做neighbor，邻近地区的英文则叫做neighbourhood，可别搞错罗！ 下面整理了「neighbor、neighbourhood」的英文例句与中文意思，赶快学起来吧！ 1.neighbor 邻居 邻居的英文是neighbor，neighbor指的是人唷，可能是住你家隔壁，或是楼上、楼下的居民。 neighbor相关英文例句与中文意思： 例： Jenny is my neighbor. 珍妮是我的邻居。 例： Have you met Jenny, my next-door neighbour? 你见过我隔壁的邻居珍妮吗？ 2.neighbourhood 邻近地区 邻近地区的英文则叫做neighbourhood，neighbourhood指的不是人，而是居住在你家附近那一带的街访、街区。 neighbourhood 英文例句与中文意思 例： They live in a poor neighbourhood. 他们生活在贫穷的街区。 例： They live in a middle class neighbourhood. 他们住在中产阶级社区。 neighbor, neighbor 中文, neighbor 意思, neighbor 翻译, neighbourhood, neighbourhood 中文, neighbourhood 意思, neighbourhood 翻译, 街区 英文, 街访 英文, 街访邻居 英文, 邻居 英文, 邻近地区 英文

Manta歌手：刘柏辛作词:刘柏辛作曲:刘柏辛Not a swimming pool, It"s an ocean（游泳池不够，我要一片汪洋）Dive in that cash, like l"m chosen（在海底的宝藏里狂欢，就像我是天选之子）That my 24 karat, got you frozen ya?（二十四克拉的钻石，冰冷又闪耀）活在不一样世界又怎样?He"ll be on the surface, Lur, lurkin"（他在地表以上偷偷观察着我）Overheated up, That gon" make me nervous（炽热的目光穿透海面，这高温让我紧张不已)水里呼吸着 扇动不属于我的翅膀Lucifer（路西法）别慌这不是我的名字呢Now he can start the fishing, buy me another-round（时间到，他的阴谋要开始了）Diamonds on me like I"m fresh outta water（我从海面浮现，亮晶晶的钻石点缀在我的身体）A Mariner（他像一个海员一样熟练）Reelin" reelin" me in with that thin line（温柔地用纤细的鱼线慢慢引我上钩）Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Manta(魔鬼鱼）I fly in water, lil Manta(小魔鬼鱼在海底飞行）Devilfish Manta(他们叫我魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）I fly like a Manta（我像魔鬼鱼一样沉默地飞翔）I fly in water, lil Manta（在水世界的飞行家）Devilfish Manta（小魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）Glitter on my skin I"m a shiner（肌肤上的水珠滚动下来，我的光芒更加灿烂）Got a flight to catch tomorrow back to China（明天我还得飞回中国）我的行踪 难以捉摸在哪but when I bust it open boy you better swim（但当机会的大门敞开，你最好使劲游起来）那么危险怎么还要追但我没有时间可以浪费我从未试过在陆地上飞起来I"ll be ridin"on a wave drippin" water tonight（我只是喜欢乘着海浪腾空跃起）Manta(魔鬼鱼）I fly in water, lil Manta(小魔鬼鱼在海底飞行）Devilfish Manta(他们叫我魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）I fly like a Manta（我像魔鬼鱼一样沉默飞翔）I fly in water, lil Manta（水世界的飞行家）Devilfish Manta（小魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）Devilfish…Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Manta(魔鬼鱼）I fly in water, lil Manta(小魔鬼鱼在海底飞行）Devilfish Manta(他们叫我魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）I fly like a Manta（我像魔鬼鱼一样沉默地飞翔）I fly in water, lil Manta（水世界的飞行家）Devilfish Manta（小魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer

项链英文是necklace。一、necklace释义：1、n.项链；（主要指南非的）火项链。2、v.（主要指南非）用火项链处决（某人）。二、词组搭配：1、diamond necklace：钻石项链。2、pearl necklace：珍珠项链。三、变形词：1、复数：necklaces。2、第三人称单数：necklaces。3、现在分词：necklacing。4、过去式：necklaced。5、过去分词：necklaced。necklace的例句：1、The necklace was cursed.这条项链上附有会给人带来灾难的符咒。2、When did you first miss the necklace?你最早发觉项链不见了是什么时候？3、A plain necklace was her only adornment.她身上的饰物就只有一串简单的项链。4、The necklace consisted of amethysts set in gold.这条项链是金镶紫水晶的。5、She had been hoodwinked into buying a worthless necklace.她受骗买了条一文不值的项链。6、Is this your necklace,Mary？玛丽，这是你的项链吗？7、She wears a necklace.她戴着一条项链。8、Friction marks indicated that they did,indeed,once form part of a necklace or bracelet.摩擦痕迹显示他们曾经是项链或手镯的一部分。9、My friend got very angry when he heard this and said he would buy a necklace somewhere else.我的朋友听到后非常生气，说他要到别的地方买一条项链。10、The scene she was wearing a black dress and dark sunglasses with a pearl necklace and long black gloves.在那个场景中，她穿着黑色的裙子，戴着黑色的太阳镜，珍珠项链和黑色的长手套。

1、学习经典著作、学习最新理论;2、实践实践再实践。3、拜师学艺;。。。 优秀管理者素质细化的96条 一、基本精神 1.凡事合理化为目标 2.敬业乐业的精神 3.有品质观念与数字观念 4.善于时间管理,有时间观念 5.追根究底,卓越精神,好还要更好 6.整体规划,成本效益,人性管理,ABC原则 7.认同公司经营理念,正确的抱负、理想和方向 8.从基础做起,不怕吃苦,不好高骛远 9.为人所不能为、不愿为，而做得好 10.要问我能获得多少之前,先问我能替公司做什么 11.待遇是工作绩效的副产品:一流人才创造一流利润,一流利润才有一流待遇 12.积极主动的态度 13.忠诚度与责任感 14.做人、做事有原则有重点 15.就业要有作为，职务不分贵贱 16.永远怀着一颗感恩的心 二、关于工作方面 17.认清目标，实施目标管理 18.做好自主管理、检查 19.工作标准化、管理制度化 20.职务工时分析，人员合理化 21.有创新与突破 22.有主见与果断力 23.尽量吸收工作新知识新方法 24.尽量使用作业电脑化 25.全心投入，尽心尽力工作 26.做好P-D-C-A管理循环工作 27.彻底执行进度控制，保证在限期内完成工作 28.做好5S整理整顿管理 29.工具齐备，保养妥善 30.公正合理的工作分配 31.随时检查工作绩效 32.重视数据，善于统计分析 33.注重安全与保密 34.尽可能尊重部下的建议 35.研究如何改进工作 36.必须具备工作上所需的知识 37.周密计划 38.审慎检讨、采取改善行动 三、关于上司方面 39.尽力更正上司的误解 40.上司所发命令或政策，如有不明了之处应请示明白 41.对公司及上司有信心 42.贯彻上司的命令 43.不烦扰上司 44.凡亲身解决的问题，应向上司报告 45.有备无患，随时掌握状况 46.不在背后批评公司与上司 47.对本单位工作负全责不作任何解释 48.必要请示上司的问题须尽速呈报商讨 四、关于同事部属方面 49.定期报告工作经过及结果四、关于同事方面 50.互相合作协助 51.不侵犯他单位之职务 52.成功有效的会议主持 53.良好的人际关系与沟通 54.互相交换知识见解 55.与他单位取得密切联系与协调 56.均衡适当的组织能力 57.对同事诚心与热心 58.了解同时的工作职务 59.必要时可以代理处理其职务 60.接受同事的批评建议五、关于部属方面 61.激励部属工作的责任 62.培养团体协力精神与士气 63.不要吝于说鼓励、赞许慰劳人的话 64.维持纪律 65.接受部署个人问题的请教与商谈，并协助解决 66.公平对待部属 67.奖励部属、培养正确嗜好与娱乐 68.命令与指示应恳切、明了 69.让部属了解工作方针及目的 70.奖励并实施部属之提案改善 71培养各人的长处，运用他的短处 72.尽避免处罚、责骂 73.教育训练部署 74.培养职务代理人 75.有关部属的事尽量告诉部属 76明确指示各人的职务 77.选才、育才、用才、留才 78.关心部属、了解部属 79.人尽其才，适才适所，依个人能力分配工作六、本身应如何自处 80.摒弃优越感与虚荣心 81.建立并维护良好形象 82.运用幽默感，能言善道 83.不断学习，充实自己 84.成功而不自满 85.监督者须负全部责任 86.不说下属的坏话 87.不可阴谋行事，投机取巧 88.经常保持情感的平静 89.清楚自卑感 90.勿做轻诺与轻浮 91.自我健康管理，精力旺盛 92.择善固执但不执着，平常心 93.处处做模范，以身作则 94.对于本身缺点与短处应有所自觉并克服它 95.保持部下的面子不与争论 96.冷静而细心、从容不迫

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问题一：Office 2003如何设置文档打开密码 工具-》选项-》安全性 看见了吧？ 有2005了吧 问题二：邻居的英语单词是什么 邻居的英语单词:neighbour 还有一个neighbourhood，意思与neighbor 有区别，neighborhood 意思是:街坊或者社区。 问题三：邻居的英文单词怎么写 neighbor 英 ["ne?b?] 美 [?neb?] n. 邻居，邻国 adj. 邻近的，邻接的 vi. 友好;毗邻而居 vt. 邻接 问题四：邻居的英文怎么读？ 邻居 neighbor neighbour vicinage 问题五：邻居的英文 neighbour 问题六：假如你是很多朋友喜欢类型的女孩;或是一个已婚的女人;你该怎么拒绝他们对你说: "我爱你 "呢? 这么简单的问题啊。 你可以对他们说，谢谢你的爱，你把它给了我，我真的感到我好幸福，是这个世界上最快乐的人了，我拥有了你的爱。呵呵（然后向他笑笑，稍稍鞠躬）但是对不起，我。。。。。。。。想你的爱给错人了。常不想伤害你。我们没有结果。我知道这句话你一定思考了很久，我知道你是个好人，我知道你很负责任，我知道你的肩膀值得我来靠，我知道你的双臂禁得住我撒娇。但是你有没有想过我们最后的结果将是什么呢。我不愿意去想它，在我面前根本没有结果。我们是朋友，好朋友，最好的朋友，比恋人还好的朋友，好吗？恋人其实没有什么意义。我们做朋友吧 问题七：邻居为什么有两个英语单词 neighbor 英["ne?b?] 美[?neb?] （美式的） n. 邻居，邻国; adj. 邻近的，邻接的; vi. 友好; 毗邻而居; [例句]A neighbor sheltered the boy for seven days. 一个邻居收留了这个男孩在他家藏了7天。 [其他] 第三人称单数：neighbors 复数：neighbors 现在分词：neighboring过去式：neighbored 过去分词：neighbored neighbour 英["ne?b?(r)] 美[?neb?] n. 邻居; 邻国; 邻近的人[物]; 世人; vt. 接壤; 邻接; vi. 邻近; 与…有睦邻关系; [例句]I got chatting with my neighbour in the garden. 我在花园里和邻居聊了一会。 [其他] 第三人称单数：neighbours 复数：neighbours 现在分词：neighbouring过去式：neighboured 过去分词：neighboured vicinage 英["v?s?n?d?] 美["v?s?n?d?] n. 附近的地区，邻居; [例句]The vicinage effects and wake effects of H~+_2 molecular ion in solids are also discussed. 作者对H+2在固体膜中的电荷交换、分子关联效应以及尾流效应进行了必要的分析和讨论。

MANTA的成员季少一的出生日期是**1999年4月18日**。

古代火折子的原理是化学反应。火折子是由磷以及一些易氧物质组成，在气温高的情况下，用嘴吹，或者快速甩，它就会与氧充分接触而起剧烈反应而燃烧。火折子在古代用很粗糙的土制纸卷成紧密的纸卷，用火点燃后再把它吹灭，这时候虽然没有火苗但能看到红色的亮点在隐隐的燃烧，就象灰烬中的余火，能保持很长时间不灭。火折（摺）子火镰子、火石、火折子是一套，火折子是易于携带之简便照明和取火用具。较好的火折子的纸制作方法是以白（红）薯蔓浸水中泡浓，取出捶扁，再泡加棉花、芦苇缨子再捶，晒干，加硝、硫磺、松香，樟脑等易燃物质和多种香料而制成的。最后折成长扁筒或拧为绳，晚间燃之似无火放在竹筒里，用时取出一晃即燃，很易燃，适合封建时代的有钱人家和帝王。更多关于古代火折子的原理是什么，进入：https://www.abcgonglue.com/ask/ead0c61616096202.html?zd查看更多内容

古代火折子的原理是复燃。火折子是用土制纸卷成的紧密的纸卷，用火点燃后吹灭，虽然没有火苗但在隐隐的燃烧，能保持很长时间不灭，用时把盖子拔掉，对着火折子轻轻吹即可点燃。 古代火折子运用了什么原理 古代火折子运用了复燃的原理，指已经燃烧的东西因缺氧而处于半燃半灭，获得氧气后立即燃烧。 古代火折子也称火摺子，是古代中国人发明的最早的引火设备，是一种小巧又方便的生火设备。 古代火折子里面有磷及一些易氧物质，气温高时，用嘴吹或快速甩，与氧充分接触而剧烈反应燃烧。

刘伯辛在《我是歌手》节目中演唱了一首《Manta》歌曲，向大家证明了自己的唱歌的实力，并且这首歌是刘伯辛作词作曲的。刘伯辛的这一期的节目我有看过，与说实话，我一直觉得刘伯辛非常的有风格特色，《Manta》这首歌可以说是非常有刘伯辛的歌曲特色，当时这一期刘伯辛在舞台上的气场真的十分的足，我还记得当时我看这期节目的时候，一个镜头给到了后台选手们，每个选手都是大吃一惊的感觉，被刘伯辛的超强的舞台风格跟歌曲呈现力度所震撼到了，我当时隔着屏幕也惊呆了，《Manta》这首歌曲算是首英文歌曲，歌词中只有几句是中文，你能感受到刘伯辛非常擅长唱英文歌曲，在舞台上刘伯辛彷佛就是一个女王，不仅仅把《Manta》这首歌诠释的非常有个人风格特色，还展现出了自己超强的舞台风格，把个人那番强大的气场，以及个人魅力都散发出来了。刘伯辛在《我是歌手》中演唱的《Manta》这首歌，算是真正彻底让业界以及大众看到了刘伯辛的唱歌实力，其实我对刘伯辛还是有所关注的，早期的刘伯辛是参加《中国新说唱》取得了不错的成绩，如果说《中国新说唱》只是让大家觉得刘伯辛唱歌还不错的话，那么在《我是歌手》中的表现可谓是让大家大开眼界，让你见识并知道了这个年轻且具有强烈个人风格特色的刘伯辛十分的有实力，十分的有魅力，可以说刘伯辛这首《Manta》，不仅仅证明了自己，也让大家都认可了刘伯辛的实力，看到了刘伯辛那番强有力的唱歌特色和气场非常足的舞台风格。

释义不同：neighborhood：地区；某地区的人。neighbor：邻居；同胞；邻近的人。侧重点不同：neighborhood：强调的是这一个邻居整体，这其中包括了人物主体，也包括人物之间的关系，以及周边的地理环境。neighbor：强调的是街坊邻居，强调人。 扩展资料 neighborhood的例句：He is street smart and is not afraid of this neighborhood（他有都市人的精明劲儿，不怕在这附近混）；neighbor的例句：Those forces launched an invasion of a neighbor"s territory（那些部队对邻国领土发动了入侵）。

都对neighbor 是美式英语neighbour 是英式英语英语中很多-our结尾的单词在美语中都写为-or扩展资料：neighbor和neighbour的区别为：来源不同neighbor：neighbor是美式英语。neighbour：neighbour是英式英语。指代不同：neighbor：邻居。neighbour：邻近的人（或物）。引证用法不同：neighbor：neighbour的基本意思是“邻居”，还可作“邻近的人〔物〕”“邻国”解。用于比喻时，可指不离左右的东西。neighbour：neighbour直接源自古英语的neahgebur，意为邻居。neighbor是美式英语的拼法，neighbour是英式英语的拼法，虽然同为英语但是美国人讲求简约，英国人则讲求谨慎这也是英、美之间文化差异所至再举例子可以看到在美英中。颜色是color；在英英中是colour，美英有很多简写，口语而非正式的用法也更多。例如：ya"ll=you will；y"all=you all；da=the；n=and；4u=for you。等等但这种拼写上省略一个u等等在现在的美英和英英中区分已经不那么明显了，在美国用neighbour大家也都可以理解，所以只管放心地用就好，不需要刻意去记其中的差别。

crayfish和crawfish均意为小龙虾，但crayfish泛指小龙虾，而crawfish也指代淡水小龙虾。lobster是龙虾(海产)小龙虾，释义小龙虾（学名：Procambarus clarkii）：也称克氏原螯虾、红螯虾和淡水小龙虾。形似虾而甲壳坚硬。成体长约5.6~11.9厘米，暗红色，甲壳部分近黑色，腹部背面有一楔形条纹。幼虾体为均匀的灰色，有时具黑色波纹。螯狭长。例句The Chinese people are crazy about crawfish.中国人非常爱吃小龙虾。I"m a big fan of garlic crawfish.我对蒜香小龙虾可谓垂涎三尺。Would you like some spicy crawfish?你要来点香辣小龙虾吗?

火折子的原理是二次燃烧。很多人好奇，古代是如何利用吹气来让火折子瞬间点燃的。大家都知道燃烧需要的条件就是：可燃物、氧气和火源，其实火折子的燃烧原理也是一样的，它的这种现象在物理学上，人们称之为“复燃现象”。它的定义是指“带火星的木条遇到纯氧（或纯度较高的氧气），重新燃烧的现象”。比照燃烧的条件，就不难理解火折子一吹就着的现象。第一，带火星，第二，遇到浓度较高的氧气。而操作其燃烧，就是从竹筒中取出带火星的火折子，向它吹气，加速氧气的流动，火折子重新燃烧，也就不足为奇了。而不用的时候之所以要把它们保存在竹筒里，也是为了让氧气与其隔绝，火折子燃烧过后，竹筒内的氧气量相对较少，更多的是一氧化碳，构不成“复燃”的条件。火折子背后意义：古人的智慧是无穷的，纵观历史长河，很多现代的物品都能在历史中找到原型。火折子的出现，意味着古人已经开始学会便捷地保存火种了，这将大大便利他们的生活。也正是在这个的基础上，人们不断地进行改良、发展，出现了各种新型的取火工具，慢慢地，才有了我们现在的打火机。

龙虾lobster虾shrimp对虾prawn海虾Seashrimp.虾仁Shelledshrimp海虾prawn,Penaeus大头虾Big-headRiverShrimp青虾、河虾、草虾、小龙虾grassshrimp;penaeusmonodon草虾crayfish小龙虾,河虾riverprawn

1、龙虾，lobster。读音：美/u02c8lɑu02d0bstu0259r/；英/u02c8lu0252bstu0259r/。 2、释义：lobster n.龙虾；龙虾肉。langouste n.（法语）龙虾。 3、例句：My favorite seafood is lobster.我最喜欢的海鲜是龙虾。

manta是马纳比省。曼塔是厄瓜多尔的城镇，属于马纳比省。在太平洋曼塔湾南岸查拉波托河畔，东南距瓜亚基尔160公里。厄第二大港口城市，是厄海产品加工和出口中心。厄海主要海、空军基地之一。厄瓜多尔：厄瓜多尔分西部沿海、中部山区、东部亚马逊河流域和加拉帕格斯群岛四种地区，气候条件多样。西部沿海平原地区属于热带雨林气候，平均气温23～25℃。中部安第斯山区。该区山间盆地属热带草原气候，山地属亚热带森林气候，海拔4000米以上常年积雪。年平均降水量在1000毫米左右，12月～次年6月为雨季，7～11月为旱季。

"neighbor"是英语单词，读音为 /u02c8neu026abu0259r/. 它的意思是“邻居”，通常指住在附近的人或事物。该单词可以用作名词或动词。作为名词，它指的是某人或某物的相邻物，尤其是指房屋的相邻物。作为动词，它指的是居住在某个地区的人们相互交往、支持和帮助，引导人们互相帮助，使得邻居之间的关系更加的和谐，大家更好。在美国英语中，该词的拼写为"neighbor"，而在英国英语中，它的拼写为"neighbour"。

它的意思是“邻居”。

2023年浙江中级经济师报考时间报名时间：8月9日至18日。中级经济师是我国国家职业资格制度中的一项重要职业资格，是专门从事经济管理和咨询工作的人员所需的专业认证。中级经济师资格考试是由中国人力资源和社会保障部主管，各省级人力资源和社会保障部门具体负责的。该考试旨在评价考生在经济学、管理学等相关领域的基本理论和实务能力，以及对国家经济政策和市场情况的了解和应用能力。中级经济师资格考试的科目包括经济学原理，管理学原理，财务管理，市场营销，人力资源管理，信息系统和数据处理等。中级经济师考试内容涵盖了广泛的经济管理知识，要求考生具备扎实的理论基础和实践技能。中级经济师资格考试分为两个阶段，即笔试和口试。笔试部分主要考察考生对经济学理论、管理学原理和实务知识的掌握程度，其中包括选择题、主观题和综合题等形式。口试部分主要考察考生的综合素质、沟通能力、业务分析能力和实际操作能力等。获得中级经济师资格认证后，具备该职业资格的人员可以从事一系列与经济管理和咨询相关的工作，如企业管理、财务管理、市场营销、人力资源管理、战略规划等。中级经济师资格证书是从事经济管理和咨询工作的重要凭证，具备中级经济师资格认证的人员在职业竞争中具有一定的优势。为了应对中级经济师资格考试，考生需要进行充分的备考准备。经济师的优势经济师通过经过专业培训和考试认证，具备扎实的经济学和管理学理论知识，以及实践应用能力。他们能够深入理解和分析经济环境，为企业和组织提供专业的经济管理和咨询服务。经济师具备较强的综合能力，包括经济分析能力、市场调研和预测能力、财务管理能力、战略规划能力等。他们能够对经济和管理问题进行系统性的分析和解决，为企业和组织提供全面的决策支持。经济师是国家职业资格认证体系中的重要角色，拥有经济师资格证书的人员在经济和管理领域具有一定的专业声誉和信誉。这有助于提高个人在行业中的竞争力和认可度，为个人发展和职业晋升创造机会。经济师资格的认证可以为个人的职业发展提供支持。拥有经济师资格证书的人员在企业和组织中拥有更多的职业机会和晋升空间。

manta是马纳比省。曼塔是厄瓜多尔的城镇，属于马纳比省。在太平洋曼塔湾南岸查拉波托河畔，东南距瓜亚基尔160公里。厄第二大港口城市，是厄海产品加工和出口中心。厄海主要海、空军基地之一。厄瓜多尔：厄瓜多尔分西部沿海、中部山区、东部亚马逊河流域和加拉帕格斯群岛四种地区，气候条件多样。西部沿海平原地区属于热带雨林气候，平均气温23～25℃。中部安第斯山区。该区山间盆地属热带草原气候，山地属亚热带森林气候，海拔4000米以上常年积雪。年平均降水量在1000毫米左右，12月～次年6月为雨季，7～11月为旱季。

火折子的原理在物理学上叫“复燃”，指的是已经在燃烧的东西因为缺氧而处在一种半燃半灭的状态，当从新获得氧气后立即开始燃烧的现象。 火折子就是用易燃的草纸人为的加个外筒，造成缺氧环境，让明火变成火星。然后打开盖子，火星从新获得足够氧气，开始从新燃烧。火折子用很粗糙的土制纸卷成紧密的纸卷，用火点燃后再把它吹灭，这时候虽然没有火苗但能看到红色的亮点在隐隐的燃烧，就象灰烬中的余火 ，能保持很长时间不灭。需要点火时只要一吹就能使它复燃，不过吹是很有技巧的，需要突然、短促、有力，送气量要大。用于夜行夜袭，用于以前抽水烟用的。一个军用一个民用。是磷以及一些易氧物质，气温高的情况下，用嘴吹，或者快速甩，它就会与氧充分接触而起剧烈反应而燃烧。真正的火折是一种极容易被点燃的草纸，乡下从前多是用来点烟做火引的。

　　邻居，指家或住处与另一人的家或住处靠紧或邻近的人;住在隔壁另外一家的或附近的人。那么你知道邻居的 英语单词 是什么吗?下面来学习一下吧。 　　 邻居英语单词1： 　　neighbor 　　 邻居英语单词2： 　　neighbour 　　 邻居英语单词3： 　　vicinage 　　 邻居的英语例句： 　　邻居家已经被盗窃三次了。 　　The house next door has been burgled three times. 　　一个邻居收留了这个男孩在他家藏了7天。 　　A neighbor sheltered the boy for seven days. 　　他常常为了噪音和邻居们争吵。 　　He was always fighting with his neighbors about the noise. 　　这些邻居被眼前的景象深深感动了。 　　The neighbors were deeply touched when they saw this. 　　我的邻居是一个具有高尚品德的人。 　　My neighbor is a man of highest virtue. 　　她委托邻居照顾她的孩子。 　　She resigned her children to the care of a neighbor. 　　她喜欢议论邻居们的是非长短。 　　She loves to gossip to her neighbors. 　　我从邻居那借了割草机来割花园里的草。 　　I borrowed a mower from my neighbor to cut grass in my garden. 　　那声音大得让邻居讨厌。 　　The noise was so loud that it was a nuisance to the neighbours. 　　邻居为什么总是看上去要比我生活得更好?(直译是：邻居家的草为什么看上去总是更鲜艳?) 　　Why does the grass always look greener on the other side of the fence? 　　邻居向警察抱怨邻居家的狗老吠. 　　Neighbours complained to the police about the dogs barking. 　　这两个邻居现已消除了他们之间的不和。 　　The two neighbors have now arranged their differences. 　　史密斯夫人生病期间由一位邻居照顾她。 　　Mrs.Smith has done for her by a neighbor. 　　这个寡妇说邻居的闲话了。 　　The widow gossiped about her neighbors. 　　不仅仅爱你深爱的人，也要爱你的邻居。你的同事甚至陌生人他们是你广义上的兄弟姐妹。 　　Love not only your loved ones, but your neighbors your coworkers strangers your brothers and sisters in humanity. 　　如果你的邻居喜好闲言碎语，那么别去凑热闹，只要一笑了之就行了。 　　If your neighbor loves to gossip, don " t add up to the gossiping but just be indifferent. 　　与此相反，他的邻居是个银行家，拥有万贯家财，却很少 唱歌 ，晚上也睡得不好。 　　His neighbor, n the contrary, Ho was rolling in wealth, sung but little and slept less. 　　上周，我接到了鲍勃u2022阿普菲尔从伦敦打来的电话，他是我在布鲁克林的邻居(也是欧柏林大学校友)。 　　I got a london call last week from Bob Apfel, a Brooklyn neighbor ( and fellow Oberlin College graduate). 　　她带着孩子逃亡，从一个邻居家跑到另一个邻居家，最后逃到了一个朋友的地下室。 　　She fled with her children, moving from neighbour to neighbour and ending up in a friend"s cellar.

有效的沟通：　　1.信息的透明程度。当一则信息应该作为公共信息时就不应该导致信息的不对称性．信息必须是公开的。公开的信息并不意味着简单的信息传递，而要确保信息接收者能理解信息的内涵。　　2.信息的反馈程度。有效沟通是一种动态的双向行为，而双向的沟通对信息发送者来说应得到充分的反馈。只有沟通的主、客体双方都充分表达了对某一问题的看法,才真正具备有效沟通的意义。方法或技巧：　一是必须知道说什么，就是要明确沟通的目的。　　二是必须知道什么时候说，就是要掌握好沟通的时间。　　三是必须知道对谁说，就是要明确沟通的对象。　　四是必须知道怎么说，就是要掌握沟通的方法。

Manta歌词歌手：刘柏辛Lexie 作词:刘柏辛作曲:刘柏辛Not a swimming pool, It"s an ocean（游泳池不够，我要一片汪洋）Dive in that cash, like l"m chosen（在海底的宝藏里狂欢，就像我是天选之子）That my 24 karat, got you frozen ya?（二十四克拉的钻石，冰冷又闪耀）活在不一样世界又怎样?He"ll be on the surface, Lur, lurkin"（他在地表以上偷偷观察着我）Overheated up, That gon" make me nervous（炽热的目光穿透海面，这高温让我紧张不已)水里呼吸着 扇动不属于我的翅膀Lucifer（路西法）别慌这不是我的名字呢Now he can start the fishing, buy me another-round（时间到，他的阴谋要开始了）Diamonds on me like I"m fresh outta water（我从海面浮现，亮晶晶的钻石点缀在我的身体）A Mariner（他像一个海员一样熟练）Reelin" reelin" me in with that thin line（温柔地用纤细的鱼线慢慢引我上钩）Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Manta(魔鬼鱼）I fly in water, lil Manta(小魔鬼鱼在海底飞行）Devilfish Manta(他们叫我魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）I fly like a Manta（我像魔鬼鱼一样沉默地飞翔）I fly in water, lil Manta（在水世界的飞行家）Devilfish Manta（小魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）Glitter on my skin I"m a shiner（肌肤上的水珠滚动下来，我的光芒更加灿烂）Got a flight to catch tomorrow back to China（明天我还得飞回中国）我的行踪 难以捉摸在哪but when I bust it open boy you better swim（但当机会的大门敞开，你最好使劲游起来）那么危险怎么还要追但我没有时间可以浪费我从未试过在陆地上飞起来I"ll be ridin"on a wave drippin" water tonight（我只是喜欢乘着海浪腾空跃起）Manta(魔鬼鱼）I fly in water, lil Manta(小魔鬼鱼在海底飞行）Devilfish Manta(他们叫我魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）I fly like a Manta（我像魔鬼鱼一样沉默飞翔）I fly in water, lil Manta（水世界的飞行家）Devilfish Manta（小魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）Devilfish…Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Fly underwater（在海底飞行）I don"t need no manner（我打破所有规则）绝不会干涸的我为海洋染色Manta(魔鬼鱼）I fly in water, lil Manta(小魔鬼鱼在海底飞行）Devilfish Manta(他们叫我魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）I fly like a Manta（我像魔鬼鱼一样沉默地飞翔）I fly in water, lil Manta（水世界的飞行家）Devilfish Manta（小魔鬼鱼）Call on me, I don"t need no romancer(别找我了，我不需要多余的浪漫）音乐总监: Kenn Wu制作人：Bijan Amir / CJ Wheeler/ Kenn Wu/刘柏辛/ Femke Weidema和声: 刘柏辛录音工程师：Kenn Wu/ Jet Chong混音师: Peter Mixman母带工程师: Randy Merrill版权公司：刘柏辛工作室 / 泥鞋文化

火折子的原理是利用了物理学上的“复燃”原理。即已经燃烧的东西，在隔绝空气的情况下，就会处于半燃半灭的状态。一旦与空气充分接触，就会起剧烈反应而燃烧。在制造火折子前，先要准备好粗糙的土纸、棉花、硫磺、磷、竹筒等物品，再将土纸按照竹筒的比例裁剪下来。接着，将棉花、硫磺、磷等材料放入土纸中，将土纸卷成竹筒般粗细，松紧度适中，然后插进竹筒中。最后，用火点燃土纸后，再将它吹灭。这时候可以看到，虽没有火苗，但有红色的亮点在隐隐燃烧。就如同灰烬中的余火，能保持很长时间不灭。在这种情况下，要立刻盖上竹筒的盖子，以隔绝空气。等需要使用时，打开盖子，对着火折子猛吹就行。火折子历史关于人类用火的历史有着很遥远的历史了，当古人不再对火产生恐惧后，就开始了利用火，最早是从大自然雷击后的山火中取得火种后，就会长时间将其保留，主要的办法是不断往火中添加木柴。后来又开始发明和制造一些取火工具，如钻木取火，还有从自然界中发现一种燧石，当其与铁器击打后就会产生火花并引燃可燃物，古人就用燧石与钢制的火镰作为打火工具，所以也被称为火石。

《Manta》是刘柏辛演唱的歌曲，由刘柏辛创作词曲，收录于刘柏辛2019年发行的音乐专辑《Meta Ego》。2020年，该曲获得融合嘻哈颁奖典礼“最佳MV奖”。创作背景“Manta”学名蝠鲼，又称魔鬼鱼。刘柏辛第一次在海洋馆看到魔鬼鱼时，就被它所折服。为了潜入海洋一睹野生魔鬼鱼的姿态，刘柏辛还专门跑去斐济学习“水肺潜水”并考了证。刘柏辛认为，鱼在水里游，鸟在天上飞，但是魔鬼鱼的存在，打破了那些常理和规则，它们展示出世界上的更多可能性，以及在规则之上的自由洒脱，因此创作出该曲。歌词Not a swimming pool It"s an oceanDive in that cash like l"m chosenThat my 24 karat got you frozen ya活在不一样世界又怎样He"ll be on the surface Lur lurkin"Overheated up That gon" make me nervous水里呼吸着扇动不属于我的翅膀Lucifer别慌这不是我的名字呢Now he can start the fishing buy me another-roundDiamonds on me like I"m fresh outta waterA MarinerReelin" reelin" me in with that thin lineFly underwaterI don"t need no manner绝不会干涸的我为海洋染色Fly underwaterI don"t need no manner绝不会干涸的我为海洋染色MantaI fly in water lil MantaDevilfish MantaCall on me I don"t need no romancerI fly like a MantaI fly in water lil MantaDevilfish MantaCall on me I don"t need no romancerGlitter on my skin I"m a shinerGot a flight to catch tomorrow back to China我的行踪难以捉摸在哪But when I bust it open boy you better swim那么危险怎么还要追但我没有时间可以浪费我从未试过在陆地上飞起来I"ll be ridin"on a wave drippin" water tonightMantaI fly in water lil MantaDevilfish MantaCall on me I don"t need no romancerI fly like a MantaI fly in water lil MantaDevilfish MantaCall on me I don"t need no romancerDevilfishFly underwaterI don"t need no manner绝不会干涸的我为海洋染色Fly underwaterI don"t need no manner绝不会干涸的我为海洋染色MantaI fly in water lil MantaDevilfish MantaCall on me I don"t need no romancerI fly like a MantaI fly in water lil MantaDevilfish MantaCall on me I don"t need no romancer

necklace[英][u02c8neklu0259s] [美][u02c8nu025bklu026as] 生词本简明释义n.项链

　　奥尔德弗（Clayton Alderfer）在1973年提出了一种关于需要和激励的理论，也是对马斯洛理论的一种修正。他在大量调查的基础上指出人的基本需要不是像马斯洛讲的是5种，而是3种。它们是：　　1.生存。这是最基本的，指人在饮食，住房、衣服等方面的基本需要，这种需要一般只有通过金钱才能得到满足。这相当于马斯洛的第一级和第二级的需要；　　2.关系。指与其他人（同级、上级、下级）和睦相处，建立友谊和有归属感需要，这相当于马斯洛的第三等级的需要；　　3.发展。指个人在事业、能力等方面有所成就和发展。这相当于马斯洛的第四级和第五级的需要。　　这3种需要并不都是与生俱来，有的需要（如关系和发展的需要）是通过后天学习才形成的，而且人的需要并不一定严格地按照由低到高的次序进行，是可以越级的。　　另外，当人高一级的需要得不到满足的时候，人们就退一级来寻求自己的需要，所以管理人员应该了解职工的不同需要，以便激励和控制职工的行为，实现组织目标。　　时代呼唤英才,希望在于青年.全面建设小康社会和实现社会主义现代化需要大学生的参与,中华民族的伟大复兴需要大学生的奋斗.作为一名大学生的管理者,该如何管理当今大学生,培养出高素质人才,为社会提供更多的服务呢？我个人认为，用行为科学去管理当代大学生是个很好的管理办法。　　大学生是具有完全独立思考、行为能力的成年人，对事物发展具有一定判断力，甚至对某些事物有独特的看法，独立意识强，但由于社会环境及工作压力等外部因素，使当代大学生的心理承受能力达。因此，对当代大学生的管理不能用管理中小学生的管理手段。行为科学理论更好地引导我们该如何做好大学生的管理。　　所谓的行为科学，是利用许多科学的知识来研究人类行为的产生、发展、变化的规律，以预测、控制和引导人的行为，达到充分发挥，调动人的积极性的目的。行为科学以人的行为及其产生的原因作为研究对象，具体来说，它主要是从人的需要、动机、欲望，目的及心理因素的角度研究人的行为规律，特别是研究人与人之间的关系，个人与集体的关系，并借助于这种规律的认识来预测和控制人的行为，以实现提高工作效率，达成组织的目标。　　今天的行为科学成为根深叶茂的学科，都是来源于梅奥以及霍桑实验堆人性的探索。　　一、 行为科学理论的产生及发展　　在20世纪20年代，劳资纠纷和罢工此起彼伏。资本主义国家中许多企业尽管采取了泰勒的科学管理，但仍无太大的效果。此种情况下促使资产阶级的管理学者们在美国国家科学委员会的赞助下开展了著名的霍桑实验。霍桑实验中队获桑工厂的工作条件和生产效率的关系进行了全面的考察和多种实验，经历8年后最终得出结果。该实验结果实际由乔治埃尔顿梅奥于1933将它正式发表，书名是《工业文明中的人的问题》，这就是行为科学的前身—人际关系学说。　　二、 行为科学的建立——人际关系学说的建立　　通过霍桑实验，梅奥和缪特斯伯格建立的人际关系学说，提出了与当时流行的泰勒科学管理是想不同的一些新的观点。　　a、 职工是社会人。霍桑实验证明人是一个社会人，影响人的劳动积极性的因素，除了物质之外，还有社会的心理的因素。因此，应当把职工当作不同的个体来看待，当作社会人来对待，而比应该将其视作为无差别的机器或机器的一部分。　　b、企业存在非正式组织.梅奥等人认为,不管承认与否,非正式组织都是存在的,它与正式组织相互依存,,而且会通过影响工人的工作态度来影响企业的生产效率和目标的达成.因此,管理人员应该正视这种非正式组织的存在,利用非正式组织为正式组织的活动和目标服务.　　c、 新型的领导能力在于提高职工的满足程度.新型的管理人员应该认真分析职工的需要,不仅要解决工人生产技术或物质生活方面的问题,还要掌握他们的心理状态,了解他们的思想情绪,以便采取相应的措施.这样才能适时,充分的激励工人,达到提高劳动生产率的目的.　　三、 个人行为的研究　　1、马斯洛的人类需要层次理论　　亚伯拉罕-马斯洛把人的各种需要归纳为五大类，分别是生理上的需要、安全上的需要、感情和归属上的需要、地位或受人尊重的需要，自我实现的需要。每个人都有不同性格，对需求表现的强度也不一样，在实践过程中应该对所管理的人员依具体情况进行不同的分析和对待。　　2、克莱顿-奥尔德弗的生存关系及发展理论　　克莱顿-奥尔德弗认为人的基本需要是三种，不是马斯洛讲的5种。生存、关系、发展，管理人员应该了解职工的不同需要，以便激励和控制职工的行为，实现组织目标。　　3、赫茨伯格的双因素理论　　美国心理学家赫茨伯格在1966年《工作和人的性质》一书中首次提出激励因素—保健因素理论。他把企业中有关因素分为满意和不满意两类，满意因素使人得到满足，属于激励因素，这适合人的心理成长因素。不满意因素指缺乏这些因素容易产生不满，消极的情绪，即保健因素。激励是促进人的积极不断提高的因素。　　4、麦格雷戈的X-Y理论　　社会心理学家道格拉斯- 麦格雷戈在进行大量研究的基础上，于1957年提出两大类可供选择的人性观。　　X理论认为人性好逸恶劳，不求上进，不愿负责，听命于人，以我为中心，漠视组织需要，习惯于保守，反对改革，缺乏理性，易于受骗，只有少数人才具有解决组织问题所需要的想象力和创造力　　Y理论认为人并非是生性懒惰，在适当的鼓励下，不但能接受而且追求担负责任，一般人都具有相当高的解决问题的能力和想象力，个人目标与组织目标统一是人们对组织的承诺，运用自我指导和自我控制更好的提高工作效率。　　行为科学理论整个系统得管理效果，实质上就是对人的管理效果的综合体现，行为科学不仅适用于企业的管理，同样也适用社会的各类组织，包括国家，甚至整个人类世界的管理，行为科学的研究成果对今天的大学生管理有巨大的现实指导作用。　　大学生到学校学习的目的非常明确，在学校里掌握专业知识技能，培养交际，组织能力，为以后找工作做铺垫。年轻充满活力的他们感情丰富，善于想象，由于现在社会就业形势严峻，面对本科文凭也难找工作的情况，大学生都为自己的前途而感到焦虑。他们承受着社会压力，家庭以及个人学业的压力，这些压力越来越重，让不少大学生走上不归之路，用结束生命最痛苦的煎熬。新闻报道显示，近年来大学生因压力自杀在逐步增加，我们在叹息生命时更应该考虑，如何管理当代大学生，才能让大学生更好更健康的发展。　　学校是提供学生学习与发展的一个平台，大学生在这个平台上，有生理，心理及其他的需求，就正如马斯洛的“需要层次理论”所讲5种需求一样。学校应该尊重而不是漠视他。目前，当代大学生感情丰富、情绪不稳定，易受外界影响，最需要的是心理的需求，心理 上的压力让他们喘不过气来。学校应多组织就业指导讲座，心理辅导课，对学生进行教育、指导，缓解他们的紧张情绪，这有利于防止更多悲剧的发生，让学生更健康的发展。　　大学生是具有完全独立思考、行为的成年人，在校他们希望可以得到学校的承认，成就得到同学们的认可，社会上得到尊重。由于学校忽视这这些，导致学生对本身所在学校很不满意，常抱怨学校环境不好等。作为学校管理者，在积极引导学生参与活动时，也要适当鼓励学生，对成就大或进步明显的学生进行物质或精神上的奖励，例如奖学金，个人进步奖，宿舍安全文明奖等。这有利于调动学生的积极性，更好的完成任务，积极寻求责任。这样能更好地带动学生自主管理、自主学习。同时，也给学校营造了良好的学习氛围。行为科学中的公平理论揭示了人与人之间总存在着社会比较，这对我们每个管理者都有启示，在处理奖酬、分配问题时应该公平、公正，给人以信赖感，从而调动人的积极性，这同样能运用到学校管理中，使学生除了学生会之外，学校还存在非正式组织，对这些非正式组织，学校应了解掌握情况，并通过引导，把非正式组织作用结合起来，为学校发展提供更有利条件。学校在为学生提供学习资源空间时，也应该严格要求学生遵守学校规章制度，鼓励学生参加社会实践，大胆地创新。　　行为科学理论强调以人为中心的管理制度，很适用于当代大学生的管理。不可否认，科学管理在相当程度上提高了人们组织行为的效率，为组织目标的实现作出了巨大的贡献。　　运用行为科学理论作好当代大学生的管理是正确的管理方式，它促使大学生更健康更全面地发展，为社会提供更多高素质人才。

邻居的英文:neighbor1.基本解释英[neibe]美[neb时]。good neighbor好邻居;睦邻。例句:My neighbor and Iwere chatting over the fence after supper.我和邻居晚饭后隔着栅栏闲聊。2.扩展资料neighbor的近义词：acquaintance读音：英[u0259"kweu026antu0259ns]美[u0259"kweu026antu0259ns]n.熟人；相识；了解，He is not a friend of mine, only an acquaintance.他不是朋友我的,只是个熟人。dweller读音：英["dwelu0259(r)]美["dwelu0259r]n.居民；居住者。Dwellers here live a happy life now.现在这里居民的生活很幸福。3.如何背单词单词是一切的基础和开始，甚至有人说“学英语除了背单词，一切都是奇技淫巧”。曾经一路从托福词汇背诵到GRE红宝书，从一小时只能勉强记住100单词练到一小时可以500单词不忘。要通过需求来背单词。对于基础薄弱的人来说，最急迫的需求是看到英文后瞬间反应出中文意思。通俗来说就是拿来一篇文章可以大概读懂。只有读懂才能有下一步。4.口语的基础是听写口语一直是国人的老大难，很多人总结为没有语言环境，并悲观的认为只能去国外练口语。“去国外”并不是这个解决方案的核心，“去国外每天听英语达到一个输入的过程”才是这种方法能成功的背景。如果不是每天都听纯正的英语，那么去了国外的意义也不大。很多留学生就是到了国外也只和中国人一起玩，最后英语没提高，却学会了各地的方言。

一、责任原理的内涵：在合理分工的基础上明确各部门与个人必须完成的工作任务和必须承担的相应责任，从而提高人的潜能的有效办法。明确职责是挖掘个人潜能最好的办法。二、责任原理的本质就是保证及提高组织的效益和效率。

我是苏教的。。

问题一：虾英文怎么读? shrimp [?rimp]小虾 prawn [pr?:n]对虾 langouste [l??"u:st]（法语）龙虾 lobster ["l?bst?] 龙虾 freshwater shrimp 青虾 river prawn 河虾 cray 小龙虾 chicken lobster（美国英语）小龙虾 greasyback shrimp 基围虾 slipper lobster 琵琶虾 问题二：虾的英语单词怎么读用汉语标一下 shrimp 常用词汇 英 [?r?mp] 美 [?r?mp] n.虾；瘦小的人（物） 问题三：虾英语怎么讲 prawns 一般用这个 问题四：虾的英文是shrimp，那虾仁的英文该怎么说 黑椒牛排拼菠萝虾仁用Hei Jiao Niupai fight with pineapple shrimp黑椒牛排拼菠萝虾仁用Hei Jiao Niupai fight with pineapple shrimp黑椒牛排拼菠萝虾仁用Hei Jiao Niupai fight with pineapple shrimp 问题五：虾仁干英文怎么写,念什么 Dried peeled prawn

满意原则。决策遵循的是满意原则，而不是最优原则，为什么不是最优呢，因为对决策者来说，要使决策达到最优必须要做到：(1)获得与决策有关的全部信息;(2)真实了解全部信息的价值所在，并据此制定所有可能的方案;(3)准确预期到每个方案在未来的执行结果。通过这些条件可以得知，决策者在现实社会中进行决策时，因为每个人的能力是有限的，决策者很难获得与决策相关的全部信息，只能制定出数量有限的方案，一般也很难确切的把握每个方案的执行结果。三个条件无论哪一个都不可能完全做到，更何况三者都要满足，所以，在尽可能多的选择情况下，选择一个满意的方案即可。2、系统原则。该原则强调决策者在进行决策时应该将各子系统的特性放到系统的整体中去权衡，用整体系统的特征和总目标去协调各子系统的目标，形成整体优化，站在一个全局的高度去考虑问题，进行决策，这样决策的结果才是较为完整的。3、信息原则。管理者在决策时离不开信息，信息的数量和质量直接影响决策水平。信息数量太多，容易让人眩晕，找不到对决策有用的信息;如果信息数量太少，那么决策的结果容易偏颇，所以，适量的信息是最好的。毋庸置疑的是，信息的质量当然越高越好。这就要求管理者在决策之前以及决策过程中尽可能地通过多种渠道收集有用的信息，并系统地对搜集到的信息进行归纳整理、比较、选择和加工，最终作为决策的有效依据，为更好的决策服务。4、预测原则。预测原则相对简单，它是指通过科学的预测，对未来事件的发展趋势和状况进行描述和分析，做出有根据的假设和判断，为决策提供科学依据和准则。决策的正确与否，很大程度上取决于对未来后果所作判断的正确程度。5、比较优选原则。该原则有两层含义，比较是指方案提出过程是经过系统分析和综合，确定多个达到预定目标的方案;优选是指从多个备选方案中选择满意方案的决断过程。决策者只能在方案的利弊之间进行合理的选择。6、反馈原则。它指根据变化了的实际情况和实践结果，对初始决策作出相应的调整或改变，使决策趋于合理的原则。反馈原则是实现动态平衡、提高决策质量以及实现决策科学化的保证。7、效益原则。决策不能不做成本效益分析，决策的目标是以较低的成本获取较高的收益。当然，这种收益不能单纯以金钱作为衡量标准，决策既要讲经济效益，也要讲社会效益。