三氯乙酸/丙酮沉淀法提取蛋白时,在离心后就把上清液扔了,上清液里面没有溶解了的蛋白质吗?
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三氯乙酸/丙酮沉淀法提取蛋白时,在离心后就把上清液扔了,上清液里面没有溶解了的蛋白质吗?
为什么啊?
为什么啊?
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brandy0401 共回答了19个问题
|采纳率84.2%- 蛋白都沉淀了
三氯乙酸是强酸,丙酮也能沉淀蛋白.二者一起作用,绝大多数蛋白都会沉淀出来.当然,也可能有某种特殊蛋白没有沉淀,但只要不是你要的就行.其实,没有什么万能的方法可以提取所有蛋白. - 1年前
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500g三氯乙酸用227ml水来溶解,所得溶液的体积为500毫升,那么就是
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|采纳率81%不过后来我加了盐酸进去,也没有沉淀生成,应该是酪蛋白出问题了:cry:wujia115(站内联系TA)也许是酪蛋白没有溶解.溶解酪蛋白时要加碱才好溶.例如:
0.5%酪蛋白溶液:称取酪蛋白(干酪素)0.25g放入50mL容量瓶中,加入约20mL水,再准确加入1mol/L NaOH 5mL,当酪蛋白溶解后,准确加入1mol/L乙酸5mL,最后加水稀释定容至50mL,充分摇匀.erping80(站内联系TA)ls,我加了0.1mol/L NaOH 10mL,用磷酸缓冲液定容的apple2001(站内联系TA)建议测下pH.
友情提醒,不要沾到三氯乙酸了,小心蜕皮:)bulebird(站内联系TA)配制酪蛋白溶液时,测酸性蛋白酶要加入几滴乳酸在沸水浴中进行溶解,一定要溶解至澄清状,溶解冷却至室温后要调节一下pH,要与所用缓冲液的pH基本一致.如果溶解充分,再加入三氯乙酸后还没有沉淀沉声的话,那肯定就是酪素的问题了.酪素有几种,并不是所有的酪素都适合用来测蛋白酶活性的,一定要选好了.1年前查看全部
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藏羚羊L 共回答了22个问题
|采纳率90.9%不过后来我加了盐酸进去,也没有沉淀生成,应该是酪蛋白出问题了:cry:wujia115(站内联系TA)也许是酪蛋白没有溶解.溶解酪蛋白时要加碱才好溶.例如:
0.5%酪蛋白溶液:称取酪蛋白(干酪素)0.25g放入50mL容量瓶中,加入约20mL水,再准确加入1mol/L NaOH 5mL,当酪蛋白溶解后,准确加入1mol/L乙酸5mL,最后加水稀释定容至50mL,充分摇匀.erping80(站内联系TA)ls,我加了0.1mol/L NaOH 10mL,用磷酸缓冲液定容的apple2001(站内联系TA)建议测下pH.
友情提醒,不要沾到三氯乙酸了,小心蜕皮:)bulebird(站内联系TA)配制酪蛋白溶液时,测酸性蛋白酶要加入几滴乳酸在沸水浴中进行溶解,一定要溶解至澄清状,溶解冷却至室温后要调节一下pH,要与所用缓冲液的pH基本一致.如果溶解充分,再加入三氯乙酸后还没有沉淀沉声的话,那肯定就是酪素的问题了.酪素有几种,并不是所有的酪素都适合用来测蛋白酶活性的,一定要选好了.1年前查看全部
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