聚合酶链反应不成功的原因有哪些?
![](images/u2507.png)
聚合酶链反应不成功的原因有哪些?
7个样品进行PCR,就是有1个电泳时不出现条带,同样的东西,别人做的话,电泳时7个样品就都有条带,到什么原因;
请问:PCR的反应液应该如何混匀?
7个样品进行PCR,就是有1个电泳时不出现条带,同样的东西,别人做的话,电泳时7个样品就都有条带,到什么原因;
请问:PCR的反应液应该如何混匀?
已提交,审核后显示!提交回复
共1条回复
hammertang 共回答了17个问题
|采纳率94.1%- 第一个加入的成分应该是水,后续加入的成分,用枪加到液面下,加好后再用枪吹洗几次保证混匀,这样做也使残留在枪头壁上的液体成分对实验体系带来的影响降至较小.
- 1年前
相关推荐
- 聚合酶链反应原理
ghjfdiqian1年前1
-
hohozhuzhu 共回答了20个问题
|采纳率85%PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板.每完成一个循环需 4分钟,3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍.到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝.
PCR的反应动力学 PCR的三个反应步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升.反应最终的DNA 扩增量可用Y=(1+X)n计算.Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平(Y)均每次的扩增效率,n代表循环次数.平均扩增效率的理论值为100%,但在实际反应中平均效率达不到理论值.反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,而进 入线性增长期或静止期,即出现“停滞效应”,这种效应称平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素.大多数情 况下,平台期的到来是不可避免的.1年前查看全部
- 聚合酶链反应和细胞内DNA复制的异同点
红帮工1年前1
-
fanz512 共回答了18个问题
|采纳率88.9%原理相同,都是利用碱基配对互补的原则而且复制的时候都是半保留复制,都需要引物.
不同点:
1.一个体内一个体外(^_^)
2.聚合酶链式反应(PCR)不会产生冈崎片断
3.一个细胞只在有丝和减数分裂的时候进行DNA复制而PCR可以反复进行
4.细胞中的DNA复制受到许多复杂的因子的调控
5.两者进行的温度不同1年前查看全部
- 聚合酶链反应
雪儿爱宪1年前1
-
mhhu 共回答了19个问题
|采纳率84.2%逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA.再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达.RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能.该技术主要用于:分析基因的转录产物,获取目的基因,合成cDNA探针,构建RNA高效转录系统.1年前查看全部
- 聚合酶链反应-序列特异性引物法(pcr-ssp)需要什么样的环境下进行
冷月儿QQ1年前1
-
部落之花 共回答了13个问题
|采纳率92.3%在pcr仪中进行
它会经过加热退火加热过程完成一次链式反应,可以设定反应的次数.1年前查看全部
大家在问
- 1某中学校园内有甲,乙两块形状与大小都相同的三角形空地,学校准备将其绿化,采取两种不同的设计方案:
- 2如果直线y=3x-1,y=x+5,y+mx-7相交于同一点,求m值
- 3高一自由落体、、、 一个自由下落的物体,它在最后一秒的位移是35m,则物体下落的速度是多大?下落时间是多少?
- 4一条高速公路长432千米,一辆客车4.5小时行完全程;一辆货车5.4小时行完全程.客车的速度比货车快多少?
- 5在测液体粘滞系数时,小球表面为什么要被待测液完全浸润?
- 6已知2的m的次方=a,2的n的次方=b,则2的m的次方除2的n的次方,用a,b可表示为
- 7在三角形ABC中,如果有性质acosA=bcosB,试问这个三角形的形状有什么特点?
- 8园xx+2x+yy+4y-3=0上到直线x+y+1=0的距离为根号2的点共有几个?
- 9微积分~求证一个极限.
- 10求解线性代数题,请给出具体过程设A是2阶实方阵,A-E,2E-A均不可逆,则行列式|A^-1-A+3E|=
- 11天冬酰胺酶会不会抑制自身蛋白合成、使自身细胞被破坏?
- 12解释一道关于力的合成的物理题.可是不知道原因.
- 13设an是公比大于1的等比数列,Sn为数列an的前n项和.已知S3=7,且3a2是a1+1和a3+4的
- 14放大倍数位20db,3db带宽至少50mhz,20db下降0.3db,50欧姆系统
- 15Do you have any problems of you homework?那里错了?