凝胶色谱

色谱析chromatography基于 混合 物 各组 体系 两相 物 理化性能差异（吸附、配差异等）进行离析际公认俄M.C.茨维特色谱创始色谱体系两相作相运通其相固定 称固定相 ；另相移 称流相色谱析程物质迁移速度取决于与固定相流相相作用力溶质两相吸引力间作用力包括色散力、诱导效应、场间效应、氢键力路易斯酸碱相互作用于离离间静电吸引力较强吸引固定相溶质相滞于较强吸引流相溶质随着移反复进行与配使混合物各组离色谱析类比较复杂根据流相固定相同色谱气相色谱液相色谱①气相色谱流相气体 ： 气固色谱 其流相气体固定相固体；气液色谱其流相气体固定相涂惰性固体液体②液相色谱流相液体?液固色谱其流相液体固定相固体；②液液色谱其流相固定相均液体按吸附剂及其使用形式柱色谱、纸色谱薄层色谱按吸附力吸附色谱、离交换色谱、配色谱凝胶渗透色谱按色谱操作终止展色谱洗脱色谱按进区带色谱、迎色谱顶替色谱经色谱离各组与已知标准品照进行定性析现代化色谱-质谱联用或色谱-光谱联用仪器配备丰富谱图库微处理机色谱柱流组直接送入质谱光谱仪进行定性鉴定数据定量处理发智能化色谱析发展主要向色谱特点?①离效率高离性质十相近物质含百种组复杂混合物进行离②离速度快几钟几十钟能完复杂物质离操作③灵敏度高能检测含量10-12克物质④进行规模纯物质制备色谱化工、石油、物化、医药卫、环境保护、食品检验、医检验、农业等各领域都广泛应用各种色谱气液色谱液固色谱应用广气相色谱离、化合物比较理想等用液液色谱液固色谱离离交换色谱般用于离基团物质尺寸再用凝胶渗透色谱离薄层色谱纸色谱析速度快、便、本低柱色谱比薄层色谱纸色谱具更高辨能力

向着柱底方向移动。在凝胶色谱中，样品被加载到凝胶柱的顶部或顶部附近，再通过溶剂的渗透作用逐渐向下移动，因此凝胶色谱法中的移动方向是从样品施加的位置向着柱底方向移动。

高温凝胶色谱属于高效凝胶色谱的一个特殊的种类，其柱温可以到220度的高温

1、盐析与机溶剂沉淀：蛋白质溶液加入量性盐,破坏蛋白质胶体性质,使蛋白质溶液沉淀析,称盐析.用性盐：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等.盐析,溶液pH蛋白质等电点处效.凡能与水任意比例混合机溶剂,乙醇、甲醇、丙酮等,均引起蛋白质沉淀.2、电泳：蛋白质高于或低于其pI溶液带净负或电荷,电场移.电泳迁移率主要取决于蛋白质所带电荷量及.3、透析：利用透析袋膜超滤性质,物质与物质离.4、层析：利用混合物各组理化性质差异,相互接触两相（固定相与流相）间布同进行离.主要离交换层析,凝胶层析,吸附层析及亲层析等,其凝胶层析用于测定蛋白质量.5、筛：称凝胶滤,蛋白质溶液加于柱顶部,任其往渗漏,蛋白质进入孔内,柱滞留间较,蛋白质能进入孔内径直流,同蛋白质离.6、超速离：利用物质密度同,经超速离,布于同液层离.超速离用测定蛋白质量,蛋白质量与其沉降系数S比.

可以关。凝胶通过溶胀、装柱、柱均匀性检查、上样之后，让样品溶液的浓度尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。当一切准备好时，打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。

体积排除色谱，是色谱个分离模式中最简单、最单纯的一种类型。在排除色谱中，溶质即待测样品组分与固定相或填料、流动相之间没有额外的相互作用。只依据分子的体积（流动力学体积）的大小而分离。

我们的Mw括号里边是Daltons，叫道尔顿，分子量的单位。不是百分数，能否截图看下？

加缓存液是为了洗涤平衡，使凝胶装填均匀紧密。洗涤平衡是为了尽量减少除样品本身特性因素外其他因素的影响，比如pH、温度、缓冲液等

凝胶色谱法用来分离和提纯蛋白质和SDS凝胶电泳法主要是检验蛋白质的纯度意思是你先用凝胶色谱法提取蛋白质，然后可以用SDS凝胶电泳法来检验提取的蛋白质的纯度

凝胶色谱法在选修1里有蛋白质工程在选修3

1.凝胶的预处理 交联葡聚糖凝胶的市售商品多为干燥颗粒，使用前必须充分溶胀。方法是将欲使用的干凝胶缓慢地倾倒入5～10倍的去离子水中，参照相关资料中凝胶溶胀所需时间，进行充分浸泡，然后用倾倒法除去表面悬浮的小颗粒，并减压抽气排除凝胶悬液中的气泡，准备装柱。在许多情况下，也可采用加热煮沸方法进行凝胶溶胀，此法不仅能加快溶胀速率，而且能除去凝胶中污染的细菌，同时排除气泡。2.装柱 层析柱的选择一般根据分离样品的种类和样品的数量而定。纯化蛋白质时，柱床体积应为样品体积的25～100倍。去除盐及游离荧光素约为样品体积的4～10倍。柱太短，影响分离效果。柱长一些，分离效果好，但柱太长，则延长分离时间，样品也稀释过度。层析柱的内径也要选择适当。内径过细，会发生“器壁效应”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影响分离效果。所以层析柱的内径和高度应有一定的比例。对于除盐来说应为1︰5～1︰25；对于纯化蛋白质来说应为1︰20～1︰100。 凝胶柱的装填方法和要求，基本上与离子交换柱的制备相同。一根理想的凝胶柱要求柱中的填料(凝胶)密度均匀一致，没有空隙和气泡。通常新装的凝胶柱用适当的缓冲溶液平衡后，将带色的兰葡聚糖–2000、细胞色素，或血红蛋白等物质配制成质量浓度为2g/L的溶液过柱，观察色带是否均匀下移，以鉴定新装柱的技术质量是否合格，否则，必须重新装填。3.加样与洗脱 （1）加样量：加样量与测定方法和层析柱大小有关。如果检测方法灵敏度高或柱床体积小，加样量可小；否则，加样量增大。例如利用凝胶层析分离蛋白质时，若采用28Onm波长测定吸光度，对一根2cm×6Ocm的柱来说，加样量需5mg左右。一般来说，加样量越少或加样体积越小(样品浓度高)，分辨率越高。通常样品液的加入量应掌握在凝胶床总体积的5％～10％。样品体积过大，分离效果不好。对高分辨率的分子筛层析，样品溶液的体积主要由内水体积(Vi)所决定，故高吸水量凝胶如Sephadex G-200，每mL总床体积可加0.3～0.5mg溶质，使用体积约为0.O2倍总体积；而低吸水量凝胶如Sephadex G–75，每mL总床体积加溶质质量为0.2mg，样品体积为0.Ol倍总体积。 （2）加样方法：如同离子交换柱层析一样，凝胶床经平衡后，吸去上层液体，待平衡液下降至床表面时，关闭流出口，用滴管加入样品液，打开流出口，使样品液缓慢渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面持平时，小心加入数mL洗脱液冲洗管壁。然后继续用大量洗脱液洗脱。 （3）洗脱：加完样品后，将层析床与洗脱液储瓶、检测仪、分部收集器及记录仪相连，根据被分离物质的性质，预先估计好一个适宜的流速，定量地分部收集流出液，每组分一至数mL。各组分可用适当的方法进行定性或定量分析。 凝胶柱层析一般都以单一缓冲溶液或盐溶液作为洗脱液，有时甚至可用蒸馏水。洗脱时用于流速控制的装置最好的是恒流泵。若无此装置，可用控制操作压的办法进行。样品体积不宜过多，最好为床体积的1％～5%，最多不要超过10%。样品浓度也不宜过大，浓度过大粘度大，分离效果差，一般不超过4%。 洗脱液应与膨胀一致，否则更换溶剂，凝胶体积会发生变化，影响分离效果。洗脱液要有一定的离子强度和pH值。分离血清蛋白常用0.02～0.1Mol/L pH 6.9～8.0的PBS液（0.14Mol/L NaCl）和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl缓冲盐溶液（0.14Mol/L NaCl）。凝胶再生和保存 凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用，因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分离操作。但使用多次后，由于床体积变小，流动速率降低或杂质污染等原因，使分离效果受到影响。此时对凝胶柱需进行再生处理，其方法是:先用水反复进行逆向冲洗，再用缓冲溶液平衡，即可进行下一次分离。对使用过的凝胶，若短时间保存，只要反复洗涤除去蛋白质等杂质，加入适量防腐剂即可；若长期保存，则需将凝胶从柱中取出，进行洗涤、脱水和干燥等处理后，装瓶保存。

首先，分子量大于排阻范围，他会不经过球体颗粒的内部空间，而直接走外部球体间缝隙，这样会使得这些物质先出色谱柱。从进样阀进入到系统后，哪怕没有色谱柱，样品也是有一些时间才到检测器的，所以只会是出峰比较早，不会是在进样时间出峰。其次，紫外检测器是检测有紫外吸收的物质，会不会被检测到，还要考虑，这个分子量大的物质，是否有紫外吸收。

我觉得是和分子筛的孔径大小有关~~~ SDS-PAGE的孔径较大~~ 所以不管是什么分子量的都经孔径走~~ 所以最后大的蛋白被滞留在后面~~~ 而凝胶色谱的孔径较小~~~ 质量大的蛋白不经过孔径走而是从孔径的间隙走 路径就短了很多~~~ 所以大的先出来~~~不知道是不是这么回事~~~~~~

D

首先：蛋白质本身是大分子物质，但是不同的蛋白质分子量又不同，差异还是比较大的。其次：凝胶颗粒内部的孔道并是都一样大，路径并不都相同。所以如果分子量较大的分子，其分子量都超过凝胶颗粒内部的孔径，那么它们都只能从外面过，路径差不多，分不开；而分子量较小的蛋白质则可进入不同大小的孔道，通过不同路径将其分开；其他比蛋白质小的分子，由于都能进入凝胶的全部空隙，也不会有好地分离效果。所以答案为C是说的过去的。

A、相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，A错误； B、相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，B正确； C、相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，C错误； D、相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，且其路程短，移动的速度快，D错误． 故选：B．

示差检测器。根据查询百度文库得知，凝胶色谱仪03c2模块是示差检测器。凝胶色谱仪的示差检测器是一种通用型的检测器，可与输液泵、进样器、控制器等组成凝胶渗透色谱系统，也可与液相色谱仪串联使用做通用型检测器。凝胶色谱仪采用国际先进技术及关键部件的基础上结合自主创新，该设备用于水性和油性高分子聚合物的分子量大小及分子量分布检测，以及糖类、醇、脂肪酸、脂类的定性定量分析。

基本就是一回事，细的方面还是有些差别的。一个是过滤的原理，一个是渗透的原理。建议你到“生化色谱网”去看看，那里比较专业。

体积排阻色谱法检测的是最大分子量是利用样品分子大小尺寸来进行分离的。色谱柱里面有许多带有孔洞的球型颗粒，小分子的物质分子会进入这些孔洞再出来，所以会增加停留时间，而大分子进不去这些孔洞，就在球型颗粒之间的缝隙直接通过。所以大分子先出色谱柱，先出峰，小分子后出色谱柱，后出峰。

(1)④→①→②→③ (2)不能破坏凝胶面 贴着管壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动 (3)完全进入凝胶层 (4)红色的蛋白质 5

凝胶色谱分离基本原理是（） A.极性大小B.与-OH缔合氢键C.分子大小D.扩散原理正确答案：分子大小

凝胶色谱流速过慢操作规程：1、开机：在开泵之前要将流动相用超声波清洗器脱气。打开泵的电源开关，这时泵的控制面板上的显示屏上显示等待状态，预设流量为1.000ml/min。按动控制面板上的EDIT/ENTER键，使其处于编辑状态，用上下键调节流量至0.100ml/min，然后按动RUN/STOP键使泵开始运转，这时的流量为0.100ml/min。按动EDIT/ENTER键及上下键调节流量并按动MENU键确定从而改变泵的流量。改变流量时速度不要太快，要等泵的压力稳定之后再进行下步操做。如果发现泵的进液管中有气泡存在，应及时除去气泡。方法是：先将泵头上的冲洗阀拧松，然后按动泵的控制面板上的MENU键使显示屏上显示purge一项，再按EDIT/ENTER键确定后即开始冲洗泵头。到预设时间（一般为5分钟）后，冲洗过程会自动停止。将菜单调回显示流速一栏，重新调节流速开始运行泵。2、检测器：打开检测器的电源开关。检测器自检后其控制面板上的显示器将显示检测器的各种参数。按动2ndfunc键然后按Int℃将显示检测器的温度。要改变检测器温度时，按动2ndfunc键然后按动Set℃键再输入要设订的温度值，最后按ENTER键即可。每次更换溶剂后，需冲洗参比池30分钟左右。按动2ndfunc键和Purge键可开始清洗。清洗完毕后，再按动2ndfunc键和Purge键即可恢复检测状态。3、数据接收：打开数据接口电源开关并打开GPC软件，点软件上的数据接收键后，即可开始进行数据接收工作。4、样品的配制：仪器测试样品的浓度在2g/l左右（一般用20毫克试样配制成10毫升的样品，分子量较低的试样浓度可以适当高些）。配制好的样品需放置24小时左右以使试样充分溶解。溶好的样品还要用滤膜过滤，除去不溶物质（这是为防止损坏凝胶柱）。5、进样：进样量一般为50μl或75μl。微型注射器先用流动相清洗4到5次，然后再样品冲洗4到5次。进样时，一定要使注射器中没有气泡存在。进样时，先将检测器回零后再扳动进样器进样，大约进样5分钟后将进样器手柄扳回原位。6、关机：测试完毕之后，应再在测试流量下继续运行30分钟左右。之后逐渐降低泵的流速直至到零。关闭泵的电源。关闭检测器的电源。关闭接口电源。退出软件。

在凝胶色谱操作中一旦洗脱液流干应该重新加入洗脱液。根据查询相关公开信息：在凝胶色谱操作过程中，若发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒，就有空气进入，若不重新装填，混入的空气，影响液体在柱内的流动，从而影响生物大分子物质的分离效果，应当重新加入洗脱液。

凝胶色谱可以分离分子量不同的物质大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，所以小分子物质的下移速度慢。

抱歉！这个我真不会。

凝胶色谱可以分离分子量不同的物质大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，所以小分子物质的下移速度慢。

根据我学到的生化知识。正确的应该是凝胶色谱是根据分子大小（也就是体积形状来分离的），说它是根据分子质量大小分离只是因为被分离的东西一般是蛋白质，而蛋白质的分子质量一般和其大小成正相关。当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶珠内网状结构，被排阻在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动，并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由进出凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。这个在高等教育出版社，王镜岩老师编的《生物化学》第301页 蛋白质的分离纯化原则上有详细解释。至于你看到的练习和书本上为什么这样写，为了你考试能考高分，建议你拿我的答案和书上的区别去请教你们生物老师，得到他肯定的说法。

（一）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-GelP），由日本tosoh的TSKGEL的pw系列，适合蛋白和多糖的纯化。（二）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵SephadexLH-20，是—SephadexG-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（三）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小排队，凝胶表现分子筛效应。

（一）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-GelP），由日本tosoh的TSKGEL的pw系列，适合蛋白和多糖的纯化。（二）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵SephadexLH-20，是—SephadexG-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（三）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。

1、凝胶色谱法又称为凝胶过滤法、 凝胶层析、凝胶渗透层析、通透层析、分子筛层析。 2、凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 3、凝胶的种类及性质 （1）交联葡聚糖凝胶（Sephadex） 交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。 （2）Sephadex LH-20，是Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。 （3）琼脂糖凝胶： 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌处理。 （4）聚丙烯酰胺凝胶： 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rad厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。 （5）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

1、凝胶色谱法又称为凝胶过滤法、 凝胶层析、凝胶渗透层析、通透层析、分子筛层析。 2、凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 3、凝胶的种类及性质 （1）交联葡聚糖凝胶（Sephadex） 交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。 （2）Sephadex LH-20，是Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。 （3）琼脂糖凝胶： 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌处理。 （4）聚丙烯酰胺凝胶： 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rad厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。 （5）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

凝胶色谱法中全渗透点是指在分离某种大分子化合物（如蛋白质、DNA等）时，当分离试样的分子量大于凝胶的孔径时，试样的分子就不能进入凝胶内部，而只能在凝胶的表面层流动。这个分子量的临界值就称为凝胶的全渗透点。在全渗透点以下，分子可以自由地穿过凝胶的孔隙，因此分离效果较差；而在全渗透点以上，分子无法穿过凝胶的孔隙，因此分离效果会更好。全渗透点是凝胶色谱法中的重要参数之一，能够帮助确定适合分离试样的凝胶孔径大小，从而提高分离的效率和准确性。

当不同相对分子质量的蛋白质通过凝胶柱时，分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长移动的速度慢，而分子量大的蛋白质分子不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，最先洗脱出来． 故选：A．

综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。

凝胶色谱和凝胶电泳的相同点是基于凝胶的分离技术。根据查询相关资料信息，凝胶色谱和凝胶电泳使用凝胶状的材料作为分离介质，通过吸附、层析或分离电泳的方法，将待测样品分为不同的构成部分，在物理和化学的结果上改变样品的组成。

凝胶色谱分离可以分离大小范围在几百到数千碱基之间的分子。它主要是通过改变电泳溶液中离子强度、酸碱度和电压来实现分离的。当分子越大，它就会沿着电泳溶液移动更迅速，从而更快地到达终点。凝胶色谱可以分离的大小可以从几十碱基到数千碱基不等，一个大的分子分离速度可能比一个小的分子慢得多。

凝胶色谱是依赖于分子量大小分析或分离蛋白的方法。一般来讲，凝胶色谱不会用于蛋白的的生产工艺或大量纯化，因为成本高，分离的效率低。但凝胶色谱可用于分析或小量制备，用于区分和血红蛋白有较大分子量差异的杂蛋白，或者排除有部分降解/聚集的目标蛋白。欢迎继续讨论，纯属手打，欢迎采纳，祝愉快！

凝胶色谱法的迁移方向是从样品的上端向下端。这是因为凝胶色谱法是一种分离技术，它将样品分离成不同的组分来分析样品。在凝胶色谱柱中，样品被加入到柱的顶部，在柱中向下移动。在移动过程中，不同的组分会以不同的速度通过柱，并在柱的底部分离出来。因此，凝胶色谱法的迁移方向是从上到下。

凝胶色谱填料合成技术的进展主要在下面四个方面：填料的微球化、窄粒度分布多孔硅微球的合成成功、小孔径多孔硅微球合成成功以及新的硅微球表面化学改性的发展。近年来在这方面有较多的新产品，中国也有许多单位在研制和生产。高效凝胶色谱正在迅速改变凝胶色谱的应用面。高效色谱柱除了对填料的粒度有要求外，对粒度分布也要求相当窄。用一般的制备方法往往得到粒度较宽的产品，需要进一步过筛。当填料的粒度在30微米以下时，这种过筛非常困难，已经成为填料制备上一个较大的技术难关。Kirkland，最近利用了尿素和甲醛在酸性介质中形成大小均匀的液体高聚物，加入某种硅溶胶时，硅溶胶的微珠将在液体高聚物中凝聚。最后把有机高聚物灼烧掉后就能得到由微粒硅珠堆积而成的多孔填料。这种堆积硅珠是球形的，粒度分布很窄，填料的孔径决定于原始硅溶胶的规格，用不同的硅胶就可以制得不同孔径的填料。柴志宽等则利用一种硅胶制成粒度分布窄的填料后，再利用适当的扩孔方法以得到各种孔径的填料。从这些方法制得的微球填料，粒度分布可以达到相当窄，所以可以不经筛选直接使用。随着进样技术和色谱柱接头设计的改进，现在已经可以得到柱效每米在八万到十万的凝胶色谱填料。Wheals用四种GPC用的微球硅胶装填色谱柱，都能达到每米八万到十万块塔板数的高效。他用这种色谱柱有效地进行了案件侦查中所要求的分析问题。

1.分析对象差别:气相色谱仪的分析对象: (1)能气化、热稳定性好和沸点较低的样品。 (2)高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物样品不能检...高效液相色谱仪的分析对象: (1)溶解后能制成溶液的样品。 (2)不受样品挥发性...2.流动相差别:气相色谱仪的流动相: (1)流动相为惰性气体。 (2)组分与流动相之间无亲合作用力,只与固定相作用。

凝胶色谱分离的依据是相对分子质量的大小。由凝胶色谱法分离蛋白质的原理可知，凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

给你举个例子，凝胶电泳以葡聚糖凝胶电泳为例，我们要铺一块凝胶板，然后在板一端点样，通电，由于样品带电子，向正极方向移动，分子量大的跑的慢，小的跑得快，然后我们可以染色观察。它的作用一般是分离核酸。然后凝胶色谱一般是指色谱柱，从上段加样之后大分子物质难以进入凝胶空隙，从边上流，而小分子就容易进入凝胶空隙，因此大分子流出的速度更快，这种方法主要用途是给高聚物分级（但是我们实验用那一次是用来分离分子量不同的蛋白质的）

为了保持气相色谱分析的准确度，载气的流量要求恒定，其变化小于1％，通常使用减压阀、稳压阀、针形阀等，来控制气流的稳定性。减压阀减压阀俗称氧气表，装在高压气瓶的出口，用来将高压气体调节到较小的工作压力，通常将10～15MPa压力减小到0.1～0.5MPa。由于气相色谱中所用载气流量较小，一般在100mL/min以下，所以单靠减压阀来控制流速是比较困难的，通常在减压阀输出气体的管线中还要串联稳压阀或针形阀，以精确地控制气体的流速。稳压阀稳压阀用以稳定载气(或燃气)的压力，常用的是波纹管双腔式稳压阀。使用这种稳压阀时进气口压力不得超过0.6MPa，出气口压力一般在0.1～0.3 MPa时稳压效果最好。使用时气源压力应高于输出压力0.05MPa。稳压阀不工作时，应顺时针转动放松调节手柄，使阀关闭，以防止波纹管、压簧长期受力疲劳而失效。使用时进气口和出气口不要接反，以免损坏波纹管。所用气源应干燥，无腐蚀性，无机械杂质。

1.当然是色谱柱。2.是色谱柱（内的）填料；3.则是填料的粒径均匀性；4.是填料的孔径的大小分布均匀性；5.还与填料的强度有关；6.与装柱技术、条件有关；7.与柱规格有关，如长短、粗细；8.与流动相有关；9.与样品和柱填料的性能有关；10.与色谱仪器质量有关；11.还有与操作的人的能力也不无关。欢迎登陆：http://www.mkf.cn/

凝胶色谱柱这样延后出峰时间：1、更换孔径更大的凝胶，例如将SephadexG-100换成G-150。2、降低流动相的流速。3、更换相对分子量更小的洗脱剂。

在凝胶色谱操作过程中,若发生洗脱液流干,露出凝胶颗粒，就有空气进入，若不重新装填，混入的空气，影响液体在柱内的流动，从而影响生物大分子物质的分离效果

凝胶色谱的原理比较特殊,类似于分子筛.待分离组分在进入凝胶色谱后,会依据分子量的不同,进入或者不进入固定相凝胶的孔隙中,不能进入凝胶孔隙的分子会很快随流动相洗脱,而能够进入凝胶孔隙的分子则需要更长时间的冲洗才能够流出固定相,从而实现了根据分子量差异对各组分的分离.调整固定相使用的凝胶的交联度可以调整凝胶孔隙的大小；改变流动相的溶剂组成会改变固定相凝胶的溶涨状态,进而改变孔隙的大小,获得不同的分离效果. 如果你只是想测一下分子量范围,可以用它,如果想更好的分离,最好选择其他色谱分析法.

凝胶色谱分析是一种重要的蛋白质分析方法，用于描述多肽或蛋白质在色谱柱中的行为。凝胶色谱（GC）主要分为两种类型：尺寸排除色谱和离子交换色谱。以下是凝胶色谱分析结果的几个重要方面：1、峰的高度：GC图中的峰高（y轴）通常代表检测到的样品在特定的分馏时期的相对量。高峰通常表示贡献较大的组分，而较低的峰则表明组分浓度低。2、峰的形状：GC图中的峰形通常揭示有关分子的分子量和构象。峰形的宽度和对称性（或不对称性）可以从中获得关于组分大小和形状的信息。3、保留时间：GC图中的保留时间通常是峰的中心到图谱初始点之间的时间（x轴）。保留时间可能对照蛋白质样品的尺寸和形状，因此有可能用于刻画蛋白质的分子量和构象特征。4、分离度：GC图中的分离度通常是两个峰之间多少时间或距离（在轴上的）之间的差异。如果峰之间的进程足够宽，这可能表明组分分离不充分。分离度计算对选择和定量所有组分的能力有关键作用。综上所述，凝胶色谱分析不仅仅只有一个峰值得看。通常来说，要综合考虑图形中的几个方面来解释GC图，以便获得更多样的分析结果和相关蛋白质的信息。

是。凝胶色谱是排阻色谱，一般情况下，分子小，可以进入凝胶孔道，需要走很长的路径才能通过凝胶层，大分子不能进入凝胶空隙，很快通过凝胶层，所以移动快，停留时间短。凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。

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高效凝胶色谱是液相色谱的一种。高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC）又称“高压液相色谱”，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。分类有反相色谱法，正相色谱法，分子排阻色潽法等。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。高效凝胶色谱法即用现代高效液相色谱法所使用的高压流路系统，将分离凝胶装填到金属色谱柱中形成封闭液相系统进行分离的色谱法。实际上凝胶色谱在本质上就是液相色谱，只不过其分离原理是用凝胶对分子大小的排阻，而不是常规液相色谱法常用的利用物质极性。

分类: 教育/科学 >> 科学技术 >> 工程技术科学 问题描述: 书本上说凝胶色谱分离血红蛋白是根据分子质量大小分离的，某本练习上根据这个说根据分子大小（体积形状）分离不对，但是没有解释，到底为什么呢？ 解析: 根据我学到的生化知识。正确的应该是凝胶色谱是根据分子大小（也就是体积形状来分离的），说它是根据分子质量大小分离只是因为被分离的东西一般是蛋白质，而蛋白质的分子质量一般和其大小成正相关。 当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶珠内网状结构，被排阻在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动，并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由进出凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。 这个在高等教育出版社，王镜岩老师编的《生物化学》第301页 蛋白质的分离纯化原则上有详细解释。至于你看到的练习和书本上为什么这样写，为了你考试能考高分，建议你拿我的答案和书上的区别去请教你们生物老师，得到他肯定的说法。

相似相容原理

　　凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。　　凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，又可分为凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗透色谱（GPC）。 GFC一般用于分离水溶性的大分子，如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主 凝胶色谱法图示　　要用于有 机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶 性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。

凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，又可分为凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗透色谱（GPC）。 GFC一般用于分离水溶性的大分子，如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有 机溶剂中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶 性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。

凝胶色谱法分离蛋白质原理：大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。

凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质。凝胶色谱法获得纤维素酶的原理是：凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，是根据不同组分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢，中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外，出峰最快，溶剂分子小，故在最后出峰，全部在死体积前出峰，可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离。

凝胶色谱法分离原理：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。 各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。 在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小排队，凝胶表现分子筛效应。———————————————————————————————————交联葡聚糖凝胶（Sephadex）：⑴ Sephadex G 交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。 ⑵ Sephadex LH-20，是Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。交联葡聚糖凝胶是 将纯化后的线性葡聚糖（a-1，b-吡喃型葡聚糖）与环氧氯丙烷反应，再导入丙三醇侧链而在葡聚糖链间形成交联链，再将所得的凝胶制成直径不同的球形即可。所得三维实体在水中能溶胀而不能溶解。交联度越高，凝胶孔径越小。 各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途： SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sepharose 6B 琼脂糖凝胶 6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中 分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中 分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细 分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细 分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离 SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中 分离范围 1500-30000 Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中 分离范围 1500-30000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75 分离范围 3000-80000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75 分离范围 3000-80000 DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶 FF 分离范围：3000-80,000 Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100 分离范围 4000-150000 Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100 分离范围 4000-150000 Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150 分离范围 5000-300000 DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000 Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150 分离范围 5000-300000 Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000 Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000 Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000 DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子 DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子 DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶 A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子具体，请参考：http://baike.baidu.com/view/1472951.htm?fr=ala0_1_1http://baike.baidu.com/view/1410242.htm?fr=ala0_1 ———————————————————————————————————短小精悍版：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。

和液相差不多

凝胶色谱是一种高分子化合物纯化的常用方法，可以去除其中的杂质物，从而获得高纯度的高分子化合物。凝胶色谱的原理基于分子的大小和形状不同，经过固定在载体上的凝胶颗粒会在流动相中作用不同，并且被不同的分离筛选出来，实现分离和纯化高分子化合物的目的。在高分子杂质的分离中，凝胶色谱基本的原理是将高分子杂质和高分子物质按照其分子大小和形状的不同分离开来。其具体操作过程如下：首先，需要选择适当的凝胶颗粒，并将其充填在色谱柱中，形成固定的凝胶层。凝胶颗粒会提供一个复杂的障碍阻力，在分离时将大分子化合物和小分子化合物分离开来。接下来，需要将混合的高分子样品溶液通过色谱柱进行分离。在流动相作用下，化合物在凝胶颗粒中被体积大小固定的孔隙所限制，大分子化合物由于在凝胶颗粒中受到更强的障碍阻力，因此会被减速，较容易受到筛选剔除，小分子化合物一般经过几乎完全的孔隙，可以很容易地通过凝胶颗粒，进入到流动相中。通过对溶液中不同高分子化合物的进出凝胶颗粒的时间和色谱柱的读数来分离和检测样品中的高分子杂质。这样，高分子杂质可以被富集在样品的前端，而高分子物质则可以被分离出来；以此获得高纯度的高分子化合物。总之，凝胶色谱是一种高效的高分子杂质分离和高分子化合物纯化的方法，可以有效的分离不同大小和形状的高分子杂质，获取高纯度的高分子化合物。

凝胶色谱法的原理是：凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰，全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离。凝胶色谱,又称为分子排阻色谱,其分离物质的原理为分子筛原理,且多用于分离有机大分子化合物,如蛋白质、多肽、多糖等.对高分子物质有很高的分离效果。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出 。分子筛效应：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动,垂直向下的移动和无定向的扩散运动.大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快.小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应.具有多孔的凝胶就是分子筛.

凝胶色谱法的原理是：凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰，全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离。凝胶色谱,又称为分子排阻色谱,其分离物质的原理为分子筛原理,且多用于分离有机大分子化合物,如蛋白质、多肽、多糖等.对高分子物质有很高的分离效果。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出 。分子筛效应：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动,垂直向下的移动和无定向的扩散运动.大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快.小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应.具有多孔的凝胶就是分子筛.

凝胶色谱法的原理是：凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰，全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离。凝胶色谱,又称为分子排阻色谱,其分离物质的原理为分子筛原理,且多用于分离有机大分子化合物,如蛋白质、多肽、多糖等.对高分子物质有很高的分离效果。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出 。分子筛效应：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动,垂直向下的移动和无定向的扩散运动.大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快.小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应.具有多孔的凝胶就是分子筛.

凝胶色谱法的原理是：凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰，全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离。凝胶色谱,又称为分子排阻色谱,其分离物质的原理为分子筛原理,且多用于分离有机大分子化合物,如蛋白质、多肽、多糖等.对高分子物质有很高的分离效果。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出 。分子筛效应：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动,垂直向下的移动和无定向的扩散运动.大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快.小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应.具有多孔的凝胶就是分子筛.

凝胶色谱法的原理是：凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过，而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰，全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离。凝胶色谱,又称为分子排阻色谱,其分离物质的原理为分子筛原理,且多用于分离有机大分子化合物,如蛋白质、多肽、多糖等.对高分子物质有很高的分离效果。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出 。分子筛效应：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动,垂直向下的移动和无定向的扩散运动.大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快.小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应.具有多孔的凝胶就是分子筛.

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⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。 交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质，防止微生物的生长，在凝胶层析中十分重要，常用的抑菌剂有:⑴叠氨钠（NaN3）在凝胶层析中只要用0.02%叠氮钠已足够防止微生物的生长，叠氮钠易溶一水，在20℃时约为40%；它不与蛋白质或碳水化合物相互作用，因此叠氮钠不影响抗体活力；不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。⑵可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳，在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效。⑶乙基汞代巯基水杨酸钠在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0. 01%。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。⑷苯基汞代盐在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01%。在微碱性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用。

(1)除去样品中分子量较小的杂质 (2)相对分子量较小 较长 较慢 (3)红色蛋白质

【答案】B【答案解析】试题分析：凝胶色谱法是根据相对分子量的大小分离蛋白质的方法之一。相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。故选B考点：本题考查凝胶色谱法的原理。点评：本题意在考查考生的识记能力和理解能力，属于容易题。

高效凝胶色谱是液相色谱的一种。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography HPLC）又称“高压液相色谱”，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。分类有反相色谱法，正相色谱法，分子排阻色潽法等。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。高效凝胶色谱法即用现代高效液相色谱法所使用的高压流路系统，将分离凝胶装填到金属色谱柱中形成封闭液相系统进行分离的色谱法。实际上凝胶色谱在本质上就是液相色谱，只不过其分离原理是用凝胶对分子大小的排阻，而不是常规液相色谱法常用的利用物质极性。

凝胶色谱法测得的数均分子量为什么与核磁波谱法凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。分离依据是目的物分子量的大小。主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。形象来说更像是“分子筛”。大分子物质先流出，小分子物质后流出。凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置 在电场当中时 , 它们 就会 以一定 的速 度移向适当的电极 , 这种电泳分子在电场作用下的迁移速度 , 叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说 ,电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多 ,其迁移的速度也就越快 , 反之则较慢。由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质 , 如琼脂糖凝胶和聚丙 烯酰胺 胶等 , 从而降低了对流运动 , 故 电泳 的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩 擦系数 是分 子的大 小、极性及介质 粘度 的函数 , 因此根据分子大小的不同、 构成或形状的差异 , 以及所带的净电荷的多少 , 便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离开来。形象来说更像是“马拉松”。不过影响因素不仅仅是分子量了。测DNA往往使用电泳技术，凝胶色谱一般用于提纯大分子物质。

根据我学到的生化知识。正确的应该是凝胶色谱是根据分子大小（也就是体积形状来分离的），说它是根据分子质量大小分离只是因为被分离的东西一般是蛋白质，而蛋白质的分子质量一般和其大小成正相关。 当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶珠内网状结构，被排阻在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动，并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由进出凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。 这个在高等教育出版社，王镜岩老师编的《生物化学》第301页 蛋白质的分离纯化原则上有详细解释。 至于你看到的练习和书本上为什么这样写，为了你考试能考高分，建议你拿我的答案和书上的区别去请教你们生物老师，得到他肯定的说法。

凝胶色谱法和sds聚丙烯酰胺凝胶电泳的对比如下：1、凝胶色谱法用来分离和提纯蛋白质SDS凝胶电泳法主要是检验蛋白质的纯度。2、凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。分离依据是目的物分子量的大小。主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说，电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。

你好，其实这个地方就是用相对分子质量衡量蛋白质分子大小的，基本认为蛋白质分子大小与分子质量呈正相关，虽然事实上并不如此。

相对分子质量大小是指一种蛋白质上所有原子的相对原子量之和，而分子大小则是指蛋白质分子的体积大小。一般情况下相对分子质量大的蛋白质分子大小也大。所以我认为区别很小。

以多孔凝胶（如葡萄糖，琼脂糖，硅胶，聚丙烯酰胺等）作固定相，依据样品分子量大小达到分离目的。

凝胶分子内有空隙,装入色普柱后,分子与分子之间也有空隙而且比分子内孔径大,分离时,大分子物质直接从凝胶分子间的空隙通过时间少;而小分子物质则通过分子内空隙,路程多时间多,后出来,这就分离了

相对分子质量大小是指一种蛋白质上所有原子的相对原子量之和，而分子大小则是指蛋白质分子的体积大小。一般情况下相对分子质量大的蛋白质分子大小也大。所以我认为区别很小。