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请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的原理和相关试剂盒使用步骤

博凌科为生物科技-为你解答:一、原理在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依 赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。二、常见试剂盒组份 组份 Annexin V-FITC 50L 100L 250L 500L Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 25 mL2 Propidium Iodide (PI) 50L 100L 250L 500L 三、操作步骤1.悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集;贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);2.用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5105细胞;3.加入500L的Binding Buffer悬浮细胞;4.加入5L Annexin V-FITC混匀后,加入5L Propidium Iodide,混匀;5.室温、避光、反应5~15min;6.请在1 hour内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。A.荧光显微镜观察1.滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;2.对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;(1) 将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;(2) 用PBS洗涤细胞两次;(3) 在500L 的Binding Buffer中加入2L Annexin V-FITC, 5L Propidium Iodide,混匀;(4) 将上述溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;(5) 避光、室温反应5 min。3.将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC和罗丹明)观察Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。B.流式细胞仪分析用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。四、注意事项1.Annexin V-FITC,Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。2.Propidium Iodide (PI)有毒,操作时要戴手套。3.本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1105,,不适用于检测组织样本。4.推荐使用悬浮培养细胞,如果是贴壁细胞,用胰酶消化不当,会引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。5.因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。五、储存 置于40C,可保存一年

请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的原理和相关试剂盒使用步骤

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。 其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。操作步骤:1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

木材漂白稳定剂TANNEX CX,和螯合剂的问题

TANNEX CX属于阴离子型双氧水稳定剂,有优异的双氧水稳定效果,确保均匀漂白,极佳的渗透性,白度高,手感好,不含APEO。螯合剂 BAYQUEST 100 阴离子 一综效型助剂,具有分散、螯合、保护胶体等功效,防止染料与助剂在硬水中沉淀,因此可以增加匀染度与染色再现性。 2.0-6.0g/l 0.5-4.0g/l √ BAYSOLEX EXT 阴离子 前处理和荧光漂白用螯合分散剂,去除纤维中的重金属杂质,中和漂液中的碱剂。 2.0-6.0g/l 0.5-4.0g/l √ BAYSOLEX EXT-120 阴离子 可应用于染色,中性及酸性含媒染料染色,提高织物白度与毛效,中和漂液中碱剂。 2.0-6.0g/l 0.5-4.0g/l √ BAYSOLEX QXL 阴离子 碱性精练、漂白与生物精练用螯合剂,对碱土金属盐具有良好的螯合作用,可生物降解,不含任何氮类、磷酸盐。 2.0-6.0g/l 0.5-4.0g/l √ LEVAQUEST 98-3 阴离子 钙、镁离子的高效螯合剂,防止染料与助剂在硬水沉淀,因此可增加匀染度与染色再现性。不会影响中性含金染料得色量。 2.0-6.0g/l 1.0-4.0g/l √ PLEXENE CA 阴离子 适用于棉织物的前处理、碱煮和漂白。 2.0-6.0g/l 1.0-2.0g/l √ PLEXENE FED 阴离子 耐强碱螯合剂,对重金属离子具有高度的螯合能力,适用于煮练漂白与丝光,耐高温可达130℃,无泡沫。 2.0-6.0g/l 1.0-2.0g/l √ PLEXENE PERP 阴离子 棉用前处理去除碱土及重金属离子杂质的螯合剂,可与淀粉酶合用,非常利于亚麻及其混纺制品的前处理。 2.0-15g/l 1.0-3.0g/l √ PLEXENE UL 阴离子 钙、镁离子的高效螯合分散剂,可与中性含金染料共浴,不会影响得色量。 2.0-6.0g/l 0.25-2.0g/l √

GEP转染细胞能不能用Annexin5和PI双染检测凋亡,GFP的荧光会不会影响流式检测的结果

额,一楼说得很对.我刚才说错了,已经删掉,请无视.

流式Annexin-FITC/PI双染法测凋亡,各个象限代表什么状态的细胞

Q1:(AnnexinV-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Q2:(AnnexinV+FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞。Q3:(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4:(AnnexinV-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。资料扩展:细胞(英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。动物细胞无细胞壁,细胞质中常有中心体,而高等植物细胞中则无。

Annexin V EGFP与FITC有什么区别?

与 FITC 的绿色荧光信号相比,EGFP 的绿色荧光信号具有信号强,不易淬灭,稳定性高等优点。

流式Annexin-FITC /PI 双染法测凋亡,各个象限代表什么状态的细胞

Q1:(AnnexinV-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Q2: (AnnexinV+FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞。Q3:(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4:(AnnexinV-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。资料扩展:细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。动物细胞无细胞壁,细胞质中常有中心体,而高等植物细胞中则无。

路由器的参数!不知道是什么意思请教高手 4*FE LAN 1*FE WAN 1*ADSL2 Annex A/M 4*FXS

楼上的乱忽悠!1G.SHDSL 8-WIRE怎么可能是1G的速率?更不是8路。而是一个8线的G.SHDSL接口,是一种对称速率的DSL技术,速率为n*64kbps,n最大为36,怎么都不可能有1G的速率。FXS和FXO的解释更是业余至极!FXS意思是foreign exchange Station,指的是用来接电话机的端口,可以理解为用户侧接口(下行);FXO意思是foreign exchange office,指的是接交换机的端口,可以理解为网络侧接口(上行)。FXS和FXO并不是插头和插座的关系,虽然它们在网络中是成对出现,都是一个RJ11水晶头,它们之间通过双绞线连接。在HomeGateway上,可以有1个或多个FXS口,接家里的电话机,也可以有FXO口,上行接到运营商局端pots设备,作为gateway故障时的电话逃生通道。

annex xvii of reach纺织品什么意思

REACH附录XVII里面有个偶氮AZO dye的测试要求。TCT提供解答

Annex I countries 是什么意思

Annex I countries 附件一国家;工业发达国家双语例句1The actual greenhouse gas emissions in2005 are lower than the target emissions inmore than half of the Annex I countries, which is in good performance condition.在2005年,有超过一半的附件一国家的实际排放量低于其目标排放量,履约进展状况良好。2Clean Development Mechanism ( CDM) is adopted on the Third Conference of theParties ( COP3) of "United Nations Framework Convention on Climate Change". It isa flexible compliance mechanism to assist Annex I countries achieving greenhousegas emission reduction. 清洁发展机制(CDM)是1997年《联合国气候变化框架公约》第三次缔约方大会(COP3)通过的,为协助附件I国家实现温室气体减排承诺的一种灵活履约机制。

AnnexL是什么意思

Annex类型: ANNEX A ANNEX I ANNEX A/L ANNEX M ANNEX A/I/J/L/M这些没有必要设置!

Annex ZA 是什么意思?有关贸易方面的

annex在电子邮件里的是“附件”的意思 应该是 附件 ZA吧

关于ADSL产品,Annex A和Annex B是什么意思?

是不同ADSL标准

iso9001新版标准的条款完全和annex sl的mss高级框架一样对吗

一级条款是对应的,从1到10。二级以下就不一定了,如9001的8.1-8.7就不一定了。。

美国munster annex属于哪个洲

你确定地名没打错?

合同中尾部写"附件一" 的英文应该写attachment i还是Annex

用attachment i

在通讯行业里,Annex A和Annex B分别指的是什么?

ITU标准:Annex A指的是ADSL Splitter Annex B指的的是ISDN Splitter

纸板的国际民航组织附件(ICAO ANNEX 1-14)哪里可以买

可以在民航安技中心买到,不过据我所知应该很贵,大概上千了。

压敏电阻,UL证书上的Type 2,Type 1 一定符合IEC 60950 Annex

UL证书上是Type 2、 Type 1的话,一般是能通过IEC 60950 Annex Q要求的测试的. 但是不是符合IEC 60950 Annex Q,要看VDE证书上是不是明确写了,没写的话就不能认为符合.

93/42/eec annex vii

我们的检查是基于欧盟医疗器械指令93/42/eec附录7 的3.2章节. 我们是以上指令的公告机构(公告号0086),作为英国标准研究院的代表.

无主之地2natural selection annex在哪

还记得野生动物保护区吗,自然选择条件这个地图就在那,你去做主线时,就已经跟它擦身而过一次了,你再回去找找

什么是Annex 1 Countries

Annex I countries 附件一国家;工业发达国家双语例句1The actual greenhouse gas emissions in2005 are lower than the target emissions inmore than half of the Annex I countries, which is in good performance condition.在2005年,有超过一半的附件一国家的实际排放量低于其目标排放量,履约进展状况良好。2Clean Development Mechanism ( CDM) is adopted on the Third Conference of theParties ( COP3) of "United Nations Framework Convention on Climate Change". It isa flexible compliance mechanism to assist Annex I countries achieving greenhousegas emission reduction. 清洁发展机制(CDM)是1997年《联合国气候变化框架公约》第三次缔约方大会(COP3)通过的,为协助附件I国家实现温室气体减排承诺的一种灵活履约机制。

无主之地2natural selection annex在哪

在野生动物保护区那里,到那里之后打开地图,可以看到右边有两个售货机的标志,门口就在售货机旁边。主线任务救血翼的时候就从那里经过的。

国外客户要求提供 ANNEX III产地证,请问是什么产地证

ANNEX III 附件3的意思产地证分为一般产地证和普惠制产地证。一般产地证 全称:CERTIFICATE OF ORIGIN是用以证明有关出口货物和制造地的一种证明文件,是货物在国际贸易行为中的“原籍”证书。在特定情况下进口国据此对进口货物给予不同的关税待遇普惠制产地证 全称:GENERALIZED SYSTEM OF PREFERENCES 普惠制的作用 :由于给惠国实行减免关税产生的差额,使受惠国出口商品的价格具有更大的竞争能力,吸引进口商购买更多的受惠产品,从而扩大了受惠国制成品和半制品的出口,增加外汇收入,促进工业化。到当地的检验检疫局和贸促会办理。两个地方提供的证书稍有不同。手续:需提供贵公司的注册登记证和组织机构代码证领取向所属管区的检验检疫局申领注册登记表。购买空白证书,制作产地证,连同申请表、发票,箱单到检验检疫局/贸促会办理。立即可取

请问Annex A/B/C/M 分别代表什么意思?有什么不同,谢谢!

ITU标准:Annex A指的是ADSL Splitter Annex B指的的是ISDN Splitter 借用他人:先说结论,是adsl标准的附件,我国选annex Aadsl现在很多城市开始搞adsl2了,传输速率那是肯定会大大提高。adsl是用电话线来拨号的,可以看做是一条模拟线里面放了很多条数字线来传数据。传输速率快了,就要想法来解决各条数字线之间的干扰。现在安装adsl经常听到电信公司的人说某某小区线路不好,就是因为线路过长、信噪比劣化。然后世界各国高手决定一起搞套标准来定义如何解决adsl更快、距离更长的问题。搞出来一个武林公约叫做G.992.1,后来又搞出来武林公约2号版本,3号版本,4号版本。。。。。。这些公约都有附件的北~美分舵的附件叫做 annex A(是给那些用电话线拨adsl的兄弟用的,你就是,你就是,你就是)欧~洲分舵的附件叫做 annex B(给ISDN用的)雅~蠛~蝶分舵的附件叫做 annex C(简称挨~你~超,和雅~蠛~蝶的名字般配啊)咱们天~朝是加入的北~美~分~舵,所以使用annex A。咱们天~朝的adsl可以使用华丽的终极技能,提升为adsl2+++++++++++++++++++++++好多字不能打,那些国家你懂的。

attachment appendix annex 区别

单词之间的差别可以自己就用英英词典查出来哦,不需要问人吧。楼上的的确回答很好,我也就不多说了。补充一点,annex means To append or attach, especially to a larger or more significant thing。

annex是什么意思啊?是电子邮件里的“附件”么

annex在电子邮件里的是“附件”的意思 annex 1KK: [] DJ: [] vt. 1. 附加,增添[(+to)] An insurance policy was annexed to the contract. 合同上附加了保险条款。 2. 并吞,强占;合并 The city annexed the area across the river. 该市合并了河对岸的地区。 3. 获得,得到 She annexed the first prize in the speech contest. 她在演讲比赛中获得头等奖。 4. 把...作为附录 annex 2 KK: [] DJ: [] n.[C] 1. 附加物;附件;附录 an annex to the contract 合同的附件 2. (房屋等的)扩建部分;增建的房屋[(+to)] A new annex is being added to the hospital. 那家医院在增建房屋。 参考资料: http://www.baidu.com/s?lm=0&si=&rn=10&ie=gb2312&ct=1048576&wd=annex&tn=max2_cb