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一部外国电影,关于三只会唱歌的花栗鼠与男主人公Dave之间发生的故事,请问这部电影的名字叫什么?

2023-06-17 01:21:38
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片名: 艾尔文与花栗鼠/鼠来宝主演: 杰森·李 卡梅隆·理查德森 大卫·克罗斯 简·林奇 类型: 动画片 年份: 2007 年 2476地区: 欧美 语言: 英语 影片介绍继那只脾气坏又好吃懒作的加菲猫搞出了一大堆是是非非之后,大银幕上的新一代宠儿由三只古灵精怪的花栗鼠接手……故事开始于一个生活在洛杉矶、雄心勃勃却又怀才不遇的词曲作家戴夫所面对的一系列窘境,他的制作人伊恩对于他的作品和女友克莱尔似乎都不甚满意,也缺乏耐心,所以干脆“冷藏”了他,对他不闻不问。就在戴夫几乎放弃了所有的希望之时,却突然在自家的厨房听到了轻快的节奏,循着声音,他找到了艾尔文、西奥多和西蒙--三只在厨房偷吃、却绝对拥有着与众不同的才能的花栗鼠。
  让戴夫差点惊掉了下巴的是,这些厚颜无耻跑到他家找能吃的东西的花栗鼠,不但说着一口流利的英语,竟然还会唱歌,而且颇有音乐天赋……它们自顾自地在戴夫的住所安了家,成了这个冷清的屋子里的新宠物,吃饱住好的同时,顺便帮助戴夫创作了几首全新的圣诞歌曲,共同演奏给伊恩听。
  不幸的是,同样觉得花栗鼠会唱歌很神奇的伊恩,还看到一条财源滚滚的致富之路,他为三只花栗鼠进行了最有效的包装和宣传,然后展开了世界范围内的巡演,给它们安排了大量的工作,心中盘算的是要如何奴役它们,才能给自己带来最大的经济效应。为了让自己心中的计划一路畅通无阻,伊恩借故成功地将一直保护着花栗鼠的戴夫赶出门外,让他没办法再度参与进来。那么,我们可爱的花栗鼠能在人类的贪婪中生存下来吗?大卫又能否拯救这三只帮他赶走了孤独的伙伴,赶在金钱至上的伊恩造成永久的伤害之前?其实答案,早在我们走进电影院之前,就已经非常明确了。片名: 鼠来宝2:明星俱乐部/艾尔文与花栗鼠2/花鼠明星俱乐部主演: 贾斯汀·朗 马修·格雷·古柏勒 杰西·麦卡尼 类型: 动画片 年份: 2009 年 8011地区: 欧美 语言: 英语 ◎译  名 《鼠来宝2:明星俱乐部/艾尔文与花栗鼠2/花鼠明星俱乐部》09年最新超热动画喜剧DVD中英双字
◎片  名 Alvin and the Chipmunks The Squeakquel
◎年  代 2009
◎国  家 美国
◎类  别 动画/喜剧/家庭/爱情
◎语  言 英语
◎字  幕 中英双字
◎IMDB评分 3.0/10 (3,175 votes)
◎IMDB链接 http://www.i**.com/title/tt1231580
◎文件格式 XviD + MP3
◎视频尺寸 640 x 304
◎文件大小 1CD 49 x 15MB
◎片  长 88 mins
◎导  演 贝蒂·托马斯 Betty Thomas
◎主  演 贾斯汀·朗 Justin Long....Alvin (voice)
      马修·格雷·古柏勒 Matthew Gray Gubler....Simon (voice)
      杰西·麦卡尼 Jesse McCartney....Theodore (voice)
      扎克瑞·莱维 Zachary Levi....Toby
      大卫·克罗斯 David Cross....Ian
      杰森·李 Jason Lee....Dave
      艾米·波勒 Amy Poehler....Eleanor (voice)
      安娜·法瑞丝 Anna Faris....Jeanette (voice)
      克里斯蒂娜·艾伯盖特 Christina Applegate....Brittany (voice)
      Wendie Malick ....Dr. Rubin
      Anjelah N. Johnson ....Julie (as Anjelah Johnson)
      Kathryn Joosten ....Aunt Jackie
      Kevin Schmidt ....Ryan
      Chris Warren Jr. ....Xander
      Bridgit Mendler ....Becca
      Aimee Carrero ....Emily
      Alexandra Shipp ....Valentina
      Gregg Binkley ....Emcee
      Charice Pempengco ....Herself
      Bernard White ....Doctor
      Adèle Jacques ....Nurse
      Joy Osmanski ....Airline Rep
      Archie Hahn ....Agent
      Lanny Joon ....Paramedic
      Brando Eaton ....Jeremy
      Andrew Lee ....Honor Society / Himself
      Michael Bruno ....Honor Society / Himself
      西恩·奥斯汀 Sean Astin....Meerkat Manor Narrator (voice)
      Marty Dew ....Chipmunk Dancer
      Richard Jackson ....Chipmunk Dancer
      Mihran Kirakosian ....Chipmunk Dancer
      Janelle Ginestra ....Chipette Dancer
      Thomasina Gross ....Chipette Dancer
      Rachele Smith ....Chipette Dancer (as Rachele Smith)
      Ryan Conferido ....Li"l Rosero Dancer (as Daniel Ryan Conferido)
      Victor Kim ....Li"l Rosero Dancer
      Hokuto "Hok" Konishi ....Li"l Rosero Dancer (as Hokuto Konishi)
      Dominic Sandoval ....Li"l Rosero Dancer
      Steve Terada ....Li"l Rosero Dancer (as Steven Terada)
      Jera Askey ....Paris Fan (uncredited)

◎简  介 

  两年前阴差阳错之下,三只花栗鼠艾尔文(贾斯汀·朗配音)、西蒙(马修·格雷·库伯勒配音)与西奥多(杰西·麦卡尼配音)成功帮助一个事业失败的作曲家戴夫·塞维利亚(杰森·李饰)重新振作起来。如今光阴似箭,三个可爱的家伙已经彻底适应了人类社会,和戴夫的相处也算是愉快,当然花栗鼠们也没忘记间或捉弄戴夫……如今的戴夫已经是一位知名作曲家,而他的生活也开始忙碌起来,甚至没空管管自己的侄子托比(扎克瑞·莱维饰)的生活。

  托比最近遇到了一个麻烦事,他所在的校园举办了一个音乐比赛,而他因为某个原因,必须要赢得比赛的25000美元奖金。为了让自己能够赢得比赛,他向叔叔戴夫求助,不过忙得要死的戴夫实在分身乏术,因此这个重任就落在了三只花栗鼠身上。艾尔文、西蒙和西奥多开始过起了校园生活,而他们在校园里也遇见了另外三只同样热爱音乐的女花栗鼠--布列塔妮(克里斯蒂娜·艾伯盖特配音)、埃莉诺(艾米·波勒配音)与珍妮特(安娜·法瑞丝饰)。浪漫的火花一触即燃……

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什么是缩二脲

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fly跟frye的的读音上区别?

fly(f-lai)fry(f-rai)一个是 r 的音,一个是l的音。日本人通常不会发清楚。。。一般的时候还是比较好区分的。可以看口形,吐舌头的是l L,r都是拼音的发声。
2023-06-16 16:24:436

向前冲歌词

  1、歌词   开始觉得每一天都充满了新鲜   Yayayaya   彩色的烟火随时都在天空眨眼   Yayayaya   除了爱情每件事我都愿意排队   Yayayaya   刚出炉的面包比男生更难拒绝   Yayayaya   我能体会好多姐妹为了爱   傻傻的等待偷偷掉眼泪   这样不对耳朵过来交换意见   当王子被发现我们向前冲吧   Ho-a a-hali-ali-a   Ho hey-a-alia ho ho-o-alia   Ho-a a-hali-ali-a   Ho hey-a-alia ho ho-o-alia   Y-u-k-I y-u-k-I yuki   Yeaa yeaa   Y-u-k-I y-u-k-I yuki   Yeaa yeaa   害羞微笑心跳加速谁在偷偷放电   Yayayaya   随时注意脸红的人会自动出现   Yayayaya   一切都在计划中对自己好敬佩   Yayayaya   恋爱的时候我一定会通知各位   Yayayaya   伸出双臂一起拥抱这世界   每一次约会都不能浪费   你还在睡难怪你总是没人追   目标就在眼前我们向前冲吧   Ho-a a-hali-ali-a   Ho hey-a-alia ho ho-o-alia   Ho-a a-hali-ali-a   Ho hey-a-alia ho ho-o-alia   Y-u-k-I y-u-k-I yuki   Yeaa yeaa   Y-u-k-I y-u-k-I yuki   Yeaa yeaa   2、《向前冲》是在1998年109日发行的音乐专辑,由徐怀钰演唱,共收录了12首歌曲。
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涮是多音字吗?听说是,另一个读音是什么?

好像只有一个音吧,或者是有不同的地方口音
2023-06-16 16:24:453

bradford测定蛋白质含量的优点有哪些

bradford法测定蛋白质浓度(一)实验原理双缩脲法(biuret法)和folin—酚试剂法(lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法.1976年由bradford建立的考马斯亮兰法(bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法.考马斯亮兰g-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(uf06cmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.在595nm下测定的吸光度值a595,与蛋白质浓度成正比.bradford法的突出优点是:(1)灵敏度高,据估计比lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1uf06dg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的多.(2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间.(3)干扰物质少.如干扰lowry法的k+、na+、mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不干扰此测定法.
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2023-06-16 16:25:361

影评:《怦然心动》--那双 Dazzling Eyes

两小无猜的年纪,他们初次相识,小女孩儿砰然心动,忘不掉男孩儿那一双亮晶晶的眼睛。他们从几岁成长到十几岁,从孩童到少年,十几年的时间里,一路陪伴着彼此成长,是彼此生命里不可或缺的角色。但是男孩儿女孩儿似乎一直不同步,或者说男孩子一开始太懵懂,并不清楚自己的感情。反倒是女孩儿,坦率真实的可爱,喜欢一个人就大声说出来,为他做很多事情,丝毫不掩饰不扭捏。当自己喜欢的男孩儿做出一些让自己伤心的举动时,又会很理性的分析他是不是自己要找的人。爱的热烈,却始终没有丧失自我。故事的最后,男孩儿女孩儿一起种下了具有象征意义的梧桐树,女孩儿那句"Do you need some help?",一下把我们拉回了他们初次相识的那个明媚夏天。只不过这次,男孩儿微微一笑,用手握住女孩儿的小手,一如多年前女孩儿主动拉起男孩儿的手。爱意在两个人之间滋长,感动又温暖。 影片里有很多很有哲理的对话,这部电影,讲述的不仅仅是两个男孩儿女孩儿之间的怦然心动青涩的爱,它同时也传递给我们, 当你遇到生命中的那个人,其他人都成了陪衬和浮云 。并且,从小女孩儿的父母身上,我们也能学习到,爱不仅仅是激情,它更包含着理解、支持和坚定。因为深爱,所以男孩儿的外公一直将去世的外婆深埋心底,他思念她,怀念她;因为深爱,女孩儿的母亲尽管异常辛苦却一直支持丈夫花很多的钱照顾智障的弟弟。生命中有了爱,才有了温暖和意义,不然再好的物质条件,也只会像电影中男孩儿的爸爸那样让人喜欢不起来。爱,教会我们勇敢,让我们充满希望的去生活。 想起了《大话西游》中,朱茵扮演的紫霞仙子,看到心爱的他时,眼里有好多小星星在闪烁,满满洋溢的都是幸福。 其实,喜欢一个人,不仅仅会看到对方亮晶晶的眼睛,原来自己也会一样的啊 。这就是爱情最美好最浪漫的状态。 终其一生,我们很多人,都是在为了寻找那一双亮晶晶的眼睛,在寻找那个能让我们整个眼神甚至生命都明亮美好起来的那个人。 怦然心动,然后跟那个人,四目温暖对视,携手一生。因为有了那个他,整个生命的色调都变得明快、美好而浪漫。 在这部电影里,我们看到的是简简单单的爱,不复杂,没有伤害。看过了太多爱情的悲伤纠结,伤害背叛,看到这样美好单纯的爱情,真是让人心生羡慕。 附上很多经典台词: A painting is more than the sum of its parts. A cow by itself is just a cow. A meadow by itself is just grass, flowers. And the sun peeking through the trees is just a beam of light. But you put them all together and it can be magic. 一幅画不是众多物件简单拼凑而成的。牛只是一头牛,草地也只有青草和鲜花,而穿过树枝的阳光也仅仅只是一束光,但如果将它们放到一起,就会产生魔一般的魅力。 The higher I got, the more amazed I was by the view. 我爬得越高,眼前的风景便愈发迷人。 Some days the sunsets would be purple and pink. And some days they were a blazing orange setting fire to the clouds on the horizon. It was during one of those sunsets that my father"s idea of the whole being greater than the sum of its parts moved from my head to my heart. 有时落日泛起紫红的余晖,有时散发出橘红色的火光燃起天边的晚霞。在这绚烂的日落景象中,我慢慢领悟了父亲所说的整体胜于局部总和的道理。 Sometimes a little discomfort in the beginning can save a whole lot of pain down the road. 有时起初的隐忍可以避免一路的疼痛。 Some of us get dipped in flat, some in satin, some in gloss. But every once in a while you find someone who"s iridescent, and when you do, nothing will ever compare. 有些人沦为平庸浅薄,金玉其外,而败絮其中。可不经意间,有一天你会遇到一个彩虹般绚丽的人,从此以后,其他人就不过是匆匆浮云。Sherry Stalls was nothing but a whiny, gossipy, backstabbing flirt. All hair and no substance. And there she was holding hands with Bryce. My Bryce. The one who was walking around with my first kiss. 雪利·斯道尔斯是个絮絮叨叨、阴险毒辣的长舌妇,头发长见识短。可她竟然牵起了布莱斯的手。那可是我的布莱斯!带着我的初吻到处招摇的布莱斯! - And she"s been stalking me since the second grade. - Well, a girl like that doesn"t live next door to everyone. - 她从二年级起就老是缠着我。 - 这种女孩可是可遇不可求的。 One"s character is set at an early age. I"d hate to see you swim out so far you can"t swim back. 从小看到老,我可不愿看到你做边城浪子回不了头。 The way she talked about what it felt like to be up in that tree to be held above the earth, brushed by the wind. Who in junior high talks like that? This weird feeling started taking over in the pit of my stomach and I didn"t like it. 她说起那种置身树梢的感觉时说就像被高高举起,微风拂面。哪个初中生会说出这样的话呢?这种怪怪的感觉在我胃里翻腾,我不喜欢这种感觉。 The apple doesn"t fall far from the tree. 树上掉下的苹果它落的地离树能有多远? And I realized Garrett was right about one thing: I had flipped. Completely. 我意识到加利特一件事是说对了:我心动了。完全心动了。
2023-06-16 16:25:391

测定蛋白质相对含量的方法有哪些

测定蛋白质相对含量的方法:直接测定UV法、双缩脲法(Biuret法)。直接测定UV法:这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受 到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。蛋白质含量:蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说,蛋白质约占人体全部质量的18%。蛋白质(protein)是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸(Aminoacid)按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。
2023-06-16 16:24:081

洛克人X8 武装装甲取得地点

  SORRY!我转的·····自己一点一点看吧······我很佩服你·····因为你没用挂····  Noah"s Park  关卡要点  一开始登场的是X与AXL,开始的敌人都很好对付,X不能斜上射击要注意,走了一段路程后,本关的BOSS第一次登场,一只巨型的机械蜘蛛,ALIA会提醒你蜘蛛的爪子会抓住你,抓住的时候换人就可以了。  蜘蛛两种攻击方式,发射子弹,一个爪子会飞出后从左边中间出现,被抓住的话换人就可以解救。这里只需要让AXL停留在空中,不停的对蜘蛛的脑袋射击,注意落下的时候躲避子弹,很简单。  继续前行,到了悬崖X会离开,通过悬崖需要利用AXL能在空中飞行一段距离的能力,在空中按住跳跃就可以了。继续前进进入一个小房间,这是游戏经常出现的陷阱房间,会不断出现敌人,根据你杀敌的数量决定你获得的MEATAL数量,但地面有四样东西是固定的,钻石一样的是增加合体攻击槽的,裂开的石头是补充武器槽,白色的玻璃补充血槽。  出门,ZERO加入,之后的敌人大都有护甲,ZERO的第三段斩,AXL的连续射击,X的最高蓄力都可以破护甲,实在破不了,绕到后面攻击后方就可以了。  走到瀑布,BOSS第二次出现,地上会爬小蜘蛛,爪子依然会到处飞行,之后根据先前你站的位置,从天而降,在瞬间躲避即可,BOSS会掉钻石,合体槽满了后ALIA会提醒你用合体攻击,跳起来,按R2,让能量圈碰触到BOSS露出水面的头颅,就可以了。  之后AXL又离开,继续一个陷阱房间后,X加入,一路前行杀敌,某处跳不上去的时候,需要把蓝色的开关击打成红色,顶上的铁门就会打开,如果往回走的话,沿着左边的墙壁向上跳,可以看到左上有个房间,里面是mwtal。以后只要看到蓝色按钮你就知道那是控制某些装置的,过关需要打开它们。  BOSS  机械蜘蛛第三度登场,这次不能饶过他了,ALIA提醒用合体攻击。蜘蛛有护甲,受攻击的部位只有头部。X最高蓄力跳起攻击其头部,它就会瘫痪,此时可以从他身底下穿过,袭击他的背部上方,会掉落钻石,合体槽集满后,再把它打趴下,用合体攻击轻松搞定。  隐藏物品  1. 第一个陷阱房间出来后,上方可以看到一些METAL,有一块石头颜色特别,后期X装备Head Parts I就可以跳起顶碎石头获得Rare Metal,实验室里面可以开发新的部件,这里得到后,可以在实验室开发AXL的Shock Absorb能力,作用是受到攻击后,不会后退。  2. 第二个陷阱房间前,悬崖下方有一扇不能打开的门,第二次来就开了,里面获得Buster Parts I。  3. 如果以后选择ALIA作为辅助,在遇到的第一个瀑布那里,她会提醒你利用二段跳可以跳到平台上面,跳上去后获得Special Metal,开发Weapon Bottle Full。  INTER MISSION  在瀑布场景下面尽可能的消灭最多数量的小机械蜘蛛。  蜘蛛消灭后,Vile出现,似乎挟持了Lumine,它叫嚣着,电梯已经在他们控制之下,一个新的世界就要开始了,扬长而去。X不理解他们所说的新世界到底是什么东西,ALIA若有所思的时候,突然检测到了世界各地出现Maverick的踪迹,可以开始选关战斗了。  Troia Base  关卡要点  这一关比较特殊,它是由8个小关组成,敌人都是可爱的警报小机器人。中间6关每关都分三个档次,上中下,难度依次递减。前一关你的表现决定了你后一关的难度,表现得好坏可以看右下角数字的变化。此外,只要你续关一次,难度就会下降一格。每次表现达到最好标准只能上升一格,也就是说不会突然从下升到上。  第一关,杀敌数超过75进中,超过90进上。建议这里用ZERO的Rasetsusen技能。  第二关,8秒之内进级,12秒之外降级,坠落的同时攻击,如果ZERO有长的兵器的话会很好办  第三关,同上,在水平移动的小平台上攻击一个,建议使用长的武器或者X的全屏攻击的技能。  第四关,同上,在三个转动的齿轮上面攻击二个,建议同上。  第五关,同上,巨大化的,需要不断攻击。  第六关,同上,在传送带上攻击,建议同第三关。  第七关,同上,敌人是两个士兵,全屏攻击会很管用,  第八关,慢慢的去消磨机械龙的外壳吧。  从第七关进入第八关的水晶刺的过法见图3。首先从此到A点,从A点起跳到最高,需要ZERO二段比较保险,最高点冲刺落到B点,B点就普通的一跳高度,冲刺,挂在C点,从C点可以落下直接冲刺,或者掉落在D点再跳跃冲刺。之后进一个房间会根据你的综合表现给你奖励。之后BOSS战。  BOSS-OPTIC SUNFLOWER  我是谁,我虽然不是什么好家伙,但我也不是怪兽,我不会让你们破坏我们的计划的。”  光属性的向日葵始终会不停的移动,会从你的脚下钻出,小心点,一开始他只会释放一条移动的激光,利用场景内的跳台躲避,当它的血减至4/5的时候,激光会变成两条,同时场景内的平台会变化。血减至1/2,注意他会发射贯通上下屏幕的巨型激光,之前被跟踪的时候没有办法躲避,只有在释放前的刹那才能用冲刺躲避,同时注意BOSS释放的捕捉笼子,被捉住会不断减血,换人解救。BOSS闪光的时候是无敌的,乘他刚从地面钻出来的时候猛烈攻击吧。此外暗属性的攻击有特效。  结束后,三个人分别获得武器栏里面的第一种武器。  隐藏物品  1. 在第三关进入第四关的通道,可以从高台冲刺使用X的SQUEEZE BOMB攻击,打开取得Buster  INTER MISSION  10分钟之内消灭所有8个BOSS。  打完这一场战斗后,X显得有点疲倦,AXL也说扣扳手扣到手疼了,X不喜欢战争,他不知道这一次战争到底要延续到什么时候。  Primrose  关卡要点  这一关有很多小房间组成,红色按钮让房间顺时针180度旋转,绿色按钮顺时针90度旋转,一般出口都被箱子挡住了,利用旋转房间,找到出口就可以了。  这里要注意的几点。  1.第一次看到有两个绿色按钮的时候,不要去碰上面的,碰左边的三次就可以了。  2.看到很多按钮的时候别慌乱,把握原则,让尖刺在你头顶你就就安全。  3.中间一个陷阱房间,比较麻烦。  4.这个房间如果不是陷阱的话,会遇到Vile,他的攻击方式主要是闪电,注意躲避就可以了。  BOSS-GRAVITY ANTONION  “你不是那个不可思议的科学家吗?”  “我不是,我也不需要你这种人的尊敬?”  “你难道也变成了Maverick了吗?”  “你又给人乱贴标签,我灭了你们!”  重力蚂蚁,一开始的攻击手段是制造一个巨大的箱子,依靠改变重力坠落攻击,很好躲,当接近他的时候,他会用棒子捶你,血剩下4/5的时候,他会在屏幕当中制造黑洞,同时会搬起地上的箱子砸你,并且在地面丢落绿色的小球来绑住你,换人解困。血剩下1/2的时候开始疯狂,不停的出现砸你的箱子,用冲刺来回躲避吧。此外似乎影子类的攻击对他有特效。  隐藏物品  1.在某个房间,见图2-7。出口A里面可以获得Head Parts I。比较保险的办法是,连续翻转这个房间3次360度,让箱子填满左上的坑,再落下去就不会碰到尖刺了,但是注意在旋转房间的时候,小心被箱子砸到。  2.在陷阱房间之前,有阶梯的地方,左上角有一个箱子,利用ZERO的跳跃,跳到箱子上面,换X在箱子上面形成蓄力Crustal Wall水晶,按住特殊武器按钮不放就可以蓄力,形成的水晶把箱子里面的东西带出来,获得ZERO 的武器X Knuckles。  3.最后一个房间,四周都是尖刺,中间是移动的箱子的房间,左下角有ZERO的武器B Fan,扇子,可以反弹子弹。在这一关开始的时候有一种敌人可以在尖刺上面行走,利用AXL的复制功能,变成他的样子就可以取得了。  INTER MISSION  LAYER 干得好,ZERO  ZERO 哦,谢谢。  PALLATE 你忘记了我们了吗,我是P她是LAYER,LAYER想和你说话,她都等你回来都等了一天了呢。  ZERO 不好意思,那么LAYER什么事情。  LAYER 嗯…我做了一些调查,但是我不能确定LUMINE的方位,嗯,嗯,那个,就这么多了。  ZERO 嗯,无论怎么样,我都要阻止他们。  Pitch Black  关卡要点  这一关需要注意的有两点。  1. 只要被探照灯照到,就会出现士兵,必须把拿盾的消灭掉才可以继续通行。  2. 后半段有个房间的照明需要那个小东西发的光,不要贸然不它毁掉了,那一关卡里有很多尖刺。  3. 第二个陷阱房间会碰到Vile。  BOSS-DARK MANTIS  “怎么会有Maverick猎人在这里啊。”  “我们是来破坏你的武器制造的。你这个Maverick。”  “我们是新的型号,不是Maverick。”  “那为什么你要制造武器。”  “你们这些旧型号是不会明白的。”  具有影之力的螳螂。战斗中唯一要注意的就是在它的血减至1/2的时候它会停在屏幕中央,挥动巨大的镰刀手,攻击范围很大,判断它会从哪一边出招的时候,要立刻躲避到另一边,此外,1/2之后,螳螂无敌的时间也变长,只要浑身闪光就表示它无敌。光属性的攻击有特效。  隐藏物品  1. 选用Pallete作为辅助的话,她会在某处提示你如果开灯的话会有隐藏的道路。那个地方就是有很多探照灯的地方,第一层走到尽头的时候可以看到对面平台上面有个血瓶,跳到平台上,沿着墙壁向上,左边就是发电所。利用AXL的变身能力,变成士兵,按特殊武器按钮与门前瞌睡的士兵敬礼,他就会开门,房间的地板是一个Metal的图案,利用X的蓄力水晶,让水晶生成在图案中间就可以得到Rare Metal,作用是研发出第二个Life Tank。  2. 用X的闪电技能Thunder Dancer,连续对着发电机使用,发电机就会继续工作,之后灯就亮了。回去,在第一层可以看到新的道路,跳上去得到Rare Metal,作用是开发 AXL的 Shield Armor,可以增加防御力。  3. 在下面的一层也有新的道路,跳上去获得ZERO的武器 D Glaive。  4. 游戏后半段最后一个需要不断往下跳跃的场景,往上跳,右边有房间,里面获得X的Body Parts H。  INTER MISSION  ALIA 已经是第三个了,Maverick到底有什么目的。  PALLETE 我们还是不能确定为什么新的Raploids会成为Maverick。  LAYER 我刚刚尝试了模拟,但是他们抵抗病毒能力很强。  AXL 我也是新的,所以我知道我们可以免疫。  PALLETE 对啊,你是新的话意味着你也会变成Maverick...不过我分析过了,他的数据ok。  AXL 我才不是Maverick,我是猎人,哼。  Dynasty  关卡要点  此关三个人物没有区别,一定要注意吃路上的补充武器槽的光球,然后按特殊武器按钮加速,一路追着Boss打,有时间限制。  BOSS-GIGABOLT MAN-O-WAR  “难道Maverick连对话能力都丧失了吗。”  “我不是Maverick,我不是的。”  发出孩子声音雷电属性的Boss,会利用水母一样的敌人做辅助攻击,这里要注意的是不要从平台上面掉落,此外1/2血的Boss会发射大面积闪电,杀伤力不小,注意看地面的痕迹,可以判断闪电的轨迹,同时小心不要被巨大的水母抓住了。  隐藏物品  无  INTER MISSION  ALIA 我完成了对于Maverick的分析,能让新的Raploids抵抗病毒的原因是因为他们有复制芯片。这个芯片可以改变他们的DNA,  AXL 你也查过我的数据了吗。  ALIA 嗯,我做了对比,发现了非常有趣的事情。  X Sigmal  ALIA 那些芯片和Sigmal有关,我很担心。  Inferno  关卡要点  这一关有三块组成,前后都是类似电梯大战的卷轴下行,推荐这里用ZERO,二段跳可以起到很大的作用。遇到激光,挂在箱子后面就可以了。  中间一块,是考验你跳跃能力的场景。  直接坠落,注意按方向的时机,遇到阶梯状的地方多用冲刺,最后利用二段跳比较保险。  BOSS-FLAME ROOSTER  你听到那些哭泣了吗,因为那个叫做公平的东西下面牺牲的Raploids们的残骸。  让我有个休息吧。  火焰公鸡,主要是火属性的攻击,冰属性会有特效,需要注意的是1/2血的时候,BOSS会将两边的墙壁点燃,同时地面会变化,小心不要掉进火坑。他喷大火的时候一定要躲避,那个攻击力很高。  BOSS战结束,还要朝上跳跃一段才算过关,小心。  隐藏物品  1. 某场景左上有个洞口,AXL在这个版面最下方会遇到飞人,复制飞人就可以分进去,取得ZERO的武器T Breaker,装备后按特殊武器可以使出地震攻击。  2. 用地震攻击在图中所示的Rare Metal 上方把地板打碎就可以拿到,可以开发X的Double Barrie,增加防御力。  3. 如图所示,parts的地方可以得到X的Foot Parts H,建议跳跃方式如图中字母顺序所表示,但得有二段跳才保险。  4. 第二次朝下跳的场景,可以先往上跳,右边上方有小房间,里面得到Rare Metal,开发出Weapon Bottle。  INTER MISSION  朝下跳的任务,测试深度。  X 我看到Vile就预感这件事情会和Sigmal 有关。  ALIA 但是复制的能力对Raploid不会有什么影响啊,你和Sigmal接触过你应该最了解。  X 我只有继续调查,积累更多的数据。  Central White  关卡要点  此关三个人物各有差别,攻击方式就是各自的,但普通攻击距离不一样。操作中,按跳跃键是刹车,冲刺是加速。建议人物里面包含X,因为其蓄力攻击是距离最远的,打飞机时候要用到。  注意的地方  1. 途中一些跳板跳起落下的时候要配合方向键左偏或者右偏。  2. 第三块长的平台不要上去,因为从那里下来后很容易撞到雪洞,雪洞就是类似尖刺效果的障碍。途中总共有2个,不要贪吃里面的东西,都往左避开。  3. 打飞机的时候,只有飞机着陆才能打的到,这里建议用X的蓄力攻击,不要和飞机靠的太近 ,按跳跃键拉远,方便避开飞机扔下来的炸弹之类的东西。  BOSS-AVALANCHE YETI  我们打算去修理一些应该修理的东西,你们这群猎人,现在已经太迟了。  冰属性的雪崩人,一开始主要是冰棱攻击,注意缺口躲开,4/5血之后会从雪地里面升龙拳,1/2会向空中喷雪,形成雪花,雪花会冻结住你,同时BOSS的攻击也具有冰冻效果,雷电属性有特效。  隐藏物品  1. BOSS战之前的场景,利用ZERO的二段跳跳上高处的平台,ZERO要在墙壁的最下点起跳,用X的第一项技能可以化掉冰块,获得X的Head Parts H。  2.从这个平台往左边,利用AXL的飞行,或者让ZERO在空中使用雷特技,就可以落到左边的门上,取得Rare Metal,开发Zero的Shock Absorb,受到攻击不会后退。  INTER MISSION  开车越过雪地里面的墙壁。  LAYER 做的好X,ZERO看起来好像情绪很低落。  X 你很担心他吗。  LAYER 不...嗯...我只是担心全队的情况而已...  X ZERO是SIGMA制造出来用于毁灭世界的,他对于自己的出生总是跟耿于怀。  LAYER 我可怜的ZERO。  X 其实事情早就过去了,他不需要那样,这次的事件似乎又和SIGMA有关,他会好好的解决,我也是。  Metal Valley  关卡要点  一开始就被一个巨大的机器人追,攻击它无效,只有往前逃命,逃到尽头会看见山崖上有个开关,控制的是背景的机械,击打开关三次就可以打退机器人。注意的是当你往上跳跃试图去开开关的时候,机器人会发射激光,这里只有很短的时间空隙让你打开开关,多试几次就可以掌握了。  机器人被击退后就要去追他,追的时候攻击他的上部会掉metal,一直追到他的房间,控制左右两个开关,一共六次就能打退,开关之间努力冲刺前进吧。  在陷阱房间会遇到Vile。  BOSS-EARTHROCK TRILOBYTE  你们旧世界的末日来临了...  岩石甲虫,需要注意的是先用破防的招数把它身上的盔甲打下来才可以,1/2血的时候它开始发飚,注意躲避那些飞快移动的紫色石柱,等一会就可以继续攻击了,黑洞在这里有特效,可以把它发射的反弹子弹吸收,对他伤害大。  隐藏物品  1. 被机器人追逐的时候可以看到巨大的龙骨,跳上去,在做高端冲刺可以取得Rare Metal,作用是开发Life Bottle Full。  2. 被机器追逐的时候有一个场景,左下方有一个凹洞被石头和油桶堵住了,上面是开关,先打开开关,启动吊机。之后反追机器人的时候,从高处的悬崖往吊车吊的钢杆跳,一个接一个,最好有AXL,到最后可以得到Rare Metal,开发ZERO的Double Barrie。  3. 原先被封住的凹洞现在也打开了,用火属性的技能摧毁障碍,可以得到X的Body Part I。  4. 继续追机器人,追到一半的地方有一个凹下去的沟,使用蓄力水晶就可以得到Rare Metal,可以开发Metal Discount,作用是给消费Metal打九折。
2023-06-16 16:24:081

JS 截取字符

var str = "中国-广州";// 截取字符串pos = str.indexOf("-");if (pos > 0) alert(str.substr(0, pos));// 利用正则获取分组var re = /(.+)-.*/;re.exec(str);alert(RegExp.$1); 取消空格可以利用 String.relace(" ", ""); 替换掉如果不要替换中间的空格..可以查找网络上JS模拟trim的方法~
2023-06-16 16:24:071

常用来测定蛋白质含量的方法有哪些,优缺点是什么

  ①凯氏定氮法  原理:蛋白质平均含氮量为16%。当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量。  ②双缩脲法  原理:尿素在180℃下脱氨生成双缩脲,在碱性溶液中双缩脲可与Cu2+形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上就是酰胺键,故多肽、蛋白质等都有双缩脲(biuret)反应,产生蓝色或紫色复合物。比色定蛋白质含量。  缺点:灵敏度低,样品必须可溶,在大量糖类共存和含有脯氨酸的肽中显色不好。其 精确度 较差 (数mg),且会受样品中 硫酸铵 及 Tris 的干扰,但 准确度 较高,不受蛋白质的种类影响。  ③Folin酚法(Lowry)  Folin酚法是biuret 法的延伸,所用试剂由试剂甲和乙两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜试剂),试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸。  在碱性条件下,蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+, Cu+能定量地与Folin-酚试剂反应生成蓝色物质,600nm比色测定蛋白质含量。  灵敏度较高(约 0.1 mg),但较麻烦,也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。 步骤中各项试剂的混合,要特别注意均匀澈底,否则会有大误差。  ④紫外法  280nm光吸收法:利用Tyr在280nm在吸收进行测定。  280nm-260nm的吸收差法:若样品液中有少量核酸共存按下式计算:  蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 (280 260为角标)  ⑤色素结合法(Bradford 法)  直接测定法:利用蛋白质与色素分子(Coomassie Brilliant Blue G-250)结合物的光吸收用分光光度法进行测定。  考马斯亮兰(CBG)染色法测定蛋白质含量。CBG 有点像指示剂,会在不同的酸碱度下变色;在酸性下是茶色,在中性下为蓝色。当 CBG接到蛋白质上去的时候,因为蛋白质会提供 CBG一个较为中性的环境,因此会变成蓝色。当样本中的蛋白质越多,吸到蛋白质上的CBG也多,蓝色也会增强。因此,蓝色的呈色强度,是与样本中的蛋白质量成正比。  间接测定法:蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素,以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。  ⑥BCA法  BCA(Bicinchoninc acid procedure,4,4"-二羧-2,2"-二喹啉)法与Lowry法相似,主要差别在碱性溶液中,蛋白质使Cu2+转变Cu+后,进一步以BCA 取代Folin试剂与Cu+结合产生深紫色,在波长562 nm有强的吸收。  它的优点在于碱性溶液中BCA 比Folin试剂稳定,因此BCA与碱性铜离子溶液结合的呈色反应只需一步骤即完成。灵敏度Lowry法相似。  本方法对于阴离子、非离子性及二性离子的清洁剂和尿素较具容忍度,较不受干扰,但会受还原糖 及EDTA的干扰。  ⑦胶体金测定法  胶体金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶胶,呈洋红色,具有高电子密度,并能与多种生物大分子结合。  胶体金是一种带负电荷的疏水胶体遇蛋白质转变为蓝色,颜色的改变与蛋白质有定量关系,可用于蛋白质的定量测定。  ⑧其他方法  有些蛋白质含有特殊的 非蛋白质基团,如 过氧化物酶含有 亚铁血红素基团,可测 403 nm 波长的吸光来定量之。 含特殊金属的酶 (如镉),则可追踪该金属。
2023-06-16 16:24:001

脸色发黄,老起痘痘怎么办

?脸上长痘痘要注意少吃辛辣刺激、煎炸油腻之品,少喝可乐、果汁、浓咖啡,还要少吃巧克力、糖果、奶油蛋糕、油炸 食物 ,生葱、生蒜、辣椒也要少吃。这样可以减少糖、油以及刺激性食物的摄入量。此外,右脸颊长痘痘要避免吃过敏食物,包括芒果、芋头、茄子、海鲜等。脸上长痘痘吃什么好要注意两点:多吃膳食纤维多的食物和补充维生素。 膳食纤维丰富的食物可帮助肠道排毒保持大便通畅,,清除体内毒素,因为体内毒素易助长痘痘。含膳食纤维丰富的食物有: 糙米和胚牙精米,以及玉米、小米、大麦、小麦皮(米糠)和麦粉(黑面包的材料)等 杂粮;此外,根菜类和海藻类中食物纤维较多,如牛蒡、胡萝卜、四季豆、红豆、豌豆、薯类和裙带菜等。此外,预防痘痘适当补充维生素也非常重要,其中,适当补充维生素A 能有效控制皮肤皮脂腺分泌、减轻表皮细胞脱落与角化的作用,而富含维生素A的食物主要有:黄豆、茄子、白菜、萝卜、菠菜、大葱、胡萝卜、南瓜、西红柿等。 茶树精油和薰衣草精油的功效是比较安全和有效果的。(小店有售,全国包邮费)不含抗生素、激素等化学合成物,不过敏无副作用的纯天然植物配方的祛痘产品。,对粉刺、青春痘,痤疮,痘疤痘痕都有非常好的效果,祛痘一般的粉刺,痤疮,青春痘,四五天就消下去了,去痘印的一款精油,十几天痘印就变淡了。 楼主有 任何护肤方面的问题都可以+咨询,Q Q : 12 07 8 79 392 ?. o(≥*≤)* ┴┴~(≥▽城≤)/~┴┴≥□≤○ ?. 万岁.真棒.开心~ ?. ≥▽≤y (/≥▽≤/) (≥▽村在≤)y (/≥▽≤)/~┴┴ (≥▽≤)(@) f ?. (≥3≤)/ (≥ω≤)/ o(≥fω≤)o o(≥ ?. 惊讶.吃惊~as fsad
2023-06-16 16:23:591

the bedazzling tour翻译

“The bedazzling tour”翻译为“迷人巡回演出”。1.什么是“The bedazzling tour”?“The bedazzling tour”是一种极具吸引力和魅力的表演形式,通常由一系列精心策划和设计的演出组成,涉及音乐、舞蹈、视觉效果等多种元素。这种巡回演出可以在全球各地上演,并且非常受欢迎。2.在演出中使用的技术“The bedazzling tour”使用了许多高科技设备和技术,例如3D动画、激光灯光、映射投影等,以增强观众的视觉体验和震撼力。此外,在演员和舞者的服装、化妆和道具方面也有很高的要求,以营造出一个理想的舞台效果。3.巡演的重要性对于表演者和舞者而言,“The bedazzling tour”是展示才华和掌握新技能的机会,可以提高他们的表演水平和声誉。对于观众来说,“The bedazzling tour”则是一场别开生面的盛宴,充满了惊喜和闪耀的瞬间,让他们进入一个奇妙的世界。4.“The bedazzling tour”的商业价值“The bedazzling tour”具有非常强的商业吸引力,因为它不仅可以在全球吸引观众,并在商业方面带来大量的经济收益。然而,这种类型的演出也需要制定适当的商业策略和有效的市场营销活动来确保其成功,并吸引更多观众。5.“The bedazzling tour”对文化交流的重要性“The bedazzling tour”在跨越国界和文化背景上表现出很大的魅力和吸引力。它不仅展示了舞蹈、音乐等艺术形式,同时也呈现出了不同地域和文化中的传统和独特之处。通过展示这种多元文化和丰富人类经验的巡演,可以促进人类之间的联系和文化交流。总结:The bedazzling tour是一种非常受欢迎的巡回演出,它包含了高科技设备、视觉效果、音乐、舞蹈和绚丽服装等元素,深受观众的喜爱。它通过展示多元文化和独特的视觉体验,推动着艺术的创新和文化交流。作为一种商业形式,它有潜在的经济效益,并需要制定有效的策略和营销活动来确保成功。
2023-06-16 16:23:532

biuret solution test for protein是个什么鬼东东?

双缩脲
2023-06-16 16:23:512

华为麦芒4和g7plus有什么不一样

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2023-06-16 16:23:503

Aliastudio怎么翻译

Aliastudio(Alias studio)别名工作室?(供你参考)
2023-06-16 16:23:451

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让人着迷的爱情
2023-06-16 16:23:452

双缩脲是干嘛的

鉴定蛋白质。紫色反应
2023-06-16 16:23:424

翻译一下《静夜思》

翻译一下《静夜思》 【译文】 明亮的月光洒在床前的窗户纸上,好像地上泛起了一层霜。我禁不住抬起头来,看那天窗外空中的一轮明月,不由得低头沉思,想起远方的家乡。 静夜思翻译 作品资讯 【标题】 《静夜思》[1]【体裁】诗歌 【作者】李白 【作品年代】 唐代 【明代】 床 前 明 月 光,疑 是 地 上 霜。 举 头 望 明 月,低 头 思 故 乡。[2] 【宋代】 床 前 看 月 光,疑 是 地 上 霜。 举 头 望 山 月,低 头 思 故 乡。[3] 【注释】 (1)题目:静静的夜里,产生的思绪 。 (2)床:五种说法。⑴指井台。已经有学者撰文考证过。中国教育家协会理事程实将考证结果写成论文发表在刊物上,还和好友创作了《诗意图》。⑵指井栏。从考古发现来看,中国最早的水井是木结构水井。古代井栏有数米高,成方框形围住井口,防止人跌入井内,这方框形既像四堵墙,又像古代的床。因此古代井栏又叫银床,说明井和床有关系,其关系的发生则是由于两者在形状上的相似和功能上的类同。古代井栏专门有一个字来指称,即“韩”字。《说文》释“韩”为“井垣也”,即井墙之意。⑶“床”即“窗”的通假字。⑷取本义,即坐卧的器具,《诗经·小雅·斯干》有“载寐之床”,《易·剥床·王犊注》亦有“在下而安者也。”之说,讲得即是卧具。⑸马未都等认为,床应解释为胡床。胡床,亦称“交床”、“交椅”、“绳床”。古时一种可以摺叠的轻便坐具,马扎功能类似小板凳,但人所坐的面非木板,而是可卷折的布或类似物,两边腿可合起来。现代人常为古代文献中或诗词中的“胡床”或“床”所误。至迟在唐时,“床”仍然是“胡床”(即马扎, 一种坐具)。[4] (3)疑:怀疑,以为。 (4)举头:抬头。 【译文】 明亮的月光洒在床前的窗户纸上,好像地上泛起了一层霜。我禁不住抬起头来,看那天窗外空中的一轮明月,不由得低头沉思,想起远方的家乡。 【韵译】 皎洁月光洒满床,恰似朦胧一片霜。 仰首只见月一轮,低头教人倍思乡。 床的意思 本诗中的‘床"字,是争论和异议的焦点。我们可以做一下基本推理。本诗的写作背景是在一个明月夜,很可能是月圆前后,作者由看到月光,再看到明月,又引起思乡之情。 既然作者抬头看到了明月,那么作者不可能身处室内,在室内随便一抬头,是看不到月亮的。因此我们断定,‘床"是室外的一件物什,至于具体是什么,很难考证。从意义上讲,‘床"可能与‘窗"通假,而且在窗户前面是可能看到月亮的。但是,参照宋代版本,‘举头望山月",便可证实作者所言乃是室外的月亮。从时间上讲,宋代版本比明代版本在对作者原意的忠诚度上,更加可靠。 静夜思整首诗句翻译一下 《静夜思》古诗译文 直译: 明亮的月光洒在窗户纸上,好像地上泛起了一层霜。我禁不住抬起头来,看那天窗外空中的一轮明月,不由得低头沉思,想起远方的家乡。 韵译: 皎洁月光洒满床,恰似朦胧一片霜。 仰首只见月一轮,低头教人倍思乡。 静夜思的英语翻译 Night Thoughts I wake, and moonbeams play around my bed, Glittering like hoar-frost to my wandering eyes; Up towards the glorious moon I raise my head, Then lay me down-and thoughts of home arise. by Herbert A. Giles 静夜思的搞笑翻译 我的床前有位叫明月的姑娘面板光滑,她的面板 *** 的就像地上的白霜。抬起头望着这位明月姑娘,低下头不禁地想起夫人远在故乡。 鉴赏:这首诗反映了诗人作为一个正常的男人,独自在外地打工,寻花问柳时的矛盾心情。 扩充套件资料 原文 静夜思 床前明月光,疑是地上霜。 举头望明月,低头思故乡。 译文 明亮的月光洒在窗户纸上,好像地上泛起了一层霜。我禁不住抬起头来,看那天窗外空中的一轮明月,不由得低头沉思,想起远方的家乡。 创作背景 李白的《静夜思》创作于唐玄宗开元十四年(726年)九月十五日的扬州旅舍,时李白26岁。同时同地所作的还有一首《秋夕旅怀》。在一个月明星稀的夜晚,诗人抬望天空一轮皓月,思乡之情油然而生,写下了这首传诵千古、中外皆知的名诗《静夜思》。 静夜思的翻译(要长的) 《静夜思》英文版 《静夜思》 床前明月光, 疑是地上霜; 举头望明月, 低头思故乡。 译文一 On A Quiet Night I saw the moonlight before my couch, And wondered if it were not the frost on the ground. I raised my head and looked out on the mountain moon, I bowed my head and thought of my far-off home. by S. Obata 译文二 Night Thoughts I wake, and moonbeams play around my bed, Glittering like hoar-frost to my wandering eyes; Up towards the glorious moon I raise my head, Then lay me down-and thoughts of home arise. by Herbert A. Giles 译文三 The Moon Shines Everywhere Seeing the Moon before my couch so bright I thought hoar frost had fallen from the night. On her clear face I gaze with lifted eyes: Then hide them full of Youth?s sweet memories. by W.J.B. Fletcher. 译文四 In the Quiet Night So bright a gleam on the foot of my bed. Could there have been a frost already? Lifting myself to look, I found that it was moonlight. Sinking back again, I thought suddenly of home. by Witter Bynner 译文五 Night Thoughts In front of my bed the moonlight is very bright, I wonder if that can be frost on the floor? I lift up my head and look at the full moon, the dazzling moon. I drop my head, and think of the home of old days. 《静夜思》英文翻译 李白《静夜思》英文翻译版本欣赏 我们在英语课上试着将李白的《静夜思》翻译: 床前明月光 Moonlight shinning at the foot of my bed, 疑是地上霜 like frost on the ground, 举头望明月 As I raise my head towards the moon, 低头思故乡 my home town fill in my mind. 搜寻网路,同道中人比比皆是。来,一同欣赏他人的佳作: 1. In the Still of the Night I descry bright moonlight in front of my bed. I suspect it to be hoary frost on the floor. I watch the bright moon, as I tilt back my head. I yearn, while stooping, for my homeland more. 2. A Tranquil Night Abed, I see a silver light, I wonder if it"s frost aground. Looking up, I find the moon bright; Bowing, in homesickness I"m drowned. 3. In the Quiet Night So bright a gleam on the foot of my bed Could there have been a frost already? Lifting my head to look, I found that it was moonlight. Sinking back again, I thought suddenly of home. 4. Night Thoughts I wake, and moonbeams play around my bed, Glittering like hoar-frost to my wandering eyes Up towards the glorious moon I raise my head, Then lay me down and thoughts of home arise. 5. On a Quiet Night I saw the moonlight before my couch, And wondered if it were not the frost on the ground. I raised my head and looked out on the mountain noon, I bowed my head and though of my far-off home. 6. The Moon Shines Everywhere Seeing the moon before my couch so bright I thought hoar frost had fallen from the night. On her clear face I gaze with lifted eyes: Then hide them full of Youth sweet memories. 7. Night Thoughts In front of my bed the moonlight is very bright. I wonder if that can be frost on the floor? I list up my head and look at the full noon, the dazzling moon. I drop my head, and think of the home of old days. 8. Thoughts in a Tranquil Night Athwart the bed I watch the moonbeams cast a trail So bright, so cold, so frail, That for a space it gleams Like hoar-frost on the margin of my dreams. I raise my head, - The splendid moon I see: Then droop my head, And sink to dreams of thee - My father land , of thee! 9. Nostalgia A splash of white on my bedroom floor. Hoarfrost? I raise my eyes to the moon, the same noon. As scenes long past e to mind, my eyes fall again on the splash of white, and my heart aches for home. 10. Thoughts at a Quiet NightMoonlight pours down my bed afore, I suspect if it were frost on the floor; Looking up, I peer at the bright moon in the sky; Sinking down, my homesick feelings afar fly. l李白的静夜思怎么翻译 《静夜思》 唐李白 床前明月光, 疑是地上霜。 举头望明月, 低头思故乡。 【诗文解释】 那透过窗户映照在床前的月光,起初以为是一层层的白霜。仰首看那空中的一轮明月,不由得低下头来沉思,愈加想念自己的故乡。 【词语解释】 举头:抬头。 【诗文赏析】 平淡的语言娓娓道来,如清水芙蓉,不带半点修饰。完全是信手拈来,没有任何矫揉造作之痕,正是平平淡淡才是真。本诗从“疑”到“举头”,从“举头”到“低头”,形象地表现了诗人的心理活动过程,一幅鲜明的月夜思乡图生动地呈现在我们面前。 客居他乡的游子,面对如霜的秋月怎能不想念故乡、不想念亲人呢?如此一个千人吟、万人唱的主题却在这首小诗中表现得淋漓尽致,以致千年以来脍炙人口,流传不衰! 李白的静夜思全文翻译 《静夜思》 唐李白 床前明月光, 疑是地上霜。 举头望明月, 低头思故乡。 【诗文解释】 那透过窗户映照在床前的月光,起初以为是一层层的白霜。仰首看那空中的一轮明月,不由得低下头来沉思,愈加想念自己的故乡。 【词语解释】 举头:抬头。 【诗文赏析】 平淡的语言娓娓道来,如清水芙蓉,不带半点修饰。完全是信手拈来,没有任何矫揉造作之痕,正是平平淡淡才是真。本诗从“疑”到“举头”,从“举头”到“低头”,形象地表现了诗人的心理活动过程,一幅鲜明的月夜思乡图生动地呈现在我们面前。 客居他乡的游子,面对如霜的秋月怎能不想念故乡、不想念亲人呢?如此一个千人吟、万人唱的主题却在这首小诗中表现得淋漓尽致,以致千年以来脍炙人口,流传不衰! 望采纳 小学生翻译李白的静夜思 月光从窗户照进来,远远望过去,错以为是冬天早上地面的霜。抬起头看见天上的明亮的月亮,忽然想到家乡的妈妈和亲人们。
2023-06-16 16:23:371

阳光可以用什么形容词?

bright、brilliant、shining、dazzling都是明亮的、光亮的、闪耀的的意思dazzling、blinding刺眼的(dazzling比blinding程度浅)warm温暖的
2023-06-16 16:23:291

如何准确测定样品中蛋白质的含量

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量。以下引用:6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏(kjeldahl)定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下: nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1) 2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2) (nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3) 反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化,可以加入cuso4作催化剂,k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量,如欲求得 样品中蛋白含量,应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。二、双缩脲法(biuret法)(一)实验原理双缩脲(nh3conhconh3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与cuso4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速 ,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。(二)试剂与器材1. 试剂:(1)标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白(bsa)或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配制,酪蛋白用0.05n naoh配制。(2)双缩脲试剂:称以1.50克硫酸铜(cuso4u20225h2o)和6.0克酒石酸钾钠(knac4h4o6u20224h2o),用500毫升水溶解,在搅拌下加入300毫升10% naoh溶液,用水稀释到1升,贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制。2. 器材:可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。(三)操作方法1. 标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后,在室温(20~25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横座标,光吸收值为纵座标绘制标准曲线。2、样品的测定:取2~3个试管,用上述同样的方法,测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。三、folin—酚试剂法(lowry法)(一)实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。folin—酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)等溶液对显色无影响,但这些物质浓度高时,必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液,只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液,即可显色测定。若样品酸度较高,显色后会色浅,则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1~2倍。进行测定时,加folin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性ph条件下稳定,但上述还原反应只在ph=10的情况下发生,故当folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前,还原反应即能发生。此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。此法可检测的最低蛋白质量达5mg。通常测定范围是20~250mg。(二)试剂与器材1.试剂(1)试剂甲:(a)10克 na2co3,2克 naoh和0.25克酒石酸钾钠 (knac4h4o6u20224h2o)。溶解于500毫升蒸馏水中。(b)0.5克硫酸铜(cuso4u20225h2o)溶解于100毫升蒸馏水中,每次使用前,将50份(a)与1份(b)混合,即为试剂甲。(2)试剂乙:在2升磨口回流瓶中,加入100克钨酸钠(na2wo4u20222h2o),25克钼酸钠(na2moo4u20222h2o)及700毫升蒸馏水,再加50毫升85%磷酸,100毫升浓盐酸,充分混合,接上回流管,以小火回流10小时,回流结束时,加入150克硫 酸 锂(li2so4),50毫升蒸馏水及数滴液体溴,开口继续沸腾15分钟,以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色,须再重复滴加液体溴的步骤)。稀释至1升,过滤,滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准naoh滴定,酚酞作指示剂,然后适当稀释,约加水1倍,使最终的酸浓度为1n左右。(3)标准蛋白质溶液: 精确称取结晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白,溶于蒸馏水,浓度为250mg/ml左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊,可改用0.9%nacl溶液。2. 器材(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器(3)秒表(4)试管16支(三)操作方法1. 标准曲线的测定:取16支大试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加入0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升标准蛋白质溶液(浓度为250mg/ml)。用水补足到1.0毫升,然后每支试管加入5毫升试剂甲,在旋涡混合器上迅速混合,于室温(20~25℃)放置10分钟。再逐管加入0.5毫升试剂乙(folin—酚试剂),同样立即混匀。这一步混合速度要快,否则会使显色程度减弱。然后在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照,于700nm处测定各管中溶液的吸光度值。以蛋白质的量为横座标,吸光度值为纵座标,绘制出标准曲线。注意:因lowry反应的显色随时间不断加深,因此各项操作必须精确控制时间,即第1支试管加入5毫升试剂甲后,开始计时,1分钟后,第2支试管加入5毫升试剂甲,2分钟后加第3支试管,余此类推。全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟,则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙,1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙,2分钟后加第3支试管,余此类推。待最后一支试管加完试剂后,再放置30分钟,然后开始测定光吸收。每分钟测一个样品。进行多试管操作时,为了防止出错,每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格。表中是每个试管要加入的量(毫升),并按由左至右,由上至下的顺序,逐管加入。最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量(微克)和测得的吸光度值。folin—酚试剂法实验表管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标准蛋白质 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (250mg/ml) 未知蛋白质 0.2 0.4 0.6(约250mg/ml)蒸馏水 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.6 0.4试剂甲 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0试剂乙 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5每管中蛋白质的量(mg)吸光度值(a700) 2. 样品的测定:取1毫升样品溶液(其中约含蛋白质20~250微克),按上述方法进行操作,取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起,同时进行。即在标准曲线测定的各试管后面,再增加3个试管。如上表中的8、9、10试管。根据所测样品的吸光度值,在标准曲线上查出相应的蛋白质量,从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。注意:由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸,显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度(相对于标准蛋白质)。四、改良的简易folin—酚试剂法(一)试剂1. 试剂甲:碱性铜试剂溶液中,含0.5n naoh、10%na2co3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜,配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后,最后加入。2. 试剂乙:与前面的基本法相同。临用时加蒸馏水稀释8倍。3. 标准蛋白质溶液:同基本法。(二)操作步骤测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升,室温放置10分钟后,试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴中保温5分钟。用流动水冷却后,在660nm下测定其吸光度值。改良的快速简易法,可获得与 folin—酚试剂法(即lowry基本法)相接近的结果。 五、考马斯亮兰法(bradford法)(一)实验原理双缩脲法(biuret法)和folin—酚试剂法(lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由bradford建立的考马斯亮兰法(bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰g-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值a595,与蛋白质浓度成正比。bradford法的突出优点是:(1)灵敏度高,据估计比lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的多。(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间。(3)干扰物质少。如干扰lowry法的k+、na+、mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不干扰此测定法。此法的缺点是:(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。(2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、 triton x-100、十二烷基硫酸钠(sds)和0.1n的naoh。(如同0.1n的酸干扰lowary法一样)。(3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。(二)试剂与器材1. 试剂:(1)标准蛋白质溶液,用 g—球蛋白或牛血清清蛋白(bsa),配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。(2)考马斯亮兰g—250染料试剂:称100mg考马斯亮兰g—250,溶于50ml 95%的乙醇后,再加入120ml 85%的磷酸,用水稀释至1升。2. 器材:(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器(3)试管16支(三)操作方法1. 标准方法(1)取16支试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分为两组按表中顺序,分别加入样品、水和试剂,即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入:0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml,然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰g—250试剂,每加完一管,立即在旋涡混合器上混合(注意不要太剧烈,以免产生大量气泡而难于消除)。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。(2)加完试剂2-5分钟后,即可开始用比色皿,在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值a595,空白对照为第1号试管,即0.1mlh2o加5.0mlg—250试剂。注意:不可使用石英比色皿(因不易洗去染色),可用塑料或玻璃比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇荡洗,以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。考马斯亮兰法实验表管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标准蛋白质 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 (1.0mg/ml)未知蛋白质 0.02 0.04 0.06 (约1.0mg/ml)蒸馏水 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.08 0.06 0.04 考马斯亮蓝g-250试剂 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 每管中的蛋白质量(mg)光吸收值(a595)(3)用标准蛋白质量(mg)为横座标,用吸光度值a595为纵座标,作图,即得到一条标准曲线。由此标准曲线,根据测出的未知样品的a595值,即可查出未知样品的蛋白质含量。0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的a595约为0.50。2. 微量法当样品中蛋白质浓度较稀时(10-100mg/ml),可将取样量(包括补加的水)加大到0.5ml或1.0ml, 空白对照则分别为0.5ml或1.0ml h2o, 考马斯亮蓝g-250试剂仍加5.0ml, 同时作相应的标准曲线,测定595nm的光吸收值。0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的a595约为0.29。六、紫外吸收法蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。低浓度的盐,例如生化制备中常用的(nh4)2so4等和大多数缓冲液不干扰测定。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值。此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差,干扰物质多,在用标准曲线法测定蛋白质含量时,对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质,有一定的误差。故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质,会出现较大的干扰。核酸的干扰可以通过查校正表,再进行计算的方法,加以适当的校正。但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的,虽然经过校正,测定的结果还是存在一定的误差。此外,进行紫外吸收法测定时,由于蛋白质吸收高峰常因ph的改变而有变化,因此要注意溶液的ph值,测定样品时的ph要与测定标准曲线的ph相一致。下面介绍四种紫外吸收法:1. 280nm的光吸收法因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收,且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大,因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。测定时,将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中,用配制蛋白质溶液的溶剂(水或缓冲液)作空白对照,在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值a280。蛋白质浓度可控制在0.1~1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿,盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时,a280约为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值(a1%1cm)有文献数据可查,根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。下式列出了蛋白质浓度与(a1%1cm)值(即蛋白质溶液浓度为1%,光径为1cm时的光吸收值)的关系。文献值a1%1cm,?称为百分吸收系数或比吸收系数。蛋白质浓度 = (a280′10 )/ a1%1cm,280nm (mg/ml)(q 1%浓度?10mg/ml)例:牛血清清蛋白 : a1%1cm=6.3 (280nm)溶菌酶 : a1%1cm=22.8 (280nm)若查不到待测蛋白质的a1%1cm值,则可选用一种与待测蛋白质的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白质作为标准蛋白质,用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0mg/ml。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(bsa)。标准曲线的测定:取6支试管,按下表编号并加入试剂:管号 1 2 3 4 5 6 bsa(1.0mg/ml) 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0h2o 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0a280用第1管为空白对照,各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度a280,以a280为纵座标,各管的蛋白质浓度或蛋白质量(mg)为横座标作图,标准曲线应为直线,利用此标准曲线,根据测出的未知样品的a280值,即可查出未知样品的蛋白质含量,也可以用2至6管a280值与相应的试管中的蛋白质浓度计算出该蛋白质的a1%1cm,280nm2. 280nm和260nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收,在280nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在260nm处的吸收更强,其吸收高峰在260nm附近。核酸260nm处的消光系数是280nm处的2倍,而蛋白质则相反,280nm紫外吸收值大于260nm的吸收值。通常:纯蛋白质的光吸收比值:a280/a260 ? 1.8 纯核酸的光吸收比值: a280/a260 ? 0.5含有核酸的蛋白质溶液,可分别测定其a280和a260,由此吸收差值,用下面的经验公式,即可算出蛋白质的浓度。 蛋白质浓度(mg/ml)=1.45×a280-0.74×a260 此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所测定的数据来建立的。3. 215nm与225nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280nm的光吸收测定时,可用215nm与225nm吸收值之差,通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。用已知浓度的标准蛋白质,配制成20~100 mg/ml的一系列5.0ml的蛋白质溶液,分别测定215nm和225nm的吸光度值,并计算出吸收差: 吸收差d= a215 -a225以吸收差d为纵座标,蛋白质浓度为横座标,绘出标准曲线。再测出未知样品的吸收差,即可由标准曲线上查出未知样品的蛋白质浓度。本方法在蛋白质浓度20~100mg/ml范围内,蛋白质浓度与吸光度成正比,nacl、(nh4)2so4以及0.1m磷酸、硼酸和tris等缓冲液,都无显著干扰作用,但是0.1n naoh, 0.1m乙酸、琥珀酸、邻苯二甲酸、巴比妥等缓冲液的215nm光吸收值较大,必须将其浓度降到0.005m以下才无显著影响。4. 肽键测定法蛋白质溶液在238nm处的光吸收的强弱,与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50~500mg/ml已知浓度的5.0ml蛋白质溶液,测定238nm的光吸收值a238,以a238为纵座标, 蛋白质含量为横座标,绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。进行蛋白质溶液的柱层析分离时,洗脱液也可以用238nm检测蛋白质的峰位。本方法比280nm吸收法灵敏。但多种有机物,如醇、酮、醛、醚、有机酸、酰胺类和过氧化物等都有干扰作用。所以最好用无机盐,无机碱和水溶液进行测定。若含有有机溶剂,可先将样品蒸干,或用其他方法除去干扰物质,然后用水、稀酸和稀碱溶解后再作测定。
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