华清园在线教育到底怎么样呢？

信用风险缓释工具（Credit Risk Mitigation，CRM），意思是说，某机构如果出现债务危机（信用风险），通过这种工具，可以将其风险转移出去。按照其英文意义，并不是什么缓释，而是转移，让其他人承担成本。 这个黑名词，最早出现在2010年中国银行间市场交易商协会（NAFMII/交易商协会）发布的《银行间市场信用风险缓释工具试点业务指引》，当时提出了两种信用缓释工具： 信用风险缓释合约（Credit Risk Mitigation Agreement，CRMA）； 信用风险缓释凭证（Credit Risk Mitigation Warrant，CRMW）。 2016年9月23日，交易商协会又发布了修订后的《银行间市场信用风险缓释工具试点业务规则》，在原有的信用风险缓释工具基础上推出另外两种工具： 信用违约互换合约（Credit Default Swap，CDS）； 信用联结票据（Credit Linked Note，CLN）。 这样一来，信用风险缓释就包括了4种工具，其具体定义与区别见下表。

可以如果要求不高，可以采用低碳钢焊条，如果要求高，可以用E309L，甚至可以采用镍基合金焊条

10月29日公布的《银行间市场信用风险缓释工具试点业务指引》创设了一种信用衍生品，即信用风险缓释工具(CRM)，信用风险缓释工具是指信用风险缓释合约、信用风险缓释凭证及其它用于管理信用风险的简单的基础性信用衍生产品，即可交易、一对多、标准化、低杠杆率的信用风险缓释合约(Credit Risk Mitigation Agreement,CRMA)和信用风险缓释凭证（CreditRisk MitigationWarrant，CRMW），被业内认为是中国对世界信用衍生品市场的一个创新，类似于国际上的CDS。

　　是crm-信用风险缓释工具的一种，最近中国银行间交易市场刚出个通知，定义了两种工具，一种是信用风险缓释合约，与CDS没什么区别，另外一种所谓的中国创新就是信用风险缓释凭证，与合约相比，凭证需要登记，可以类似于债券一样交易，可以流通！ 两种都是用来对冲信用风险，对银行最实际的意义就是可以降低资本金要求，扩大放债规模！

CRM,MA培训教务管理系统只是辅助工具，减少繁复工作，节约时间成本，可以帮助机构更好招生，那么CRM,MA培训教务管理系统都有几个管理模块？能日常应用吗？染书CRMA为你总结了以下几点1业务管理业务管理功能主要包括：市场管理，招生管理，学员管理，收费管理，财务中心，物资管理，教师管理，开班排课管理模块。2市场管理包括：来源设置，登记方式设置。还包括市场计划管理，合作伙伴管理，数据库管理。使得市场人员有效管理市场宣传计划，收集每个市场计划获取的线索，查看各个市场渠道获取的线索的转化率，以及统计线索的来源情况。3招生（咨询）管理引入了CRM思想，可更加有效的管理意向学员，提高转化率，并且与学员管理，报班管理，收费管理实现了完美结合。4学员报名/学员档案管理/出勤管理可实现学员报名管理、学员档案管理、学员出勤管理以及通过学员日志记录学员的各类信息，查看一个学员的时候可关联其历次报班记录的交费，出勤，日常记录的信息。5收费管理财务、安全方面解决方案支持单期收费，按课程扣次数收费，满足学校多样化的收费模式。 学员缴费时直接打印收费票据，缴费流程更方便快捷;清晰准确的收费记录。6人力资源管理人力资源管理重点实现了人事档案管理，同样在查看人员的时候可查看其相关的变动情况，所授班级。还提供了绩效统计功能。7统计分析管理者通过系统可实时的了解各个部门的工作情况，随时查看各个校区的信息8物资管理（教材/物品）9教学管理此功能模块供授课教师、班主任以及教学主管使用。

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档案补办机构的可靠性取决于具体的机构，建议你在选择机构时多加留意，可以询问有关档案补办机构的资质情况，可以多咨询一些公司的服务状况，把握服务的质量，以便保证服务的安全性。档案补办机构是档案补办中心。档案补办中心是由档案馆、县级档案馆和市级档案馆组成的档案补办服务机构，主要负责档案补办服务。档案补办机构有：1. 全国身份信息中心（CIIC）2. 国家身份认证管理中心（NIC）3. 全国公民身份信息系统（NPS）4. 公民身份信息管理中心（CIMC）5. 中国公民身份证号码登记中心（CRN）6. 中国登记管理局（CRMA）7. 中国人口身份信息管理中心（CPIMC）8. 区域登记管理局（ARMA）

细胞凋亡受到严格调控，在正常细胞Caspase处于非活化的酶原状态，凋亡程序一旦开始，Caspase被活经随后发生凋亡蛋白酶的层叠级联反应，发生不可逆的凋亡——细胞调节细胞凋亡的举例如下。 迄今为止，人类已发现多种凋亡抑制分子，包括P53，CrmA,IAPs，FLIPs以及Bcl-2家族的凋亡抑制分子。1)P53和CrmA是广谱凋亡抑制剂，体外研究结果表明P35以竞争性结合方式与靶分子形成稳定的具有空间位阻效应的复合体并且抑制Caspases活性，同时P53在位点DMQD！G被靶Caspases特异切割，切割后的P35与caspase的结合更强，CrmA（Cytokine response modfer A）是血清蛋白酶抑制剂，能够直接抑制多种蛋白酶的活性，但还未发现在哺乳动物中发现P35和CrmA的同源分子。2)FLIPs(FLICE-imhibirory proterins）能抑制Fas/TNFR1介导的细胞凋亡。它有多种变异体，但其N-端功能前区（Prodomain）完全相同，C端长短不一。FLIPs通过DED功能区，与FADD和Caspase-8，10结合，拮抗它们之间的相互作用，从而抑制Caspase8，10募集到死亡受体复合体和它们的起始化。3）凋亡抑制蛋白（IAPs,inhibitors of Apoptosisprotien）为一组具有抑制凋亡作用的蛋白质，首先是从杆状病毒基因组克隆到，发现能够抑制由病毒感染引起的宿主细胞死亡应答。其特性是有大约20氨基酸组成的功能区，这对IAPs抑制凋亡是必需要的，它们主要抑制Caspase3,-7，而不结合它的酶原，对Caspase则即可以结合活化的，又可结合酶原，进而抑制细胞凋亡。 这一家族有众多成员，如Mcl-1、NR-B、A1 、Bcl-w、Bcl-x、Bax、Bak、Bad、Bim等，它们分别既有抗凋亡作用，也有促凋亡的作用。多数成员间有两个结构同源区域，在介导成员之间的二聚体化过程中起重要作用。Bcl-2成员之间的二聚体化是成员之间功能实现或功能调节的重要形式。Bcl-2生理功能是阻遏细胞凋亡，延长细胞寿命，在一些白血病中Bcl-2呈过度表达。Bcl-2的亚细胞定位已经明确，它在不同的细胞类型可以定位于线粒体、内质网以及核膜上，并通过阻止线粒体细胞色素C的释放而发挥抗凋亡作用。此外， Bcl-2具有保护细胞的功能， Bcl-2的过度表达可引起细胞核谷胱苷肽（GSH）的积聚，导致核内氧化还原平衡的改变，从而降低了Caspase的活性。Bax是Bcl-2家族中参与细胞凋亡的一个成员，当诱导凋亡时，它从胞液迁移到线粒体和核膜。有人研究发现，细胞毒性药物诱发凋亡时，核膜Bax水平的上升与lamin及PARP两种核蛋白的降解呈正相关。用Bax寡核苷酸处理的细胞，只能特异地阻断Lamin的降解，对PARP的降解不起作用。这种效应的调控机制仍然不清楚。总之，细胞凋亡的调节是非常复杂的，参与的分子也非常多，还有很多不为我们所知的机理需要我们一步的探索。

内容来源于染书CRMA一，自动课消，工作更高效托管、艺考、体育健身等类型学校，对于课消功能的需求在于：1.每天会排多种课程，学员可能需要在一天之内上好几门课程，但是扣费按天计算；2.有些健身类学校并不需要排课，在学员购课或购卡的有效期内，系统自动按天进行扣费。其实这些都可以通过校管家的按天计费功能来实现。按天计费功能定价方式非常灵活，学校根据自身需求，设置不同的课程规格。课消计费方式也很灵活，系统自动课消，且出勤和课消分离，支持一天上多次课，只计一天的费用，老师再也不需要手动操作点名了，省时省力，不会出错，极大地提高了老师的工作效率。二，一键停课复课，家长更满意学员请假了以后，课消怎么办？这是很多艺考、体育健身、托管类机构比较痛苦的问题。而校管家的按天计费功能，支持学校对学员进行停课和复课操作，完美解决了学校难题。当学员一段时间不能来学校上课时，老师可以对该学员进行一键停课，该学员的课消将会停止计算；当学员复课时，课程有效期将会自动往后顺延。老师操作简单，需要退费时，也不再需要计算复杂的课消时长了，工作效率再次得到提升。三，智能退费，避免财务漏洞学生要退费？怎样才能智能、规范的操作呢？首先，通过按天计费功能，学校可以选择按学生实际课消进行退费，系统自动计算出课消金额和应退金额，计算精准操作简单；而对于有不同退费规则的学校，支持手动调整计费时长和计费标准，智能而方便。同时，按天计费的退费审批功能，能有效帮助学校规避不规范操作导致的财务漏洞。

大部分有，软件工程教育，还有学业教育，常见的有影视剪辑，还有平面设计，这两年建模也多了起来，人物建模和房屋建模。

我觉得它们的区别就是16的，这个的性价比会更高一些

中国行业市场信息数据咨询的服务商公司很多，其中，在国内占据绝对的权威的有以下几家：1：零点研究咨询是源自中国的国际化数据智能服务机构，旗下包括创新数据开发中心、公共事务数据事业群、商业数据事业群、未来商习院。2：国研国务院发展研究中心信息网(简称“国研网”)由国务院发展研究中心主管、北京国研网信息有限公司承办，创建于1998年3月，并于2002年7月31日正式通过ISO9001：2000质量管理体系认证。3：深圳中为智研咨询有限公司是中国领先的产业与市场研究服务供应商。公司围绕客户的需求持续努力，与客户真诚合作，在调查报告、研究报告、市场调查分析报告、商业计划书、可行性研究、IPO咨询等领域构筑了全面专业优势。中为咨询致力于为企业、投资者和政府等提供有竞争力的调查研究解决方案和服务，持续提升客户体验，为客户创造最大价值。4：赛迪顾问股份有限公司是中国首家在香港创业板上市，并在业内率先通过国际、国家质量管理与体系标准认证的现代咨询企业，直属于中华人民共和国工业和信息化部中国电子信息产业发展研究院。5：万得信息技术股份有限公司(简称：Wind资讯)是中国大陆领先的金融数据、信息和软件服务企业，总部位于上海陆家嘴金融中心。6：新华信国际信息咨询(北京)有限公司是中国领先的营销解决方案和信用解决方案提供商，1992年在北京成立。企业收集、分析和管理关于市场、消费者和商业机构的信息，通过信息、服务和技术的整合，提供市场研究、商业信息、咨询和数据库营销服务，协助您做出更好的营销决策和信贷决策并发展盈利的客户关系。7：慧聪研究是一家根植于中国、放眼全球，提供大数据与小数据有效结合的洞察研究公司。HCR为企业提供大小数据结合的深度洞察服务。8：易观国际成立于2000年，是中国互联网和互联网化市场卓越的信息产品，服务及解决方案提供商。每年为来自于全球的互联网和信息技术厂商、电信运营商，行业用户、投资机构、政府部门的高级主管，提供包括订阅制的EnfoDes资讯平台和EnfoGrowth专项咨询在内的信息产品，服务及解决方案。9：新生代市场监测机构成立于1998年，位列中国市场研究行业TOP10，是国内最具规模和影响力的消费者与媒介研究机构之一。新生代致力于为客户提供专业的市场调查和基于数据的研究与咨询服务，主要业务包括市场研究、媒介研究、消费与社会研究，以及营销策略咨询。10：艾瑞咨询成立于2002年，由杨伟庆发起创立，致力成为中国大数据时代下最佳互联网收视率及消费者洞察公司。艾瑞咨询以“生活梦想科技承载”为理念，为客户提供中国市场最专业的互联网相关领域的数据产品、研究咨询等专业服务，助力客户提高对互联网产业的认知水平、盈利能力和综合竞争力，让互联网的力量点燃中国各个行业。

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法国航空公司采用大众策略，成本为先，集中于客运和货运。法国航空公司的销售策略是致力于完善现有的运营网络，服务于大众乘客。依靠严格的成本控制来保证盈利。法国航空公司面对航空业的不景气和油价的攀升，通过更新飞机，降低油耗；开展了石油期货交易，减轻了高油价的冲击。利用航空枢纽港，为法航及其合作伙伴的班机提供快捷中转，以吸引更多乘客；根据客流变化，适时调整航班，使其载客量实现均匀化；根据不同航程的乘客的不同需求，提供相应的服务。法航在远程航班在机舱服务方面使乘客更加舒适，在中程航班则采用低成本经营模式，以价格吸引客源。 法航的业务主要分为四个部分：客运：2003-2004年度运送旅客4370万人次，是全球第3大、欧洲第1大客运航空公司，占欧洲市场17.4%份额，营业额为102.6亿欧元，占集团营业总额的83%；货运：法航货运机队拥有10架波音747-200F和4架波音747-400ERF飞机，2003-2004年度货运营业额为14.1亿欧元，占集团营业总额11%，利润达1500万欧元；机修维护：法航集团全部机修维护服务由工业后勤部（INDUSTRIAL LOGISTICS DIVISION）负责，为本集团和一百余家其它航空公司提供机修维护服务；是全球第2大机修服务公司，全球最大的为“空客”A320、A330、A340提供机修服务的公司，也是最大的为CFM56-5型发动机提供维护的机修公司；2003-2004年度机修维护营业额为5.1亿欧元，占集团营业总额4%；其它服务：其中主要是培训服务。法航每年度对培训服务的投资达2亿欧元左右，分别设有法航训练中心（针对地勤）和空勤训练中心（CFTPN）两个训练基地。2003-2004年度其它业务营业额为1.6亿欧元，占集团营业总额1%。 除开展自身业务外，为应对激烈的市场竞争，法国航空公司与墨西哥航空公司（AEROMEXICO）、美国三角航空公司（DELTA AIRLINES）、韩国航空公司（KOREA AIR）组成了组天合联盟(Skyteam) ，后捷克航空公司（CSA CZECH）及意大利航空公司（ALITALIA）分别加入。每日有 8200个航班往来于全球512 个终点站，为各国旅客提供优质联网航空服务。2004年5月4日法国航空公司(Air　France)又成功以八亿三千三百万欧元（九亿九千五百七十万美元），获取了荷兰皇家航空公司（KLM）的百分之八十九的控制权，组成全球收入最大的航空公司。荷航股东们让出四千一百七十六万股，约等于该航空公司资本的百分之八十九点二。这次合并，是欧洲大航空公司首次跨境合并，合并后的规模将大于日本佳速航空公司（JAS），也是以营业额计全球最大的航空公司。以运客量计，法航—荷航将居于美国的美利坚航空公司和联合航空公司之后，成为全球第三大航空公司。这项交易使两家公司节省成本和提高收益，帮助它们提高运客量和迎接来自廉价航空公司日益强大的竞争。据预计，年度长远合并收益将达六亿欧元。根据双方协议，两家航空公司将组成一家联合控股公司，在控股公司名下，法航和荷航将以各自的名字共存三年。控股公司法航—荷航将拥有两家公司百分之百的控股权，但荷航将继续作为荷兰公司，其百分之五十一的控股权由国家和两个基金持有。这样安排可使荷航维持其保留其外国着陆权。这项交易使法国政府在法国航空公司的股权，从百分之五十四降至百分之四十四点七。法航雇员拥有新公司百分之十点五的股权，荷航前股东则拥有百分之十七点三。该公司近百分之四十五的股票将在股市上市交易。法航集团的下属企业还包括：SERVAIR——航空餐饮及飞机保洁公司；AMADEUS FRANCE——售票网络信息技术公司；CRMA——航空维修公司；SODEXI——航空速递公司。 法国航空公司上海巴黎航线每日双飞 由B777执行第一个在广州建航站的欧洲航空公司；第一个在中国有5个航站的欧洲航空公司；1947年1月法航成为首家试航巴黎至上海航线的欧洲航空公司。1947年3月使用 DC4型飞机进行第一次巴黎至上海的客运飞行。1966年6月法中两国政府在巴黎签署涵盖两国间航空运输的协议。1966年7月法航与中国民航签署双边销售协议。1966年9月巴黎-上海航线恢复运营。1971年法航签署了可将巴黎-上海航班数增加一倍的协议。1972年1月法航巴黎-上海航班增为每周两班。1973 年法航获许飞往北京，从而取代了上海。1973年9月法航成为首家飞往北京的欧洲航空公司。1980年法航起用波音747客货混运宽体飞机，每周一个航班。1991年6月法航开始提供经西伯利亚航线往返巴黎和北京的直航服务。飞行时间减少到10小时以内。1999年11月22日法航和中国东方航空公司签署了在巴黎-上海航线上互享代码的协议。2001年4月法航提供每星期七个班次由巴黎飞往上海的直航服务，其中包括四班与中国东方航空合作的联营班机。2012年4月12日，法航开通了巴黎直飞武汉航线。

教育培训crm系统有很多功能，但重要的还是要看能否做好招生引流、学员管理、教务排课这几项：1、提供招生引流宣传方案可以根据不同课程、不同节日设定不同的营销方案，利用限时优惠、好友砍价、N元试听等，从促销、裂变、体验多个维度进行成交。做活动的过程中通过技术手段进行相关的客户信息收集。可进行对参与活动客户的手机号码抓取，在不加微信的情况下进行信息沟通等。2、学员管理中心个性化记录学员信息，优化销售过程，提高成交率。解析学员生源特点，为招生提供重要参考。活动信息随时可以群发通知家长，增加家长与中心黏性；信息记录有迹可循，管理收集客户信息，学习家校沟通技巧；随时方便查询短信余额情况。3、教务智能排课当学员报名缴费成功之后，分布班级，如果是按照班级进行排课的话，就直接在班级相关的功能之间选择排课，出现排课的界面之后，设置好课程的时间、教师、教室的安排，点击智能排课，就可以轻松生成课表。除了上面所说的，还有统计学员在学期间的续报率，统计学校财务支出情况报表等，为决策提供依据；学校一体化的资金管理流程，让每一笔资金的出、入都有清晰的记录，避免糊涂账。染书CRMA培训学校管理系统实现对培训机构的全面管理，促进信息管理水平的提升。

现在RICHARD MILLE一共推出了12款自主机芯腕表，男士腕表里像RM 67-02， RM 40-01 这些都是自主机芯，女士腕表中比较热门的RM 07-01 和 RM 037， 以及RM 74-01陀飞轮腕表，这些都是自主机芯。

作为一个教师，我建议你考虑小鹅通，这个体验很好，我上课互动性很强， 满足了我的需求。

我的分析如下：1、Caspase8分为pro-Caspase8和active/cleaved-Caspase8两种形式，前者是Caspase8前体，而后者在凋亡因素诱导pro-Caspase8大量聚集后产生的。2、正常情况下pro-Caspase8位于胞浆内，当凋亡启动时，大量的pro-Caspase8降解产生active-Caspase8，发生胞浆-胞膜之间的转移。3、此外，我猜测会不会凋亡发生时，核膜和线粒体膜发生破裂，部分active/cleaved-Caspase8发生位移到核内。不知你做的是哪一种Caspase8？附上一篇综述，仅供参考： http://gene.bjmu.edu.cn/news/caspase.htm　　凋亡（或程序性细胞死亡）是一个生理性的细胞自我毁灭的过程，在胚胎发育、生物体内环境的稳定及多细胞生物防御外在及内在伤害方面均起着非常重要的作用。凋亡过程的紊乱，可能与许多疾病的发生有直接或间接的关系，如肿瘤、自身免疫性疾病、神经退行性变及局部损伤等[1]。能够诱发细胞凋亡的因素很多，如射线、能够引起染色体损伤的药物、细胞自身表达的一些受体分子等。凋亡细胞表现出一些共同的特征，如形态学的改变（包括胞膜小泡的形成，细胞的皱缩，凋亡小体的形成），生物化学特性的改变（如胞膜内环磷脂酰丝氨酸的外翻，DNA的片断化，细胞骨架的解离，细胞内功能蛋白的降解等）[2]。对细胞凋亡的机制，人们进行了深入的研究，在以往研究的基础上，大致可以把凋亡分为Caspase依赖的和非Caspase依赖的凋亡。本文着重对Caspase依赖的凋亡过程中的Caspase分子特性作一综述。　　Caspase分子是一类在进化上非常保守的蛋白酶类分子。Caspase的含义表现在两个方面（1）他们为半胱苷酸蛋白酶类，并且把半胱氨酸作为对底物裂解时的亲核基团，（2）他们为天冬氨酸蛋白酶类，切割天冬氨酸的羧基与下一个氨基酸的氨基形成的肽键。人们对Caspase在凋亡中起重要作用的认识来自于一些试验观察（1）天然和合成的Caspase抑制剂可以显著降低甚至阻断多种刺激引起的细胞凋亡，（2）一些Caspase基因敲除动物模型表现出明显的无凋亡现象，（3）Caspase催化裂解众多的细胞内功能蛋白分子，这些裂解的分子可以导致细胞凋亡[3]。Caspase分子除了在凋亡过程中起重要作用外，在炎症过程中也起重要作用。Caspase分子以酶原的形式被合成，并且在体内低水平组成性表达。外部或内部的刺激引起Caspase分子以瀑布式的活化方式活化。活化的Caspase分子催化裂解众多的效应分子，诱发细胞凋亡。Caspase的结构和酶活性　　自从第一个Caspase分子（Caspase－1）被发现以来，在哺乳动物已经发现了14种同源分子，在果蝇中发现了5种同源分子。从结构上进行分析，这些同源物均含有一个高度同源的酶活性区域，该区域可以被切割为大约20KD和10KD的两个片断，在一些Caspase分子如Caspase－3，大小两个片断以Linker相连。根据Caspase分子酶活性区域的相似性，可以把Caspase分子分为三大类（1）与炎症有关的Caspase分子，包括Caspase-1、-4、-5、-11、-12、-13和-14，（2）包括Caspase-2和-9，（3）包括Caspase-3、-6、-7、-8、-10。Caspase分子的另外一个显著特点是以酶原的形式被合成，这些酶原的氨基端有一段长短不一的肽段，被称为Prodomain。Prodomain与Caspase分子功能密切相关。与炎症相关的Caspase分子的Prodomain长度大于100个氨基酸，而功能性Caspase分子的Prodomain长度则小于30个氨基酸。长的Prodomain往往含有明显的功能域，如DED（death effector domain）,CARD(Caspase recruitment domain)，DID(death inducing domain)等。Caspase-8和-10均含有两个重复的DED功能域，而Caspase-1、-2、-4、-5和-9均含有CARD功能域，在果蝇的DREDD中含有DID功能域。这些功能域参与Caspase分子之间的相互作用及Procaspase DE活化及Caspase分子的亚细胞定位等[4,5,6,7,8]。短的Prodomain的功能可能是抑制Caspase的活化[9]。最近的研究发现Linker中的一些氨基酸序列也有明显的生物学作用，如Caspase-3的Linker中的DDD序列参与Procaspase-3的稳定[10]。Procaspase分子的三维结构人们目前还无法知道，但DED，CARD等功能域的三维结构已经被认识，他们均由6个a－螺旋构成，外形上非常相似，但仍有一些差异，主要表现为功能域相互作用的方式不尽相同。如电荷－电荷相互作用主导CARD-CARD之间的作用，而疏水相互作用主导DED-DED之间的作用 [11,12,13]。　　对活化Caspase的结构的研究发现，活化Caspases均为由大小两个亚基构成的异四聚体，大小两个亚基对于酶的活性均是必需的。利用Caspase的抑制物已经将一些活化Caspase分子的三维结构研究的比较清楚。如Caspase-8，Caspase-3等。这些研究显示，活化Caspase为四聚体，两个小亚基相邻排列，两个大亚基围绕在小亚基的周围；每一大小亚基形成一球状分子，球状分子的核心为6个α螺旋环绕的6个β片层样结构。两个异二聚体以小亚基相连。每一活化Caspase分子含有两个酶活性中心，这两个活性中心可能独立发挥作用。在Caspase-1分子中，Cys-285，His-237， Arg-179（大亚基）和Arg-341（小亚基）组成酶的活性中心。结构研究还显示，在Procaspase到活化Caspase的过程中，大亚基的羧基端和小亚基的氨基端顺势相邻有利于形成正确的酶活性中心[14,15,16,17,18]。对Caspase酶活性中心的研究主要是依靠特异性抑制剂及突变技术。如在对Caspase-1的研究中，发现Caspase-1的活性可以不可逆的被半胱苷酸蛋白酶抑制剂（带重氮甲基酮的多肽）所抑制，起他的能够修饰半胱氨酸的类似物如碘乙酰胺、N－乙酰马来酰亚胺也可以抑制Caspase-1的活性；其他一些丝氨酸、天冬氨酸、金属蛋白酶抑制剂不能抑制Caspase-1的活性。以上结果被突变技术及三维结构的研究所证实。与其他半胱氨酸蛋白酶相类似，Caspase分子对过渡期金属元素比较敏感，如Zn2+ 可以明显抑制多种因素诱导的凋亡，其机制可能是Zn2+干扰了活性中心的正确形成 [19,20] 。　　Caspase分子是非常特异的内肽酶，其酶作用的底物要有四个排列正确的四个氨基酸及相邻氨基酸[21,22]。如图所示，P1位必须是天冬氨酸，P2、P3、P4位上氨基酸的组成，不同的Caspase分子的要求不同。应用positional scanning synthetic combinatorial library(PS-SCL)的方法[23]，我们现在已经可以对不同的Caspase分子的底物特异性有一大概了解。根据Caspase对底物的识别不同，Caspase分子可以分为三大类，第一类的特异识别位点是WEHD，包括Caspase-1、-4、-5。第二类的特异识别位点为DETD，包括Caspase-2、-3、-7、CED3。第三类的特异识别位点为（L/E）EXD，包括Caspase-6、-8、-9、-10。以上仅仅是粗粗的分类，其实，同一类的不同的Caspase分子对相同的底物的亲合力是不同的，如Caspase-1和Caspase-4对WEHD的亲合力常数分别为0.056和97，这说明Caspase-1比Caspase-4的酶活性更强[24]。除了P1-P4位外，P1′（切割位点后的第一个氨基酸）的氨基酸种类也很有特点，常常为Ala、Ser、 Asn等小分子的氨基酸。在体外试验中，P1′位只要是甲酰胺就足以引起正确地切割。必须注意的是，体外实验的结果并不能完全代表体内实验的结果，因为在体内，酶对底物的切割更易受到蛋白分子内相邻氨基酸残基的影响。Procaspase的活化　　尽管人们对凋亡的机制及Caspase分子特性了解很多，但Caspase分子是如何被活化的，仍是一个有争论的话题。对initiator caspase的活化始于对caspase 在大肠杆菌表达的研究．这些表达的procaspase分子能够完全和准确的活化，但是在这些研究中，所使用的蛋白浓度非常高，并不能代表细胞内的真正情况．对procaspase的真正意义上的活化的研究始于procaspase-8．当受到FasL的作用后，Fas的细胞内肽段募集Procaspase-8，引起Procaspase-8的寡聚化，继而活化。由此提出Procaspase-8的活化是由于其寡聚化引起的，体外实验中寡聚化可以引起caspase－8的活化。Procaspase-9的活化是由于Apaf-1引起其寡聚化后而活化的。事实上，由寡聚化而使蛋白活化是细胞内的一个广泛的机制。但近来的研究却发现，由突变引起的Processing位点缺失的Procaspase-9仍能诱导凋亡，而且其Prodomain参与全酶的形成。这些结果提示Initiator caspase的自我切割并不是寡聚化介导的caspase活化的首发条件。另外一个利用定点突变方法是相邻的Procaspase分子一个缺失Processing位点，另一个缺失酶活性位点，均不能使两个Procaspase分子活化。这些结果似乎提示还有其他活化Procaspase的途径[25,26,27,28]。　　效应caspase的活化可能有两条途径：一是由Initiator caspase对其切割后活化的，另外是通过反式活化途径。现在已经证明了的活化途径包括受体介导的caspase的活化和线粒体介导的caspase的活化。反式活化需经两个步骤。以颗粒酶B对caspase-3的活化对反式途径加以描述。颗粒酶对caspase-3的切割首先发生在Linker区域，产生一个具有部分酶活性的中间体，该中间体与成熟酶在结构上很相似，然后，中间体进行自我切割，切去Prodomain，形成活化的caspase-3。IAPs（inhibitor of apoptosis）对caspase的抑制作用之一就是抑制Prodomain的自我切割[29,30,31,32]。非常有意思的是，Procaspase-3可以被含有R-G-D Motif的短肽所活化，该种活化机制不清，但Procaspase-3在活化部位的RGD motif及linker区域中所含有的RGD结合序列，可能参与了这种作用。Caspases 分子在凋亡过程中的位移　　Procaspases分子为细胞的组成性表达分子，主要分布于胞液中。在各种刺激诱导的细胞凋亡过程中，不同的caspases分子位移到不同的亚细胞区域，发挥不同的作用。胞浆－胞膜之间的位移?caspase-8主要介导由受体诱导的细胞凋亡，在正常情况下存在于胞浆中。当受到配体的作用后，受体的胞内肽段的DD Domain的抑制因子SODD解离。在伴侣分子FLASH的陪伴下，procaspase-8通过其prodomain中的DED结构域与受体的DD domain相互作用，在胞膜内的局部区域聚集，导致procaspase-8的活化，活化的caspase-8再返回胞浆，激活下游的caspase分子[33]。　　胞浆、线粒体和核之间的位移?caspase-9是个多功能的分子，间接活化caspase-2、-6、-8、-10，直接活化caspase-3、-7。在许多肿瘤细胞系中，procaspase-9分布于胞浆中，但在部分细胞系及肝脏细胞提取的线粒体中，发现procaspase-2、-9存在于膜间隙中，当细胞受到细胞毒性药物袭击后，线粒体外膜破坏，procaspase-2、-9移位到胞浆中，进行活化。另外，在培养及活体的心肌细胞及神经元细胞中，procaspase-9几乎全部位于线粒体中。与通常所理解的procaspase-9的作用不同，心肌细胞的procaspase-9移位到细胞核中。procaspase-3主要在胞液中，但一些研究者在部分细胞系及肝细胞的线粒体中，发现有10-90%不等的procaspase-3分布于线粒体的膜间隙中，这还是一个有争议的结果，因为另外一些研究者得到的是阴性结果。procaspase-7是目前直到的唯一位移到微体的caspase分子，细胞受到FasL作用后，procaspase-7被活化后，移位到微体中。Caspase-3和caspase-7切割的底物相同，但在细胞内的定位不同。最近的研究发现，caspase-2可以易位到高尔基体中，并对特异底物Golgin-160进行切割。[34,35]　　Caspases 分子的核转位?在细胞凋亡的过程中，细胞核的形态学和生化特性都发生了很大的变化，这些变化有些是核内的功能性蛋白直接被切割降解失活引起的，如Lamins,Poly(ADP-ribose) polymerize,DNPK,Rb和DNA topoisomeraseI等，有些则是caspase 的切割激活了一些内切酶类，如ICAD/CAD。已经发现可以核转位的caspase分子有caspase-1、-2、-3、-6和-9。Caspase核转位的机制还不是特别清楚。已知caspase核转位的机制大致可以归为Prodomain介导的和自由扩散两种。Procaspase-1、-2、和-9的长的Prodomain中含有核定位信号，可以辅助caspase的入核。Caspase-3的入核机制还在争论中，有的研究认为该过程是一个主动需能的过程，但最近的对MCF-7DE研究结果却发现，caspase-3的核转位是由于活化的caspase-9破坏了细胞的核屏障作用，导致了caspase-3在核浆之间的自由扩散[36]。Caspases分子的调控　　由于功能上的多样性和对细胞作用的不可逆性，caspase分子在细胞内受到精细的调控。根据调控的方式不同，大致可以分为以下三类：（1）caspases 分子一级结构内所含的特异基序，调控caspase 活性，（2）由调控分子直接作用与caspase 分子进行的调控，（3）对caspase的修饰作用。　　对caspase一级结构所包含的调控信息现在了解的不是很多。已经知道，caspase―3的Prodomain可以抑制caspase－3的活化，使caspase－3保持在静止状态。对caspase的一级结构的研究还发现，在caspase－1、2、3、7分子中含有RGD基序，而在caspase―3的分子中，还发现有RGD的结合序列DDM, RGD和DDM的相互作用可以促进caspase－3的自身活化[37]。为了抑制caspase分子在正常情况下的自我催化作用，在caspase－3分子的linker序列中，包含有DDD基序，可以抑制caspase－9、颗粒酶B介导的活化，及caspase－3的自身活化。在caspase－7的Linker区发现了相似的基序DTD，提示利用一级结构的某些基序来调控caspase是一个广泛的机制[10]。现在已知的直接作用与caspase并调控其功能的分子很多。理论上，对一个代谢通路的调节包含有正、负两种方式，但在caspase的调控研究中，除了我们刚刚发现的一个正调控分子TFAR19外，其余均为负调控因子。　　TFAR19为一个有125个氨基酸的酸性蛋白质，在体内广泛分布，在胞浆合成，利用反义寡核甘酸技术发现TFAR19可以促进由etoposide等topoisomeraseⅡ抑制剂诱导的凋亡，对其作用的分子机理的研究发现TFAR19直接作用与caspase－3，促进caspase－3的活性。对TFAR19的作用机理的研究还在进行。通过对其的研究，可能会促进对caspase－3正调控机理的研究。　　Caspase的负调控分子有很多。如选择性作用于一、三类caspase的CrmA(来自牛痘病毒的丝氨酸蛋白酶抑制剂)，主要选择性的作用于二类caspase的IAP超家族成员，来自于杆状病毒caspase的广泛抑制分子p35。CrmA和p35分子作为caspase的竞争性抑制剂，抑制caspase的活性。　　IAP超家族的成员较多，如c-IAP1, c-IAP2,XIAP, NIAP 和Survivin，新的成员在不断的被发现，如新发现的Livin分子[38]。IAP家族成员有一个共同的特征，含有一个或多个70个氨基酸的重复序列（BIR），类似于zinc指状的结构。c-IAP1、 c-IAP2和 XIAP含有环指装结构。BIR功能域和之间的连接区域介导对caspase的抑制作用，而环指状结构则具有泛素化蛋白连接酶的作用，介导caspase－3和－7的泛素化降解作用[39]。　　Caspase的负调控分子还包括caspase的变异体。如已经发现caspase-8有8种变异体[40]，这些变异主要包括N端的缺失或序列变异。Caspase－9的变异体caspase－9beta缺乏活性区，为caspase－9的内源性负调控因子[40]。Caspase的调控还包括转录后修饰作用。如Akt 和p21-RAS 可以诱导procaspase-9 Ser196的磷酸化，抑制procaspase-9的活化。Ser196的突变可以抑制Akt的磷酸化作用，促进凋亡[41]。在部分未被刺激的细胞中，procaspase-3活性中心的半胱氨酸被亚硝基化，Fas诱导的caspase的活化可以使procaspase-3去亚硝基化，使procaspase-3活化[42]。　　总之，作为决定细胞命运的活性分子，Caspase具有复杂的功能和调控方式。人们对Caspase分子的了解还刚刚开始，对其的进一步了解将会帮助我们认识疾病，治疗疾病。

Bcl-2抑制凋亡的作用并不是万能的，例如在细胞毒T细胞杀伤作用中，特定的淋巴因子撤离以及某些TNF受体家族介导的凋亡途径中Bcl-2不能抑制凋亡，其原因右能是这些凋亡诱导剂作用于Bcl-2下游或是独立于Bcl-2的其它凋亡路径。最近Scaffidi等发现，Jurkat等细胞（Ⅱ型细胞）中Bcl-2可抑制TNF受体家族中的CD95（Apo-1/Fas）信号通路介导的凋亡，而在SKW6.4等细胞（Ⅰ型细胞）中Bcl-2则不能抑制这种信号通路介导的凋亡。其结果表明，凋亡途径对Bcl-2敏感与否可能与细胞类型有关。进一步研究发现，这种差异取决于线粒体是否参与这种凋亡途径，在Ⅰ型 细胞中线粒体则未参与该凋亡途径。因此，Bcl-2可能只抑制依赖于线粒体的凋亡途径。更进一步研究发现，来源于牛痘病毒的细胞因子应答修饰体A（crmA）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin）类分子，能抑制一些Caspases的功能。而来源于杆状病毒的P35蛋白也能抑制一些Caspases的功能，而且它比CrmA具有更广泛的Caspases抑制特性。在组织培养体系中或转基因鼠的T淋巴细胞中CrmA表达能抑制CD95（Fas/Apo-1）和p55TNF受体Ⅰ诱发的凋亡，但对另一些诸如生长因子撤除，DNA损伤等细胞毒因素引起的凋亡则无能为力，而这些由细胞毒因素引起的凋亡现象则可被Bcl-2及其同系物所抑制，但是Bcl-2又不能抑制由CD95（Fas/Apo-1）和TNF受体介导的凋亡。由细胞毒因素及TNF受体家族介导的凋亡都可有效地被p35所抑制，提示这些通路都依赖于Caspases的激活。上述结果表明，在细胞中不同的凋亡激活途径同时存在，其一是需要对CrmA敏感的Caspases参与但又不能被Bcl-2所抑制；而另一个则是Bcl-2可抑制的凋亡途径，其中Caspases对p35敏感，但对CrmA则不敏感。

建议选用差异显示技术，对于该技术在植物中的应用简要介绍如下（大量资料可以从网络获取）：高等植物在其生命活动过程中，由于基因的选择性表达，决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中，都有不同的基因起作用。因此，研究基因的选择性表达，掌握其对植物生命活动的调控，克隆">克隆新基因，是分子生物学的重要课题。 1992年，Liang和Pardee〔1〕首次提出差异显示技术(DD-PCR)，并且利用这一技术克隆">克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRMA的优点〔2〕，很快成为克隆">克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具。这项技术最初用于医学研究上，近年来已开始在高等植物研究中应用，为研究高等植物的发育、生理代谢、基因表达提供了重要的技术手段。1 差异显示技术的原理和实验程序 差异显示的基本原理是，利用一系列的oligo(dT)引物，逆转录真核生物细胞中全部表达的mRMA，通过PCR扩增的方法，转换成cRMA双链，再利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，将有差异的片段分开，筛选出目的基因。其技术一般包括下列步骤：(1)从植物组织中提取总RMA，在这个步骤中注意不能有RMA污染，一般用无RMA酶的RMA酶在37℃下处理30 min；(2)在逆转录酶作用下，以Oligo T11MN 为引物(M为G、A、C中的任一种，N为A、C、G、T任一种)，进行逆转录；(3)PCR反应，扩增cRMA的第一条链；(4)扩增后的cRMA进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，使差异表达的cRMA片段在6%测序胶上分开；(5)找出不同处理间差异显示的条带，从胶上切割下来，并回收，再进行第二次扩增；(6)克隆差异片段，差异片段可作为探针；(7)Northern 杂交，验证目的片段，去掉假阳性片段；(8)对目的片段进行测序；(9)以克隆">克隆的目的片段为探针，从基因组文库中筛选出相应的全长基因。2 差异显示技术的应用 差异显示技术由于充分利用PCR技术和反转录，因此比较快速，且利用该技术能够观察细胞中mRMA的组成，了解植物不同发育阶段或不同环境条件下的细胞之间的差异表达，克隆">克隆目的基因。此项技术常用于下列领域。2.1 基因表达 Vielle-Calzada〔3〕和Nuccio利用差异显示技术研究了狼尾草的基因表达情况，发现狼尾草的有性生殖和无融合生殖的子房在基因表达上不同。用2个锚定引物和20个10碱基的随机引物，共显示出2268个cRMA片段。其中有3个基因片段(pcs-2,pca-2,pca-3)能在有性生殖的子房中特异表达，表明无融合生殖子房可能缺少某些基因，而表现无融合生殖。Brigham等〔4〕研究碗豆根尖和界面细胞的mRMA和蛋白质的差异表达后指出，两种细胞的mRMA差异与蛋白质差异具有高度的相似性，界面细胞的分化与蛋白表达的变化有关。利用差异显示技术可以揭示植物根的形态建成。Bachem等〔5〕利用差异显示技术，揭示了马铃薯块茎在不同发育阶段的基因表达情况，并同时比较了马铃薯块茎不同发育时期的mRMA表达情况，认为在块茎形成过程中有2个lox基因，不同时期产生的mRMA数量不同。Opsahl等〔6〕发现，玉米胚特定区域才能表达的基因——ZmEsr，在开花前4～7d内表达，之后表达量逐渐减少。张立平等〔7〕比较了水稻对铝敏感品种和抗性品种，在铝胁迫条件下，苗期抗性品种和敏感品种基因表达有明显差异。2.2 基因的鉴定与克隆">克隆 差异显示技术目前已成为鉴定和克隆">克隆基因的重要方法。Hannappel等〔8〕利用一对近等基因系，研究了西红柿基因组特异区。这对近等基因系中有一个含有抗烟草花叶病毒(TMV)抗性基因Tm-2a，一个不含。这两个近等基因系有一个差异片段，克隆后经Northern杂交证实是阳性克隆">克隆，并且发现，这个片段与抗性有密切关系。Joshi〔9〕利用修饰的差异显示法克隆了小麦HSP70基因族的3个公认的基因，他认为差异显示法在很短时间内就可以克隆">克隆基因。Knaap和Kende〔10〕克隆了水稻的赤霉素调控基因，利用赤霉素处理水稻，一个诱导，一个不诱导，发现二者在差异显示时，mRMA表达量相差10倍，因而很容易克隆">克隆了一个赤霉素调控基因。Sharma和Davis〔11〕利用差异显示法，分析了拟南芥对臭氧的反应。拟南芥用臭氧处理后，在根和成熟花中，臭氧诱导的转录物AtOZI 1 mRMA含量极高，是叶的3～5倍。序列分析证明，AtOZI 1编码一个Mr8600蛋白多肽，其序列与已知的蛋白序列基本一致，充分表明差异显示方法是克隆">克隆基因的有效方法。赵大中等〔12〕比较春化过和不春化的小麦，发现春化20d的小麦有一个与春化相关的cRMA克隆，经Northern杂交和同源性分析，证明VRC54是春化特异克隆片段，该克隆">克隆片段的基因对春化需求型植物的成花诱导起重要作用。2.3 研究激素对植物发育的影响 在植物的发育过程中，激素自始至终起着作用，调控着植物的器官形成、生长发育。研究其作用具有重要意义。Peters等〔13〕发现，用玉米素处理红叶藜的细胞时，mRMA表达量迅速增加，从而使细胞分裂加快。Chen等〔14〕发现，用赤霉素处理水稻幼苗，然后采用mRMA差异显示技术，处理过的幼苗中mRMA有特异的差异带(UBCgene)。克隆">克隆此片段，发现此片段影响基因调控过程中的某些蛋白。瞬时表达分析表明，该序列位于启动子转录起始位点上游231～159碱基位置；另外，还发现UBC gene可促进α-淀粉酶基因表达，从而调节水稻幼苗发育。2.4 研究植物发育过程 果实成熟是一个复杂的过程，在这个过程中，基因表达和细胞代谢有一些特殊的变化，其中乙烯对果实成熟有重要影响。为了了解果实成熟的分子机理，Wilkinson等〔15〕利用差异显示技术分析了果实的发育，发现成熟的草莓与不成熟的草莓之间有较多的差异，有3个特异表达的mRMA片段与果实发育有密切的关系，cRMA片段序列推测的氨基酸序列与已知的蛋白有同源关系。作者认为，差异显示技术能在RMA水平上研究植物果实成熟和其它发育过程。Callard等〔16〕通过研究拟南芥细胞悬浮培养后期的mRMA差异表达，分析了器官衰老的原因。他们发现，有3个基因(srg1,srg2,srg3)的转录产物mRMA在器官衰老时大量积累，这3个基因转录翻译产生的蛋白酶对衰老器官发育有重要作用。如果改变这3个基因，则有利于延缓器官衰老。Heck等〔17〕研究了欧洲油菜的胚发育，认为有一个重要的基因Ag115调控胚发育过程。Northern杂交和原位杂交证明，Ag115产生的mRMA和蛋白早在胚的球形期就开始大量积累，随后这些蛋白影响着胚的发育进程。2.5 研究抗病机制 植物病害每年都使农作物受到大量损失，因此提高农作物的抗病能力不仅有利于减少损失，而且有利于减少农药使用和环境污染。目前研究植物抗病机理主要方法是探讨植物－微生物的相互作用机制。Benito等〔18〕通过研究西红柿真菌病害，利用差异显示法对抗病机理进行了探索。他们发现，健康的番茄叶和被真菌或烟草枯斑病毒侵染的番茄叶的mRMA有较大差异。在病菌侵入后，植物防卫基因会迅速产生一系列mRMA，产生蛋白与病原菌相互作用，杀死病原菌或病毒。在相互作用过程中，有3个mRMA片段(ddB-2，ddB-5，ddB-47)大量积累，但相互作用后，则很快消失。这表明，植物的抗病与某些防卫基因的瞬时表达有密切关系。2.6 研究次生代谢途径 在植物的生长发育过程中，次生代谢对植物的生长发育有一定的影响，而且许多次生代谢物也是工业急需的。掌握次生代谢的分子机理，将有利于调控次生代谢及次生代谢物的生产。Appleyard和Unkles〔19〕以稻恶苗病真菌(Gibberella fujikuroi)为实验系统，探讨次生代谢物赤霉酸产生的结果表明，在赤霉酸代谢的各个时期，mRMA表达不一样，其中有16个cRMA片段与赤霉酸合成有关。利用基因诱变方法，进一步确定这16个基因确实决定着赤霉酸的合成。这个实验表明，利用差异显示法可以分离一些编码次生代谢物生物合成途径中酶的基因，用以研究次生代谢的调控。2.7 研究抗冷机理 防止冷害是农业生产上的一个重要课题，而弄清作物抗冷机理，有利于提高作物产量。马铃薯是北方寒冷地带重要的作物，了解其抗冷机理，有利于种植和贮藏。Jacobs〔20〕利用差异显示法分析了马铃薯的抗冷机理。他们把一部分马铃薯进行冷处理，而另一部分不处理，然后比较两者的mRMA表达情况。发现冷处理的马铃薯增加了一些mRMA片段，表明有一些低温诱导的mRMA片段出现，经过Northern杂交分析，这些低温诱导的mRMA片段都是组成性表达。这说明植物本身在遇到低温时，会产生一些应急反应，以抵挡低温危害。 3 差异显示技术使用中存在的问题与解决方法 DD-PCR法有许多优点，已为植物的基因表达研究和基因克隆所证实。但也有一些缺点，如扩增片段短、假阳性高、检测全部mRMA工作量大、基因的克隆">克隆受mRMA表达的时效性影响等。而最大的问题还是假阳性太高。据研究，假阳性高达70%〔21〕，严重地干扰试验结果，使后续工作量极大地增加。所谓假阳性指克隆">克隆的RMA片段用Northern杂交时，没有阳性信号。克服假阳性的缺点主要有以下措施。3.1 改进DD-PCR方法 (1)用无RMA酶的RMA酶处理总RMA，防止RMA污染。 (2)使用Tag酶时，批号应相同，不要经常调换。 (3)PCR循环次数减至30次，提高退火温度，减少非特异性条带。 (4)把从测序胶上切下来的条带纯化后分成两部分，一部分用于克隆，另一部分用作探针杂交以筛选克隆">克隆。 (5)改变引物长度，如有的在3′端锚定引物和5′端各加上10个碱基，带上EcoRI双酶切位点，如此可显著提高重复性。3.2 改进技术的几种方法 (1)代表性差异分析。此法是由Hubank和Schatz〔22〕1994年提出的。将合成的cRMA酶切，通过降低cRMA群体复杂度和多次更换cRMA两端接头等方法，特异扩增目的基因片段，重复性好，假阳性低。其主要步骤是，提取总RMA，逆转录合成cRMA，用识别4个碱基的限制性内切酶消化，连接接头，扩增出不同的代表子，进行Tester与Driver杂交，消减杂交富集，从而找出差异cRMA片段。 (2)RC4D法〔23〕。RC4D法全称为RFLP-domain-directed-differential display，是将RFLP与差异显示技术结合起来的方法，由Fisher首先提出。RC4D法不用10个碱基的随机引物，而是使用一些特异的引物，因而有利于降低假阳性。其具体方法是：首先反转录mRMA，再用一些常用的限制性内切酶酶切，然后连上一些双链接头，用接头引物和FSD(families specific domains)引物进行PCR扩增，产物进行聚丙烯酰胺电泳分离。RC4D方法可大大提高特异性和重复性、分辨率。Fisher用这种方法很快鉴定和克隆">克隆了6个MADS-Box gene，经Northern和原位杂交试验证明6个基因无一个假阳性。 (3)cRMA-AFLP法。1996年，Bachem〔5〕将DD-PCR法与AFLP(amplified fragment length polymorphisms)结合，探索马铃薯块茎发育情况，并克隆">克隆了2个cRMA片段(TDF536和TDF531)。cRMA-AFLP法很好地解决了假阳性和重复性等问题。其主要步骤包括：mRMA反转录形成cRMA双链，再用两种限制性内切酶消化，一种是常用内切酶EcoRI，一种是稀有内切酶MseI。然后在消化的cRMA片段上连上接头，再利用与接头相配对的引物进行预扩增。预扩增后，用有2个或3个选择性碱基的引物进行PCR扩增，扩增产物以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异片段。3.3 克隆差异片段小的解决方法 差异显示得到的片段较小，不能代表真正差异表达的基因。为了得到全长的基因，传统方法是采用cRMA探针从cRMA文库中筛选，比较复杂。目前人们多采用Lauren等〔24〕创造的mRMA 5′端逐渐步移技术，以步移法获取的片段大小多在1～1.5kb之间。另外还有一种叫RACE(cRMA末端快速扩增)的方法，也比较快速，简便。 4 结束语 许多年来，人们一直希望改变生物的某些性状，掌握植物的生命活动过程，克隆基因，将一些优良基因导入另一生物中，对植物发育进行调控。差异显示技术的出现，可使人们克隆">克隆一些与植物发育有关的基因，通过改变这些基因的结构，重新导入植物体内从而改变其发育进程，如开花时间、次生代谢等。这一技术不仅可以向上游RMA而且可以向下游蛋白质两个方向探讨植物生长、开花、结果的发育过程。当证明某基因与某种生物现象相联系时，就可以利用这种技术研究这些生物过程的调控。 目前利用差异显示技术克隆的大部分片段并没有与生物的功能联系起来，某些克隆片段只是代表了生物信息的某些基因。同时，差异显示技术还有假阳性、检测稀有mRMA困难、不能定量研究等问题尚待解决。但随着差异显示技术的不断改进，它将日益成为科学工作者手中克隆">克隆新基因，研究基因表达和植物发育的有效工具。

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据统计，2022年全球汽车销量为8102万辆（以LMC为准），下降0.6%，但8个主要市场的销量合计增长1.2%。中国、印度、墨西哥、东盟等新兴市场出现复苏，但欧洲及美国、俄罗斯、巴西市场有所减少。从市场来看，除俄罗斯以外的大部分新兴市场恢复到疫情之前的水平，但发达市场受通货膨胀和高利率的影响，出现了缩小市场的倾向。中国（+9.7%）、印度（+23.0%）、墨西哥（+7.1%）、东盟（+26.8%）等国虽然有所增加，但美国（-8.1%）、欧洲（-4.1%）、俄罗斯（-58.8%）、巴西（-0.8%）等国有所减少。美国市场因供应链问题，通货膨胀加剧等原因，车辆价格上涨，而由于利率急剧上调，消费者购买力减弱，销量下降了8.1%。受俄乌战争导致供应链受阻和能源价格暴涨导致消费心理放缓的影响，欧洲市场同比减少4.1%。中国市场在2022年6月以后实施的刺激消费和疫情的缓解导致需求急剧恢复，增长9.7%。在人口最多的印度市场，在疫情稳定和供应链稳定的帮助下，需求强劲反弹，创下历史新高，同比增长23%，超过日本，成长为世界第三大内需市场。半导体供应困难缓解后，墨西哥市场从5月开始连续8个月呈上升趋势，增长7.1%，而巴西受高利率影响购买力减弱，仅同比下降0.8%。俄罗斯市场因战争、全球厂商撤离业务等原因减少一半，同比减少58.8%。海外8个主要市场的厂商国籍增减率中，中国品牌（24.3%↑）大幅增长，美系品牌同比增长（0.6%↑），但除此之外，欧系（5.5%↓）、日系（5.9%↓）、韩系（4.4%↓）等均同比下降。中国品牌以内需市场为中心，得益于比亚迪等电动汽车企业等本地品牌的增长，增长率达到24.3%，首次超过了美系（18.3%）的占有率。美系在内需市场低迷的美国和欧洲分别减少0.7%和0.3%，但在墨西哥和东盟地区依然保持不错的水平，整体销售与上年持平（0.6%↑），市场占有率为18.3%，同比下降0.1%。欧系销售比重较高的欧洲市场受俄乌冲突影响较大，同比减少5.5%，占有率也下降1.8%。韩系在大部分市场表现良好，同比增长，但由于中国和俄罗斯市场风险持续，销量同比下降4.4%，市场占有率也小幅缩小0.4个百分点，从7.7%降至7.3%。各市场份额变化（“21年→”22年）从国家来看，美国为10.0→10.7%，欧洲为8.7→9.4%，巴西为9.6→9.7%，印度为22.3→21.3%，东盟为3.6→4.6%，中国为2.4→1.6%，俄罗斯为22.7→17.8%，中国和俄罗斯市场持续低迷。日系在美国市场也因半导体等供应受阻、电动化应对延迟等原因表现不佳，整体减少5.9%，市场占有率也减少1.9个百分点，仅为25.3%。日资企业的市场占有率变化（“21年→”22年）整体从27.2%减少到25.8%，美国38.8→34.7%，欧洲11.1→11.6%，中国21.3→18.6%，印度52.6→49.2%，东盟73.0→68.7%，整体表现不佳。尽管全球汽车市场出现停滞或下跌的基本情况，但电动汽车市场仍呈现快速增长趋势。八大主要市场2022年电动汽车市场同比增长43.4%，美国、欧洲、中国3个市场占比99.1%，占比大部分。在各市场内，电动汽车所占比重最高的是欧洲，占46.3%。其次是中国，在新能源汽车补贴等强有力的政府扶持政策的带动下，增至31.2%，美国增至12.3%。其他国家的电动汽车销售比例不到2%，但从增长率来看，东盟增长率为81%，巴西为45.7%，印度为30.4%，预计今后将呈现迅猛增长趋势。美国、欧洲等发达市场一方面加强了应对气候变化的内燃机车限制，另一方面加强了为培育本国产业和稳定供应链的立法推进，新兴国家也为应对产业模式变化，积极开展吸引和扩大本国电动汽车产业投资和普及的政策。例如，美国加利福尼亚州大气资源局（CARB）自2026年以后推进对新车辆实施进一步强化的汽车尾气排放标准（LEV4）。计划在2035年以后禁止销售新汽油车的同时，进一步加强尾气限制。欧盟委员会决定从2025年7月开始实施比现行汽车尾气排放欧6标准更严格的欧7排放标准，轿车和商用车等将从2027年7月开始实施。此外，还公布了应对美国IRA法的CRMA（核心原材料法）草案。欧7排放标准已经超越了过去只对内燃机汽车的尾气排放的限制，还包括刹车磨损、粉尘释放、电池耐久性限制。2022年，中国为弥补疫情封锁给汽车企业带来的损失，通过引导消费搞活经济，实施了各种支援政策，将支援对象扩大到内燃机车，推出购置税减半政策。东盟主要国家也在积极实施招商引资和电动化转型的生产者和消费者奖励。此外，泰国通过生产投资优惠政策（免除法人税）引导电动汽车在本国生产，同时推进以当地生产为条件的物品税免除、购买补贴等消费者奖励。印度尼西亚也将为特斯拉等电动汽车公司的招商引资提供奖励。马来西亚对电动汽车进口时的进口及消费税全额免除，CKD组装生产的电动汽车到2025年为止对进口税及消费税、服务税免除等购买者实行税额扣除。全球汽车市场的电动化转型速度急剧加快，中国新能源汽车品牌迅速发展，中国汽车的占有率接近20%，同时各国政府在加强环境限制的同时，也纷纷出台本国产业扶持政策。【本文来自易车号作者郑谊，版权归作者所有,任何形式转载请联系作者。内容仅代表作者观点，与易车无关】

越来越多的教育培训机构都在开展在线教育，开展在线教育也是许多机构拓展业务线，增加营收的好方式。而对于教培机构而言，首要的问题是如何完成线上授课的环节，其次还要考虑督学、学员管理、招生营销等问题。如果仅仅是为了讲一堂课，随便什么软件都可以。如果是真的想要从事线上教育的业务，还是用专业的、经过大量机构尝试的平台最为稳妥。 推荐使用短书，我自己就是用短书的直播抄功能线上讲课，我就是用短书的，提供双向直百播、手机直播、白板直播、录屏直播 ，微信群直播 等多种直播形式。高峰期都很流畅，学生也能听清楚。直播中有个白度板的功能用起来很方便，可以一目了然的将回知答问题的步骤呈现在屏幕上，有种上讲台答题的感觉，教学效果非常道好，学生也很积极踊跃 。

2022年的年检工作将于9月24日开始，持证人员可根据《2022年CIA/CCSA/CRMA年检手册》的要求，在12月31日前完成本年度年检并缴纳年检费用。

教务管理主要是有新建课程，分班，排课，考勤，补课，考试等功能

一、平台化运作中国的在线教育网站初创时都遇到过两个难题，一是缺乏教育资源，二是如何吸引更多的用户。传课网采取的方式是与中小型教育机构合作，大部分课程免费。而多贝网则从一开始自己做教育培训的模式变身为平台化运作，并对授课和上课双方都不收费。 在传课网上，学校可以完成招生、订付课程、调度老师、安排教学等线下运营的事务。讲课的老师只需录制一次视频，视频每播一次，就能获得额外的课程播放分成。传课网的策略是跟教育机构合作，聚集教师资源到平台上讲课以3%到15%的比例分成。 跟传课网不同的是，多贝网试图将自己打造成一个更加开放的平台任何人和机构都可以在这个平台上授课。这是一个免费提供线上虚拟教室的平台。老师约好上课时间，学生准时到位。老师在线上实时演示和讲解教学资料，课堂上还能通过留言窗实时交流：事后上课的过程被录制成录像，放在网站上供学生回看。在多贝网上，上课和授课都不需要交钱，甚至不用注册也可以听课。 二、线上线下混战 对于传统的教育巨头来说，众多新创在线教育网站是一个巨大的挑战。而他们要做的就是迅速跟上浪潮，并发挥自己的线下资源优势。早在2000年，新东方在线就已成立。运营第三年，遇上了SARS，很多人没办法到学校上课，用户第一次发现网上学习这种方式。那一年新东方在线就创造了几百万收入。新东方长久积累的品牌效应，为新东方在线带来广大的潜在用户群。在新东方线下学校还没有布局到的地区，新东方在线的学习产品正好弥补了市场空缺。但新东方在线不仅是线下学校的补充，其架构更相近于一家互联网公司，新东方在线的员工皆来自市场，包括产品部门、技术研发部门、推广销售部门等。一部分老师从新东方线下学校选取，更多的是直接从市场里挑选。新东方在线的课程比新东方学校的课程更丰富多元，而且线下的老师授课的方式不一定适合线上推广。”新东方线上课程的平均价格约为线下价格的2/3。2012年，新东方在线付费用户超过20万，收入超过2亿，但其营业额仍不到集团营业总额的5%。 2012年出现的第九课堂就采取的是线上报名线下授课的方式。三 社区化运营 在业内，很多人意识到，单纯的教授课程很难持续、要维持粘性，必须社区化。用业内人的话说，这是从1.0播视频的时代发展到2.0线上互动的时代。近两年新入场的教育培训企业都开始注重社区建设。比如：2009年，沪江网尝试过视频产品，代销如早稻田大学、罗塞塔等机构的视频学习产品，结果发现市场反响不好，产品续报率不高。因为视频是最传统的形态，四十分钟就坐在那里看着老师比比划划，学生很容易关掉的，这次花了钱，可能往后就不续费了。后来，沪江网利用自身的论坛社区优势，仿造论坛里有人发帖子、回楼主、写作业的形式，将课程整合到网络班级平台上，在那里有开学典礼、毕业典礼，开课要选班长、学习委员，学生可以选择同桌、看同桌的学习进度等。这样用户续报有所上升。现在，沪江网校营收占网站总收入40%。新东方在线也在2013年4月份推出全新的个人学习中心，在平台上用户可以自己选学习工具、课程，有自己的老师、同学，平台还能跟微博、微信、搜索联系在一起。 多贝网的页面看起来更像微博、人人等社区网站，个人关系网内的用户发布了一门新的课程，页面就像微博一样多了一条新的消息。因为学生首先对你产生兴趣才回来听课的，这个产品本身就具备社交的因素。

“djdbsk”是一个看起来比较像莫名其妙的缩写，具体涵义很难确定。也许是某个群体、某个地区或某个行业中的一个暗语、用语或缩写，对于不熟悉这个词汇的人来说很难理解其具体含义。如果您需要了解更多信息，建议您先确定一下上下文背景，例如这个词汇出现在哪种场合、哪个平台或与什么话题有关等，再尝试通过互联网或朋友了解其含义。若度娘、Google和您的朋友都无法解释，则可能是个别人的个人习惯或者打错字，不必过于在意。

比Core2 Duo E8500 @ 3.16GHz强，比Core2 Duo E8600 @ 3.33GHz弱，

巴适卡

CPU

Athlon是速龙3000+是CPU的型号。建议你不要买3000+的太低端了。现在已经淘汰了！！如果没有钱可以买4000+的，不要500。有钱可以买4800+或是更好的。

，那个是简称看那位说了，我以为我记错了，又去查了一下，我没错，所有的AMD双核的CPU都是64位的，不存在什么32位的AMD双核CPU，连更前的AMD单核的CPU都有64位的，那就叫Athlon64虽然这问题没关系，但回答还是负责一点好，不要信口开河

bsk是必胜客的意思。必胜客是比萨专卖连锁企业之一，由法兰克·卡尼和丹·卡尼两兄弟在1958年，凭着由母亲借来的600美元于美国堪萨斯州威奇托创立首间必胜客餐厅。它的标识特点是把屋顶作为餐厅外观显著标志。必胜客属于百胜餐饮集团。必胜客最好吃比萨的有：1、必胜客的薄饼披萨，薄饼披萨我吃了两种口味，一是榴莲薄饼披萨，二是薯香薄饼披萨（材料有土豆跟培根），都很好吃。又薄又脆的饼底加上一层厚厚（相对于薄饼）的芝士和馅料，真的很好吃。2、鳗鱼披萨，吃这款披萨的时候恰好我胃口不佳，没什么特别的感觉。与其他披萨不同的是，它的酱汁很多，吃起来不会干。必胜客的经典口味我倒感觉一般，一般都还是会用来拼，毕竟吃一个口味有点无聊。3、部分店还有榴莲披萨。所有披萨都建议多加份芝士但要加钱，加芝士不是变成芝心的意思，是在馅料里面加芝士。不要吐槽本身芝士太少，因为芝士非常贵，它都是有固定标准的。

双核！

bsk是防爆配电柜。防爆配电柜是统称，包含防爆配电箱，防爆检修箱，防爆电源箱，它的防爆原理主要是采用介质隔离点燃源的防爆措施从而达到电器防爆的目的，可根据用户要求安装各种普通的检测仪表、分析仪表、显示仪表、监视器、微电脑触摸屏、大功率变频器以及普通电器元件。特点隔爆型柜内允许危险气体或可燃粉尘进入柜内，允许发生可能的爆炸，但是爆炸后爆炸产生的热量及火花会停留在防爆柜内，不会向外传播引发连锁爆炸，相应的柜内的设备会有所损伤或损坏。防爆配电柜为锻造或钢板焊接后加工而成，具备较高的强度；防爆配电箱盖子与箱体密封较好，并颠末严厉查验及格后，由专门机构签发及格证实，并予以出厂贩卖。

应该和奔4 3.4差不多吧

1、必胜客必胜客是比萨专卖连锁企业之一，由法兰克·卡尼和丹·卡尼两兄弟在1958年，凭着由母亲借来的600美元于美国堪萨斯州威奇托创立首间必胜客餐厅。它的标识特点是把屋顶作为餐厅外观显著标志。必胜客属于百胜餐饮集团。2、变身卡变身卡是网络游戏《梦幻西游》中热门道具之一。相传这是一种天界流传下来的神奇卡片，借助这些卡片，凡夫俗子也能获得七十二变的能力，变身卡片不仅能让玩家变幻成三界中的各种怪物，一些高级的卡片还能赋予玩家特殊的技能。3、标识卡通俗点理解，即粘贴或挂在产品上的标明产品的品名、形状、性状、功能、作用、规格、构成、注意事项、时间、来源、等等信息的产品“说明书”。《梦幻西游》卡片使用效果玩家使用变身卡后可以变化成相应的怪物，并且在变身状态下，不会被他人PK（不影响切磋比武）。除此之外，一些高级的变身卡还记载着召唤兽才会有的技能，并附带某些临时的属性效果，例如使用虾兵变身卡可以临时获得“必杀”技能，但会临时降低一定的伤害力。变身卡使用后的效果有一定期限，过期后变身效果会自行消失，提高“变化之术”的技能等级可以延长变身时间。当与玩家比武、切磋等战斗3次后，变身效果也将解除。剧情技能中有一项“火眼金睛”，能够识破变身卡的变化效果。玩家找天宫的杨戬即可学习这项技能，每学一级消耗2点技能点，最高学到5级。“火眼金睛”在平时状态下使用，当技能不低于对方“变化之术”等级时，即可破除对方的变身效果。

win7 64位旗舰版最低配置要求：CPU：1GHz及以上内存：1GB及以上 安装识别的最低内存是512M。硬盘：20GB以上可用空间显卡：集成显卡64MB以上128MB为打开AERO最低配置，不打开的话64MB也可以。win7旗舰版64位标准配置：CPU：64位双核以上等级的处理器;内存： 1.5G DDR2及以上;硬盘：20 GB 可用硬盘空间以上;显卡：支持DirectX 10/Shader你的cpu达到推荐配置，再看看内存是否有1G以上，C盘是否够20G即可

QL-64平台同T4200平台性能较为接近，基本处于同一水平线，PCMark05测试中T4200稍占优势，不过由于该款软件较老，仅供参考；分析测试得分发现，QL-64在多媒体方面占有明显优势，特别在显卡性能及功能方面，QL-64平台表现不错，同T4200平台差异幅度约为一倍以上。另外，QL-64支持高清硬解，T4200平台则无法支持该功能。 对于一般用户而言，除了简单的办公软件应用之外，更多的还是关注笔记本在影音娱乐方面的应用（如电影、游戏、图形设计等）。在这方面，QL-64平台显然更具优势。得益于Puma整体平台尤其是GPU的突出表现，平台的整体性能和图形处理能力都得到了提升。当然，另外一个需要反复推敲的是两款平台的价格差距，由于两款平台在综合性能上基本处于同一个水准线，价格因素将成为重要参考因素。

TestFlight软件。苹果发布这个TestFlight的是为了用于将Beta测试流水化，其实TestFlight作为一个独立的测试平台已经有些时间了，不过因为TestFlight的开发商Burstly被苹果收购，于是在之后公开发行的Xcode。使用TestFlight兑换码来兑换相应的应用程序，比如实用工具，社交软件内侧版本等，但是，有些开发者钻研漏洞开发带有色彩的软件散布兑换码来引流获利，而且刚好无需上架苹果商城和审批，所以导致了testflight灰色链的诞生，使广大用户陷入其中无法自拔。远离testflight灰色产业链，做新一代健康的青少年从我做起。

ZARA不属于哪个品牌的负品牌，是属于INDITEX公司旗下的，同样同属于INDITEX还有其他13个品牌：例如：STR,BERSHKA,OYSHO,BSK,BERA&PULL.........等等ZARA自己的品牌分为：ZARAWOMEN,ZARAHOME,ZARAKID.ZARABAISC,ZARATRF其中ZARATRF在国内外，最受欢迎，因为设计时尚，价格低廉出名

宜宾学院是一所公立学校，在学生中间很有名气。它的优势在于师资力量雄厚，硬件设施先进。同时，学院还有丰富的课外活动，学生可以根据自己的兴趣爱好选择参加。宜宾学院的学生都很幸福，因为他们能够在这所优秀的学校里学习。 宜宾学院联系方式地址：四川省宜宾市翠屏区酒圣路8号 联系方式收集于网络，如果错误，联系本站修改 宜宾学院概况宜宾学院位于国家历史文化名城四川省宜宾市。 学校是2001年经国家教育部批准，由原宜宾师范高等专科学校和四川教育学院宜宾分院合并组建而成的省属全日制综合性普通本科院校。 学校现有18个二级学院，开办有覆盖文、理、工、管、经、法、教、艺、农九大学科门类的本科专业59个，面向全国28个省、市、自治区招生，现有全日制在校学生15000余人。 学校占地1266.89亩，校舍面积38万平方米，教学仪器设备总值1亿多元，藏书301.15万册（含电子图书153.65万册），拥有固定资产近6亿元。 学校是教育部中美应用技术教育“双百计划”首批试点院校之一，是四川省整体转型发展改革试点院校之一。学校和同济大学、电子科技大学、西南大学等6所国内知名大学建立了联合办学机制，每年选派优秀学生到合作学校学习；与德国BSK国际教育机构签订协议，在校生可赴德国攻读硕士德制工程师；学校是举办成建制的“ACCA特许公认会计师培训项目”的高校，培养高素质会计人才。目前，学校与有关国家签订了合作协议，正在努力建设中美应用技术学院、中德同济工程师学院、中俄四川萨拉托夫艺术学院等国际化学院；学校还与日本、俄罗斯、韩国、马来西亚、台湾、香港等国家和地区有合作办学关系，形成了健全的师生交换往来的机制。 宜宾学院部分专业：序号专业名称所属类别1煤矿开采技术医药卫生2工程管理管理学3视觉传达设计艺术学4美术学艺术学5社会体育指导与管理教育学6物流管理管理学7汉语言文学文学8小学教育教育学9广播电视编导艺术学10财务管理管理学11思想政治教育法学12环境工程工学13音乐学艺术学14劳动与社会保障管理学15体育教育教育学16图形图像制作公共管理与服务17工商管理管理学18农学农学19应用心理学理学20社会工作法学宜宾学院周边环境宜宾学院的所在地宜宾市，位于四川省南部，东与泸州市毗邻；南和云南省昭通地区接壤；西界凉山彝族自治州和乐山市；北濒自贡市。处于金沙江、岷江、长江汇流之地，川、滇、黔结合部。交通十分便利，内昆铁路、渝昆高速公路、宜乐高速公路、西南出海通道横贯市区。距宜宾城中心7公里建成的宜宾机场，有飞机直达北京、上海、广州、深圳、昆明等城市。沿金沙江、石门江可至云南绥江、盐津滩头，溯岷江可达乐山、成都，顺长江经重庆、武汉，东下到上海。宜宾是四川省内具有"铁、公、水、空"综合立体交通网络的区域中心城市之一。宜宾作为生态旅游城市，拥有川南明珠的“蜀南竹海”、姿态万千的“中国石海”、千古之谜的“僰人悬棺”及西部大峡谷温泉等风景名胜。宜宾学院就座落在“五粮液”飘香的“万里长江第一城”。自考/成考有疑问、不知道如何总结自考/成考考点内容、不清楚自考/成考报名当地政策，点击底部咨询官网，免费领取复习资料：https://www.87dh.com/xl/

CPU不需要驱动 主板的话 目前NV也没有针对它的新驱动了 可以查查看NF2的比较后期的驱动吧

阝+丁+口bsk

主线打法第一回合你遇到的是带头盔的小莫，不用紧张，她给你的伤害顶多就是EX攻击and三色卡攻击，你就让大卫放宝具就行了，绿茶和月神一定要留着宝具，这两个人的宝具留着第二回合用，想保险的话你可以用大卫的群体回避技能。拖着拖着你就发现到了第二回合了，第二回合的小莫没有带头盔，一言不合给你放宝具，解决的办法是：绿茶给小莫扔个第一技能【简称下毒】，然后放月神宝具绿茶宝具就行了，妥妥的2333，至于我方搞什么buff我也不需要解释了吧嘿嘿嘿。(6)第11节第4关，boss是静谧，别以为她只是个普通的黑影NP满格会放宝具。(7)第12节第3关，第二回合的特里斯坦(archer)是职介克制反转，意思是，原本archer会被lancer克，现在变成了archer克lancer，当然，我方带了lancer的话，对他的伤害=正常伤害。(8)第12节第4关，依旧打特里斯坦(archer)，buff依旧是职介克制反转，血量是48W，请务必带几个saber。说到底就是saber和archer是互相克制的。【第一推荐带总司，花嫁尼禄还没有试过】哦对了，顺便说一句话，他的宝具有个必中效果，所以我方用了回避等于没效果。(9)第13节，3/3的第1关，第二回合的S长江，saber是被archer克制，然而他有个buff效果，你可以完全把他当成ruler来打，至于怎么解决?要么带一队的archer(月神和二姐强力推荐)要么带一队的BSK。(10)第15节1/3的第1关又要打长江，打法同第九点，打消耗的话就带绿茶+月神+二姐+大卫。(11)第15节3/3的第2关和第3关都是打魔神柱，第二关血量是50W，第三关血量是58W。PS：这家伙会给自己放个buff，每回合回血【我记得好像是1W?】正常的解决办法就是带四骑士，强烈推荐带安徒生+大腿孔明+C龙娘+双子+盾娘+蛋糕+R金时+C妈。双子最好带上黑圣杯，如果你没有双子那就带R金时吧，正常配置应该是安徒生+孔明+金时+C妈/龙娘+盾娘+蛋糕。怎么打我不需要解释了吧，前排能活多久就活多久，单体的输出一定要存活到最后，R金时/双子是核心输出人物啊你只要让安徒生多放几次宝具就行了(12)第16节3/3的第4关，分为3轮，第1波是拉二+雕像，第2波是拉二+雕像，第3波是拉二+黑皮妹子。前面两波尽量早点解决，最后一波能放几次宝具就放几次宝具，R金时必须要带了，其次是大腿孔明还有自己的盾娘，别让孔明提早退场不然就劝退重新来一次吧，我带的应该是R金时+R无毛+孔明+盾娘+B叔+蛋糕?【记得应该是这样的】对策：R金时的回NP先开，盾娘1技能防御先开，孔明的第二技能和第三技能也先开，然后第一技能就扔给R金时吧，能拖多久就多久。如果可以的话，请一定要在第3波用R金时的宝具处理掉黑皮妹子至于那个拉二慢慢耗吧，最后的B叔一定要憋出宝具【当然，如果你没有B叔的话后排带个能输出的ASS吧，切丝papa/214?】(12)第17节3/5的第一关，又是打小莫，没有带头盔，血量46W，又是每回合放宝具目前的解决办法就是带一队弓，大卫必须带，其次是二姐和绿茶，大腿的话可以带月神，剩下的人，你有多少弓就带多少弓吧，有回避技能就更好了【PS：一队弓的练度要达到满级】(13)第17节3/5的第二关，打特里斯坦，buff效果我就不用说了吧，带一队saber砍砍砍【必中这个技能太蛋疼了】(14)第17节4/5的第四关，打57W的枪毛，解决办法就是靠大佬的总司满级魔放。然后带一队saber吧记得带个盾娘。【打完之后，盾娘宝具改名字+宝具等级lv2】

盘锦职业技术学院，是公办学校。比民办学校，是好多了。最好的专业是：护理专业、学前教育专业

E1：漏电 E2感温器故障 E3温控器失灵 找出此电热水器的说明书，上面会针对显示器上出现哪种标识而采取什么解决方式的说明！

这个无法判断电脑型号和硬件信息。这串名称，是安装操作系统时，系统自动生成的，相当于给电脑起的一个名字。LAPTOP表示笔记本，DESKTOP表示台式机，不过并不绝对。后面的则是随机生成，没有实际意义。要看型号，用软件如AIDA64检测，或者直接看产品标签。

应该是“GSK”吧。尚金缘的英文缩写。尚金缘是百泰旗下的一个品牌。应该没问题的。

从开关下的火线接常闭触点1 常闭触点2接电机 电机线另一线接零线