- 可可
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细菌染色分为活菌染色跟死菌染色两种。其中死菌染色分为正染色跟负染色。正染色又包括普通染色与特殊染色两种。普通染色有简单染色法、革兰氏染色法和抗酸染色法;特殊染色分为芽孢染色法、荚膜染色法和细胞壁染色法。一般都只用革兰氏染色法跟抗酸染色法。
革兰氏染色法(Gram"s stain)是最常用的细菌染色法。细菌经结晶紫初染染成蓝色。革兰氏染色阳性菌(G+)细胞壁肽聚糖层数多,且肽聚糖为空间网状结构,再经乙醇脱水,网状结构更为致密,染料复合物不易从细胞内漏出,仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌(G-)细胞壁脂类含量多,肽聚糖层数少,且肽聚糖为平面片层结构,易被乙醇溶解,使细胞壁通透性增高,结合的染料复合物容易泄漏,细菌被脱色为无色,再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
①将结晶紫染液加于涂膜上,染色(初染)1min。②水洗后加芦戈氏碘液处理(媒染)1min。③水洗后用95%酒精脱色,脱色时频频摇动玻片,直至流下的液体无色为止(约需0.5min)。④水洗后加石炭酸复红稀释液染色(复染)0.5min。⑤水洗,用滤纸轻轻吸干,待标本充分干燥后进行镜检。染色过程中,水洗要用自来水的细流徐徐冲洗,冲洗涂膜的背面,勿使强水流直接冲到涂膜上。
抗酸染色法(acid-fast stain)对分枝杆菌属等一般染色法不易着色的抗酸性细菌染色。要注意:1)涂片要略厚;2)加温染色或延长染色时间,加温时随时补加染色液;3)分枝杆菌呈红色(+),其他细菌和背景为蓝色。
①石碳酸复红加温染色8~10分钟。②3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟,脱色是轻摇玻片,直到涂片颜色脱去为止。③水洗后,用碱性美蓝复染1分钟。④再次水洗,印干。
芽孢染色法是专门给细菌芽孢染色的。要注意:1)芽孢染色用的菌种应控制菌龄,使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜;2)染色加热过程要及时补充染液,切勿让涂片干涸。
①孔雀绿加热染色5分钟。②水洗。③番红染色2~3分钟。④水洗,干燥。
荚膜染色法是专门给与染料亲和性弱的细菌荚膜染色。由于荚膜很薄,且含水量高(90%以上),易变形,所以制片和染色时一般不用热固定。这个包括黑素负染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素负染色法:
1.制菌液:在洁净载破片一端加一滴蒸馏水,按无菌操作要求,用接种环取少量斜面试管培养物于蒸馏水中,轻轻混匀。
2.涂片(推片法):取另一块边缘光滑的载玻片,使之一端与菌液接触,然后迅速均匀地将菌液推向玻片的另一端,使菌液涂成一薄层。置空气中自然干燥。注意:勿热固定。
3.复红染色:滴加石炭酸复红染色液覆盖涂布面,染色4~5分钟后,除去多余染液(勿用水洗)。干燥时间不要太长,防荚膜脱水。
4.黑素染色:在玻片一端加一滴1%黑素液,再取一块边缘光滑的裁玻片,当边缘与黑素液接触后,迅速均匀地推向玻片另一端,使成一薄层。置空气中自然干燥。
5. 镜检(油镜):菌体呈红色,背景呈黑色,荚膜无色。
注意事项:滴黑色素要量少;取菌要适量。
Leifson染色法
1.制备涂片同前,自然干燥。
2.滴加Leifson"s染色液覆盖涂布面,染色10分钟,倾去多余染料(勿用水洗)。
3.滴加硼酸钠美蓝染色液,染色5分钟,轻轻用水冲洗,置空气中自然干燥。
4.油镜下镜检,菌体呈蓝色,荚膜呈红色。
Tyler染色法
1.制备涂片同前,自然干燥。
2.滴加结晶紫冰醋酸染色液覆盖涂布面,染色5~7分钟。倾去多余染料(勿用水洗)。
3.用20%CuS04水溶液轻轻冲去染料,用吸水纸印干后,置空气中自然干燥。
4.油镜下检查,菌体呈紫色,荚膜呈浅紫色或浅蓝色。
细胞壁染色法是观察细菌细胞壁时采用的染色法。细菌细胞壁很薄,它与染料结合的能力差,不易着色,在细菌的染色过程中,一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞,细胞壁本身并未染色,因此,欲通过染色来观察细胞壁,必须设法使细胞壁能着色,而细胞质则不易着色,常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用,它们使细胞壁形成可着色的复合物,而使细胞质不易被着色,经结晶紫或甲基绿染色后,便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。
根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
1.单宁酸法
(1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。
(2)用5%单宁酸染5分钟后,水洗。
(3)用0.2%结晶紫染3—5分钟,水洗,吹干。用油镜观察,细胞壁呈紫色,细胞质呈淡紫色。
2.磷钼酸法
(1)制备浓厚的涂片,在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3—5分钟。
(2)用1%甲基绿水溶液染3—5分钟。
(3)水洗后,吹干,用油镜观察。细胞壁为绿色,细胞质无色。
3.区分细胞壁与细胞质膜
(1)乙醚蒸气法
(a)将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上,翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。
(b)取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出,水洗。
(c)用硫堇染色30秒钟。
(d)水洗,水封,置油镜下观察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。
(b)挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌,在25%NaCl水滴中涂布均匀,待自然干燥。
(c)滴加0.01%结晶紫于其上,使盖满有菌部分,30秒钟后水洗,干燥,用油镜观察结果。
- 余辉
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常用的细菌染色方法有简单染色和革兰氏染色。1、简单染色是利用单一染料对细菌进行染色,常用碱性染料如美蓝、结晶紫、碱性复红等。方法很简单:(一)制片:进行无菌涂片->自然风干->微火固定 (二)染色:例如用美蓝染色3-5分钟,滤纸吸干后就可以置于显微镜下观察了
2、革兰氏染色:使用非常普遍。方法:(1)用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染(2)用碘液进行媒染(3)用乙醇冲洗以脱色(4)用一种与结晶紫不同颜色的碱性染料进行复染如沙黄。
这些实验都很简单,到时候你亲自做一遍就会很明白了,你现在只需弄清原理和简单过程就行。
- nicehost
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不一定哦,染色剂多呢!有甲基蓝,复红,结晶紫,还有碘液……一般最常见的细菌染色也就、革兰氏染色吧!
方法:
1)涂片固定。 2)草酸铵结晶紫染1分钟。 3)自来水冲洗。 4)加碘液覆盖涂面染1分钟。 5)水洗,用吸水纸吸去水分。 6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分。 7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。 染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。
加油噢