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法国LA GUYENNOISE(拉古杰)股份酒业集团有哪些牌子的红酒。LAFITE KING VILLAGE MARQUIS是?

2023-07-14 23:38:03
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不是拉菲系列酒 简单的说就是山寨

阿啵呲嘚

不是拉菲系列酒 简单的说就是山寨

S笔记

没有关系原瓶进口的拉菲红酒英文是 lafite La Fite是另外一个品牌,中文翻译拉菲特,因为和拉菲就差了一个字所以特别好卖 罗斯柴尔德拉菲集团真正的英文全称是Lafite Rothschild 乾杯网上有很多关于葡萄酒的小知识|所有的葡萄酒也是原装原瓶从国外进口的|你可以多来了解了解

陶小凡

没有关系原瓶进口的拉菲红酒英文是 lafite La Fite是另外一个品牌,中文翻译拉菲特,因为和拉菲就差了一个字所以特别好卖 罗斯柴尔德拉菲集团真正的英文全称是Lafite Rothschild 法国人喝葡萄酒就像中国人喝茶,虽然尊贵、高雅却并不那么遥不可及,随时随地您都可以享受葡萄酒带给您的愉悦与温馨,国庆长假晓宇酒类专营邀您与家人共饮健康美酒

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应答性反应的意思

就是受到刺激后,不由自主地做出反射,被动的,控制不了的,比如膝跳反射、火烧手时不自觉缩手。也就是低级的反射
2023-07-14 23:08:462

拉菲酒王的由来 为什么最好的红酒是拉菲红酒

关注雅典娜红酒杯,了解更多红酒知识怎样在瓶身上区分大拉菲和拉菲传奇?二者在瓶身上最大的区别来自于酒标上的名称,拉菲在酒标上的写法为“Chateau Lafite Rothschild”,而拉菲传奇则为“Legende”。大拉菲、小拉菲、拉菲传奇和智利拉菲这四者分别指什么?酿造拉菲古堡正牌葡萄酒标准的葡萄(产自树龄30年以下的葡萄树),拉菲古堡则用之来酿造副牌葡萄酒拉菲珍宝。拉菲传奇属于拉菲罗斯柴尔德集团精选系列葡萄酒(The DBR…拉菲传说、拉菲传奇和拉菲有什么关系和区别?afite)的简称,这个集团属于赫赫有名的罗斯柴尔德家族。拉菲罗斯柴尔德男爵集团精选系列共分拉菲传奇(Legende)、拉菲传说(Saga)和拉菲珍藏(Reserve Speciale)三大系…拉菲传奇波雅克干红葡萄酒怎么样?拉菲传奇波雅克干红葡萄酒所受“礼遇”与大牌酒完全一致。其酿酒葡萄均产自拉菲罗斯柴尔德集团自己的葡萄园。此款酒一直都受到特别关照,因此酒中优雅的古典主义风格…拉菲传奇葡萄酒来自法国哪个产区?拉菲传奇主要有四大酒款,分别是:拉菲传奇梅多克干红葡萄酒,产区:梅多克(Medoc)拉菲传奇波雅克干红葡萄酒,产区:波雅克(Paulliac)拉菲传奇波尔多干红葡萄酒
2023-07-14 23:08:551

美国火警是911吗?

  是的。x0dx0ax0dx0a  美国第一个使用 911 报警系统的是阿拉巴马州的 Haleyville, 第一个拨出去的 911 报警电话是在 1968 年 2 月 16 日, 报警人是参议员 Rankin Fite, 接线员是在警局等待报警电话的 Tom Beville。 仅仅在一周后,阿拉斯加州的 Nome 就建立了全国第二个 911 报警系统。 现在加拿大的报警电话也是 911。 最原始的时候,911 采取的是根据报警者所使用的手机号码来定位,但是这样效率不高,因为很 多情况下市区界限以及电话交换机的界限并不相同, 有时候电话并不能及时接通。 为了处理这个 问题,911 系统进行了升级,不再使用电话号码而是使用地址来给报警者定位。x0dx0ax0dx0a 其他类似于 N11 的号码还有 x0dx0a211:查询社区服务信息,x0dx0a311:非紧急市政服务,x0dx0a411:咨询辅助, x0dx0a511: 交通信息以及非紧急情况的警察服务, x0dx0a611 电话公司客户服务, x0dx0a711: 电信设备服务,x0dx0a811: 地下公共设施服务。
2023-07-14 23:09:041

关于服装的英语单词

关于服装的英语单词skirt 裙子divided skirt, split skirt 裙裤underskirt 内衣underwear,underclothes 内衣裤underpants,pants 内衣裤(美作: shorts)briefs 短内裤,三角裤panties 女短内裤knickers 女半短内裤,男用灯笼短裤brassiere,bra 乳罩corselet 紧身胸衣stays,corset 束腰,胸衣waistcoat 背心slip,petticoat 衬裙girdle 腰带stockings 长袜anorak,duffle coat 带兜帽的夹克,带风帽的粗呢大衣hood 风帽scarf, muffler 围巾shawl 大披巾knitted shawl 头巾,编织的头巾fur stole 毛皮长围巾muff 皮手筒housecoat, dressing gown 晨衣(美作: duster)short dressing gown 短晨衣bathrobe 浴衣
2023-07-14 23:09:111

juice果汁可数吗

juice果汁不可数。根据意思判断,juice是液体,液体是不可数的。类似的还有milk,cola,tea,water,junk food,chocolate,juice,beer等这些都是不可数名词。但a bottle of orange juice这样借助相应量词的是可数的。 扩展资料   短语搭配:   Orange Juice 橙汁 ; 橘子汁 ; 桔子原汁 ; 柳橙汁   grapefruit juice 葡萄柚汁 ; 西柚汁 ; 蒲萄柚汁 ; 柚子汁   cranberry juice 蔓越莓汁 ; 红莓汁 ; 越橘汁 ; 蔓越橘汁   juice extractor 果汁榨汁机 ; 榨汁机 ; 液汁提取器 ; 汁液榨取器   Noni Juice 诺丽果汁 ; 大溪地诺丽果汁 ; 诺利果汁   Juice Beauty 果漾美人 ; 果漾美颜 ; 果漾佳丽   Prune Juice 西梅汁 ; 黑枣汁 ; 或干李子汁   Sugarcane juice 蔗汁 ; 柘浆   fitered juice 清汁泵 ; 清汁泵联轴器   juice的复数形式使用例句:   The male mosquito feeds on nectar and other plant juices.   公蚊子靠花蜜和其它植物的汁液哺育成长。   And in the summer, ice creams and fruit juices.   夏天,卖冰激凌和果汁。   It is a camellia to maintain flavor, aroma, vitamins and nature of the natural juices.   它是一种保持山茶口味、香气、维生素和性质的天然汁液。
2023-07-14 23:09:511

关于肿瘤基因治疗中的“旁观者效应”的定义拜托了各位 谢谢

自杀基因治疗: 自杀基因治疗的一个显著特点是产生 “【旁观者效应】”,【即不仅杀死已经转染的肿瘤细胞,而且可引起临近未转染的肿瘤细胞死亡,其机制是通过细胞间的缝隙连接将毒性代谢产物从转染的肿瘤细胞中转移到相临的肿瘤细胞或者通过血管凋亡抑制肿瘤生长】。 研究最多的自杀基因/前药系统是单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷。HSV TK能催化GCV磷酸化,其磷酸化产物能阻止DNA合成,对分离期瘤细胞产生杀伤作用。Hayashi等以逆转录病毒作为载体将HSV TK基因导入Y79RB细胞,体外实验观察到,Y79 TK细胞对GCV的敏感性较亲代提高,同时观察到了旁观者效应的存在;体内实验时,HSV TK/GCV系统基因治疗组裸鼠皮下接种部位无肿瘤生长。Burrows等将HSV TK基因导入人和鼠的神经胶质细胞株,给予GCV后,发现二者均有较强的旁杀伤效应,当培养液中仅5%的肿瘤细胞转染时,却有90%以上的肿瘤细胞死亡。Zager等用HSV TK通过病毒转染治疗肝癌荷瘤小鼠,在大剂量TK治疗下,小鼠肿瘤负荷明显减少。Chevez Barrios等曾报告,选取双眼RB,应用HSV TK/GCV系统基因治疗后,所有患者均获得临床效果,其中一名患者治疗后,监测27个月未查及肿瘤生长,所有患者未出现肿瘤经眼部注射球外蔓延。另外,有的学者提出了一种远程旁观者效应的说法。Pierrefite等用大肠埃希菌胞嘧啶氨酶基因修饰的肿瘤细胞给小鼠结肠癌转移模型予皮下及肝内注射,再予咪康唑加5 氟胞嘧啶治疗,发现70%的肿瘤细胞消亡,且阻止了肿瘤的扩散,提出了“自杀细胞疫苗”的概念,尤其是皮下注射了自杀细胞疫苗后结肠癌细胞消退及扩散的停止,支持了“远程旁观者效应”。
2023-07-14 23:10:061

天彩写真机SC-760打印机参数设置

天彩sc-760怎么调成双向打印的 能不能 我用的是蒙泰5.1
2023-07-14 23:10:133

经典优美英文句子_最经典的英文句子

  the road to success, always in the construction。通往成功的路,总是在施工中。优美的英文也是有很多的。下面是我带来的,欢迎阅读!   优美英文 句子 精选   1、love is blind。爱情是盲目的。   2、my heart is with you。我的爱与你同在。   3、nothing in the world。 世界什么都没留下。   4、1my heart is with you。我的爱与你同在。   5、my hours are slumberless 我的时间在沉睡。   6、the sad past is heartbroken。 悲伤的往事令人断肠。   7、brief is life, but love is long。生命虽短,爱却绵长。   8、the soul cannot live without love。灵魂不能没有爱而存在。   9、love is a light that never dims。爱是一盏永不昏暗的明灯。   10、a heart that loves is always young。有爱的心永远年轻。   经典英文句子   1、A man is not old until regrets take the place of dreams.   当后悔取代了梦想,一个人才算老了。   2、Donu2019t let a little dispute break up a great friendship.   不要让小小的争端损毁了一场伟大的友谊。   3、Johan Wolfgang Goethe: Man errs so long as he strives.   德国诗人、剧作家歌德:只要奋斗,人就会犯错。   4、Do not keep anything for a special occasion, because every day that you live is a special occasion.   不要将你的东西为了某一个特别的时刻而预留着,因为你生活的每一天都是那么特别。   5、Itu2019s not easy to change friendship into love. But itu2019s even harder to turn love into friendship.   让友情变成爱情不是件容易的事,而让爱情变成友情却更困难。   6、Michael Jackson 《You Are Not Alone》: I can hear your prayers. Your burdens I will bear. But first I need your hand then forever can begin.   MJ的歌《你并不孤单》:我听到了你的祈愿,我愿肩承你的负担,但我需要先牵着你的手,才能告诉你什么是永远。   7、When I thought I couldnu2019t go on, I forced myself to keep going. My success is based on persistence, not luck.   当我以为我无法继续走下去时,我强迫自己要继续前进。我的成功是基于我的坚持,并非运气。   8、The better to have loved and lost; Than never to have loved at all.   宁肯爱过而又失去,也不要做一个从未爱过的人。   9、Dreaming in the memory is not as good as waiting for the paradise in the hell.   在回忆里继续梦幻,不如在地狱里等待天堂。   10、If I had a single flower for every time I think about you, I could walk forever in my garden.   假如每次想起你我都会得到一朵鲜花,那么我将永远在花丛中徜徉。   11、In the world the most exhausting matter is that spending every day falsely.   世上最累人的事,莫过于虚伪的过日子。   12、True love is visible not to the eyes but to the heart.   真爱不靠眼睛看,要用心感受。   13、When it comes to family, we are all still children at heart. No matter how old we get,we always need a place to call home.   面对家人的时候,在我们内心深处我们始终觉得自己还是孩子。不管我们年龄多大了,我们还需要一个称之为家的地方。   14、Better to do something imperfectly than to do nothing flawlessly.   宁愿做事不完美,总比完美地不做事要好。   15、Actually it is just in an idea when feel oneself can achieve and cannot achieve.   觉得自己做得到和做不到,往往只在一念之间。   16、Franois Rabelais: A child is not a vase to filled but a fire to be lit.   法国作家拉伯雷:孩子不是一个需要你灌水的瓶子,而是一堆等着你点燃的火焰。   17、The greatest things are done by the aid of small ones.   最伟大的事情是在小事情的帮助下完成的。意即:一个篱笆三个桩,一个好汉三个帮。   18、Three important things in relationships: eyes that wonu2019t cry, lips that wonu2019t lie, and love that wonu2019t die.   美满恋情的三个要点:不要让眼泪模糊了她的双眼;不要让谎言伤害他的心;不要让真爱之花猝然凋谢!   19、Dont ever let your enemies see you fall, all they want is to see you mess up, donu2019t give them the pleasure. Be strong, prove them wrong.   不要让你的敌人看到你一蹶不振,他们最想看到的是你自乱阵脚,不要让他们轻易得逞。振作起来,用行动证明,他们看走眼了。   20、Byron: I am never away from you. Even now, I shall not leave you. In another land, I shall be still that one who loves you, loves you beyond measure beyond measure.   拜伦:我从未离开过你。即使现在,我也不会离开你。在另一个世界,我依旧是爱的那个人。爱你,无穷无尽,天长地久。   21、 有些记忆,注定无法抹去;就好比有些人,注定无法替代一样。 Some memories, are doomed to be unable to cancel, is just like some people, is doomed to be unable to substitute.   22、 美好的日子给你带来快乐,阴暗的日子给你带来 经验 。所以,不要对生命中的任何一天怀有遗憾。 Never regret a day in your life. Good days give you happiness and bad days give you experience.   23、 被特别在乎的人忽略,会很难过,而更难过的是你还要装作你不在乎。 It"s tough when someone special starts to ignore you, it"s even tougher to pretend that you don"t mind.   24、 爱并不复杂,复杂的是人。 Love isnu2019t complicated, people are.   25、 很多我们想要的东西都是价格不菲的。但是,真正能让我们感到满足的东西,比如爱、欢笑还有工作中的激情,却都是不需要花钱的。 Many of the things we desire are expensive. But the truth is, the things that really satisfy us are totally free u2013love, laughter and working on our passions.   26、 我们无法在这个世界上做什么伟大的事情,可我们可以带着伟大的爱做一些小事。 We cannot do great things on this Earth, only small things with great love.   27、 你无法真正忘掉那个打动你内心的人,无论他是那个伤害你的人,还是治愈你的人。 You never really forget the ones who touched your heart; regardless whether it"s the ones who broke it or the ones who healed it.   28、 不要祈祷生活的舒适,祈祷自己变得更加坚强。 Do not pray for easy lives. Pray to be stronger men.   29、 所有人都想得到幸福,不愿承担痛苦,但是不下点小雨,哪来的彩虹? Everybody wants happiness, nobody wants pain, but you can"t have a rainbow without a little rain.   30、 很抱歉,我没法委屈自己来取悦你。 Iu2019m sorry that I canu2019t make myself unhappy to please you.   31、 昨天已经过去,明天还没到来。只有今天是一份礼物。 Yesterday is history, tomorrow is a mystery, but today is a gift.   32、 孤单不是因为没有朋友,而是没有人住在你心里。 To be lonely is not because you have no friends, but there is no one in your heart.   33、iu2019ll think of you every step of the way。我会想你,在漫漫长路的每一步。   34、there is no remedy for love but to love more。治疗爱的创伤唯有加倍地去爱。   35、the road to success, always in the construction。通往成功的路,总是在施工中。   36、forget the memories, that continue to live。忘不掉的是回忆,继续的是生活。   37、at the touch of love everyone becomes a poet。每一个沐浴在爱河中的人都是诗人。   38、i love you, is never a touch on lightly。我爱你,从来都不是一件轻描淡写的事。   39、you never abandon a useful, is it right?你说的不离不弃、是不是一辈子有用。   40、happiness by adding those sad there the elements。幸福中总会掺加那些悲哀的元素。   关于时尚的英文句子   1、Some people say that loneliness is shameful, but fashion is a means of resistance alone, this is fashion realm。有人说孤独是可耻的,而时尚则是抵抗孤独的手段,这才是时尚的境界。   2、 Here is my card。 这是我的名片。   3、My heart beats for you every day。 I am inspired by you every minute, and I worry about you every second。 It is wonderful to have you in my life。每一天都为你心跳,每一刻都被你感动,每一秒都为你担心。有你的感觉真好。   4、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头大波浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。   5、 You have to believe in yourself。That"s the secret of success。-- Charles Chaplin 人必须有自信,这是成功的秘密。——卓别林   6、May your love soar on the wings of a dove in flight。愿你的爱乘着飞翔的白鸽,展翅高飞。   7、No one indebted for others,while many people don"t know how to cherish others。永远不是一种距离,而是一种决定。   8、The soul cannot live without love。灵魂不能没有爱而存在。   9、Coffee is lonely without cups just as I am lonely without you。没有杯子u2026u2026咖啡是寂寞的u2026u2026没有你u2026u2026我是孤独的u2026u2026   10、Love understands love; it needs no talk。相爱的心息息相通,无需用言语倾诉。   11、You can go commando。 你可以不穿内裤出门。   12、 When is the store closing? 这家店什么时候结束营业?   13、Maybe God wants you to meet many wrong people before you meet the right one, so when this happens, youl will be thankful。 也许上帝让你在遇见那个合适的人之前遇见很多错误的人,所以,当这一切发生的时候,你应该心存感激。   14、 I can"t do this。 我不能这么做。   15、Bam chi ga bon-bon。 是不是干了什么好事。   16、Clothing is not modified the real purpose of appearance, but to show you the essence。服装的真正目的不在于修饰外表,而是展现你的本质。   17、 I have a lot of problems。 我有很多问题。   18、A boy will make you think he loves you, but he really doesn"t。 A girl will make you think she doesn"t love you, when she really does。 —— 很多时候,男人会让你觉得他爱上了你,其实他真没有;而女人会让你觉得她不可能会爱上你,结果她却动了心。   19、I dod"t think the blue shirt fite your complexion。我认为这种蓝色的衣服不适合你的肤色。   20、Love is when you find someone better, yet you stay with the same person you promised to spend forever with——爱情就是当遇到一个更好的人,却依然和那个曾发誓与其共度一生的人在昨天。   >>>下一页更多精彩“最经典的英文句 子”
2023-07-14 23:10:201

关于青春时尚的句子

1、在这个忧伤而明媚的三月,我从我单薄的青春里打马而过,穿过紫堇,穿过木棉,穿过时隐时现的悲喜和无常。 2、我每天都在数着你的笑,可是你连笑的时候,都好寂寞。他们说你的笑容,又漂亮又落拓。 3、如果上帝要毁灭一个人必先令其疯狂。可我疯狂了这么久为何上帝还不把我毁掉。 4、曾经拥有的,不要忘记。不能得到的,更要珍惜。属于自己的,不要放弃。已经失去的,留作回忆 5、也许仔细想想,能够慢慢地回忆起一些大事小事,可终究它们还是在记忆里被磨起了所有棱角,成了平淡的一个过往,踏上去已经体会不到当时的种种心情。 6、我知道我不是一个很好的记录者,但我比任何人都喜欢来回首自己来时的路,我不住的往返首,伫足,然而,时光仍下我轰轰烈烈的向前奔去。 7、青春,是人类生命激情的赞歌。花季雨季的我们,应该珍爱青春,敞开心扉,感受多彩生命,编织人生梦想,实现精神成长。来吧,走在青春旅程上的青年朋友一起来吧,让我们齐唱青春之歌。 8、我一路狂奔,渴望在拥挤匆忙的人群里找到一个和我相似的面孔,她和我有相似的命运。我可以在她的身上看到自己命运的参照,何去何从,不再那么仓皇。 9、我们曾经是单纯的孩子,我们希望能单纯一辈子。如果可以选择,我们宁愿永远不懂,那些从前不懂的事。 10、我们都是单翅膀的天使,只有拥抱着才能飞翔。 11、我觉得能认识你,有点像某个极低概率的奇迹。既然自己的年龄中还没有太多其它的纷扰前来打搅,青春在拖杳的节奏上,总会为这样的情怀而奏出激烈的强音。 12、所有的“我开玩笑的”都一定带着一点点认真;所有的“我不懂”其实还是有一点懂;每一次“我不在乎”背后都有一点点在乎,每一次“我没事”背后都还是有那么一点伤痛。 13、让需求简单一点,心灵就会更轻松一点;让外表简单一点,本色就会更接近一点;让沟通简单一点,情感就会更融洽一点,让过程简单一点,内涵就会更丰富一点;让效率更高一点,成果就会更丰硕一点。 14、青春如同一首歌,它的内涵就是让你用如火的精力唱出它的生命;同时它又是一个梦,让你用坚实的足音将它羽化为现实的辉煌;青春也是我们的一种资本,需要我们用成功来证实它的潇洒,用胜利证实它的生机勃勃。 15、当遇到合适的人,彼此可以融合生活,不管简单也好,复杂也好,就不要犹豫,犹豫之间,他或她就有可能成为她或他的人。不要贪图物质的享受,也不要贪图精神的高尚,世间没有十全十美的人,也没有十全十美的生活,贫贱富贵,开心就好。 16、曾经也有一个笑容出现在我的生命里,可是最后还是如雾般消散,而那个笑容,就成为我心中深深埋藏的一条湍急河流,无法泅渡,那河流的声音,就成为我每日每夜绝望的歌唱。 17、一个人总要走陌生的路,看陌生的风景,听陌生的歌,然后在某个不经意的瞬间,你会发现,原本费尽心机想要忘记的事情真的就这么忘记了。 18、我知道我不是一个很好的记录者,但我比任何人都喜欢回首自己来时的路,我不但的回首,伫足,然手时光仍下我轰轰烈烈的向前奔去。 19、我生命里的温暖就那么多,我全部给了你,但是你离开了我,你叫我以后怎么再对别人笑。 20、你笑一次,我就可以高兴好几天;可看你哭一次,我就难过了好几年。 21、你给我一滴眼泪,我就看到了你心中全部的海洋。 22、那些刻在椅子背后的爱情,会不会像水泥上的花朵,开出没有风的,寂寞的森林。 23、做一个爱笑的女孩,听说喜欢笑的人运气都不会太差;做一个爱哭的女孩,因为我想活得长点;做一个爱睡的女孩,睡出灿烂好气色;做一个爱吃的女孩,减肥神马的吃完再说;做一个宠爱自己的女孩,所有看的上的东西,你值得拥有。 24、有时候,莫名的心情不好,不想和任何人说话,只想一个人静静的发呆。有时候,夜深人静,突然觉得不是睡不着,而是固执地不想睡。有时候,听到一首歌,就会突然想起一个人。有时候,别人突然对你说,我觉得你变了,然后自己开始百感交集。丢了的自己,只能慢慢捡回来。 25、有疤痕的地方,流不去的疤痕,但在周围,新生的皮肉里,还有可以继续的因子。 26、炫,青春的活力;甜,青春的滋味;美,青春的本质。现在的我们,拥有着布满激情活力的青春年华,在书的海洋里领航,在生活的天空中翱翔,在人生的道路上行走,往慢慢品味体会人间的真善美。 27、幸福不是获得多了,而是在乎少了;活得糊涂的人,容易幸福;活得清醒的人,容易烦恼。清醒的人看得太真切,一较真,生活中便烦恼遍地;糊涂的人,计较得少,虽然活得简单粗糙,却因此觅得了人生的大滋味。 28、无论是幸事照旧憾事,只要过去,便只不过是往事。人无须为了往事而活。但我永恒不会忘记,那一次,在时间的荒园里,地域的无边中,咱们擦身而过。 29、我一直都是美丽世界里的孤儿,孤单,寂寞,执着。一旦和温暖相遇,便注定了要溃不成军。 关于时尚的句子 1、时尚很容易,让你的装饰物的价值超过你的内在价值,你就时尚了。 2、世界不会在意你的自尊,人们看的只是你的成就。在你没有成就以前,切勿过分强调自尊。 3、自由不是做你想做的,而是可以不做你不想做的。 4、记忆像是掌心里的水,不论你摊开还是紧握,终究还是会从指缝中一滴一滴流淌干净。 5、做与不做的最大区别是:后者拥有对前者的评论权。 6、男人的使命神圣而坚定:一是保卫祖国!二是听自己女人的话! 7、求而不得,舍而不能,得而不惜,这是人最大的悲哀。 8、人在接吻的时候,头脑最迷糊;人在数钱的时候,头脑最清醒。 9、只有守得住秘密的人才能得到更多的秘密。 10、小时候觉得自己的父亲不简单,后来觉得自己不简单,再后来觉得自己的孩子不简单。 11、离开我就别安慰我,要知道每一次缝补也会遭遇穿刺的痛。 12、有些事,明知是错的,也要去坚持,因为不甘心;有些人,明知是爱的,也要去放弃,因为没结局;有时候,明知没路了,却还在前行,因为习惯了。 13、男人和老婆的关系再差,和岳母的关系也是好的;女人和老公的关系再好,和婆婆的关系也是差的。 14、地球是运动的,一个人不会永远处在倒霉的位置。 15、一个成熟的人往往发觉可以责怪的人越来越少,因为人人都有难处。 16、认识你之前我无依无靠,认识你之后我无药可医。 17、银行卡要钱,信用卡要命。 18、最可怕的生活不是今天不知道明天怎样,而是现在就看到了自己一生的全部,而且无法改变。 19、有钱的捧个钱场,没钱的回家取点钱来捧个钱场。 20、格式化自己,就是为了删除你! 21、你可以用自己不喜欢的方式赚到财富,也可以用自己不相信的药治好疾病,但你无法从自己不爱的人身上获得幸福。 22、毁灭友情的方式有许多,最彻底的一种是借钱。 23、能够说出的委屈,便不算委屈;能够抢走的爱人,便不算爱人。 24、人生安全须知:第一,提防好脾气的人发火,第二,别和没什么东西可失去的人竞争。 25、偶尔要回头看看,否则永远都在追寻,而不知道自己失去了什么。 26、保持青春的秘诀,是有一颗不安分的心。 27、对一个朋友信任的深浅,不是看你会不会对他笑,而是看你愿不愿意当着他的面哭。 28、真君子是:以入世之态度做事,以出世之态度做人。 29、有些事情绝不能错过:天上掉馅饼免费吃午餐刷卡返现金。 30、所谓情话,就是你说了一些连自己都不相信的话,却希望对方相信。 31、当裤叫子失去皮带,才懂得什么做依赖。 32、人犯错误,大半是该用真情时太过动脑筋,而在该用脑筋时又太感情用事。 33、他殷勤,那是他刚刚爱上你;他笨拙,那是他深深爱着你;他从容,那是他已厌倦你。 34、话说出去之前你是话的主人,说出去之后你便成了话的奴隶。 35、当我们相信自己对这个世界已经相当重要的时候,其实这个世界才刚刚准备原谅我们的幼稚。 36、聪明的人应当是快乐的,自以为聪明的人才常常感到烦恼。 37、不怕讨债的是英雄,就怕欠债的是真穷。 38、男人认为是调情,女人以为是情调。 关于时尚流行的句子 1、两个人的感情,如果只得一个人努力去掺和蜂蜜,那么到最后,只会让另一只蜜蜂变成了苍蝇。 2、高职不如高薪,高薪不如高寿,高寿不如高兴。 3、风萧萧兮易水寒,欠了钱兮你要还! 4、别老喊我禽兽,多点了解我,你会知道我禽 兽不如的。 5、要是你再年轻十岁我可以说你幼稚,但现在我只能很遗憾的说你弱智。 6、时间真的很宝贵,就差一秒厕所就被其他人抢了。 7、人的一生至少要有一次一见钟情,那看来我已经让很多人不枉此生了。 8、你身材很好,好的连孙悟空看见你,都会给你三棍子了。 9、男人上班前一般由老婆为他系领带,男人上床前多时由情人为他解裤带。 10、忙,有事儿说事儿,没事儿整点儿事儿说。 11、她胖得我大腿都拧不过她胳膊。 12、顾客不是上帝,顾客只是上当。 13、低头要有勇气,抬头要有底气。 14、当江湖有了传说,不满城风雨,是对不起观众的。 15、成熟不是心变老,而是眼泪在眼里打转却还保持微笑。 16、不要相信什么一见钟情,因为你不能一眼看出对方挣多少钱。 17、走的最急的是最美的景色,伤的最深的是最真的感情。 18、在网上碰上一群流氓并不可怕,可怕的是碰上了一堆流氓软件。 19、在事实面前,我们的想象力越发达,后果就越不堪设想。 20、再烦我就把你绑草船上借箭去! 21、兄弟我先抛块砖,有玉的尽管砸过来。 22、为避免酒多误事,请在酒醉时保持清醒状态。 23、生活总喜欢把我扔在天使与魔鬼间当拔河的绳子,为了报复他们,我决定做草绳,断了,然后他们都滚一边去。 24、上天决定了谁是你的亲戚,幸运的是在选择朋友方面它给你留了余地。 25、人干点好事儿总想让鬼神知道,干点坏事儿总以为鬼神不知道,我们太让鬼为难了。 26、你以为最酸的感觉是吃醋吗?不是,最酸的感觉是没权吃醋。 关于时尚的英文句子 1、Some people say that loneliness is shameful, but fashion is a means of resistance alone, this is fashion realm。有人说孤独是可耻的,而时尚则是抵抗孤独的手段,这才是时尚的境界。 2、 Here is my card。 这是我的名片。 3、My heart beats for you every day。 I am inspired by you every minute, and I worry about you every second。 It is wonderful to have you in my life。每一天都为你心跳,每一刻都被你感动,每一秒都为你担心。有你的感觉真好。 4、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头大波浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。 5、 You have to believe in yourself。Thats the secret of success。-- Charles Chaplin 人必须有自信,这是成功的秘密。卓别林 6、May your love soar on the wings of a dove in flight。愿你的爱乘着飞翔的白鸽,展翅高飞。 7、No one indebted for others,while many people dont know how to cherish others。永远不是一种距离,而是一种决定。 8、The soul cannot live without love。灵魂不能没有爱而存在。 9、Coffee is lonely without cups just as I am lonely without you。没有杯子咖啡是寂寞的没有你我是孤独的 10、Love understands love; it needs no talk。相爱的心息息相通,无需用言语倾诉。 11、You can go commando。 你可以不穿内裤出门。 12、 When is the store closing? 这家店什么时候结束营业? 13、Maybe God wants you to meet many wrong people before you meet the right one, so when this happens, youl will be thankful。 也许上帝让你在遇见那个合适的人之前遇见很多错误的人,所以,当这一切发生的时候,你应该心存感激。 14、 I cant do this。 我不能这么做。 15、Bam chi ga bon-bon。 是不是干了什么好事。 16、Clothing is not modified the real purpose of appearance, but to show you the essence。服装的真正目的不在于修饰外表,而是展现你的本质。 17、 I have a lot of problems。 我有很多问题。 18、A boy will make you think he loves you, but he really doesnt。 A girl will make you think she doesnt love you, when she really does。 很多时候,男人会让你觉得他爱上了你,其实他真没有;而女人会让你觉得她不可能会爱上你,结果她却动了心。 19、I dodt think the blue shirt fite your complexion。我认为这种蓝色的衣服不适合你的肤色。 20、Love is when you find someone better, yet you stay with the same person you promised to spend forever with爱情就是当遇到一个更好的人,却依然和那个曾发誓与其共度一生的人在昨天。 21、I love three things in this world。 Sun, moon and you。 Sun for morning, moon for night , and you forever。予独爱世间三物。昼之日,夜之月,汝之永恒。 22、 Im supposed to go on a diet / get a raise。 我应该节食/涨工资。 23、Love is a fire which burns unseen。爱情是无形燃烧的火焰。 24、Love is a fabric that nature wove and fantasy embroidered。爱情是一方织巾,用自然编织,用幻想点缀。 25、Fashion, is a kind of aesthetic view。 Brother is a punk, you satisfied 时尚,就是一种审美观。哥就朋克,你不服吗? 26、My aunt Flo is visiting。 我的芙洛姑妈来拜访我了。 27、It is graceful grief and sweet sadness to think of you, but in my heart, there is a kind of soft warmth that cant be expressed with any choice of words。想你,是一种美丽的忧伤的甜蜜的惆怅,心里面,却是一种用任何语言也无法表达的温馨。 28、Love keeps the cold out better than a cloak。爱比大衣更能驱走寒冷。 29、One word frees us of all the weight and pain in life。That word is love。 有一个词可以让我们摆脱生活中所有的负担和痛苦,那就是爱情。 30、 Could you do me a big favor? 能否请你帮我个忙? 31、 Im getting a new computer for birthday present。 我得到一台电脑作生日礼物。 32、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头大波浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。 33、All things are difficult before they are easy。凡事必先难后易。 34、I am not gossipy。 我才不会长舌呢。 35、 The meeting was scheduled for two hours, but it is now over yet。 会议原定了两个小时,不过现在还没有结束。 36、 Did you know that Stone ended up marrying his secretary? 你知道吗?斯通最终和他的秘书结婚了。 37、No matter the ending is perfect or not, you cannot disappear from my world。我的世界不允许你的消失,不管结局是否完美。 38、Eternity is not a distance but a decision。在回忆里继续梦幻不如在地狱里等待天堂 39、Love is a light that never dims。爱是一盏永不昏暗的明灯。 40、In love folly is always sweet。恋爱中,干傻事总是让人感到十分美妙。 41、Wherever you go, whatever you do, I will be right here waiting for you。 无论你身在何处,无论你为何忙碌,我都会在此守候。 42、Within you I lose myself, without you I find myself wanting to be lost again。有了你,我迷失了自我。失去你,我多么希望自己再度迷失。 43、 How do you like Hong Kong? 你喜欢香港吗? 44、 Towering genius disdains a beaten path。It seeks regions hitherto unexplored。-- Lincoln 卓越的天才不屑走旁人走过的路。他寻找迄今未开拓的地区。 45、Nothing is impossible to a willing heart。心之所愿,无事不成。 46、 I see what your mean。 我了解你的意思。 47、A heart that loves is always young。有爱的心永远年轻。 48、 How did you do on your test? 你这次考试的结果如何? 49、Im going to wear my blue suit。 Is that all right?我穿蓝色西装,合适吗? 50、If you weeped for the missing sunset,you would miss all the shining stars如果你为着错过夕阳而哭泣,那么你就要错群星了 51、The suit matches your shoes perfectly。这套西装配你的鞋好极了! 52、If you weeped for the missing sunset,you would miss all the shining stars。感受梦的火焰,感觉飞舞瞬间,当一切浪漫遥远,永恒依然 53、You really have a good taste in selecting clothes。你选衣服还蛮有品位的。 54、Love ,promised between the fingers。爱情在指缝间承诺 指缝。在爱情下交缠。 55、passionate love is a quenchless thirst。热烈的爱情是不可抑制的渴望。 56、 1I would like to talk to you for a minute。 我想和你谈一下。 57、If equal affection cannot be, let the more loving be me。如果没有相等的爱,那就让我爱多一些吧。 58、Take away love, and our earth is a tomb。没有了爱,地球便成了坟墓。 59、No matter at what age, if there is no love, can only be considered a failure of a woman。女人无论到了什么年龄,如果没有人爱,就只能算是一个失败的女人。 60、 He is crazy about Crazy English。 他对疯狂英语很着迷。 61、When love is not madness, it is not love。如果爱不疯狂就不是爱了。 62、Love is something eternal; the aspect may change, but not the essence。爱是永恒的,外表可能改变,但本质永远不变。 63、Call room service and ask for some coffee。叫客房服务员送些咖啡来。 64、 I enjoy working with you very much。 我很喜欢和你一起工作。 65、 How did the game turn out? 球赛结果如何? 66、 The good seaman is known in bad weather。惊涛骇浪,方显英雄本色。 67、What kind of material is this dress made from?这件衣服是什么质地的? 68、If living on the earth is a mission from the lord living with you is the award of the lord如果活着,是上帝赋予我最大的使命,那么活者有你,将会是上帝赋予我使命的恩赐 69、Be an angel and bring me a cup of coffee。请做做好事给我拿杯咖啡来。 70、When a cigar falls in love with a match,its destined to be hurt。有些爱从一开始就注定会受伤。 71、Human values, in face of the temptations of the moment decision人的价值,在遭受**的一瞬间被决定 72、Look into my eyes - you will see what you mean to me。看看我的眼睛,你会发现你对我而言意味着什么。 73、Better to light one candle than to curse the darkness。与其诅咒黑暗,不如燃起蜡烛。 74、Love is a carefully designed lie。爱情是一个精心设计的谎言。 75、With the wonder of your love, the sun above always shines。拥有你美丽的爱情,太阳就永远明媚。 76、Love is hard to get into, but harder to get out of。爱很难投入,但一旦投入,便更难走出。 77、 How do you want your steak? 你的牛排要几分熟? 78、When the words I love you were said by you for the first time, my world blossoms。第一次听到你对我说我爱你,我的世界一瞬间鲜花绽开。 79、Ill think of you every step of the way。我会想你,在漫漫长路的每一步。 80、If we can only encounter each other rather than stay with each other,then I wish we had never encountered 。如果只是遇见,不能停留,不如不遇。 81、to feel the flame of dreaming and to feel the moment of dancing,when all the romance is far away,the eternity is always there。没有谁对不起谁,只有谁不懂得珍惜谁。 82、White cap set her up long hair and half of his face is obscured, but felt she must be very beautiful, breathtaking beauty!白色的鸭舌帽把她那盘起的长发和半张脸都给遮住了,但能感觉出她一定很漂亮,惊人的漂亮! 83、 Our destiny offers not the cup of despair,but the chalice of opportunity。So let us seize it,not in ? fear,but in gladness。-- R。M。Nixon命运给予我们的不是失望之酒,而是机会之杯。因此,让我们毫无畏惧,满心愉悦地把握命运。? 尼克松 84、 We must accept finite disappointment,but we must never lose infinite hope。-- Mattin Luther King 我们必须接受失望,因为它是有限的,但千万不可失去希望,因为它是无穷的。马丁 ? 路德 ? 金 85、Love is blind。爱情是盲目的。 86、At the touch of love everyone becomes a poet。每一个沐浴在爱河中的人都是诗人。 87、Fashion, is a kind of aesthetic view. Brother is a punk, you satisfied?时尚,就是一种审美观。哥就朋克,你不服吗? 88、There is no hiding from lovers eyes.什么也瞒不过恋人的眼睛。 89、I have coffee after dinner, as is my usual practice.我饭后喝咖啡,这是我的习惯。
2023-07-14 23:10:381

关于时尚的英文句子

1、I love three things in this world。 Sun, moon and you。 Sun for morning, moon for night , and you forever。予独爱世间三物。昼之日,夜之月,汝之永恒。 2、No matter at what age, if there is no love, can only be considered a failure of a woman。女人无论到了什么年龄,如果没有人爱,就只能算是一个失败的女人。 3、 He is crazy about Crazy English。 他对疯狂英语很着迷。 4、A heart that loves is always young。有爱的心永远年轻。 5、A boy will make you think he loves you, but he really doesn"t。 A girl will make you think she doesn"t love you, when she really does。 —— 很多时候,男人会让你觉得他爱上了你,其实他真没有;而女人会让你觉得她不可能会爱上你,结果她却动了心。 6、 I enjoy working with you very much。 我很喜欢和你一起工作。 7、Love keeps the cold out better than a cloak。爱比大衣更能驱走寒冷。 8、Love is blind。爱情是盲目的。 9、I dod"t think the blue shirt fite your plexion。我认为这种蓝色的衣服不适合你的肤色。 10、White cap set her up long hair and half of his face is obscured, but felt she must be very beautiful, breathtaking beauty!白色的鸭舌帽把她那盘起的长发和半张脸都给遮住了,但能感觉出她一定很漂亮,惊人的漂亮! 11、 Our destiny offers not the cup of despair,but the chalice of opportunity。So let us seize it,not in ? fear,but in gladness。-- R。M。Nixon命运给予我们的不是失望之酒,而是机会之杯。因此,让我们毫无畏惧,满心愉悦地把握命运。——? 尼克松 12、Love is a fabric that nature wove and fantasy embroidered。爱情是一方织巾,用自然编织,用幻想点缀。 13、Fashion, is a kind of aesthetic view. Brother is a punk, you satisfied?时尚,就是一种审美观。哥就朋克,你不服吗? 14、Some people say that loneliness is shameful, but fashion is a means of resistance alone, this is fashion realm。有人说孤独是可耻的,而时尚则是抵抗孤独的手段,这才是时尚的境界。 15、Love is a light that never dims。爱是一盏永不昏暗的明灯。 16、Love is a fire which burns unseen。爱情是无形燃烧的火焰。 17、 How do you like Hong Kong? 你喜欢香港吗? 18、Love understands love; it needs no talk。相爱的心息息相通,无需用言语倾诉。 19、 I have a lot of problems。 我有很多问题。 20、Be an angel and bring me a cup of coffee。请做做好事给我拿杯咖啡来。 21、Human values, in face of the temptations of the moment decision人的价值,在遭受诱惑的一瞬间被决定 22、 Could you do me a big favor? 能否请你帮我个忙? 23、I am not gossipy。 我才不会长舌呢。 24、At the touch of love everyone bees a poet。每一个沐浴在爱河中的人都是诗人。 25、Coffee is lonely without cups just as I am lonely without you。没有杯子……咖啡是寂寞的……没有你……我是孤独的…… 26、When the words "I love you" were said by you for the first time, my world blossoms。第一次听到你对我说"我爱你",我的世界一瞬间鲜花绽开。 27、It is graceful grief and sweet sadness to think of you, but in my heart, there is a kind of soft warmth that can"t be expressed with any choice of words。想你,是一种美丽的忧伤的甜蜜的惆怅,心里面,却是一种用任何语言也无法表达的温馨。 28、All things are difficult before they are easy。凡事必先难后易。 29、May your love soar on the wings of a dove in flight。愿你的爱乘着飞翔的白鸽,展翅高飞。 30、The suit matches your shoes perfectly。这套西装配你的鞋好极了! 31、Eternity is not a distance but a decision。在回忆里继续梦幻不如在地狱里等待天堂 32、With the wonder of your love, the sun above always shines。拥有你美丽的爱情,太阳就永远明媚。 33、When a cigar falls in love with a match,it"s destined to be hurt。有些爱从一开始就注定会受伤。 34、My aunt Flo is visiting。 我的芙洛姑妈来拜访我了。 35、 The meeting was scheduled for o hours, but it is now over yet。 会议原定了两个小时,不过现在还没有结束。 36、I have coffee after dinner, as is my usual practice.我饭后喝咖啡,这是我的习惯。 37、Fashion, is a kind of aesthetic view。 Brother is a punk, you satisfied 时尚,就是一种审美观。哥就朋克,你不服吗? 38、Clothing is not modified the real purpose of appearance, but to show you the essence。服装的真正目的不在于修饰外表,而是展现你的本质。 39、 How do you want your steak? 你的牛排要几分熟? 40、One word frees us of all the weight and pain in life。That word is love(next88)。 有一个词可以让我们摆脱生活中所有的负担和痛苦,那就是"爱情"。 41、 I see what your mean。 我了解你的意思。 42、I"m going to wear my blue suit。 Is that all right?我穿蓝色西装,合适吗? 43、Within you I lose myself, without you I find myself wanting to be lost again。有了你,我迷失了自我。失去你,我多么希望自己再度迷失。 44、 I"m getting a new puter for birthday present。 我得到一台电脑作生日礼物。 45、Maybe God wants you to meet many wrong people before you meet the right one, so when this happens, youl will be thankful。 也许上帝让你在遇见那个合适的人之前遇见很多错误的人,所以,当这一切发生的时候,你应该心存感激。 46、 When is the store closing? 这家店什么时候结束营业? 47、No matter the ending is perfect or not, you cannot disappear from my world。我的世界不允许你的消失,不管结局是否完美。 48、 The good seaman is known in bad weather。惊涛骇浪,方显英雄本色。 49、 How did you do on your test? 你这次考试的结果如何? 50、If equal affection cannot be, let the more loving be me。如果没有相等的爱,那就让我爱多一些吧。 51、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头 *** 浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。 52、 How did the game turn out? 球赛结果如何? 53、I"ll think of you every step of the way。我会想你,在漫漫长路的每一步。 54、Bam chi ga bon-bon。 是不是干了什么好事。 55、Better to light one candle than to curse the darkness。与其诅咒黑暗,不如燃起蜡烛。 56、If we can only encounter each other rather than stay with each other,then I wish we had never encountered 。如果只是遇见,不能停留,不如不遇。 57、Love is something eternal; the aspect may change, but not the essence。爱是永恒的,外表可能改变,但本质永远不变。 58、Love ,promised beeen the fingers。爱情…在指缝间承诺 指缝…。在爱情下交缠。 59、If living on the earth is a mission from the lord… living with you is the award of the lord…如果活着,是上帝赋予我最大的使命,那么活者有你,将会是上帝赋予我使命的恩赐…… 60、Passionate love is a quenchless thirst。热烈的爱情是不可抑制的渴望。 61、If you weeped for the missing sunset,you would miss all the shining stars如果你为着错过夕阳而哭泣,那么你就要错群星了 62、There is no hiding from lover"s eyes.什么也瞒不过恋人的眼睛。 63、In love folly is always sweet。恋爱中,干傻事总是让人感到十分美妙。 64、Nothing is impossible to a willing heart。心之所愿,无事不成。 65、 We must accept finite disappointment,but we must never lose infinite hope。-- Mattin Luther King 我们必须接受失望,因为它是有限的,但千万不可失去希望,因为它是无穷的。——马丁 ? 路德 ? 金 66、If you weeped for the missing sunset,you would miss all the shining stars。感受梦的火焰,感觉飞舞瞬间,当一切浪漫遥远,永恒依然 67、 I can"t do this。 我不能这么做。 68、 I"m supposed to go on a diet / get a raise。 我应该节食/涨工资。 69、 You have to believe in yourself。That"s the secret of success。-- Charles Chaplin 人必须有自信,这是成功的秘密。——卓别林 70、When love is not madness, it is not love。如果爱不疯狂就不是爱了。 71、 Towering genius disdains a beaten path。It seeks regions hitherto unexplored。-- Lincoln 卓越的天才不屑走旁人走过的路。他寻找迄今未开拓的地区。 72、My heart beats for you every day。 I am inspired by you every minute, and I worry about you every second。 It is wonderful to have you in my life。每一天都为你心跳,每一刻都被你感动,每一秒都为你担心。有你的感觉真好。 73、Wherever you go, whatever you do, I will be right here waiting for you。 无论你身在何处,无论你为何忙碌,我都会在此守候。 74、 Here is my card。 这是我的名片。 75、 1I would like to talk to you for a minute。 我想和你谈一下。 76、You can go mando。 你可以 *** *** 出门。 77、Love is when you find someone better, yet you stay with the same person you promised to spend forever with——爱情就是当遇到一个更好的人,却依然和那个曾发誓与其共度一生的人在昨天。 78、Love is a carefully designed lie。爱情是一个精心设计的谎言。 79、Take away love, and our earth is a tomb。没有了爱,地球便成了坟墓。 80、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头 *** 浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。 81、to feel the flame of dreaming and to feel the moment of dancing,when all the romance is far away,the eternity is always there。没有谁对不起谁,只有谁不懂得珍惜谁。 82、No one indebted for others,while many people don"t know how to cherish others。永远不是一种距离,而是一种决定。
2023-07-14 23:10:451

矿物是什么?

我们经常听说矿物这个名称,可什么是矿物呢?简而言之,矿物就是由地质作用形成的结晶态的化合物或单质,一般来说,矿物具有相对稳定的化学组成和晶体结构,在一定的物理化学条件范围内稳定存在。在这个定义中,首先矿物是由地质作用形成的,也可以说是天然形成的,那么一些人工合成的物质就不能说是矿物了;矿物还是结晶态的物质,也就是说矿物内部原子或离子的排布具有严格的周期性,象玻璃的结构就不具有周期性,故也不能称之为矿物;此外,矿物可以是化合物,如石盐(NaCl),也可以是单质,如金刚石(C)。矿物是地球演化过程中化学元素运动和存在的一种形式,也是组成地壳岩石的最小单位。每一个具体的矿物都有具体的名称,一般来讲,矿物名称的获得也遵循一些规律:1)以化学成分命名,如自然金,它是以金为主要成分;2)以物理性质命名,如橄榄石,它是以橄榄绿色为特点;3)以形态命名,如绿柱石,常为绿色的柱状形态;4)以人名命名,如袁复礼石,袁复礼是我国著名的地质学家;5)以地名命名,如包头矿,包头是我国内蒙的一个城市。此外,有些矿物名称是沿用我国古代的名称,如水晶、雄黄、辰砂等;但更多是自不同外文名称转译而来,如绿帘石(来自日文)、贝塔石(来自英文betafite)、地开石(dickite)等。值得注意的是,从中文的矿物名称中我们可以大致获得矿物的一些信息,如:以“石”结尾的矿物名称,如滑石、方解石等,通常指的是非金属矿物;以“矿”结尾的,如辉锑矿、黄铁矿等,指的是金属矿物;以“玉”结尾的,如黄玉、硬玉等,指的是可以作为宝石的矿物;以“晶”结尾的,如水晶、黄晶等,指呈透明晶体的矿物;以“砂”结尾的,如硼砂、辰砂等,指颗粒细小的矿物;以“华”结尾的,如锑华、铅华等,指在地表形成的松散状的矿物;以“矾”结尾的,如胆矾、水绿矾等,则之易溶于水的矿物。
2023-07-14 23:10:552

Adobe公司发布的第一款外语AE软件的时间、语种和版本分别是什么?

1993 最初只为Mac开发。详见:http://baike.baidu.com/view/1024291.htm提供者 日期 版本 代号 主要加入的功能 CoSA 1993年1月 1.0 Egg layered compositing with mask, effect, transforms, keyframes;仅于Mac上 u200b 1993年5月 1.1 u200b 更多效果 Aldus 1994年1月 2.0 Teriyaki 时间配置视窗、多机转译、框架混色 Adobe 1995年10月 3.0 Nimchow render queue, time remapping, multiple effects per layer, motion tracker, motion math, Illustrator import, Photoshop as comp import,第一个日语版本 u200b 1996年4月 3.1 u200b 档案格式、多处理、advanced keying for the "Professional Bundle" u200b 1997年5月 3.1 (Windows) Dancing Monkey 第一个Windows版本、内容选单、第一个法语与德语版本 u200b 1999年1月 4.0 ebeer 分页视窗, multiple masks per layer, adjustment layers,内存预览, Premiere import;第一个同步的Mac & Windows版本 u200b 1999年9月 4.1 Batnip 流程图检视、观看资料夹、3D Channel效果 u200b 2001年五月 5.0 Melmet 3D、运算式、16 bits per channel color u200b 2002年1月7日 5.5 Fauxfu 进阶的3D转译器、多重3D检视、第一个OS X版本 u200b 2003年8月 6.0 Foodfite 绘图、指令码、文字图层、支援OpenGL u200b 2004年5月 6.5 Chambant cloning、默认动画、grain management u200b 2006年1月 7.0 Clamchop new docking panels UI, 32 bits per channel color (floating point), display color management, dynamic link with Premiere Pro,第一个西班牙语与意大利版本 u200b 2007年7月2日 CS3 (8.0) Metaloaf 形状图层、操偶工具、脑力激荡、短片注记、完整的色彩管理、第一个Intel Mac版本 u200b 2008年1月22日 CS3 (8.0.2) Metaloaf 支援Panasonic P2;最后一个Mac Power PC版本 u200b 2008年9月23日 CS4 (9.0) Chinchillada 启用CUDA、于专案和时间轴中快速搜寻、迷你流程图、即时汇入PS 3D图层、独立的XYZ、Mocha u200b 2009年1月5日 CS4 (9.0.1) Chinchillada 支援RED R3D档案 (经由RED插件)
2023-07-14 23:11:021

神经元凋亡检测怎么做

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。美国著名生物试剂公司CLONTECH和Invitrogen公司分别开发了多种标记的Annexin V产品,简便快速,10分钟就可完成检测。其中带荧光标记的Annexin V-EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)及Annexin V-FITC,灵敏度高,可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合蛋白Annexin V-EGFP,EGFP与PS 的结合比例为1:1,还可进行定量检测。除此之外,还提供生物素偶联的Annexin V,可通过常用的酶联显色反应来检测。另外,MACS公司将磁珠包被Annexin V,可采用磁分选方法筛选凋亡细胞。2)细胞内氧化还原状态改变的检测:这反应了细胞凋亡研究中相对较新的趋势,研究什么样的氧化还原环境引起下游事件的发生。CLONTECH公司的ApoAlertTM GlutathioneDetection Kit通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。正常状态下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要,许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。在Jurcat和一些其它类型的细胞中,细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关,此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外,还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如:HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化,不能用此法检测。3)细胞色素C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1 (apoptoticprotease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。ApoAlertTMCell Fractionation Kit不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。4) 线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正常细胞中,它在线粒体中形成聚集体,发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中,因线粒体穿膜电位的改变,它以单体形式存在于细胞液中,发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是,这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。 细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法:1) TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP (多为dUTP)间接(通过地高辛)或直接接到DNA片段的3"-OH端,再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少(如活体组织切片)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的ApoAlert?LM-PCR Ladder Assay Kit通过LM-PCR(ligation-mediated PCR),连上特异性接头,专一性地扩增核小体的梯度片段,从而灵敏地检测凋亡时产生的核小体的梯度片段。此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产生这一现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。3) Telemerase Detection (端粒酶检测)这是相对来说推出较早,用得较多的一种方法。端粒酶是由RNA和蛋白组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列,使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的,每分裂一次,染色体的端粒会缩短,这可能作为有丝分裂的一种时钟,表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现,90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。Invitrogen公司的TRAP-eze Telemerase Detection Kit在1996年率先推出。它提供特定的寡核苷酸底物,分别与底物及端粒重复序列配对的引物。如果待测样本中含有端粒酶活性,就能在底物上接上不同个数的6碱基(GGTTAG)端粒重复序列,通过PCR反应,产物电泳检测就可观察到相差六个碱基的DNA Ladder现象(参见图4)。此外,Intergen公司还提供用酶联免疫法(ELISA)检测的试剂盒.同样,这种检测方法也不专对细胞凋亡,检测结果也不纯反应细胞凋亡的发生。 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜1. 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。2. 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。3.透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。 细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,较其它方法有不可比拟的优越性,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。在APO 的研究得到较为广泛的应用,开辟了新途径。1 光散射法在FCM 系统中,被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。细胞坏死由于胞体肿胀,细胞核亦碎裂分解故FSC 和SCC 均增高。正常细胞FSC 高而SSC 低。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞表面免疫荧光分析结合起来,用以区别辩认经这些特殊处理发生选择凋亡的淋巴细胞亚型,也可用于活细胞分类。值得注意的是,根据FSC 和SSC 判断凋亡细胞的可靠性受被测细胞形态上的均一性和核细胞浆比率影响很大,因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好而在肿瘤细胞凋亡中其可靠性较差。2  细胞DNA 含量的测定细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA 断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于正常细胞的二倍体。用碘化丙啶( PI) 染色后分析,可在二倍体C0/ G1 ,峰前出现“亚二倍体”峰,即细胞凋亡峰(APO峰) ,根据APO 峰可测出凋亡细胞百分率,该法简单易行,可大批定量检测凋亡标本,亦可同时分析细胞的细胞周期位置。另外,应用FCM 方法通过对DNA 和RNA 的联合检测可以鉴别出G0 期细胞,因此,可分析细胞凋亡与G1 或G0 细胸的关系。DNA 降解的程度取决于凋亡的阶段、细胞的类型和凋亡诱发因子的特性。染色过程中DNA 的逸出量变化也影响FCM 检测结果。据研究,将高浓度的磷酸盐———枸椽酸盐缓冲液加入漂洗液中,可增高降解DNA 的逸出量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力。DNA 含量测定在检测细胞凋亡中的局限性在于其特异性和敏感性均不高。特异性不高是因为APO 峰代表了一组细胞群体,包括凋亡细胞、机械损伤细胞、低DNA 含量的细胞或不同染色体结构的细胞,在上述情况下,DNA 与荧光染料的结合量均小。另外,非固定的细胞在低渗溶液中被溶解时,可导致大量的核碎片出现,此时APO 峰的细胞数目只代表了核碎片的数目,并不代表凋亡细胞数目。敏感性较差的原因是细胞凋亡早期只有DNA 断裂点出现,但尚未出现DNA 片段的大量丢失,所以该法不能检出早期凋亡细胞和发生于S 期或G2/ M 期的凋亡细胞,因为其实际含量不低于二倍体细胞所含的DNA ,因此该法进行凋亡细胞分析时应结合其它形态或生化方法,以期更准确地分析细胞的凋亡状态。3  Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)AO 可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或通过变性而产生的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因此,通过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。在测定被标准化后,绿色和红色荧光强度的量与总DNA 含量成比例,红色荧光与总体细胞(红色加绿色) 荧光的比率表示细胞中变性DNA 的比例,因此,这种方法可用于评价DNA 对原位变性的敏感性。有时候,凋亡细胞DNA 降解不明显,依赖于DNA 降解来检测细胞凋亡的方法如细胞DNA含量测定、DNA 末端标记等就难以检测到细胞凋亡变化。AO法检测凋亡的原理不依赖于DNA 片断的产生,因此其最主要的优点是可应用于寡核小体片段与凋亡不相平衡等情况,但AO 染色法不能有效区分有丝分裂细胞和凋亡细胞。4  若丹明( Rh123) 染色法细胞生活状态下,胞膜上的钠- 钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,形成细胞膜电位。FCM 可以检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料,对细胞膜具有通透性,线粒体膜尤敏感。细胞存活状态时,若丹明123 通过细胞膜,积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时,线粒体膜的转运能力下降,电负性降低,故细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失,荧光强度降低,据此检测细胞的凋亡变化。但应指出,在凋亡的早期阶段,由于胞膜尚完整,大多数细胞器和细胞功能相对较好,因此,Rh123 法对于早期凋亡细胞和活细胞的鉴别比较困难。5  原位末端标记技术细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL) 。INST 是利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到凋亡细胞内断裂的DNA 处的3"末端,同时水解5"末端,以修复DNA ,若使用已标记的核苷酸即可显示出有断裂DNA 的细胞。1993 年,Gorczyca 等提出了末端脱氧核糖核酸转移酶( TdT) 标记法采检测凋亡细胞的DNA 断裂,此种方法已得到广泛应用。由于内源性核酸内切酶激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,并产生与DNA 断点数目相同的3"2 羟基末端, TdT 可以将生物素化的dUTP 标记至3"2 羟基末端,通过卵白素2FITC 系统,使DNA 的断点部位发生特异荧光而签别出凋亡细胞,TdT 末端标记法是鉴别凋亡细胞比较特异的一种方法。脑组织中的凋亡细胞很少,因此基因组DNA 片断需要更灵敏的检测技术。将TUNEL 法与FCM 结合起来可以提高检测凋亡细胞中DNA 片断的灵敏度。经凋亡诱导因子处理一定时间后的细胞,原位末端标记的凋亡比Hoechst33342 染色显示的要多,提示TUNEL 可检测出尚未出现明显凋亡形态学特征但已发生DNA 裂解的核,从而使检测的灵敏度提高。对比研究表明, TUNEL 的敏感性远远高于ISNT ,尤其在APO早期TUNEL 法阳性率较高,可能是APO 发生时DNA 多数为双链同时断裂,单链少见的原因。后者是依赖DNA 多聚酶介导的修复反应,故ISNT 的阳性率相对较低。TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。但由于断裂DNA 的标记过程比较复杂,涉及多种因素,所以末端标记的阴性结果并不一定代表DNA链的完整,应排除方法上的问题,如TdT 酶活力的丧失等诸多影响因素。因此应用TdT 末端标记法鉴别凋亡细胞必须同时设阳性及阴性对照组,以便得到可靠结果。6  Annexin V/ PI 法1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin ,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,利用其特性可以检测细胞凋亡。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死或凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胆区分开来。FCM 通过Annexin V —FITC 标志暴露于细胞膜上的PS 结合PI 进入损伤细胞膜标记降解DNA 分析凋亡与坏死细胞。在检测时有4个亚群包括机械性损伤细胞(Annexin - / P1 + ) 、正常细胞(An2nexin - / PI - ) 、凋亡细胞(Annexin + / PI - ) 和继发性坏死细胞(Annexin + / PI + ) 被区分。Boersma 等应用Ampexin V2FITE染色法检测细胞毒药物处理后的中国仓鼠细胞凋亡变化,FCM 检测发现荧光信号强弱不同的两种细胞亚群。进一步形态学等证实弱荧光细胞亚群代表早期凋亡细胞,强荧光亚群代表晚期凋亡细胞,可见其是检测和定量凋亡细胞的一种较为可靠的方法。细胞凋亡时膜上PS 外露早于DNA 断裂发生,因此该法检测早期凋亡更为灵敏,且该法不需要固定细胞,避免了PI 法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL 法因固定出现的DNA 片段丢失,因此更加省时,结果亦更可靠,是目前最为理想的凋亡定量检测方法。7  其 他7.1  ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。与TUNEL法相比,ssDNA 具有更强的灵敏性。TUNEL 法检测的凋亡细胞可能只是单抗法检测的凋亡细胞中的一个亚类。ssDNA法检测APO 一般用免疫荧光法。但也可和FCM 结合应用。单抗法使用简便、成本低、应用广泛。ssDNA 单抗可以区别坏死和凋亡、甚至能检测前期凋亡,凋亡后坏亡和一些特殊的凋亡形式(如无片段化的细胞凋亡) 。因此, ssDNA 单抗法可望成为一种新的特异灵敏检测细胞凋亡的方法。7.2  细胞凋亡的相关蛋白分析 研究发现,有不少基因参加凋亡调控,这些基因产物可参与促进或抑制APO 的发生、发展,因此检测凋亡调节基因蛋白对研究APO 及其调控有重要作用。迄今为止,已可对大量细胞凋亡调节基因的蛋白产物分析,如P53 蛋白、caspases、C2myc、Fas 抗原、TNF、bcl22 家族蛋白、cyclin、ras 等。FCM 用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确。8  展 望近几年来,随着FCM 技术的不断发展和APO 研究的逐渐深入,FCM 在细胞凋亡研究中日益广泛。应用FCM 定量检测凋亡细胞简便、快速、客观,并可进行多参数检测,因此,可同时对APO 及其相关的癌基因表达、细胞周期分布等诸多因素进行相关分析,可以比较深入地了解凋亡的调节机制。尽管应用FCM 进行细胞凋亡研究的方法较多,但FCM检测凋亡细胞的方法一般基于细胞凋亡过程中形态、生化等某一方面的特性,因而难于了解凋亡过程中发生的各种变化的相互关系,也使该类方法缺乏特异性,所以,联合应用多种针对不同特性的FCM 检测方法,才能更为有效地鉴别凋亡细胞。同时,FCM 研究结果尚需同时结合形态学观察或生物化学方法,才能更加深入地了解凋亡细胞的生物学特性。随着生物技术的发展及人们对APO 本质认识的深入,相信在不久的将来,定会有更为特异和敏感的方法问世,有助于细胞凋亡取得突破性进展。
2023-07-14 23:11:111

日语形容词かわいい最后的い是长音吗

2023-07-14 23:11:274

焦亚硫酸钠的详细介绍

焦亚硫酸钠厂家 焦亚硫酸钠介绍一、 产品名称:焦亚硫酸钠化学名称:焦亚硫酸钠:又称二硫五氧酸钠,重硫氧二、 理化性质成品为白色或微黄结晶粉末,湿时相对密度1.4.溶于水甘油,微溶于乙醇.受潮易分解,露置空气中易氧化成硫酸钠.与强酸接触放出二氧化硫而生成相应的盐类.加热到150度分解.三、 用途:1、医药工业用于生产氯仿、苯丙砜和苯甲醛.2、橡胶工业用做凝固剂.3、印染工业用作棉布漂白后的脱氯剂、棉布煮炼剂.4、制革工业用于皮革处理,能使皮革柔软,丰满、坚韧,具有防水、抗折、耐磨等性能.5、化学工业用于生产羟基香草醛、盐酸羟胺等.6、感光工业用作显影剂等.7、食品工业用作漂白剂、防腐剂、疏松剂、抗氧化剂、护色剂及保鲜剂.8、工业上用于印染、有机合成、印刷、制革、制药等部门;四、物化性质:焦亚硫酸钠为白色或黄色结晶粉末或小结晶,带有强烈的so2气味,比重 1.4,溶于水,水溶液呈酸性,与强酸接触则放出so2而生成相应的盐类, 久置空气中,则氧化成na2s2o4,故该产品不能久存。高于1500c,即分解出so2。五、包装及储运:1、包装袋(桶)上应涂刷牢固的标志,内容包括:产品名称、等级、净重和生产厂名称;2、焦亚硫酸钠用塑料编织袋或桶包装,内衬塑料袋、净重 25 或 50kg;3、本产品运输,储存应防止破损、受潮、遇热变质。严禁与氧化剂、酸共存;4、本产品自生产之日起,储存期为 6 个月。by海滨化工
2023-07-14 23:11:372

判断 C语言处理的文件类型只能是文本文件

1 错2 错3 错4 错5 错
2023-07-14 23:11:543

偏重焦亚硫酸钠的保质期是多少

2年、、、、、
2023-07-14 23:12:142

请问如何快速简便的提取毛发或者唾液中DNA

这个你得去请教专业人士。
2023-07-14 23:12:258

AE各个版本具有什么优势

Adobe After Effects简称“AE”是Adobe公司推出的一款图形视频处理软件,适用于从事设计和视频特技的机构,包括电视台、动画制作公司、个人后期制作工作室以及多媒体工作室。属于层类型后期软件。Adobe After Effects软件可以帮助您高效且精确地创建无数种引人注目的动态图形和震撼人心的视觉效果。利用与其他Adobe软件无与伦比的紧密集成和高度灵活的2D和3D合成,以及数百种预设的效果和动画,为您的电影、视频、DVD和Macromedia Flash作品增添令人耳目一新的效果。Adobe官方最新版本为:Adobe After Effects CC 20171990年6月CoSA成立1990年9月PACo开发开始1991年5月PACo 1.0和QuickPics 1.0发布1992年2月PACo Producer 2.0发布1992年4月Lort开发开始1992年6月Egg开发开始1993年1月 After Effects 1.0发布1993年5月 After Effects 1.1发布1994年1月 After Effects 2.0(Teriyaki)发布1995年10月 After Effects 3.0(Nimchow)发布1996年4月 After Effects 3.1发布1997年5月 After Effects 3.1 Windows版本(Dancing Monkey)发布站1999年1月 After Effects 4.0(ebeer)发布1999年9月 After Effects 4.1(Batnip)发布2001年4月 After Effects5.0发布2002年1月 After Effects5.5发布2003年8月After Effects6.0发布2005年6月 After Effects6.5发布2006年1月 After Effects7.0发布2007年7月 After Effects CS3(After Effects 8.0)发布2008年2月 After Effects CS3 升级8.0.22008年9月 After Effects CS4(After Effects 9.0)发布2008年12月 After Effects CS4 升级9.0.12009年5月 After Effects CS4 升级 9.0.22010年10月 After Effects CS4 升级9.0.32011年4月 After Effects CS5 发布2012年4月26日 After Effects CS6 正式发布2013年6月18日 After Effects CC 正式发布2014 年6月 After Effects CC 2014 更新2015 年3月 After Effects CC 2015.3 更新2016 年10月 After Effects CC 2017更 新版本更新时间及功能提供者CoSA 1993年1月 版本1.0 代号Egg 主要加入法人功能layered compositing with mask, effect, transforms, keyframes;仅于Mac上提供者 1993年5月 版本1.1 代号 更多效果提供者Aldus 1994年1月 版本2.0 代号Teriyaki 主要加入的功能时间配置视窗、多机转译、框架混色提供者Adobe 1995年10月 版本3.0 代号Nimchow主要加入的功能render queue, time remapping, multiple effects per layer, motion tracker, motion math,Illustrator import, Photoshop as comp import,第一个日语版本提供者 1996年4月 版本3.1 代号 主要加入的功能档案格式、多处理、advanced keying for the “Professional Bundle”提供者 1997年5月 版本3.1 (Windows) 代号Dancing Monkey 主要加入的功能第一个Windows版本、内容选单、第一个法语与德语版本提供者 1999年1月 版本4.0 代号ebeer 主要加入的功能分页视窗, multiple masks per layer, adjustment layers,内存预览, Premiere import;第一个同步的Mac & Windows版本提供者 1999年9月 版本4.1 代号Batnip 主要加入的功能流程图检视、观看资料夹、3D Channel效果提供者 2001年5月 版本5.0 代号Melmet 主要加入的功能3D、运算式、16 bits per channel color提供者 2002年1月7日 版本5.5 代号Fauxfu 主要加入的功能进阶的3D转译器、多重3D检视、第一个OS X版本提供者 2003年8月 版本6.0 代号Foodfite 主要加入的功能 绘图、指令码、文字图层、支持OpenGL提供者 2004年5月 版本6.5 代号Chambant主要加入的功能 cloning、默认动画、grain management提供者 2006年1月 版本7.0 代号Clamchop主要加入的功能 new docking panels UI, 32 bits per channel color (floating point), display color management, dynamic link with Premiere Pro,第一个西班牙语与意大利版本提供者 2007年7月2日 版本CS3 (8.0) 代号Metaloaf主要加入的功能 形状图层、操偶工具、脑力激荡、短片注记、完整的色彩管理、第一个Intel Mac版本提供者 2008年1月22日 版本CS3 (8.0.2) 代号Metaloaf 主要加入的功能 支持Panasonic P2;最后一个Mac Power PC版本提供者 2008年9月23日 版本CS4 (9.0) 代号Chinchillada 主要加入的功能 启用CUDA、于专案和时间轴中快速搜寻、迷你流程图、即时汇入PS 3D图层、独立的XYZ、Mocha提供者 2009年1月5日 版本CS4 (9.0.1) 代号Chinchillada 主要加入的功能 支持RED R3D档案 (经由RED插件)
2023-07-14 23:13:081

哪个男明星组合长得迷人?人气又高?不是中国都介绍下

jyj
2023-07-14 23:13:2713

[急急急]电脑故障,关闭程序蓝屏问题

哥们你真狂!佩服!有那工夫直接送修了!!
2023-07-14 23:13:496

怎么给写真机喷头校准

分为水平校准和垂直校准,需要移喷头的物理位置。打印出校准图来根据实际情况调整。
2023-07-14 23:14:183

关于时尚的英文句子大全精选89句

1、Clothing is not modified the real purpose of appearance, but to show you the essence。服装的真正目的不在于修饰外表,而是展现你的本质。 2、Fashion, is a kind of aesthetic view. Brother is a punk, you satisfied?时尚,就是一种审美观。哥就朋克,你不服吗? 3、When love is not madness, it is not love。如果爱不疯狂就不是爱了。 4、In love folly is always sweet。恋爱中,干傻事总是让人感到十分美妙。 5、Love keeps the cold out better than a cloak。爱比大衣更能驱走寒冷。 6、How did you do on your test? 你这次考试的结果如何? 7、Wherever you go, whatever you do, I will be right here waiting for you。 无论你身在何处,无论你为何忙碌,我都会在此守候。 8、Eternity is not a distance but a decision。在回忆里继续梦幻不如在地狱里等待天堂 9、Call room service and ask for some coffee。叫客房服务员送些咖啡来。 10、Maybe God wants you to meet many wrong people before you meet the right one, so when this happens, youl will be thankful。 也许上帝让你在遇见那个合适的人之前遇见很多错误的人,所以,当这一切发生的时候,你应该心存感激。 11、I love three things in this world。 Sun, moon and you。 Sun for morning, moon for night , and you forever。予独爱世间三物。昼之日,夜之月,汝之永恒。 12、You can go commando。 你可以不穿内裤出门。 13、Fashion, is a kind of aesthetic view。 Brother is a punk, you satisfied 时尚,就是一种审美观。哥就朋克,你不服吗? 14、I"m supposed to go on a diet / get a raise。 我应该节食/涨工资。 15、I have a lot of problems。 我有很多问题。 16、May your love soar on the wings of a dove in flight。愿你的爱乘着飞翔的白鸽,展翅高飞。 17、How do you like Hong Kong? 你喜欢香港吗? 18、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头大波浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。 19、If equal affection cannot be, let the more loving be me。如果没有相等的爱,那就让我爱多一些吧。 20、Did you know that Stone ended up marrying his secretary? 你知道吗?斯通最终和他的秘书结婚了。 21、I enjoy working with you very much。 我很喜欢和你一起工作。 22、Better to light one candle than to curse the darkness。与其诅咒黑暗,不如燃起蜡烛。 23、If living on the earth is a mission from the lordu2026 living with you is the award of the lordu2026如果活着,是上帝赋予我最大的使命,那么活者有你,将会是上帝赋予我使命的恩赐u2026u2026 24、Love is a light that never dims。爱是一盏永不昏暗的明灯。 25、I"m getting a new computer for birthday present。 我得到一台电脑作生日礼物。 26、My aunt Flo is visiting。 我的芙洛姑妈来拜访我了。 27、Could you do me a big favor? 能否请你帮我个忙? 28、When a cigar falls in love with a match,it"s destined to be hurt。有些爱从一开始就注定会受伤。 29、Love is hard to get into, but harder to get out of。爱很难投入,但一旦投入,便更难走出。 30、I have coffee after dinner, as is my usual practice.我饭后喝咖啡,这是我的习惯。 31、Within you I lose myself, without you I find myself wanting to be lost again。有了你,我迷失了自我。失去你,我多么希望自己再度迷失。 32、I see what your mean。 我了解你的意思。 33、One word frees us of all the weight and pain in life。That word is love。 有一个词可以让我们摆脱生活中所有的负担和痛苦,那就是"爱情"。 34、How did the game turn out? 球赛结果如何? 35、If you weeped for the missing sunset,you would miss all the shining stars如果你为着错过夕阳而哭泣,那么你就要错群星了 36、The meeting was scheduled for two hours, but it is now over yet。 会议原定了两个小时,不过现在还没有结束。 37、Some people say that loneliness is shameful, but fashion is a means of resistance alone, this is fashion realm。有人说孤独是可耻的,而时尚则是抵抗孤独的手段,这才是时尚的境界。 38、The soul cannot live without love。灵魂不能没有爱而存在。 39、I"m going to wear my blue suit。 Is that all right?我穿蓝色西装,合适吗? 40、When the words "I love you" were said by you for the first time, my world blossoms。第一次听到你对我说"我爱你",我的世界一瞬间鲜花绽开。 41、I am not gossipy。 我才不会长舌呢。 42、Love is a fabric that nature wove and fantasy embroidered。爱情是一方织巾,用自然编织,用幻想点缀。 43、Bam chi ga bon-bon。 是不是干了什么好事。 44、No matter at what age, if there is no love, can only be considered a failure of a woman。女人无论到了什么年龄,如果没有人爱,就只能算是一个失败的女人。 45、With the wonder of your love, the sun above always shines。拥有你美丽的爱情,太阳就永远明媚。 46、A heart that loves is always young。有爱的心永远年轻。 47、Love is a fire which burns unseen。爱情是无形燃烧的火焰。 48、Towering genius disdains a beaten path。It seeks regions hitherto unexplored。-- Lincoln 卓越的天才不屑走旁人走过的路。他寻找迄今未开拓的地区。 49、Passionate love is a quenchless thirst。热烈的爱情是不可抑制的渴望。 50、Nothing is impossible to a willing heart。心之所愿,无事不成。 51、My heart beats for you every day。 I am inspired by you every minute, and I worry about you every second。 It is wonderful to have you in my life。每一天都为你心跳,每一刻都被你感动,每一秒都为你担心。有你的感觉真好。 52、I"ll think of you every step of the way。我会想你,在漫漫长路的每一步。 53、All things are difficult before they are easy。凡事必先难后易。 54、Love understands love; it needs no talk。相爱的心息息相通,无需用言语倾诉。 55、We must accept finite disappointment,but we must never lose infinite hope。-- Mattin Luther King 我们必须接受失望,因为它是有限的,但千万不可失去希望,因为它是无穷的。——马丁 ? 路德 ? 金 56、You have to believe in yourself。That"s the secret of success。-- Charles Chaplin 人必须有自信,这是成功的秘密。——卓别林 57、You really have a good taste in selecting clothes。你选衣服还蛮有品位的。 58、I can"t do this。 我不能这么做。 59、No one indebted for others,while many people don"t know how to cherish others。永远不是一种距离,而是一种决定。 60、A boy will make you think he loves you, but he really doesn"t。 A girl will make you think she doesn"t love you, when she really does。 —— 很多时候,男人会让你觉得他爱上了你,其实他真没有;而女人会让你觉得她不可能会爱上你,结果她却动了心。 61、to feel the flame of dreaming and to feel the moment of dancing,when all the romance is far away,the eternity is always there。没有谁对不起谁,只有谁不懂得珍惜谁。 62、There is no hiding from lover"s eyes.什么也瞒不过恋人的眼睛。 63、When is the store closing? 这家店什么时候结束营业? 64、Love is something eternal; the aspect may change, but not the essence。爱是永恒的,外表可能改变,但本质永远不变。 65、No matter the ending is perfect or not, you cannot disappear from my world。我的世界不允许你的消失,不管结局是否完美。 66、Look into my eyes - you will see what you mean to me。看看我的眼睛,你会发现你对我而言意味着什么。 67、Love ,promised between the fingers。爱情u2026在指缝间承诺 指缝u2026。在爱情下交缠。 68、The suit matches your shoes perfectly。这套西装配你的鞋好极了! 69、The good seaman is known in bad weather。惊涛骇浪,方显英雄本色。 70、If you weeped for the missing sunset,you would miss all the shining stars。感受梦的火焰,感觉飞舞瞬间,当一切浪漫遥远,永恒依然 71、Love is a carefully designed lie。爱情是一个精心设计的谎言。 72、White cap set her up long hair and half of his face is obscured, but felt she must be very beautiful, breathtaking beauty!白色的鸭舌帽把她那盘起的长发和半张脸都给遮住了,但能感觉出她一定很漂亮,惊人的漂亮! 73、I dod"t think the blue shirt fite your complexion。我认为这种蓝色的衣服不适合你的肤色。 74、Our destiny offers not the cup of despair,but the chalice of opportunity。So let us seize it,not in ? fear,but in gladness。-- R。M。Nixon命运给予我们的不是失望之酒,而是机会之杯。因此,让我们毫无畏惧,满心愉悦地把握命运。——? 尼克松 75、It is graceful grief and sweet sadness to think of you, but in my heart, there is a kind of soft warmth that canu2019t be expressed with any choice of words。想你,是一种美丽的忧伤的甜蜜的惆怅,心里面,却是一种用任何语言也无法表达的温馨。 76、He is crazy about Crazy English。 他对疯狂英语很着迷。 77、Take away love, and our earth is a tomb。没有了爱,地球便成了坟墓。 78、Coffee is lonely without cups just as I am lonely without you。没有杯子u2026u2026咖啡是寂寞的u2026u2026没有你u2026u2026我是孤独的u2026u2026 79、What kind of material is this dress made from?这件衣服是什么质地的? 80、Be an angel and bring me a cup of coffee。请做做好事给我拿杯咖啡来。 81、Love is when you find someone better, yet you stay with the same person you promised to spend forever with——爱情就是当遇到一个更好的人,却依然和那个曾发誓与其共度一生的人在昨天。 82、At the touch of love everyone becomes a poet。每一个沐浴在爱河中的人都是诗人。 83、Here is my card。 这是我的名片。 84、1I would like to talk to you for a minute。 我想和你谈一下。 85、Love is blind。爱情是盲目的。 86、How do you want your steak? 你的牛排要几分熟? 87、If we can only encounter each other rather than stay with each other,then I wish we had never encountered 。如果只是遇见,不能停留,不如不遇。 88、Devil killer body, a large wavy golden hair shine, slender legs wearing a yellow goose miniskirts, show figure of the perfect。魔鬼般惹火的身材,一头大波浪形金黄卷发发出耀眼的光芒,修长的大腿穿着一条鹅黄色的超短迷你裙,显出身材的完美绝伦。 89、Human values, in face of the temptations of the moment decision人的价值,在遭受**的一瞬间被决定
2023-07-14 23:15:201

juice用英语怎么读

juice果汁;英[du0292uu02d0s];美[du0292uu02d0s]n.果汁;菜汁;果汁(或菜汁)饮料;肉汁;胃液;消化液;汽油;电;vt.榨出(水果或蔬菜的)汁液;榨汁;Come on, drink up your juice.快,把果汁喝完。bottle of juice一瓶果汁fruit juice果汁glass of juice一杯果汁变形复数juicesOrange Juice 橙汁 ; 橘子汁 ; 桔子原汁 ; 柳橙汁grapefruit juice 葡萄柚汁 ; 西柚汁 ; 蒲萄柚汁 ; 柚子汁cranberry juice 蔓越莓汁 ; 红莓汁 ; 越橘汁 ; 蔓越橘汁juice extractor 果汁榨汁机 ; 榨汁机 ; 液汁提取器 ; 汁液榨取器Noni Juice 诺丽果汁 ; 大溪地诺丽果汁 ; 诺利果汁Juice Beauty 果漾美人 ; 果漾美颜 ; 果漾佳丽Prune Juice 西梅汁 ; 黑枣汁 ; 或干李子汁Sugarcane juice 蔗汁 ; 柘浆fitered juice 清汁泵 ; 清汁泵联轴器[1]Yes, I like milk and juice.是的。我喜欢牛奶和果汁。Have some juice then.有一些果汁,之后。I like juice.我喜欢果汁。
2023-07-14 23:15:271

少年正义联盟的成员介绍

少年正义联盟成员 : 角色身份备注Robin(罗宾)Tim Drake由于成员众多,列表并不完整。Superboy(超级小子)Kon-El / Conner KentImpulse(脉冲)Bart AllenWonder Girl(神奇女孩)Cassandra SandsmarkSecret(秘密)Greta HayesArrowetteCissie King-Jones Empress(女皇)Anita Fite Captain Marvel, Jr.(神奇队长二世)Freddy FreemanBeast Boy(野兽小子)  Garfield LoganFlamebird(火鸟)Bette KaneBatgirl(蝙蝠女孩)Cassandra CainLagoon Boy(湖少侠)Lagoon BoyL"il Lobo / Slo-boLoboThe RayRay Terrill导师:红色龙卷风(Red Tornado)、Snapper Carr
2023-07-14 23:15:461

DavidWells主要经历

DavidWellsDavidWells是一名演员,代表作品有《ElephantSighs》、《OtisE.》等。外文名:DavidWells职业:演员代表作品:《ElephantSighs》合作人物:MarkFite
2023-07-14 23:16:391

细胞凋亡的检测

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。美国著名生物试剂公司CLONTECH和Invitrogen公司分别开发了多种标记的Annexin V产品,简便快速,10分钟就可完成检测。其中带荧光标记的Annexin V-EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)及Annexin V-FITC,灵敏度高,可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合蛋白Annexin V-EGFP,EGFP与PS 的结合比例为1:1,还可进行定量检测。除此之外,还提供生物素偶联的Annexin V,可通过常用的酶联显色反应来检测。另外,MACS公司将磁珠包被Annexin V,可采用磁分选方法筛选凋亡细胞。2)细胞内氧化还原状态改变的检测:这反应了细胞凋亡研究中相对较新的趋势,研究什么样的氧化还原环境引起下游事件的发生。CLONTECH公司的ApoAlertTM GlutathioneDetection Kit通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。正常状态下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要,许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。在Jurcat和一些其它类型的细胞中,细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关,此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外,还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如:HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化,不能用此法检测。3)细胞色素C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1 (apoptoticprotease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。ApoAlertTMCell Fractionation Kit不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。4) 线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正常细胞中,它在线粒体中形成聚集体,发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中,因线粒体穿膜电位的改变,它以单体形式存在于细胞液中,发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是,这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。 细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法:1) TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP (多为dUTP)间接(通过地高辛)或直接接到DNA片段的3"-OH端,再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少(如活体组织切片)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的ApoAlert?LM-PCR Ladder Assay Kit通过LM-PCR(ligation-mediated PCR),连上特异性接头,专一性地扩增核小体的梯度片段,从而灵敏地检测凋亡时产生的核小体的梯度片段。此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产生这一现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。3) Telemerase Detection (端粒酶检测)这是相对来说推出较早,用得较多的一种方法。端粒酶是由RNA和蛋白组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列,使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的,每分裂一次,染色体的端粒会缩短,这可能作为有丝分裂的一种时钟,表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现,90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。Invitrogen公司的TRAP-eze Telemerase Detection Kit在1996年率先推出。它提供特定的寡核苷酸底物,分别与底物及端粒重复序列配对的引物。如果待测样本中含有端粒酶活性,就能在底物上接上不同个数的6碱基(GGTTAG)端粒重复序列,通过PCR反应,产物电泳检测就可观察到相差六个碱基的DNA Ladder现象(参见图4)。此外,Intergen公司还提供用酶联免疫法(ELISA)检测的试剂盒.同样,这种检测方法也不专对细胞凋亡,检测结果也不纯反应细胞凋亡的发生。 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜1. 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。2. 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。3.透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。 细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,较其它方法有不可比拟的优越性,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。在APO 的研究得到较为广泛的应用,开辟了新途径。1 光散射法在FCM 系统中,被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。细胞坏死由于胞体肿胀,细胞核亦碎裂分解故FSC 和SCC 均增高。正常细胞FSC 高而SSC 低。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞表面免疫荧光分析结合起来,用以区别辩认经这些特殊处理发生选择凋亡的淋巴细胞亚型,也可用于活细胞分类。值得注意的是,根据FSC 和SSC 判断凋亡细胞的可靠性受被测细胞形态上的均一性和核细胞浆比率影响很大,因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好而在肿瘤细胞凋亡中其可靠性较差。2  细胞DNA 含量的测定细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA 断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于正常细胞的二倍体。用碘化丙啶( PI) 染色后分析,可在二倍体C0/ G1 ,峰前出现“亚二倍体”峰,即细胞凋亡峰(APO峰) ,根据APO 峰可测出凋亡细胞百分率,该法简单易行,可大批定量检测凋亡标本,亦可同时分析细胞的细胞周期位置。另外,应用FCM 方法通过对DNA 和RNA 的联合检测可以鉴别出G0 期细胞,因此,可分析细胞凋亡与G1 或G0 细胸的关系。DNA 降解的程度取决于凋亡的阶段、细胞的类型和凋亡诱发因子的特性。染色过程中DNA 的逸出量变化也影响FCM 检测结果。据研究,将高浓度的磷酸盐———枸椽酸盐缓冲液加入漂洗液中,可增高降解DNA 的逸出量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力。DNA 含量测定在检测细胞凋亡中的局限性在于其特异性和敏感性均不高。特异性不高是因为APO 峰代表了一组细胞群体,包括凋亡细胞、机械损伤细胞、低DNA 含量的细胞或不同染色体结构的细胞,在上述情况下,DNA 与荧光染料的结合量均小。另外,非固定的细胞在低渗溶液中被溶解时,可导致大量的核碎片出现,此时APO 峰的细胞数目只代表了核碎片的数目,并不代表凋亡细胞数目。敏感性较差的原因是细胞凋亡早期只有DNA 断裂点出现,但尚未出现DNA 片段的大量丢失,所以该法不能检出早期凋亡细胞和发生于S 期或G2/ M 期的凋亡细胞,因为其实际含量不低于二倍体细胞所含的DNA ,因此该法进行凋亡细胞分析时应结合其它形态或生化方法,以期更准确地分析细胞的凋亡状态。3  Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)AO 可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或通过变性而产生的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因此,通过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。在测定被标准化后,绿色和红色荧光强度的量与总DNA 含量成比例,红色荧光与总体细胞(红色加绿色) 荧光的比率表示细胞中变性DNA 的比例,因此,这种方法可用于评价DNA 对原位变性的敏感性。有时候,凋亡细胞DNA 降解不明显,依赖于DNA 降解来检测细胞凋亡的方法如细胞DNA含量测定、DNA 末端标记等就难以检测到细胞凋亡变化。AO法检测凋亡的原理不依赖于DNA 片断的产生,因此其最主要的优点是可应用于寡核小体片段与凋亡不相平衡等情况,但AO 染色法不能有效区分有丝分裂细胞和凋亡细胞。4  若丹明( Rh123) 染色法细胞生活状态下,胞膜上的钠- 钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,形成细胞膜电位。FCM 可以检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料,对细胞膜具有通透性,线粒体膜尤敏感。细胞存活状态时,若丹明123 通过细胞膜,积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时,线粒体膜的转运能力下降,电负性降低,故细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失,荧光强度降低,据此检测细胞的凋亡变化。但应指出,在凋亡的早期阶段,由于胞膜尚完整,大多数细胞器和细胞功能相对较好,因此,Rh123 法对于早期凋亡细胞和活细胞的鉴别比较困难。5  原位末端标记技术细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL) 。INST 是利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到凋亡细胞内断裂的DNA 处的3"末端,同时水解5"末端,以修复DNA ,若使用已标记的核苷酸即可显示出有断裂DNA 的细胞。1993 年,Gorczyca 等提出了末端脱氧核糖核酸转移酶( TdT) 标记法采检测凋亡细胞的DNA 断裂,此种方法已得到广泛应用。由于内源性核酸内切酶激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,并产生与DNA 断点数目相同的3"2 羟基末端, TdT 可以将生物素化的dUTP 标记至3"2 羟基末端,通过卵白素2FITC 系统,使DNA 的断点部位发生特异荧光而签别出凋亡细胞,TdT 末端标记法是鉴别凋亡细胞比较特异的一种方法。脑组织中的凋亡细胞很少,因此基因组DNA 片断需要更灵敏的检测技术。将TUNEL 法与FCM 结合起来可以提高检测凋亡细胞中DNA 片断的灵敏度。经凋亡诱导因子处理一定时间后的细胞,原位末端标记的凋亡比Hoechst33342 染色显示的要多,提示TUNEL 可检测出尚未出现明显凋亡形态学特征但已发生DNA 裂解的核,从而使检测的灵敏度提高。对比研究表明, TUNEL 的敏感性远远高于ISNT ,尤其在APO早期TUNEL 法阳性率较高,可能是APO 发生时DNA 多数为双链同时断裂,单链少见的原因。后者是依赖DNA 多聚酶介导的修复反应,故ISNT 的阳性率相对较低。TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。但由于断裂DNA 的标记过程比较复杂,涉及多种因素,所以末端标记的阴性结果并不一定代表DNA链的完整,应排除方法上的问题,如TdT 酶活力的丧失等诸多影响因素。因此应用TdT 末端标记法鉴别凋亡细胞必须同时设阳性及阴性对照组,以便得到可靠结果。6  Annexin V/ PI 法1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin ,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,利用其特性可以检测细胞凋亡。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死或凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胆区分开来。FCM 通过Annexin V —FITC 标志暴露于细胞膜上的PS 结合PI 进入损伤细胞膜标记降解DNA 分析凋亡与坏死细胞。在检测时有4个亚群包括机械性损伤细胞(Annexin - / P1 + ) 、正常细胞(An2nexin - / PI - ) 、凋亡细胞(Annexin + / PI - ) 和继发性坏死细胞(Annexin + / PI + ) 被区分。Boersma 等应用Ampexin V2FITE染色法检测细胞毒药物处理后的中国仓鼠细胞凋亡变化,FCM 检测发现荧光信号强弱不同的两种细胞亚群。进一步形态学等证实弱荧光细胞亚群代表早期凋亡细胞,强荧光亚群代表晚期凋亡细胞,可见其是检测和定量凋亡细胞的一种较为可靠的方法。细胞凋亡时膜上PS 外露早于DNA 断裂发生,因此该法检测早期凋亡更为灵敏,且该法不需要固定细胞,避免了PI 法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL 法因固定出现的DNA 片段丢失,因此更加省时,结果亦更可靠,是目前最为理想的凋亡定量检测方法。7  其 他7.1  ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。与TUNEL法相比,ssDNA 具有更强的灵敏性。TUNEL 法检测的凋亡细胞可能只是单抗法检测的凋亡细胞中的一个亚类。ssDNA法检测APO 一般用免疫荧光法。但也可和FCM 结合应用。单抗法使用简便、成本低、应用广泛。ssDNA 单抗可以区别坏死和凋亡、甚至能检测前期凋亡,凋亡后坏亡和一些特殊的凋亡形式(如无片段化的细胞凋亡) 。因此, ssDNA 单抗法可望成为一种新的特异灵敏检测细胞凋亡的方法。7.2  细胞凋亡的相关蛋白分析 研究发现,有不少基因参加凋亡调控,这些基因产物可参与促进或抑制APO 的发生、发展,因此检测凋亡调节基因蛋白对研究APO 及其调控有重要作用。迄今为止,已可对大量细胞凋亡调节基因的蛋白产物分析,如P53 蛋白、caspases、C2myc、Fas 抗原、TNF、bcl22 家族蛋白、cyclin、ras 等。FCM 用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确。8  展 望近几年来,随着FCM 技术的不断发展和APO 研究的逐渐深入,FCM 在细胞凋亡研究中日益广泛。应用FCM 定量检测凋亡细胞简便、快速、客观,并可进行多参数检测,因此,可同时对APO 及其相关的癌基因表达、细胞周期分布等诸多因素进行相关分析,可以比较深入地了解凋亡的调节机制。尽管应用FCM 进行细胞凋亡研究的方法较多,但FCM检测凋亡细胞的方法一般基于细胞凋亡过程中形态、生化等某一方面的特性,因而难于了解凋亡过程中发生的各种变化的相互关系,也使该类方法缺乏特异性,所以,联合应用多种针对不同特性的FCM 检测方法,才能更为有效地鉴别凋亡细胞。同时,FCM 研究结果尚需同时结合形态学观察或生物化学方法,才能更加深入地了解凋亡细胞的生物学特性。随着生物技术的发展及人们对APO 本质认识的深入,相信在不久的将来,定会有更为特异和敏感的方法问世,有助于细胞凋亡取得突破性进展。
2023-07-14 23:16:491

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2023-07-14 23:17:055

流式细胞仪亚二倍体凋亡峰怎么分析

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。美国著名生物试剂公司CLONTECH和Invitrogen公司分别开发了多种标记的AnnexinV产品,简便快速,10分钟就可完成检测。其中带荧光标记的Annexin V-EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)及Annexin V-FITC,灵敏度高,可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合蛋白Annexin V-EGFP,EGFP与PS 的结合比例为1:1,还可进行定量检测。除此之外,还提供生物素偶联的Annexin V,可通过常用的酶联显色反应来检测。另外,MACS公司将磁珠包被Annexin V,可采用磁分选方法筛选凋亡细胞。2)细胞内氧化还原状态改变的检测:这反应了细胞凋亡研究中相对较新的趋势,研究什么样的氧化还原环境引起下游事件的发生。CLONTECH公司的ApoAlertTMGlutathioneDetection Kit通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。正常状态下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要,许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。在Jurcat和一些其它类型的细胞中,细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关,此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外,还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如:HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化,不能用此法检测。3)细胞色素C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1(apoptoticprotease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。ApoAlertTMCell Fractionation Kit不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。4) 线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正常细胞中,它在线粒体中形成聚集体,发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中,因线粒体穿膜电位的改变,它以单体形式存在于细胞液中,发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlertMitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是,这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。 细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法:1) TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)通过DNA末端转移酶将带标记的dNTP (多为dUTP)间接(通过地高辛)或直接接到DNA片段的3"-OH端,再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少(如活体组织切片)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的ApoAlert?LM-PCRLadder Assay Kit通过LM-PCR(ligation-mediated PCR),连上特异性接头,专一性地扩增核小体的梯度片段,从而灵敏地检测凋亡时产生的核小体的梯度片段。此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产生这一现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。3) Telemerase Detection (端粒酶检测)这是相对来说推出较早,用得较多的一种方法。端粒酶是由RNA和蛋白组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列,使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的,每分裂一次,染色体的端粒会缩短,这可能作为有丝分裂的一种时钟,表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现,90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。Invitrogen公司的TRAP-ezeTelemerase Detection Kit在1996年率先推出。它提供特定的寡核苷酸底物,分别与底物及端粒重复序列配对的引物。如果待测样本中含有端粒酶活性,就能在底物上接上不同个数的6碱基(GGTTAG)端粒重复序列,通过PCR反应,产物电泳检测就可观察到相差六个碱基的DNALadder现象(参见图4)。此外,Intergen公司还提供用酶联免疫法(ELISA)检测的试剂盒.同样,这种检测方法也不专对细胞凋亡,检测结果也不纯反应细胞凋亡的发生。 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜1. 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。2. 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。3.透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪(Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,较其它方法有不可比拟的优越性,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。在APO的研究得到较为广泛的应用,开辟了新途径。1 光散射法在FCM 系统中,被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。细胞坏死由于胞体肿胀,细胞核亦碎裂分解故FSC 和SCC 均增高。正常细胞FSC 高而SSC 低。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞表面免疫荧光分析结合起来,用以区别辩认经这些特殊处理发生选择凋亡的淋巴细胞亚型,也可用于活细胞分类。值得注意的是,根据FSC和SSC 判断凋亡细胞的可靠性受被测细胞形态上的均一性和核细胞浆比率影响很大,因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好而在肿瘤细胞凋亡中其可靠性较差。2  细胞DNA 含量的测定细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于正常细胞的二倍体。用碘化丙啶( PI) 染色后分析,可在二倍体C0/ G1 ,峰前出现“亚二倍体”峰,即细胞凋亡峰(APO峰) ,根据APO 峰可测出凋亡细胞百分率,该法简单易行,可大批定量检测凋亡标本,亦可同时分析细胞的细胞周期位置。另外,应用FCM 方法通过对DNA 和RNA 的联合检测可以鉴别出G0 期细胞,因此,可分析细胞凋亡与G1 或G0 细胸的关系。DNA 降解的程度取决于凋亡的阶段、细胞的类型和凋亡诱发因子的特性。染色过程中DNA 的逸出量变化也影响FCM 检测结果。据研究,将高浓度的磷酸盐———枸椽酸盐缓冲液加入漂洗液中,可增高降解DNA 的逸出量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力。DNA含量测定在检测细胞凋亡中的局限性在于其特异性和敏感性均不高。特异性不高是因为APO 峰代表了一组细胞群体,包括凋亡细胞、机械损伤细胞、低DNA含量的细胞或不同染色体结构的细胞,在上述情况下,DNA 与荧光染料的结合量均小。另外,非固定的细胞在低渗溶液中被溶解时,可导致大量的核碎片出现,此时APO 峰的细胞数目只代表了核碎片的数目,并不代表凋亡细胞数目。敏感性较差的原因是细胞凋亡早期只有DNA 断裂点出现,但尚未出现DNA 片段的大量丢失,所以该法不能检出早期凋亡细胞和发生于S 期或G2/ M 期的凋亡细胞,因为其实际含量不低于二倍体细胞所含的DNA ,因此该法进行凋亡细胞分析时应结合其它形态或生化方法,以期更准确地分析细胞的凋亡状态。3  Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)AO可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或通过变性而产生的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因此,通过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。在测定被标准化后,绿色和红色荧光强度的量与总DNA 含量成比例,红色荧光与总体细胞(红色加绿色) 荧光的比率表示细胞中变性DNA 的比例,因此,这种方法可用于评价DNA 对原位变性的敏感性。有时候,凋亡细胞DNA 降解不明显,依赖于DNA 降解来检测细胞凋亡的方法如细胞DNA含量测定、DNA 末端标记等就难以检测到细胞凋亡变化。AO法检测凋亡的原理不依赖于DNA 片断的产生,因此其最主要的优点是可应用于寡核小体片段与凋亡不相平衡等情况,但AO 染色法不能有效区分有丝分裂细胞和凋亡细胞。4  若丹明( Rh123) 染色法细胞生活状态下,胞膜上的钠-钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,形成细胞膜电位。FCM 可以检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料,对细胞膜具有通透性,线粒体膜尤敏感。细胞存活状态时,若丹明123 通过细胞膜,积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时,线粒体膜的转运能力下降,电负性降低,故细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失,荧光强度降低,据此检测细胞的凋亡变化。但应指出,在凋亡的早期阶段,由于胞膜尚完整,大多数细胞器和细胞功能相对较好,因此,Rh123法对于早期凋亡细胞和活细胞的鉴别比较困难。5  原位末端标记技术细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL) 。INST 是利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到凋亡细胞内断裂的DNA 处的3"末端,同时水解5"末端,以修复DNA ,若使用已标记的核苷酸即可显示出有断裂DNA 的细胞。1993 年,Gorczyca 等提出了末端脱氧核糖核酸转移酶( TdT) 标记法采检测凋亡细胞的DNA 断裂,此种方法已得到广泛应用。由于内源性核酸内切酶激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,并产生与DNA 断点数目相同的3"2 羟基末端, TdT 可以将生物素化的dUTP 标记至3"2 羟基末端,通过卵白素2FITC 系统,使DNA 的断点部位发生特异荧光而签别出凋亡细胞,TdT 末端标记法是鉴别凋亡细胞比较特异的一种方法。脑组织中的凋亡细胞很少,因此基因组DNA 片断需要更灵敏的检测技术。将TUNEL 法与FCM 结合起来可以提高检测凋亡细胞中DNA 片断的灵敏度。经凋亡诱导因子处理一定时间后的细胞,原位末端标记的凋亡比Hoechst33342 染色显示的要多,提示TUNEL 可检测出尚未出现明显凋亡形态学特征但已发生DNA 裂解的核,从而使检测的灵敏度提高。对比研究表明, TUNEL 的敏感性远远高于ISNT ,尤其在APO早期TUNEL 法阳性率较高,可能是APO 发生时DNA 多数为双链同时断裂,单链少见的原因。后者是依赖DNA 多聚酶介导的修复反应,故ISNT 的阳性率相对较低。TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。但由于断裂DNA 的标记过程比较复杂,涉及多种因素,所以末端标记的阴性结果并不一定代表DNA链的完整,应排除方法上的问题,如TdT 酶活力的丧失等诸多影响因素。因此应用TdT 末端标记法鉴别凋亡细胞必须同时设阳性及阴性对照组,以便得到可靠结果。6  Annexin V/ PI 法1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,利用其特性可以检测细胞凋亡。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死或凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胆区分开来。FCM 通过Annexin V —FITC 标志暴露于细胞膜上的PS 结合PI 进入损伤细胞膜标记降解DNA 分析凋亡与坏死细胞。在检测时有4个亚群包括机械性损伤细胞(Annexin - / P1 + ) 、正常细胞(An2nexin - / PI - )、凋亡细胞(Annexin + / PI - ) 和继发性坏死细胞(Annexin + / PI + ) 被区分。Boersma 等应用Ampexin V2FITE染色法检测细胞毒药物处理后的中国仓鼠细胞凋亡变化,FCM 检测发现荧光信号强弱不同的两种细胞亚群。进一步形态学等证实弱荧光细胞亚群代表早期凋亡细胞,强荧光亚群代表晚期凋亡细胞,可见其是检测和定量凋亡细胞的一种较为可靠的方法。细胞凋亡时膜上PS外露早于DNA 断裂发生,因此该法检测早期凋亡更为灵敏,且该法不需要固定细胞,避免了PI 法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL 法因固定出现的DNA 片段丢失,因此更加省时,结果亦更可靠,是目前最为理想的凋亡定量检测方法。7  其 他7.1  ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。与TUNEL法相比,ssDNA 具有更强的灵敏性。TUNEL 法检测的凋亡细胞可能只是单抗法检测的凋亡细胞中的一个亚类。ssDNA法检测APO 一般用免疫荧光法。但也可和FCM 结合应用。单抗法使用简便、成本低、应用广泛。ssDNA 单抗可以区别坏死和凋亡、甚至能检测前期凋亡,凋亡后坏亡和一些特殊的凋亡形式(如无片段化的细胞凋亡) 。因此, ssDNA 单抗法可望成为一种新的特异灵敏检测细胞凋亡的方法。7.2  细胞凋亡的相关蛋白分析 研究发现,有不少基因参加凋亡调控,这些基因产物可参与促进或抑制APO 的发生、发展,因此检测凋亡调节基因蛋白对研究APO 及其调控有重要作用。迄今为止,已可对大量细胞凋亡调节基因的蛋白产物分析,如P53 蛋白、caspases、C2myc、Fas 抗原、TNF、bcl22 家族蛋白、cyclin、ras 等。FCM 用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确。8  展 望近几年来,随着FCM技术的不断发展和APO 研究的逐渐深入,FCM 在细胞凋亡研究中日益广泛。应用FCM 定量检测凋亡细胞简便、快速、客观,并可进行多参数检测,因此,可同时对APO 及其相关的癌基因表达、细胞周期分布等诸多因素进行相关分析,可以比较深入地了解凋亡的调节机制。尽管应用FCM 进行细胞凋亡研究的方法较多,但FCM检测凋亡细胞的方法一般基于细胞凋亡过程中形态、生化等某一方面的特性,因而难于了解凋亡过程中发生的各种变化的相互关系,也使该类方法缺乏特异性,所以,联合应用多种针对不同特性的FCM检测方法,才能更为有效地鉴别凋亡细胞。同时,FCM 研究结果尚需同时结合形态学观察或生物化学方法,才能更加深入地了解凋亡细胞的生物学特性。随着生物技术的发展及人们对APO 本质认识的深入,相信在不久的将来,定会有更为特异和敏感的方法问世,有助于细胞凋亡取得突破性进展。
2023-07-14 23:17:221

juice是什么意思

juice是一个英语单词,名词,作名词时意为“(水果)汁,液;果汁”。短语搭配Orange Juice 橙汁 ; 橘子汁 ; 桔子原汁 ; 柳橙汁grapefruit juice 葡萄柚汁 ; 西柚汁 ; 蒲萄柚汁 ; 柚子汁cranberry juice 蔓越莓汁 ; 红莓汁 ; 越橘汁 ; 蔓越橘汁juice extractor 果汁榨汁机 ; 榨汁机 ; 液汁提取器 ; 汁液榨取器Noni Juice 诺丽果汁 ; 大溪地诺丽果汁 ; 诺利果汁Juice Beauty 果漾美人 ; 果漾美颜 ; 果漾佳丽Prune Juice 西梅汁 ; 黑枣汁 ; 或干李子汁Sugarcane juice 蔗汁 ; 柘浆fitered juice 清汁泵 ; 清汁泵联轴器相关造句1、This is an apple juice and concentrate production line .这是条苹果汁和浓缩生产线。2、Drain remaining juice in bottom of bowl .把剩余的汁液洒在盘底。3、Does lemon juice really boost metabolism ?柠檬汁真的能够促进新陈代谢吗?4、The lemon juice is called electrolyte .而柠檬中的柠檬汁就是电解质。5、Is there arsenic in apple juice ?苹果汁中含有砷吗?以上内容参考:百度百科-juice
2023-07-14 23:17:411

juice可数吗

根据意思判断,juice是液体,液体是不可数的。类似的还有milk,cola,tea,water,junk food,chocolate,juice,beer等这些都是不可数名词。但a bottle of orange juice这样借助相应量词的是可数的。 短语搭配 Orange Juice 橙汁 ; 橘子汁 ; 桔子原汁 ; 柳橙汁 grapefruit juice 葡萄柚汁 ; 西柚汁 ; 蒲萄柚汁 ; 柚子汁 cranberry juice 蔓越莓汁 ; 红莓汁 ; 越橘汁 ; 蔓越橘汁 juice extractor 果汁榨汁机 ; 榨汁机 ; 液汁提取器 ; 汁液榨取器 Noni Juice 诺丽果汁 ; 大溪地诺丽果汁 ; 诺利果汁 Juice Beauty 果漾美人 ; 果漾美颜 ; 果漾佳丽 Prune Juice 西梅汁 ; 黑枣汁 ; 或干李子汁 Sugarcane juice 蔗汁 ; 柘浆 fitered juice 清汁泵 ; 清汁泵联轴器
2023-07-14 23:17:551

milk和juice可数吗

milk和juice是液体,液体是不可数的; 类似的还有cola,tea,water,junk food,chocolate,juice,beer等这些都是不可数名词。 但a bottle of orange juice这样借助相应量词的是可数的。 扩展资料   短语搭配:   Orange Juice 橙汁 ; 橘子汁 ; 桔子原汁 ; 柳橙汁   grapefruit juice 葡萄柚汁 ; 西柚汁 ; 蒲萄柚汁 ; 柚子汁   cranberry juice 蔓越莓汁 ; 红莓汁 ; 越橘汁 ; 蔓越橘汁   juice extractor 果汁榨汁机 ; 榨汁机 ; 液汁提取器 ; 汁液榨取器   Noni Juice 诺丽果汁 ; 大溪地诺丽果汁 ; 诺利果汁   Juice Beauty 果漾美人 ; 果漾美颜 ; 果漾佳丽   Prune Juice 西梅汁 ; 黑枣汁 ; 或干李子汁   Sugarcane juice 蔗汁 ; 柘浆   fitered juice 清汁泵 ; 清汁泵联轴器
2023-07-14 23:18:011

初中英语26个字母的音标

Aa[ei]Bb[bi:]Cc[si:]Dd[di:]Ee[i:]Ff[ef]Gg[dЗi:]Hh[eit∫]Ii[ai]Jj[dЗei]Kk[kei]Ll[el]Mm[em]Nn[en]Oo[эu]---第一个音标就是e倒过来,打不出来那个音标了Pp[pi:]Qq[kju:]Rr[a:]Ss[es]Tt[ti:]Uu[ju:]Vv[vi:]Ww["d∧blju:]Xx[eks]Yy[wai]Zz[zεd]音标与字母组合e-----bemewehesheea---eatneatbeatee----seedeedfeelfreeie----piecebeliefgriefI----itsitbitfite--beginbelongdelaydesire/iz/--horsesracesprices/id/----waitedneededcarriedparted/ist/----foresthonestlongeste------getyetwetchecka--------anymanyea-----deadreadysweatweathera-------capmapfathatu-----cupupfunguno-----comesomeonedoesou-------toughroughtouchir---sirshirtbirdthirdor---wordworthworstur-----furcurlchurchear----earlyheardearnester------certainpersonservicea-------agoagainamongaboveer------feverteacherwinterworkeror------doctoractorour-----labourneighbouray------paydaywaya--------shademadetakeai-------paingainmaintailo-------gosonoohow------showlowknownownbowloa-----coatboatsoapo--------hopephonenoteol------toldsoldfoldcoldie-----liedietiey--------whytryflytypeigh---highfightsightlightmightI---------rideliferipewidewhileow----howcowvownowtownou---------outdoubtmouthsouthroundoy----boytoyjoyroyaloi---------choicenoisejoincoinoilear----earteardearhearnearea--------realreallyrealizeideaere------spheresincereer--------seriousmysterioussuperioreer-------sheerdeerbeerair------airpairrepairaffairfairear-------beartearwearare------sparecaresharedeclareoor------poormoorour--------tourure------puresurematureendureur---------furyjuryfuriousrural1)[i:]字母组合:eeeaeiethreetreegreensheepmeetbeefseeseekeatteameatleaveleadteacherteammeanspeakcleanheshemepiecereceiveceiling2)发音字母iyesitpictureitislistsixmixfixfitpigbigbuildmissmythmanytwentyhappydictionarydefectdecidedelicious3)发音字母abaghandandanthappyhatmapmadbadblackbackgladflagshallman4)[e]字母组合eaeaheadbreadpleasureelephantelectricremembersellshelllessonbetterbedyesdeskhotelmanyany5)[ε:]字母组合irurearerorgirlshirtskirtthirtythirteenthirdbirdturnburnmurdernurseturtleThursdayburgerlearnearnearthheardtermhernerdserveworkwormworkworld6)[ε]字母组合erorouaroaeuteacherleaderrememberplayerspeakerfarmerpowderdoctoractormayorauthortractordeliciousgraciouspleasurefamiliarcollardollartogethertomorrowtodayshalloplessonWashingtoncontrolaroundaccountagoelephantmantabananaCanadaJapanchinamenlistenfamulusSaturday7)[a:]字母组合aracarfarmcardarmgardenfastclasslastglassplantauntcalm8)发音字母uoouooupsupperlunchfungunhuntcupbuscomemotherdosebrotherloveabovetroubleroughflourishbloodflood9)字母组合alorauourarsmallwalltalktallhallballcallwalkshortmorelordhorseforfortysportdoorfloorstoreauthorcaughtautumnfourmourncourtboughtwarmquarrelquarter10)发音字母oahotlostlotfoxboxmophoplosscollarnotwantwashwatch11)[u:]字母组合oooufoodmoonroomgloombroomdoomgoosetoothshoedotwotruetruthbluefullprude12)[u]字母组合ooouuolookgoodfootbookwoodshouldcouldputfullbullpullpushwomanwolf13)[ei]发音字母aayeaaieynamecakelategateplaneAprilplaysaymaywaygreatbreakrainpaintplaintheygrey14)[ai]发音字母iybikefinefinddieninelightnighthighmytryflyeye15)[au]字母组合ouowhouseoutflourgroundaccountcountsoundloudaroundflowerdownnowcowhowtown16)[εu]发音字母oowoahomecoldgonophonehostghostknowlowbelowgrowblowshowflowboatcoatgoal17)字母组合oyoiboytoyjoyoilsoilvoicechoice18)[iε]字母组合eerearbeerdeerearnearherefierceidea19)字母组合earairerepearbearchairairfairtherewherecare20)[uε]字母组合ourowerhourtourflowershower
2023-07-14 23:18:081

在美国的火警电话是多少?

911
2023-07-14 23:18:195

试分析哪些因素影响离体细胞发生凋亡

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。美国著名生物试剂公司CLONTECH和Invitrogen公司分别开发了多种标记的Annexin V产品,简便快速,10分钟就可完成检测。其中带荧光标记的Annexin V-EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)及Annexin V-FITC,灵敏度高,可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合蛋白Annexin V-EGFP,EGFP与PS 的结合比例为1:1,还可进行定量检测。除此之外,还提供生物素偶联的Annexin V,可通过常用的酶联显色反应来检测。另外,MACS公司将磁珠包被Annexin V,可采用磁分选方法筛选凋亡细胞。2)细胞内氧化还原状态改变的检测:这反应了细胞凋亡研究中相对较新的趋势,研究什么样的氧化还原环境引起下游事件的发生。CLONTECH公司的ApoAlertTM GlutathioneDetection Kit通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。正常状态下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要,许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。在Jurcat和一些其它类型的细胞中,细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关,此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外,还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如:HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化,不能用此法检测。3)细胞色素C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1 (apoptoticprotease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。ApoAlertTMCell Fractionation Kit不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。4) 线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正常细胞中,它在线粒体中形成聚集体,发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中,因线粒体穿膜电位的改变,它以单体形式存在于细胞液中,发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是,这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。 细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法:1) TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP (多为dUTP)间接(通过地高辛)或直接接到DNA片段的3"-OH端,再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少(如活体组织切片)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的ApoAlert?LM-PCR Ladder Assay Kit通过LM-PCR(ligation-mediated PCR),连上特异性接头,专一性地扩增核小体的梯度片段,从而灵敏地检测凋亡时产生的核小体的梯度片段。此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产生这一现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。3) Telemerase Detection (端粒酶检测)这是相对来说推出较早,用得较多的一种方法。端粒酶是由RNA和蛋白组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列,使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的,每分裂一次,染色体的端粒会缩短,这可能作为有丝分裂的一种时钟,表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现,90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。Invitrogen公司的TRAP-eze Telemerase Detection Kit在1996年率先推出。它提供特定的寡核苷酸底物,分别与底物及端粒重复序列配对的引物。如果待测样本中含有端粒酶活性,就能在底物上接上不同个数的6碱基(GGTTAG)端粒重复序列,通过PCR反应,产物电泳检测就可观察到相差六个碱基的DNA Ladder现象(参见图4)。此外,Intergen公司还提供用酶联免疫法(ELISA)检测的试剂盒.同样,这种检测方法也不专对细胞凋亡,检测结果也不纯反应细胞凋亡的发生。 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜1. 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。2. 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。3.透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,较其它方法有不可比拟的优越性,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。在APO 的研究得到较为广泛的应用,开辟了新途径。1 光散射法在FCM 系统中,被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。细胞坏死由于胞体肿胀,细胞核亦碎裂分解故FSC 和SCC 均增高。正常细胞FSC 高而SSC 低。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞表面免疫荧光分析结合起来,用以区别辩认经这些特殊处理发生选择凋亡的淋巴细胞亚型,也可用于活细胞分类。值得注意的是,根据FSC 和SSC 判断凋亡细胞的可靠性受被测细胞形态上的均一性和核细胞浆比率影响很大,因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好而在肿瘤细胞凋亡中其可靠性较差。2  细胞DNA 含量的测定细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA 断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于正常细胞的二倍体。用碘化丙啶( PI) 染色后分析,可在二倍体C0/ G1 ,峰前出现“亚二倍体”峰,即细胞凋亡峰(APO峰) ,根据APO 峰可测出凋亡细胞百分率,该法简单易行,可大批定量检测凋亡标本,亦可同时分析细胞的细胞周期位置。另外,应用FCM 方法通过对DNA 和RNA 的联合检测可以鉴别出G0 期细胞,因此,可分析细胞凋亡与G1 或G0 细胸的关系。DNA 降解的程度取决于凋亡的阶段、细胞的类型和凋亡诱发因子的特性。染色过程中DNA 的逸出量变化也影响FCM 检测结果。据研究,将高浓度的磷酸盐———枸椽酸盐缓冲液加入漂洗液中,可增高降解DNA 的逸出量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力。DNA 含量测定在检测细胞凋亡中的局限性在于其特异性和敏感性均不高。特异性不高是因为APO 峰代表了一组细胞群体,包括凋亡细胞、机械损伤细胞、低DNA 含量的细胞或不同染色体结构的细胞,在上述情况下,DNA 与荧光染料的结合量均小。另外,非固定的细胞在低渗溶液中被溶解时,可导致大量的核碎片出现,此时APO 峰的细胞数目只代表了核碎片的数目,并不代表凋亡细胞数目。敏感性较差的原因是细胞凋亡早期只有DNA 断裂点出现,但尚未出现DNA 片段的大量丢失,所以该法不能检出早期凋亡细胞和发生于S 期或G2/ M 期的凋亡细胞,因为其实际含量不低于二倍体细胞所含的DNA ,因此该法进行凋亡细胞分析时应结合其它形态或生化方法,以期更准确地分析细胞的凋亡状态。3  Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)AO 可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或通过变性而产生的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因此,通过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。在测定被标准化后,绿色和红色荧光强度的量与总DNA 含量成比例,红色荧光与总体细胞(红色加绿色) 荧光的比率表示细胞中变性DNA 的比例,因此,这种方法可用于评价DNA 对原位变性的敏感性。有时候,凋亡细胞DNA 降解不明显,依赖于DNA 降解来检测细胞凋亡的方法如细胞DNA含量测定、DNA 末端标记等就难以检测到细胞凋亡变化。AO法检测凋亡的原理不依赖于DNA 片断的产生,因此其最主要的优点是可应用于寡核小体片段与凋亡不相平衡等情况,但AO 染色法不能有效区分有丝分裂细胞和凋亡细胞。4  若丹明( Rh123) 染色法细胞生活状态下,胞膜上的钠- 钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,形成细胞膜电位。FCM 可以检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料,对细胞膜具有通透性,线粒体膜尤敏感。细胞存活状态时,若丹明123 通过细胞膜,积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时,线粒体膜的转运能力下降,电负性降低,故细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失,荧光强度降低,据此检测细胞的凋亡变化。但应指出,在凋亡的早期阶段,由于胞膜尚完整,大多数细胞器和细胞功能相对较好,因此,Rh123 法对于早期凋亡细胞和活细胞的鉴别比较困难。5  原位末端标记技术细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL) 。INST 是利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到凋亡细胞内断裂的DNA 处的3"末端,同时水解5"末端,以修复DNA ,若使用已标记的核苷酸即可显示出有断裂DNA 的细胞。1993 年,Gorczyca 等提出了末端脱氧核糖核酸转移酶( TdT) 标记法采检测凋亡细胞的DNA 断裂,此种方法已得到广泛应用。由于内源性核酸内切酶激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,并产生与DNA 断点数目相同的3"2 羟基末端, TdT 可以将生物素化的dUTP 标记至3"2 羟基末端,通过卵白素2FITC 系统,使DNA 的断点部位发生特异荧光而签别出凋亡细胞,TdT 末端标记法是鉴别凋亡细胞比较特异的一种方法。脑组织中的凋亡细胞很少,因此基因组DNA 片断需要更灵敏的检测技术。将TUNEL 法与FCM 结合起来可以提高检测凋亡细胞中DNA 片断的灵敏度。经凋亡诱导因子处理一定时间后的细胞,原位末端标记的凋亡比Hoechst33342 染色显示的要多,提示TUNEL 可检测出尚未出现明显凋亡形态学特征但已发生DNA 裂解的核,从而使检测的灵敏度提高。对比研究表明, TUNEL 的敏感性远远高于ISNT ,尤其在APO早期TUNEL 法阳性率较高,可能是APO 发生时DNA 多数为双链同时断裂,单链少见的原因。后者是依赖DNA 多聚酶介导的修复反应,故ISNT 的阳性率相对较低。TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。但由于断裂DNA 的标记过程比较复杂,涉及多种因素,所以末端标记的阴性结果并不一定代表DNA链的完整,应排除方法上的问题,如TdT 酶活力的丧失等诸多影响因素。因此应用TdT 末端标记法鉴别凋亡细胞必须同时设阳性及阴性对照组,以便得到可靠结果。6  Annexin V/ PI 法1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin ,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,利用其特性可以检测细胞凋亡。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死或凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胆区分开来。FCM 通过Annexin V —FITC 标志暴露于细胞膜上的PS 结合PI 进入损伤细胞膜标记降解DNA 分析凋亡与坏死细胞。在检测时有4个亚群包括机械性损伤细胞(Annexin - / P1 + ) 、正常细胞(An2nexin - / PI - ) 、凋亡细胞(Annexin + / PI - ) 和继发性坏死细胞(Annexin + / PI + ) 被区分。Boersma 等应用Ampexin V2FITE染色法检测细胞毒药物处理后的中国仓鼠细胞凋亡变化,FCM 检测发现荧光信号强弱不同的两种细胞亚群。进一步形态学等证实弱荧光细胞亚群代表早期凋亡细胞,强荧光亚群代表晚期凋亡细胞,可见其是检测和定量凋亡细胞的一种较为可靠的方法。细胞凋亡时膜上PS 外露早于DNA 断裂发生,因此该法检测早期凋亡更为灵敏,且该法不需要固定细胞,避免了PI 法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL 法因固定出现的DNA 片段丢失,因此更加省时,结果亦更可靠,是目前最为理想的凋亡定量检测方法。7  其 他7.1  ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。与TUNEL法相比,ssDNA 具有更强的灵敏性。TUNEL 法检测的凋亡细胞可能只是单抗法检测的凋亡细胞中的一个亚类。ssDNA法检测APO 一般用免疫荧光法。但也可和FCM 结合应用。单抗法使用简便、成本低、应用广泛。ssDNA 单抗可以区别坏死和凋亡、甚至能检测前期凋亡,凋亡后坏亡和一些特殊的凋亡形式(如无片段化的细胞凋亡) 。因此, ssDNA 单抗法可望成为一种新的特异灵敏检测细胞凋亡的方法。7.2  细胞凋亡的相关蛋白分析 研究发现,有不少基因参加凋亡调控,这些基因产物可参与促进或抑制APO 的发生、发展,因此检测凋亡调节基因蛋白对研究APO 及其调控有重要作用。迄今为止,已可对大量细胞凋亡调节基因的蛋白产物分析,如P53 蛋白、caspases、C2myc、Fas 抗原、TNF、bcl22 家族蛋白、cyclin、ras 等。FCM 用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确。8  展 望近几年来,随着FCM 技术的不断发展和APO 研究的逐渐深入,FCM 在细胞凋亡研究中日益广泛。应用FCM 定量检测凋亡细胞简便、快速、客观,并可进行多参数检测,因此,可同时对APO 及其相关的癌基因表达、细胞周期分布等诸多因素进行相关分析,可以比较深入地了解凋亡的调节机制。尽管应用FCM 进行细胞凋亡研究的方法较多,但FCM检测凋亡细胞的方法一般基于细胞凋亡过程中形态、生化等某一方面的特性,因而难于了解凋亡过程中发生的各种变化的相互关系,也使该类方法缺乏特异性,所以,联合应用多种针对不同特性的FCM 检测方法,才能更为有效地鉴别凋亡细胞。同时,FCM 研究结果尚需同时结合形态学观察或生物化学方法,才能更加深入地了解凋亡细胞的生物学特性。随着生物技术的发展及人们对APO 本质认识的深入,相信在不久的将来,定会有更为特异和敏感的方法问世,有助于细胞凋亡取得突破性进展。
2023-07-14 23:18:381

AE模板的发展历史

1993年1月 1.0 Egg layered compositing with mask, effect, transforms, keyframes;仅于Mac上1993年5月 1.1 更多效果 Aldus 1994年1月 2.0 Teriyaki 时间配置视窗、多机转译、框架混色1995年10月 3.0 Nimchow render queue, time remapping, multiple effects per layer, motion tracker, motion math, Illustrator import, Photoshop as comp import 第一个日语版本1996年4月 3.1 档案格式、多处理、advanced keying for the "Professional Bundle"1997年5月 3.1 (Windows) Dancing Monkey 第一个Windows版本、内容选单、第一个法语与德语版本1999年1月 4.0 ebeer 分页视窗, multiple masks per layer, adjustment layers,内存预览, Premiere import;第一个同步的Mac & Windows版本1999年9月 4.1 Batnip 流程图检视、观看资料夹、3D Channel效果2001年五月 5.0 Melmet 3D、运算式、16 bits per channel color2002年1月7日 5.5 Fauxfu 进阶的3D转译器、多重3D检视、第一个OS X版本2003年8月 6.0 Foodfite 绘图、 指令码 、文字图层、支援OpenGL2004年5月 6.5 Chambant cloning、默认动画、grain management2006年1月 7.0 Clamchop new docking panels UI, 32 bits per channel color (floating point), display color management, dynamic link with Premiere Pro,第一个 西班牙 语与意大利版本2007年7月2日 CS3 (8.0) Metaloaf 形状图层、操偶工具、脑力激荡、短片注记、完整的色彩管理、第一个Intel Mac版本2008年1月22日 CS3 (8.0.2) Metaloaf 支援Panasonic P2;最后一个Mac Power PC版本2008年9月23日 CS4 (9.0) Chinchillada 启用 CUDA 、于专案和时间轴中快速搜寻、迷你流程图、即时汇入PS 3D图层、独立的XYZ、Mocha2009年1月5日 CS4 (9.0.1) Chinchillada 支援RED R3D档案 (经由RED插件)2011年4月 After Effects CS5发布1.原生支持64位2.支持了彩色LUT文件3.Mocha 2.0 AE进一步强化了手工遮罩和跟踪的能力2012年4月24日 After Effects CS6发布1.3D摄像机跟踪功能 基于光线追踪的挤出文字与形状(以后做Motion Graphic的简单展示就更简单了)2.矢量图形直接转换成Shape图层 可变宽度的遮罩羽化新CC特效3.其他CC特效全面升级支持16bit和32bit4.基于Automatic Duck技术的从第三方程序6.提升与mocha-AE的整合度7.新的极大提升的GPU对预览与最终输出质量的加速功能8.果冻效应修复特效.2013年6月18日 After Effects CC 正式发布关于Adobe CC系列产品  相比CS系列产品,CC系列产品最大的特点便是改进了云服务功能,用户可在Mac OS、Windows、iOS和Android系统上通过Creative Cloud来储存、同步和分享Creative文件。此外,Adobe CC系列产品还集成了全球领先的创意设计平台Behance,用户可以在这里展示作品、获得建议和反馈。
2023-07-14 23:18:481

求伊莉雅出场集数。

直接去看魔法少女伊莉雅 每集都登场
2023-07-14 23:19:012

有关电脑开机以后 checking file system on C: The type of the file system is NTFS

具体解决方法如下:1、首先需要知道开机出现checking file system on C,可能是硬盘出现了问题,需要修改注册表,按win+R键打开运行,输入regedit,如下图所示:2、进去注册表编辑器之后,点击HKEY_LOCAL_MACHINE,如下图所示:3、依次点击HKEY_LOCAL_MACHINE->SYSTEM->CurrentControlSet->Control->Session Manager,如下图所示:4、在Session Manager的右侧,双击BootExecute,如下图所示:5、进去BootExecute之后,将值清空,点击确定之后,下次开机就不会出现checking file system on C错误,如下图所示:
2023-07-14 23:19:091

LONGFITE MANOR 是什么红酒?

回答和翻译如下:朗费特曼洛。
2023-07-14 23:20:011

英语Quartz Scheduler怎么翻译?

翻译成“具有石英机芯的电子日历手帐”
2023-07-14 23:20:0910

什么是矿物?

什么是矿物 矿物是地壳内外各种岩石和矿石的组成部分,是具有一定的化学成分和物理性质的自然均一体。大部分矿物是固体,也有的是液体(如自然汞、石油)或气体(如CO2、H2S等)。 矿物学家把所有矿物分为有机矿物和无机矿物两种:前者种类比较少,主要是碳氢化合物,如:日常烧饭用的煤炭,妇女用的妆饰品琥珀等。有机化合物矿物还有石油和地沥青等,这些矿物原来都是有生命的动植物,由于长期地质作用的结果,使它们失去原形,变成了无生活机能的产物,所以被称为有机矿物。后者在地球上数量众多,由于每年都有几十至几百种新矿物被发现,据统计,目前已有三、四千种。许多种矿物是我们日常生活离不开的,例如:中小学生几乎天天都用的铅笔,制造笔芯的石墨就是矿物的一种。我们每餐都用的食盐也是天然石盐矿物的一种,可以说人类时时刻刻都离不开矿物。 有机矿物的化学成分是碳氢化合物,无机矿物的化学成分比较复杂,门捷列夫周期表中的一百多个化学元素,都可以组成无机矿物。既可以是一个元素独立存在,也可以是多个元素的组合。一个元素独立存在的矿物较普遍,如:Fe元素可以形成自然铁矿物,Ag元素可以形成自然银矿物,Au元素可以形成自然金矿物等。两个以上的元素组合可以形成几千种矿物,最简单的如两个元素Si和O,可以组成SiO2,由这两个元素组成的矿物可以是石英、柯石英和鳞石英等。Fe和O两个元素可以组成赤磁铁矿、赤铁矿以及磁铁矿等,赤铁矿和磁铁矿都是炼铁的主要原料。三个元素组成的矿物就更多了,例如:Cu5FeS4是斑铜矿、CuFeS2是黄铜矿、CoAsS是辉砷钴矿等。我们每天都用的陶瓷器皿,其原材料是我们日常所说的黏土,它的化学成分比上述矿物的成分更为复杂,是由Al2Si2O5(OH)4组成。这种化学成分是四个矿物的名字(高岭石、迪开石、埃洛石和珍珠石),但它们的物理性质不同,所以是四个独立的矿物。
2023-07-14 23:20:342

juice是什么意思

juice是一个英语单词,察嫌则名词,作名词时意为“(水果)汁,液;果汁”。短语搭配Orange Juice 橙汁 ; 橘子汁 ; 桔子原汁 ; 柳橙汁grapefruit juice 葡萄柚汁 ; 西柚汁 ; 蒲萄柚汁 ; 柚子汁cranberry juice 蔓越莓汁 ; 红莓汁 ; 越橘汁 ; 蔓越橘汁juice extractor 果汁榨汁机 ; 榨汁机 ; 液汁提取器 ; 汁液榨取器Noni Juice 诺丽果汁 ; 大溪地诺丽果汁 ; 诺利果汁Juice Beauty 果漾美人 ; 果漾美颜 ; 果漾佳丽Prune Juice 西梅汁 ; 黑枣汁 ; 或干李子汁Sugarcane juice 蔗汁 ; 柘浆fitered juice 清汁泵 ; 清汁泵联轴器相关造句1、This is an apple juice and concentrate production line .这是条苹果汁和浓缩生产线。2、Drain remaining juice in bottom of bowl .把剩余的汁液洒在盘底。3、Does lemon juice really boost metabolism ?柠檬汁真的能够促进新陈代者源谢吗?4、The lemon juice is called electrolyte .而柠檬中的柠檬汁就是电解质。5、Is there arsenic in apple juice ?苹果汁中含有砷吗?
2023-07-14 23:20:421

火山碎屑岩的特征

火山碎屑岩(pyroclastic rocks)是火山作用形成的各种火山碎屑物质堆积后经多种方式固结而形成的岩石,其中含少量的正常沉积物时,则是火山岩与沉积岩的过渡类型。1.火山碎屑岩的结构和构造火山碎屑岩的结构按粒度和成因特征分为两种类型:1)粒度结构集块结构:粒度>64mm的火山碎屑物体积分数一般>50%,不少于1/3。火山角砾结构:粒度介于64~2mm之间的火山碎屑物体积分数一般>50%,不少于1/3。凝灰结构:粒度介于2~0.0625mm之间的火山碎屑物体积分数一般>50%,不少于1/3。尘屑结构:粒度<0.0625mm之间的火山碎屑物体积分数一般>50%,不少于1/3。2)成因结构塑变(熔结)结构:主要由塑性玻屑和塑性岩屑彼此平行重叠熔结而成,可含少量的刚性碎屑,根据主要碎屑粒度的大小可进一步分为熔结集块结构、熔结角砾结构和熔结凝灰结构。碎屑熔岩结构:是火山碎屑岩向熔岩过渡的一种结构,火山碎屑物被熔岩胶结。根据主要碎屑的粒度大小可作进一步划分。沉火山碎屑结构:是火山碎屑岩向正常沉积岩的过渡类型结构,以火山碎屑为主,混入有少量的沉积物。凝灰沉积结构:是以正常沉积物为主的过渡类型的结构,在正常沉积物中混有少量(体积分数为50%~10%)的火山碎屑物质,如凝灰砾状结构、凝灰泥质结构等。火山碎屑岩常见的构造有以下几种:(1)流状构造:由压偏拉长的塑变玻屑和塑变岩屑定向排列形成,野外与流纹构造不易区别。(2)火山泥球结构:火山灰级碎屑物质凝聚成球状、豆状,中心粒度较粗,向边缘变细,具同心层构造。一般认为是当雨滴通过喷发云时由湿润的火山灰凝聚而成的。(3)层理构造:多见于水携或风携下降落的火山碎屑沉积物中,陆上堆积的涌浪相堆积中也可出现水平层理和交错层理。(4)粒序构造:有正粒序(由上向下粒度变粗)和逆粒序构造(由上向下粒度变细)两种。其中逆粒序构造是由于在火山碎屑中存在一些体积大但密度小的浮岩岩屑(密度小于1)而造成的。2.火山碎屑岩的分类火山碎屑岩因为兼有火山岩和沉积岩的一些特性,因此在分类上需考虑的因素较多,本教材推荐使用孙善平(1978)的分类方案(表8-3)。该分类中首先考虑火山碎屑岩向沉积岩和熔岩过渡的特征分为向熔岩过渡类型、正常火山碎屑岩类型和向沉积岩过渡类型3个大类,进一步据成岩方式和结构构造特征分为5个亚类,每一亚类又据火山碎屑的粒径分为3种。表8-3 火山碎屑岩分类表3.主要类型岩石特征1)正常火山碎屑岩类火山碎屑物体积分数大于90%,正常沉积物和熔岩物质极少。按成岩作用方式和结构构造特点,又可分为普通火山碎屑岩、层状火山碎屑岩和熔结火山碎屑岩3个亚类。普通火山碎屑岩亚类 成岩方式以压结为主,常叠加有水化学胶结,胶结物往往为火山灰分解物,由蛋白石和粘土矿物(如蒙脱石)构成,重结晶后变成玉髓和水云母集合体。一般成层构造不明显。火山碎屑物质主要为集块、火山角砾、火山砾、晶屑和半塑性的玻屑组成,以刚性和半塑性碎屑为主,没有堆积后的压偏、拉长等塑性变形现象。按岩石中主要碎屑(体积分数一般大于50%)的粒度可分为集块岩(agglomerate)、火山角砾岩(volcanic breccia)、火山砾角砾岩(lapilli stone)和凝灰岩(tuff)等类型。当不同粒级的火山碎屑含量混杂时,定名时可据各种碎屑的含量投点(图8-7)确定复合名称,如角砾凝灰岩、集块角砾岩等。进一步定名还应据晶屑组合或同源岩屑中斑晶成分特征等,确定火山碎屑对应的熔岩成分,并作为前缀参加到定名中,如安山质火山角砾岩、流纹质凝灰岩等。凝灰岩是火山碎屑岩中分布最广的一种,主要由粒度小于2mm的火山灰组成,晶屑、玻屑和岩屑均有,进一步可据“三屑”的相对含量分为7 种类型(图8-8)。图8-7 火山碎屑岩定量粒级分类图8-8 凝灰岩中“三屑”命名图熔结火山碎屑岩亚类 火山碎屑物在堆积后仍具较高的温度,处于可塑状态,在上覆物质的负荷压力下,经变形、熔结而成。岩石具熔结结构,碎屑主要由晶屑、塑变岩屑、塑变玻屑和火山尘组成,也可有少量的刚性岩屑,由于塑变碎屑拉长定向而具流状构造。根据碎屑的粒度分为熔结集块岩(welded ag-glomelate)、熔结角砾岩(welded breccia)和熔结凝灰岩(welded tuff或 ignimbrite),也可据图8-7、8-8进一步定名,再加上相应熔岩名称前缀,如流纹质玻屑熔结凝灰岩等。熔结集块岩和熔结角砾岩在露头上经常共生,分布面积不大,主要见于火山喷出口附近,是近火山口相产物。熔结凝灰岩则分布较广,可分布在近火山口附近,也可以远离火山口分布。同一喷发单元的不同部位和不同厚度的喷发单元的熔结凝灰岩的玻屑和塑变岩屑的变形程度也有所不同,即具有不同的熔结程度(图8-9),根据塑性玻屑和塑性岩屑的变形特点可分弱熔结、熔结和强熔结3个等级:①弱熔结凝灰岩,即塑性玻屑微受变形,部分棱角开始圆化,部分仍保留弧面棱角状,略有压偏拉长现象,塑性岩屑少见,岩石流动构造不明显,常产于熔结凝灰岩的上、下部,与熔结凝灰岩呈渐变过渡关系;②熔结凝灰岩,即塑变玻屑仍可恢复弧面棱角状形态,塑变岩屑发育,塑变碎屑受刚性碎屑挤压,在其边缘,尤其是在受压的一方,出现明显的变形定向,因此具明显的流状构造,常呈巨厚堆积,剖面上位于喷发单元的中上部;③ 强熔结凝灰岩,塑变玻屑含量极多,变形强烈呈扁平状,仅在刚性碎屑(通常为晶屑)的撑开部位偶尔见变形弱的玻屑,塑变碎屑多为直接接触,尘屑少见,流状构造十分明显,有时与流纹构造不易区别,一般位于喷发单元的中下部,近火山口处和喷发单元层中下部的熔结程度要强于远火山口处和喷发单元层中上部。层火山碎屑岩亚类 指具明显的韵律层理和成层构造的火山碎屑岩,以层状凝灰岩较常见。层状凝灰岩一般是火山灰在水盆中堆积形成的,其中正常沉积物体积分数小于10%,火山碎屑主要为玻屑、刚性—半塑性岩屑和火山尘,由火山灰和火山尘分解的少量水化学沉积物胶结,部分为压实胶结。当正常沉积物体积分数大于10%时,就过渡为沉凝灰岩。2)向熔岩过渡的火山碎屑熔岩类火山碎屑体积分数10%~90%,变化较大,由熔浆胶结。碎屑熔岩类的成因多样:已固结的熔岩表壳在下部熔浆继续流动和逸出的气体产生爆炸的情况下,使表壳破碎再被熔岩胶结形成角砾熔岩(breccia lava)和集块熔岩(agglomerate lava);爆发能量不足时,往往在从火山口中抛出碎屑的同时,亦有熔岩溢出,降落入熔岩中的碎屑物质被熔岩胶结形成各种碎屑熔岩;当熔岩以较大的冲力从火山口喷发时,使熔岩中的斑晶大部分破碎,形成碎屑以晶屑为主的晶屑凝灰熔岩;岩浆在地下的隐爆作用常使内部的斑晶破碎亦可形成晶屑凝灰熔岩。凝灰熔岩中的碎屑以晶屑为主,也可有少量刚性岩屑,但一般不出现玻屑。3)向沉积岩过渡的火山碎屑岩类这类火山碎屑岩由落入水盆中的火山碎屑物与正常沉积物同时堆积形成的。岩石中正常沉积物体积分数可达10%~90%,碎屑物由化学沉积物和粘土物质胶结,也可由压实固结。根据火山碎屑物的含量可分为沉积火山碎屑岩和火山碎屑沉积岩两亚类。图8-9 流纹质熔结凝灰岩塑性玻屑的变形程度与熔结强度的关系沉积火山碎屑岩亚类 常与正常火山碎屑岩和正常 沉积岩共生,并往往呈过渡关系。根据火山碎屑的粒度可分为沉集块岩、沉火山角砾岩和沉凝灰岩等,常见的是沉凝灰岩(tuffite)。岩石具层理构造,韵律层较发育。在碎屑物中常见具磨圆的砾、砂、粘土等正常沉积物,有时还可出现生物化石和生物碎屑,火山碎屑体积分数为50%~90%。火山碎屑沉积岩亚类 火山碎屑体积分数较小,介于50%~10%之间,更接近于沉积岩的特征,常与沉积火山碎屑岩呈渐变过渡关系,堆积位置一般离火山口较远,命名时以正常沉积岩的名称为基本名称,将火山碎屑作前缀,如凝灰质砂岩、凝灰质砾岩等。
2023-07-14 23:20:581

美国火警是911吗?

911
2023-07-14 23:21:087

mc龙蛋怎么孵化

孵化龙蛋的方法:孵化霜龙,把龙蛋放在雪地或冰面上,或者给最后一只影龙建一个冰库,然后把龙蛋放进去,等待龙蛋孵化出霜龙。如果我们害怕霜妖蛆孵化后攻击自己,那么我们可以准备一些岩浆。霜龙害怕岩浆,当我们意识到霜龙要攻击我们的时候,可以用它稍微减速。其次,是孵化以太坊。以太也叫天龙。据孵化过以太坊的玩家说,因为以太坊很神奇,喜欢俯瞰,所以为了满足这个条件,需要建造一个非常高的塔,把龙蛋放在半空中孵化。至于需要建多高,先建168个方块。最后是孵化地狱龙的方法。因为地狱龙比较娇气,在孵化它们的蛋之前,我们需要去地下取地狱火石,萤石,灵魂沙。之后把龙蛋放在上面,等龙蛋孵化出地狱龙。如果把Hellfite,萤石,灵魂砂放在不同的地方,可以得到其中一种材料,在上面放龙蛋孵化地狱火。只有地狱的材料才能孵化地狱龙。
2023-07-14 23:21:511

使命召唤15暗物质皮肤怎么获得

使命召唤15暗物质皮肤是比较难获得的,外观还是非常的炫酷,不少玩家都想要获得几款皮肤吧,但是可能还不清楚获得方法,这里就和大家介绍一下暗物质皮肤的获得方法,需要的玩家不妨来参考参考。小刀套房迷彩要捡起武器杀5个,不过不用连杀,做着做着就完成了。5连杀5次比较困难,一定要找2个房间狗着,一个不够因为对面被杀了可能会阴着报复。火箭筒在刷这个皮肤的时候会有严重的bug,队友/自己射过得机枪被我炸了并没有计入5个成就中,算下来只有完整被炸掉的才算,对面基本是被打的叫不出来螳螂/机枪的。步枪除了RFB之外都很好刷,远距离每个图都有固定点,大概就是一把硬核的时间。手感的话用下来kn57和vapr是最好用的,icr7很不错但是伤害还是差了点。冲锋枪GKS装了4倍镜也太好爆头了,冲锋枪里的icr,简直激光枪。野火双持不用说,都不用刻意去刷因为大家都用的多。corfite有点抖不过弹量大,就在硬核对着对面头上面一点泼水压枪,打爆头也还是挺快的。狙击枪三把狙正常模式刷真的是地狱模式,只推荐去硬核刷。硬核打koshka很爽,大约可以在2小时刷完。手枪strife简直就是硬核霸主,实在太好用,不管是ads还是腰射都很容易爆头,用这枪几乎把把第一。rk7很难受,中远距离都不能一枪死,kd很低。mozu满级的话可以在正常模式打,这枪爆头率应该在50%以上。sg12装双弹+长枪管,硬核中近距离打头都可以爆头死,没有想象中的难。
2023-07-14 23:21:581

stdio 是什么意思?

标准输出输入,是 standard input and output的意思
2023-07-14 23:22:072

暗恋我好几年的男生向我表白但我对他没感觉,该答应他吗?

不应该答应他。因为好几年了你对他都没有感觉说明你并不喜欢他。该坚决的拒绝他。
2023-07-14 23:22:2715

c罗的个人网站

同意楼上的观点
2023-07-14 23:23:246

火山碎屑岩结构

构成火山碎屑岩类的沉火山碎屑岩和火山碎屑沉积岩的火山碎屑颗粒主要由较大的火山碎屑物和较小的火山填隙物(较细的火山灰、尘等)两部分物质所组成。火山碎屑物质包括石屑、晶屑、玻屑。石屑还可进一步细分为岩屑、火山弹、浮石、火山渣、塑性岩屑,而玻屑可分为非塑性玻屑和塑性玻屑(表3-5)。表3-5 火山碎屑物的种类、成因及特征根据火山碎屑颗粒的大小和形态,火山碎屑岩结构可划分为集块结构、火山角砾结构、凝灰结构、火山尘结构、塑变结构及沉凝灰结构。(1)集块结构(agglomeratic texture):火山碎屑颗粒大于64mm且含量大于50%,这些碎屑颗粒被细小的火山碎屑物胶结而成的岩石结构。(2)火山角砾结构(volcanic breccia texture):粒度为2~64mm的火山碎屑物的含量超过75%,并被细小的火山碎屑物胶结而成的岩石结构。(3)凝灰结构(tuffaceous texture):又称玻屑结构(vitroclastic texture)、弓形玻屑结构(bow-shaped hyaloclastic texture)、火山灰结构(volcanic clastic)。粒度小于2mm的火山碎屑物含量超过75%,并被细小的火山碎屑物胶结而成的岩石结构,是玻屑凝灰岩的典型结构。(4)火山尘结构(volcanic dust texture):碎屑颗粒以小于0.0625mm的尘状火山碎屑物为主,并与相应成分粒径更大的火山碎屑物一起固结而成。(5)塑变结构(plastopyroclastic texture):主要由塑性玻屑和塑性岩屑彼此平行重叠熔结而成,其中可有少量刚性碎屑物。(6)沉凝灰结构(tuffite texture):是凝灰岩与正常碎屑岩之间的过渡岩石的结构。如粗砂状沉凝灰结构、细砂状沉凝灰结构等,凝灰碎屑结构是以正常沉积碎屑物为主的过渡型岩石的结构。如凝灰砂状结构,凝灰粉砂状结构等。
2023-07-14 23:23:431