- 北有云溪
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是你电脑突然断电关机或关机前卡,造成系统文件受损引起的。
按电源键反复开关机试试,放一段时间试试,确实不可以就重装系统吧,如果自己重装不了,花30元到维修那里找维修的人帮助您。
只要自己的电脑不卡机、蓝屏、突然关机,开机就不会这样了。
有问题请您追问我。
lkb等于多少b
1024b。对信息技术有了解的朋友都知道,lkb=1024b,这是最小的单位换算。单位,指机关、团体或属于一个机关、团体的各个部门;指数学方面或物理方面计量事物的标准量的名称。2023-07-14 20:49:461
LKB什么意思
离开吧2023-07-14 20:49:553
lkb是什么服装牌子
lkb是LK贝尼特服装牌子公司地址:广东省广州市越秀区永福路40盛大国际汽车用品交易广场二层自编B55铺。2023-07-14 20:50:041
什么是林肯币?
LKB是由美国肯塔基州政府联合美国花旗银行共同推出的一款加密型数字货币币,以美国总人口(3.257亿)为基础,限量发行3257万枚加密型数字货币,发行后,花旗银行持币31%,肯塔基州政府持币39%,发行团队持币10%,20%的LKB在全世界流通,保证了LKB的价值和上涨空间。2023-07-14 20:50:131
沪教版的字母缩写是什么
沪教版的字母缩写是什么答案如下:沪教版的字母缩写是hjb2023-07-14 20:50:223
lkb流量多少钱联通
1KB忽略不计。1MB=1024KB 价格0.29元。2023-07-14 20:50:312
一个字节等于8位二进制是什么意思?
计算机发展过程中 CPU 数据总线的位数一直在增多,从4位、8位到目前的64位.业内规定8位二进制(8bit)称为一个字节.成为计算总线宽度、存储器容量的标准单位.字节是计算机存储信息的最基本单位,因此也是信息数据的基本单位.一个字节用8位二进制数表示.通常计算机以字节为单位来计算内存容量. 计算机中字节与容量的换算: lB=8bit 、lKB=l024B 、lMB=l024KB 、lGB=l024MB2023-07-14 20:50:425
bangkok lkb是什么港口
2023-07-14 20:51:001
320s14lkb开机后不充电
320s14lkb开机后不充电的原因是电池自身的硬件故障。我们可以重启电脑或者重新插拔电池来判断是否是电池自身硬件故障,如果电池无法充电,可以安装一些硬件检测应用,获得大概的电池损耗参考信息。如果确定是电池硬件故障,切勿自行打开或是尝试修复,需要到专业检修点进行修理。2023-07-14 20:51:121
多少汉字占1B?又多少汉字占1KB?
一汉字占2字节2023-07-14 20:51:326
关于计算机技术指标的描述中,正确的是( )。
【答案】:AMTBF为平均无故障时间,是Mean Time Betweon Failures的缩写,指多长时问系统发生一次故障,所以选项A)是正确的。选项B),奔腾芯片是32位的,而双核奔腾芯片也是32位的芯片;选项C),MIPs是单字节定点指令平均执行速度,是Million InstruCtions Per SeCond的缩写;选项D),存储量lKB指1024字节。2023-07-14 20:51:451
联想 ipeapad 310s_15lkb怎么切换独显
行路难·大道如青天(李白)2023-07-14 20:52:072
联想ideapad320-15LKB怎么查询以太网物理地址
联想ideapad320-15LKB在电脑管家里边查询以太网物理地址。打开联想电脑管家,然后找到我的电脑选项并打开,点击查看硬件信息,查看电脑的硬件信息,找到网卡的物理地址的信息进行查看即可。这样网卡的物理地址的信息就能进行查看。2023-07-14 20:52:151
联想710一14lKB可以改2K屏幕吗?
联想710-14lKB笔记本电脑采用的是14寸1920X1080分辨率LED屏幕,如果换成2K分辨率屏幕也可以的,但是需要和你笔记本电脑接口针脚一样才能使用,关键就在接口针脚能不能找到2K分辨率屏幕和你的一样,2023-07-14 20:52:221
什么是容积效应?
伽玛刀放射外科的剂量分布与剂量-容积效应http://www.ydgmd.com/news/news_detail.asp?class=14&id=362023-07-14 20:52:291
怎么得洛克币快
LZ你好。快速赚取LKB的方法如下:钻石港投资(不定,一天1000LKB一般没问题)、每天打工(350LKB)、帮安格(120LKB)、完成每日任务(270LKB)、捡家园垃圾(好友越多,钱越多。)、玩游戏,建议玩“蝠蝠猪脱险”,在威廉古堡花园,50秒左右1盘,1盘40LKB、挖矿。2023-07-14 20:52:372
Lenovo v330-14lkb,无法切换UEFI
在configuration里选择最下面一下Storage,将Controller Mode改成ACHI mod即可2023-07-14 20:52:452
一个字节等于8位二进制是什么意思?
这个是计算机的基础知识计算机的最原始的识别就是0和1这2个数字,2进制就是为了让计算机理解的数字运算方法。里面所有的数字都是0和1我们一般见到的都是十进制就是到十位数的时候进一位但是2进制呢到2就进一位给你举个例子2进制1就是1十进制的2在2进制里面就是10了因为封二进一。。就是这个道理以此类推十进制的42进制就是100你可以自己算一下。。。这个是计算机组成原理的原码、反码、补码的概念2023-07-14 20:52:553
联想IdeaPad710S-13lKB电脑摄像头打不开怎么回事,请大家帮帮忙?
如果你的摄像头驱动是好的,那有两种可能,第一是你的系统不兼容,可以尝试换成win7或10,另外一种可能性就是你的摄像头是坏的,个人觉得摄像头坏的可能性比较大。2023-07-14 20:53:141
甲状腺素结合球蛋白简介
目录 1 拼音 2 英文参考 3 概述 4 甲状腺素结合球蛋白的医学检查 4.1 检查名称 4.2 分类 4.3 甲状腺素结合球蛋白的测定原理 4.4 试剂 4.5 操作方法 4.6 正常值 4.7 化验结果临床意义 4.8 附注 4.9 相关疾病 1 拼音 jiǎ zhuàng xiàn sù jié hé qiú dàn bái 2 英文参考 thyroid binding globulin TBG 3 概述 甲状腺素结合球蛋白(thyroxinebinding globulin,TBG)是有四个亚基构成的酸性糖蛋白,由肝脏合成,分子量为60kD。TBG是甲状腺激素在血液循环中的主要载体蛋白,对甲状腺激素的贮存、运输、代谢以及维持甲状腺激素的浓度和游离甲状腺激素的动态稳定,均具有重要的作用。 4 甲状腺素结合球蛋白的医学检查 4.1 检查名称 甲状腺素结合球蛋白 4.2 分类 激素类测定 > 甲状腺激素测定 4.3 甲状腺素结合球蛋白的测定原理 血清中的甲状腺素结合球蛋白(TBG)和Eu3+标记TBG共同竞争性的与 *** 特异抗体结合。以第二抗体IgG包被活化微量滴定条作为固相分离剂。样品中的TBG越高,则特异性抗体和Eu3+标记TBG结合就越少。反之,血清TBG降低,则特异性抗体结合Eu3+标记TBG的量就增多。故样品孔的荧光强度和待测物浓度呈反比。 4.4 试剂 (1)TBG的提取和纯化:取适量T4溶于少量0.1mol/L KOH液中,即刻滴加到活化琼脂糖珠4B悬液中(2mg T4/ml珠)。放4℃过夜,次晨加20倍体积0.1mol/L NaHCO3液抽滤,除去剩余T4。 将正常血清100ml加至烧杯中,加入25ml T4琼脂糖珠4B混合,室温搅拌反应过夜,静置待4B珠下沉,倾去上清液。用400ml 0.1mol/L NaHCO3洗涤。然后装1.5×30cm柱,用NaHCO3液平衡柱床至流出液至280nmA值最低时,改用2mmol/L KOH液淋洗。紫外检测,将蛋白峰合并,浓缩。对60mmol/L pH8.6 TrisNaCl透析48h。将提取物液和适量125IT4混合加至预先经60mmol/L pH8.6TrisNaCl平衡DEAESephadex A50柱中。用相同缓冲液加NaCl梯度淋洗。收集NaCl浓度为0.2mol/L流出液。用γ计数。合并紫外280nm蛋白峰。经SDS聚丙烯酰胺圆盘电泳为单一区带。浓缩干燥。即得纯化TBG,供免疫动物,标准品和Eu3+标记用。 (2)固相第二抗体制备:将羊抗小鼠血清IgG抗体,经盐析和DEAE纤维素柱层析提取IgG。用50mmol/L pH9.6碳酸盐缓冲液配制成50μg/ml,包被预先用戊二醛处理的微量滴定条。倾出IgG液于清洁瓶中。将条洗涤2次,每孔加10%戊二醛液200μl,室温下放1h,倾出戊二醛液,将滴定条放37℃干燥,重新用原IgG液包被1次,以提高包被固相抗体IgG的量。向每孔加20g/L BSA液200μl,室温放置4~6h,洗涤两次,装入塑料内,密封,放4℃冰箱保存。 (3)TBG的Eu3+标记:取纯化TBG 2mg溶于0.5ml 0.25mol/L NaHCO3液中,加入Eu3+[对异硫氰酸苯基]DTTA螫合剂350μg,用0.25mol/LNaOH液调至pH8.5~9.0,放4℃冰箱反应过夜。次晨将反应液经Sephadex G50柱分离,紫外280nm检测,收集蛋白峰。测工作液稀释度和标记比活性。加入保护蛋白和防腐剂,分装,放-20℃保存。 (4)试验缓冲液:50mmol/L pH7.6PBS,每1000ml中加白明胶1g,NaN3 0.5g,DTPA8mg,Tween20 0.2g。 (5)抗TBG单克隆抗体:用试验缓冲液按预先所测得的工作液滴度稀释。 (6)标准TBG液:取纯化TBG经高纯度标准品(Pharmacia公司提供)标定。用试验缓冲液配制成2,5,10,20,40,80mg/L。放-20℃保存或冷冻干燥临用前溶解。 4.5 操作方法 (1)将固相第二抗体微量滴定条用洗涤液洗2~3次。S0孔加缓冲液25μl,S1~6孔加入相对应不同浓度标准TBG 25μl,样品孔加待测血清25μl,均作双孔。 (2)向每孔加稀释Eu3+TBG液75μl,稀释抗TBG单克隆抗体100μl。室温下置微量滴定板振荡器上反应3h。 (3)倾去反应液,用自动微量滴定板冲洗器(LKB Wallac产品)洗10次。向每孔加增强液200μl。置振荡器上15min。静置15min后在时间分辨荧光计上测量。按预先制的程序,以S0孔的CPS为B0,各S管的CPS为B0所划出的标准曲线是B/B0为纵坐标,标准TBG浓度为横坐标(对数)。并直接打印出待测血清中TBG的浓度。 4.6 正常值 男:17±3.3μg/L;女:17.6±3.9μg/L。 4.7 化验结果临床意义 (1)甲亢患者血清TBG水平明显降低,病情缓解后,TBG可逐渐上升至正常水平。 (2)甲减时,TBG降解速率减慢,血中TBG浓度可明显升高,可随病情的缓解而逐渐下降。 (3)先天性高TBG血症和遗传性TBG缺乏症可出现TBG升高或降低。 (4)严重的肝脏疾病,由于TBG合成和释放增多而出现血中TBG增高。肢端肥大症、严重的糖尿病或营养不良等疾病血中TBG多降低。 (5)雌激素、糖皮质激素等多种药物均可影响血清TBG的水平,出现TBG升高或降低。 4.8 附注 TBG与T4亲和作用较T3强。 4.9 相关疾病2023-07-14 20:53:201
测试一下,顺带交流,o(∩_∩)o...
好难啊 1.C 2.B 3.难个数是多少啊 是LAL还是什么啊 4.C 5.B 6.D 7.A 8.C 9.A 10.C 11.D 12.D 13.D 14.C 15.A 16.D 17.D 18.C好辛苦啊 终于做完了 全部是自己算的2023-07-14 20:53:282
2018年3月计算机一级考试MSOffice模拟试题1
2018年3月计算机一级考试MSOffice模拟试题1 1.字长是CPU的主要性能指标之一,它表示. A.CPU一次能处理二进制数据的位数 B.最长的十进制整数的位数 C.最大的有效数字位数 D.计算结果的有效数字长度 A. 【解析1字长是指计算机运算部件一次能同时处理的二进制数据的位数。 2.字长为7位的无符号二进制整数能表示的十进制整数的数值范围是. A.0~128 B.0~255 C.0~127 D.1~127 C.【解析】无符号二进制数的第一位可为0,所以当全为O时,最小值为0,当全为】时,最大值为27一】=127。 3.根据汉字国标GB2312-80的规定,lKB存储容量可以存储汉字的内码个数是. A.1024 B.512 C.256 B.约341 B.【解析】一个汉字等于28,也就是说,lKB=10248,所以可以放512个。 4.十进制整数64转换为二进制整数等于. A.1100000 B.1000000 C.1000100 D.1000010 A.【解析164=26,所以64的二进制为1000000。 5.在所列的软件中,1、WPS Office 2010;2、Windows 7;3、财务管理软件;4、UNIX;5、学籍管理系统;6、MS-DOS;7、Linux;属于应用软件的有. A.1,2,3 B.1,3,5 C.1,3,5,7 D.2,4,6,7 【解析】Windows 7、UNIX、MS—DOS、Linux为系统软件。 6.汉字国标码(GB2312-80)把汉字分成. A.简化字和繁体字两个等级 B.一级汉字,二级汉字和三级汉字三个等级 C.一级常用汉字,二级次常用汉字两个等级 D.常用字,次常用字,罕见字三个等级 C.【解析l在国标码的字符集中,收集了一级汉字 3755个,二级汉字3008个,图形符号682个。 7.一个完整的计算机系统应该包含. A.主机、键盘和显示器 B.系统软件和应用软件 C.主机、外设和办公软件 D.硬件系统和软件系统 D.【解析】一个完整的计算机系统应该包括硬件系统和软件系统两部分。 8.在ASCⅡ码表中,根据码值由小到大的排列顺序是. A.空格字符、数字符、大写英文字母、小写英文字母 B.数字符、空格字符、大写英文字母、小写英文字母 C.空格字符、数字符、小写英文字母、大写英文字母 D.数字符、大写英文字母、小写英文字母、空格字符 A. 1解析】ASCIl码编码顺序从小到大为:空格、数 字、大写字母、小写字母。 9.在CD光盘上标记有“CD-RW”字样,此标记表明这光盘. A.只能写入一次,可以反复读出的一次性写入光盘 B.可多次擦除型光盘 C.只能读出,不能写入的只读光盘 D.RW是Read and Write的缩写 B.【解析】CD—RW是可擦除型光盘,用户可以多次对其进行读/写。CD—RW的全称是CD—ReWritable。 10.下列叙述中,错误的是. A.硬盘在主机箱内,它是主机的组成部分 B.硬盘是外部存储器之一 C.硬盘的技术指标之一是每分钟的转速rpm D.硬盘与CPU之间不能直接交换数据 A.【解析】主机包括CPU、主板及存存,而硬盘属于外存。2023-07-14 20:53:351
联想v110-15lkb更换固态硬盘后启动不了
没有检测到固态硬盘,只检测到一个机械硬盘,你是不是插错接口了。2023-07-14 20:53:431
计算机硬盘的存储名词解释
计算机硬盘的存储名词解释大全 硬盘的盘片是将磁粉附着在铝合金(新材料也有改用玻璃的)圆盘片的表面上制成的,这些磁粉波划分成被称作“磁道”的若干个同心圆。在每个同心圆的磁道上就好像有无数的任意排列着的小磁铁,它们分别代表0和1的状态。当这些小磁铁受到来自磁头的磁力影响时,其徘列的方向会随之改变,利用磁头的磁力来控制指定的一些小磁铁的方向,使每个小磁铁都可以用来储存信总。0盘片上的小磁铁越多。能存储的信息也越多。 硬盘的盘体由多个盘片(Platter)组成,这些盘片被重叠在一起,放在一个密封的盒中,它们在主轴电机的带动下以很髙的速度旋转,其每分钟转速达3600、4500、5400、7200、10000转等。在不同的硬盘内部,其盘片的数目不一样,少则两片,多则数十片。一个盘片有两个面,面的编号从fit方的盘片开始,朝上的一面标号为0,朝下的一面标号为1。第2个盘片朝上的一面标号为2,朝下为3,其余依此类推。硬盘每个盘片的每一面都有一个电磁读写磁头。 1、磁面(Side) 硬盘的磁面是指一个盘片的两个面。在硬盘中一个磁面对应一个读写磁头。所以,一般来说在对硬盘进行读写操作时不再称磁面0、磁面1、磁面2,而是称其为磁头0、磁头1、磁头2。 2、磁道(Track) 磁盘在格式化时波划分成许多同心圆,其同心圆轨迹亦称为磁道。第0面的.最外层磁道编号为0面0道,另一面的最外层磁道编号为1面0道。磁道编码沿着磁面中心的方向增长,硬盘的磁面一般有3001024个以上的磁逆。 3、柱面(Cylinder) 在盘体中所有磁面半径相同的同心磁道就称为柱面,即每张磁盘上编号(位置)相同的磁道集合,如图所示。在一般的情况下进行硬盘的逻辑盘容量划分时,往往采用柱面数面不采用磁道数。 柱面是从最外圈柱面开始,当该柱面所有磁道用完后,再移至内圈的一个柱面,而不是先存完一张盘再存一张盘。同系列的硬盘的柱面数是一样的,但每个柱面包含的磁道数因磁头数而异,计算公式为:磁道数=磁头数x柱面数。如迈拓D740X,20GB型号由于只有一个磁头,所以一个柱面的容董是一个磁道,而80GB型号则是4个磁头,一个柱面的容置就是4个磁道。 以最外圈柱面为例,D740X的外圈磁道有837个扇区,按每扇区512Byte计算,20GB型号的最外圈柱面的容量为418.5kB,80GB型号的最外圈柱面容量为1674kB。也就是说如果连续存储500kB的数据,20GB的硬盘就要移动磁头进行道间寻道了,IK80GB的还不会,只是存在冏一柱面内磁头切换的延迟。人家可以这么认为,80GB型号中一个柱面相当于20GB型号中的4个柱面,而同一柱面内的磁道切换速度通常要快于柱面间的切换,对提卨数据传输率更为有利。 4、扇区(Sector) 如果将每一个磁道视为一个圈环,再把该0环等分成若干个扇形小区,每一个扇形小区就是磁盘存取数据的最基本的单位一扇区。硬盘的磁面与柱面编号从0计起,而扇区则从1计起,每个磁道包含的扇区数相等。一个扇区的容董往往是512Byte,扇区的首部都包含有该扇区的惟一一地址标忐ID,扇区之间以空隙隔开,便于系统进行识别。 在每个磁道上划分扇区的多少,以及扇区在磁道内的编兮随介质的类型而不同。例如1.44MB的软盘有18个扇区,而大多数硬盘具有1763个以上扇区。 5、容量(Volume) 硬盘的容置由柱面数、磁头、磁面数和扇区数确定。如果每个扇区为512Byte,其计算公式为: 硬盘容量(Byte)=柱面数x磁头数x扇区数x512(Byte) 但是,当我们说硬盘的容董是多少兆字节(MB)或者多少千兆字节(GB)时,这其中所指的容董悄是通过转换得来的。其转换方法为:lkB=1024Byte,lMB=1024kB,1GB=1024MB或lkB=1000Byte,1MB=lOOOkB,1GB=1000MB。比较合理的计算方法应该是前者,但是硬盘生产厂商基本上邰S以后者的计总方法为单位的,甚至一些硬盘处理工具软件也采用后者的转换方法。例如DM等把10000Byte作为1MB,所以大多数软件将硬盘格式化后报告的容量可能比厂商所说的容量要低一些。在选购硬盘时,硬盘容量是我们首先要考虑的性能指标。 6、每分钟转速(RPM,RevolutionsPerMinute) 每分钟转速指硬盘主轴电机(用于带动磁盘)的转速。比如“5400RPM”就代表该硬盘中的主轴转速为7每分钟5400转(5400r/min)。工作时,磁盘在主轴电相咖带动F,卨速旋转,而磁头臂在音圈电机的控制下,在磁盘上方进行径向的移动,进行寻址。 7、平均寻道时间(AverageSeekTime) 平均寻道时间指硬盘接到读/写指令后到磁头移到指定的磁道(应该是柱面,怛对于具体磁头来说就是磁道)上方所需要的平均时间。如果没有特殊说明*般指读取时的寻道时间,单位为ms(毫秒)。除了平均寻道时间外,还有道间寻道时间(TracktoTrack或CylinderSwitchTime)与全程寻道时间(FullTrack或FullStroke),前者是指磁头从当前磁道上方移至相邻磁道上方所需的时间,后者是指磁头从最外(或最内)圈磁道上方移至最内(或外)圈磁道上方所需的时间,基本上比平均寻道时间多一倍。出于实际的工作情况,购买时我们一般只关心平均寻道时间。 8、平均潜伏期(AverageLatency) 平均潜伏期指当磁头移动到指定磁道后,要等多长时间指定的读/写扇区才会移动到磁头下方(盘片是旋转的),盘片转得越快,潜伏期越短。显然,同一转速的硬盘的平均潜伏期是固定的,7200r/min的硬盘约为4.167ms,5400r/min的硬盘约为5.556ms。 9、平均访问时间(AverageAccessTime) 平均访问时间有称平均存取时间,一般在厂商公布的规格中是不会提供的,-般是测试成绩中的一项,其含义是指从读/写指令发出到第一笔数据读/写时所用的平均时间,包栝了平均寻道时间、平均潜伏期与相关的内务操作时间(如指令处理),由于内务操作时间一般很短(一般在0.2ms左右),可忽略不计,所以平均访问时间可近似等于平均寻道时间+平均潜伏期,因而有称平均寻址时间。如果一个5400r/min硬盘的平均寻道时间是9ms,那么理论上它的平均访问时间就是14.556ms。 10、数据传输率(DTR,DataTransferRate) 数据传输率的单位为MB/s(兆字节每秒,又称MBps)或Mbits/s(兆位每秒,又称Mbps)。DTR分为最大(Maximum)与持续(Sustained)两个指标,根据数椐交接方的同乂分外部与内部数据传输率。内部DTR是指磁头与缓冲区之间的数据传输率,外部DTR是指缓冲区与主机(即内存)之间的数据传输率。外部DTRh限愤取决于硬盘的接口,目前的UltraATA100接口(即代表外部DTR)最高理论值可达100MB/S,持续DTR则要看内部持续DTR的水平。内部DTR是硬盘的真正数据传输能力,为充分发挥内部DTR的作ffl,外部DTR理论值会比内部DTR高,俱内部DTR决定了外部DTR的实阮表现。由于磁盘中最外圈的磁道ft长,磁头在单位时间内比内圈的磁道划过更多的扇区,所以磁头在fi外圈时内部DTR最人,在最内降时内部DTR最小。 11、缓冲区容量(BufferSize) 很多人也称之为缓存(Cache)容董,单位为MB。在一些厂商资料中还被写为CacheBuffer.缓冲区的基本作用是平衡内部与外部的DTR。为了减少主机等待时间,硬盘会将读取的资料先存入缓冲区,等全部读完或缓冲区填满后再以接口速率快速向主相L&送。随着技术的发诚,厂商们后来为SCSI硬盘缓冲区增加了缓存功能。这主要体现在三个方面: 预取(Prefetch)。实验表明在典型情况下,至少50%的读取操作是连续读取。预取功能简单地说就是硬盘“私自”扩大读取范围,在缓冲区向主机发送指定扇区数据(即磁头已经读完指定扇区)之后,磁头接着读取相邻的若干个扇区数据并送入缓冲区,如果后面的读操作IH好指向已预取的相邻扇区,就直接从缓冲区中读取而不用磁头再寻址,提髙了访问速度。 写缓存(WriteCache)0通常情况下,在写入操作时,也足:先将数据写入缓冲区再发送到磁头,等磁头写入完毕后再报告主机写入完毕,主机才开始处理F—任务。而具备写缓存的硬盘则在数据写入缓存区后即向主机报告写入完毕,让主机提前“解放”,开始处理其他事务(剩下的磁头写入操作主机不用等待),提高了整体效率。为了进一步提高效能,现在的厂商莲本都应用了分段式缓存技术(MultipleSegmentCache),将缓冲区划分成多个/jH用来存储不同的写入数据,而不必为小数据浪赀整个缓冲区空间,同时还可以等所有段写满后统一写入,性能更好。 读缓存(ReadCache)。将读取过的数据暂时保存在缓冲区中,如果主机再次需要时可直接从缓冲区提供,提高读取速度。读缓存同样也可以利用分段技术,存储多个互不桕干的数据块,缓存多个已读数据,进一步提高缓存命中率。 12、噪音与温度(Noise&Temperature) 这两个属于非性能指标。对于噪音,以前厂商们并不在意,怛从2000年开始,由于市场的需要(比如OEM厂商希望生产更安静的电脑以增加卖点),厂商开始采用各种手段来降低硬盘的工作噪音,ATA-5规范第三版也加入了自动声学(噪音)管理子集(AAM,AutomaticAcousticManagement),因此目前的所有新硬盘都支持AAM功能。硬盘的噪音主要来源于主轴电机与音圈电机,降叹也是从这两点入手(盘片的增多也会增加噪音)。至于热量,其实每个厂商都有自己的标准,并声称硬盘的表现是他们预料之中的,完全在安全范围之内,没有问题。这一点倒是不用祖心,不过关键在于硬盘是中的一个组成部分,它的高热会提高的整体温度,也许硬盘本身没事,怛可能周围的配件却已经受不了,别的不说,如果是两个高热的硬盘安装得很紧密,那么承受近乎于双倍的热量吗?所以硬盘的发热量仍然需要注意。 ;2023-07-14 20:53:501
哪个牌子的中药熏蒸机好?有质量保障?
其实专业做熏蒸机的厂家也就那么几家,市场上面大部分的熏蒸机都是由这几有贴牌生产的,LKB养生堂就提供了一些专业生产熏蒸机和木桶的厂家,而至于哪个牌子的好你也可以去LKB养生堂看看别人用过的人是怎么评价的,不过到底好不好还得自己用过后才知道。2023-07-14 20:53:592
凝胶渗透柱层析
简介凝胶层析又称为凝胶排阻层析(gel exclusion chromatography)、分子筛层析(molecular sieve chromatography)、凝胶过滤(gel filtration)、凝胶渗透层析(gel permeation chromatography)等。它是以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小顺序分离样品中各个组分的液相色谱方法。1959年,Porath 和Flodin 首次用一种多孔聚合物-交联葡聚糖凝胶作为柱填料,分离水溶液中不同分子量的样品,称为凝胶过滤。1964年,Moore 制备了具有不同孔径的交联聚苯乙烯凝胶,能够进行有机溶剂中的分离,称为凝胶渗透层析(流动相为有机溶剂的凝胶层析一般称为凝胶渗透层析)。随后这一技术得到不断的完善和发展,目前广泛的应用于生物化学、高分子化学等很多领域。凝胶层析是生物化学中一种常用的分离手段,它具有设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、特别是不改变样品生物学活性等优点,因此广泛用于蛋白质(包括酶)、核酸、多糖等生物分子的分离纯化,同时还应用于蛋白质分子量的测定、脱盐、样品浓缩等。凝胶层析的基本原理凝胶层析是依据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。层析过程如图2-23。凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒,凝胶颗粒的内部具有立体网状结构,形成很多孔穴。当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后,各个组分就向固定相的孔穴内扩散,组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部,完全被排阻在孔外,只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动,它们经历的流程短,流动速度快,所以首先流出;而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部,经历的流程长,流动速度慢,所以最后流出;而分子大小介于二者之间的分子在流动中部分渗透,渗透的程度取决于它们分子的大小,所以它们流出的时间介于二者之间,分子越大的组分越先流出,分子越小的组分越后流出。这样样品经过凝胶层析后,各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出,从而达到了分离的目的。凝胶的种类和性质凝胶的种类很多,常用的凝胶主要有葡聚糖凝胶(dextran)、聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide)、琼脂糖凝胶(agarose)以及聚丙烯酰胺和琼脂糖之间的交联物。另外还有多孔玻璃珠、多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等等。下面将分别介绍。(1)葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶是指由天然高分子-葡聚糖与其它交联剂交联而成的凝胶。葡聚糖凝胶主要由Pharmacia Biotech 生产。常见的有两大类,商品名分别为Sephadex 和Sephacryl。葡聚糖凝胶中最常见的是Sephadex 系列,它是葡聚糖与3-氯-1,2环氧丙烷(交联剂)相互交联而成,交联度由环氧氯丙烷的百分比控制。Sephadex 的主要型号是G-10 ~ G-200,后面的数字是凝胶的吸水率(单位是mL / g 干胶)乘以10。如Sephadex G-50,表示吸水率是5mL/g 干胶。Sephadex 的亲水性很好,在水中极易膨胀,不同型号的Sephadex 的吸水率不同,它们的孔穴大小和分离范围也不同。数字越大的,排阻极限越大,分离范围也越大。Sephadex 中排阻极限最大的G-200为8×105。Sephadex 在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液以及有机溶液中都是比较稳定的,可以多次重复使用。Sephadex 稳定工作的pH 一般为为2~10。强酸溶液和氧化剂会使交联的糖苷键水解断裂,所以要避免Sephadex 与强酸和氧化剂接触。Sephadex 在高温下稳定,可以煮沸消毒,在100 °C 下40 min 对凝胶的结构和性能都没有明显的影响。Sephadex 由于含有羟基基团,故呈弱酸性,这使得它有可能与分离物中的一些带电基团(尤其是碱性蛋白)发生吸附作用。但一般在离子强度大于0.05的条件下,几乎没有吸附作用。所以在用Sephadex 进行凝胶层析实验时常使用一定浓度的盐溶液作为洗脱液,这样就可以避免Sephadex 与蛋白发生吸附,但应注意如果盐浓度过高,会引起凝胶柱床体积发生较大的变化。Sephadex 有各种颗粒大小(一般有粗、中、细、超细)可以选择,一般粗颗粒流速快,但分辨率较差;细颗粒流速慢,但分辨率高。要根据分离要求来选择颗粒大小。Sephadex 的机械稳定性相对较差,它不耐压,分辨率高的细颗粒要求流速较慢,所以不能实现快速而高效的分离。另外,Sephadex G-25和G-50中分别加入羟丙基基团反应,形成LH 型烷基化葡聚糖凝胶,主要型号为Sephadex LH-20和LH-60,适用于以有机溶剂为流动相,分离脂溶性物质,例如胆固醇、脂肪酸激素等。Sephacryl 是葡聚糖与甲叉双丙烯酰胺(N,N"-methylenebisacrylamide)交联而成。是一种比较新型的葡聚糖凝胶。Sephacryl 的优点就是它的分离范围很大,排阻极限甚至可以达到108,远远大于Sephadex 的范围。所以它不仅可以用于分离一般蛋白,也可以用于分离蛋白多糖、质粒、甚至较大的病毒颗粒。 Sephacryl 与Sephadex 相比另一个优点就是它的化学和机械稳定性更高:Sephacryl 在各种溶剂中很少发生溶解或降解,可以用各种去污剂、胍、脲等作为洗脱液,耐高温,Sephacryl 稳定工作的pH 一般为3~11。另外Sephacryl 的机械性能较好,可以以较高的流速洗脱,比较耐压,分辨率也较高,所以Sephacryl 相比Sephadex 可以实现相对比较快速而且较高分辨率的分离。(2)聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶是丙烯酰胺(acrylamide)与甲叉双丙烯酰胺交联而成。改变丙烯酰胺的浓度,就可以得到不同交联度的产物。聚丙烯酰胺凝胶主要由Bio-Rad Laboratories 生产,商品名为Bio-Gel P,主要型号有Bio-Gel P-2 ~ Bio-Gel P-300等10种,后面的数字基本代表它们的排阻极限的103,所以数字越大,可分离的分子量也就越大。各种型号的主要参数如附表所示。聚丙烯酰胺凝胶的分离范围、吸水率等性能基本近似于Sephadex。排阻极限最大的Bio-Gel P-300为4×105。聚丙烯酰胺凝胶在水溶液、一般的有机溶液、盐溶液中都比较稳定。聚丙烯酰胺凝胶在酸中的稳定性较好,在pH 为1~10之间比较稳定。但在较强的碱性条件下或较高的温度下,聚丙烯酰胺凝胶易发生分解。聚丙烯酰胺凝胶非常亲水,基本不带电荷,所以吸附效应较小。另外,聚丙烯酰胺凝胶不会象葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶那样可能生长微生物。聚丙烯酰胺凝胶对芳香族、酸性、碱性化合物可能略有吸附作用,使用离子强度略高的洗脱液就可以避免。(3)琼脂糖凝胶琼脂糖是从琼脂中分离出来的天然线性多糖,它是琼脂去掉其中带电荷的琼脂胶得到的。琼脂糖是由D-半乳糖(D-galactose)和3,6-脱水半乳糖(anhydrogalactose)交替构成的多糖链。它在100 °C 时呈液态,当温度降至45 °C 以下时,多糖链以氢键方式相互连接形成双链单环的琼脂糖,经凝聚即成为束状的琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶的商品名因生产厂家不同而异,常见的主要有Pharmacia Biotech 生产的Sepharose(2B ~ 4B)和Bio-Rad Laboratories 生产的Bio-gel A 等。琼脂糖凝胶在pH 为4-9之间是稳定的,它在室温下很稳定,稳定性要超过一般的葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。琼脂糖凝胶对样品的吸附作用很小。另外琼脂糖凝胶的机械强度和孔穴的稳定性都很好,一般好于前两种凝胶,在高盐浓度下,柱床体积一般不会发生明显变化,使用琼脂糖凝胶时洗脱速度可以比较快。琼脂糖凝胶的排阻极限很大,分离范围很广,适合于分离大分子物质,但分辨率较低。琼脂糖凝胶不耐高温,使用温度以0-30°C 为宜。Sepharose 与2,3二溴丙醇反应,形成Sepharose CL 型凝胶(CL-2B ~ CL-4B),它们的分离特性基本没有改变,但热稳定性和化学稳定性都有所提高,可以在更广泛的pH 范围内应用,稳定工作的pH范围为3-13。Sepharose CL 型凝胶还特别适合于含有有机溶剂的分离。(4)聚丙烯酰胺和琼脂糖交联凝胶这类凝胶是由交联的聚丙烯酰胺和嵌入凝胶内部的琼脂糖组成。它们主要由LKB 提供,商品名为Ultragel。这种凝胶由于含有聚丙烯酰胺,所以有较高分辨率;而它又含有琼脂糖,这使得它又有较高的机械稳定性,可以使用较高的洗脱速度。调整聚丙烯酰胺和琼脂糖的浓度可以使Ultragel 有不同的分离范围,(5)多孔硅胶、多孔玻璃珠多孔硅胶和多孔玻璃珠都属于无机凝胶。顾名思义,它们就是将硅胶或玻璃制成具有一定直径的网孔状结构的球形颗粒。这类凝胶属于硬质无机凝胶,它们的最大的特点是机械强度很高、化学稳定性好,使用方便而且寿命长,无机胶一般柱效较低,但用微粒的多孔硅胶制成的HPLC 柱也可以有很高的柱效,可以达到4×104塔板/米。多孔玻璃珠易破碎,不能填装紧密,所以柱效相对较低。多孔硅胶和多孔玻璃珠的分离范围都比较宽,多孔硅胶一般为102-5×106,多孔玻璃珠一般为3×103-9×106。它们的最大缺点是吸附效应较强(尤其是多孔硅胶),可能会吸附比较多的蛋白,但可以通过表面处理和选择洗脱液来降低吸附。另外它们也不能用于强碱性溶液,一般使用时pH 应小于8.5。另外值得一提的是各类凝胶技术近年来发展得很快,目前已研制出很多性能优越的新型凝胶。例如Pharmacia Biotech 的Superdex 和Superrose,Superdex 的分辨率非常高,化学物理稳定性也很好,可以用于FPLC、HPLC 分析;而Superose 的分离范围很广,分辨率较高,可以一次性的分离分子量差异较大的混合物。同时它的机械稳定性也很好。关于各种凝胶产品的详细情况可以参阅本书附录以及各个公司的产品目录。凝胶的选择、处理和保存(1)凝胶的选择通过前面的介绍可以看到凝胶的种类、型号很多。不同类型的凝胶在性质以及分离范围上都有较大的差别,所以在进行凝胶层析实验时要根据样品的性质以及分离的要求选择合适的凝胶,这是影响凝胶层析效果好坏的一个关键因素。一般来讲,选择凝胶首先要根据样品的情况确定一个合适的分离范围,根据分离范围来选择合适型号的凝胶。一般的凝胶层析实验可以分为两类:分组分离(group separations)和分级分离(fractionations),分组分离是指将样品混合物按分子量大小分成两组,一组分子量较大,另一组分子量较小。例如蛋白样品的脱盐或蛋白、核酸溶液去除小分子杂质以及一些注射剂去除大分子热源物质等等。分级分离则是指将一组分子量比较接近的组分分开。在分组分离时要选择能将大分子完全排阻而小分子完全渗透的凝胶,这样分离效果好。一般常用排阻极限较小的凝胶类型。分级分离时则要根据样品组分的具体情况来选择凝胶的类型,凝胶的分离范围一方面应包括所要的各个组分的分子量,另一方面要合适,不能过大。如果分离范围选择过小,则某些组分不能得到分离;如分离范围选择过大,则分辨率较低,分离效果也不好。选择凝胶另外一个方面就是凝胶颗粒的大小。颗粒小,分辨率高,但相对流速慢,实验时间长,有时会造成扩散现象严重;颗粒大,流速快,分辨率较低但条件得当也可以得到满意的结果。选择时要依据分离的具体情况而定,例如样品中各个组分差别较大,则可以选用大颗粒的凝胶,这样可以很快的达到分离的目的;如果有个别组分差别较小,则要考虑使用小颗粒凝胶以提高分辨率。由于凝胶一般都比较稳定,所以它在一般的实验条件下都可以正常的工作。如果实验条件比较特殊,如在较强的酸碱中进行或含有有机溶剂等等,则要仔细查看凝胶的工作参数,选择合适的类型的凝胶。(2)凝胶的处理凝胶使用前要首先要进行处理。选择好凝胶的类型后,首先要根据选择的层析柱估算出凝胶的用量。由于市售的葡聚糖凝胶和丙烯酰胺凝胶通常是无水的干胶,所以要计算干胶用量:干胶用量(g)=柱床体积(mL)/凝胶的床体积(mL/g)。 由于凝胶处理过程以及实验过程可能有一定损失,所以一般凝胶用量在计算的基础上再增加10%-20%。葡聚糖凝胶和丙烯酰胺凝胶干胶的处理首先是在水中膨化,不同类型的凝胶所需的膨化时间不同。一般吸水率较小的凝胶(即型号较小、排阻极限较小的凝胶)膨化时间较短,在20 °C 条件下需3-4小时;但吸水率较大的凝胶(即型号较大、排阻极限较大的凝胶)膨化时间则较长,20 °C 条件下需十几个到几十个小时,如Sephadex G-100以上的干胶膨化时间都要在72小时以上。如果加热煮沸,则膨化时间会大大缩短,一般在1-5小时即可完成,而且煮沸也可以去除凝胶颗粒中的气泡。但应注意尽量避免在酸或碱中加热,以免凝胶被破坏。琼脂糖凝胶和有些市售凝胶是水悬浮的状态,所以不需膨化处理。另外多孔玻璃珠和多孔硅胶也不需膨化处理。膨化处理后,要对凝胶进行纯化和排除气泡。纯化可以反复漂洗,倾泻去除表面的杂质和不均一的细小凝胶颗粒。也可以一定的酸或碱浸泡一段时间,再用水洗至中性。排除凝胶中的气泡是很重要的,否则会影响分离效果,可以通过抽气或加热煮沸的方法排除气泡。(3)凝胶的保存凝胶的保存一般是反复洗涤去除蛋白等杂质,然后加入适当的抗菌剂,通常加入0.02%的叠氮化钠,4℃下保存。如果要较长时间的保存,则要将凝胶洗涤后脱水、干燥,可以将凝胶过滤抽干后浸泡在50%的乙醇中脱水,抽干后再逐步提高乙醇浓度反复浸泡脱水,至95%乙醇脱水后将凝胶抽干。置于60 °C 烘箱中烘干,即可装瓶保存。注意膨化的凝胶不能直接高温烘干,否则可能会破坏凝胶的结构。凝胶层析的基本操作凝胶层析的基本操作步骤与前面介绍的柱层析的操作过程基本相似,这里就不再重复了。下面主要介绍凝胶层析操作中应注意的一些具体问题。(1)层析柱的选择层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择。一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难。一般柱长度不超过100cm,为得到高分辨率,可以将柱子串联使用。层析柱的直径和长度比一般在1:25-1:100之间。用于分组分离的凝胶柱,如脱盐柱由于对分辨率要求较低,所以一般比较短。(2)凝胶柱的鉴定凝胶柱的填装情况将直接影响分离效果,关于填装的方法前面已有介绍,这里主要介绍对填装好的凝胶柱的鉴定。凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡。另外通常可以采用一种有色的物质,如蓝色葡聚糖-2000、血红蛋白等上柱,观察有色区带在柱中的洗脱行为以检测凝胶柱的均匀程度。如果色带狭窄、平整、均匀下降,则表明柱中的凝胶填装情况较好,可以使用;如果色带弥散、歪曲,则需重新装柱。另外值得一提的是,有时为了防止新凝胶柱对样品的吸附,可以用一些物质预先过柱,以消除吸附。(3)洗脱液的选择 由于凝胶层析的分离原理是分子筛作用,它不象其它层析分离方式主要依赖于溶剂强度和选择性的改变来进行分离,在凝胶层析中流动相只是起运载工具的作用,一般不依赖于流动相性质和组成的改变来提高分辨率,改变洗脱液的主要目的是为了消除组分与固定相的吸附等相互作用,所以和其它层析方法相比,凝胶层析洗脱液的选择不那么严格。由于凝胶层析的分离机理简单以及凝胶稳定工作的pH 范围较广,所以洗脱液的选择主要取决于待分离样品,一般来说只要能溶解被洗脱物质并不使其变性的缓冲液都可以用于凝胶层析。为了防止凝胶可能有吸附作用,一般洗脱液都含有一定浓度的盐。(4)加样量关于加样前面已经有所介绍,要尽量快速、均匀。另外加样量对实验结果也可能造成较大的影响,加样过多,会造成洗脱峰的重叠,影响分离效果;加样过少,提纯后各组分量少、浓度较低,实验效率低。加样量的多少要根据具体的实验要求而定:凝胶柱较大,当然加样量就可以较大;样品中各组分分子量差异较大,加样量也可以较大;一般分级分离时加样体积约为凝胶柱床体积的1%-5%左右,而分组分离时加样体积可以较大,一般约为凝胶柱床体积的10%-25%。如果有条件可以首先以较小的加样量先进行一次分析,根据洗脱峰的情况来选择合适的加样量。设要分离的两个组分的洗脱体积分别为Ve1和Ve2,那么加样量不能超过(Ve1-Ve2)。实际由于样品扩散,所以加样量应小于这个值。从洗脱峰上看,如果所要的各个组分的洗脱峰分得很开,为了提高效率,可以适当增加加样量;如果各个组分的洗脱峰只是刚好分开或没有完全分开,则不能再加大加样量,甚至要减小加样量。另外加样前要注意,样品中的不溶物必须在上样前去掉,以免污染凝胶柱。样品的粘度不能过大,否则会影响分离效果。(5)洗脱速度洗脱速度也会影响凝胶层析的分离效果,一般洗脱速度要恒定而且合适。保持洗脱速度恒定通常有两种方法,一种是使用恒流泵,另一种是恒压重力洗脱。洗脱速度取决于很多因素,包括柱长、凝胶种类、颗粒大小等,一般来讲,洗脱速度慢一些样品可以与凝胶基质充分平衡,分离效果好。但洗脱速度过慢会造成样品扩散加剧、区带变宽,反而会降低分辨率,而且实验时间会大大延长;所以实验中应根据实际情况来选择合适的洗脱速度,可以通过进行预备实验来选择洗脱速度。一般凝胶的流速是2-10 cm/hr,市售的凝胶一般会提供一个建议流速,可供参考。总之,凝胶层析的各种条件,包括凝胶类型、层析柱大小、洗脱液、上样量、洗脱速度等等,都要根据具体的实验要求来选择。例如样品中各个组分差异较小,则实验要求凝胶层析要有较高的分辨率,提高分辨率的选择应主要包括:选择包括各个待分离组分但分离范围尽量小一些的凝胶,选择颗粒小的凝胶,选择分辨率高的凝胶类型,选择较长、直径较大的层析柱、减少加样量、降低洗脱速度等等。但正如前面讲过的,各种选择都有一个限度的问题,超过这个限度可能会产生相反的效果。另外需要提的一点是,实验时应尽可能的参考相关实验和文献以及进行预实验,以选择最合适的实验条件。凝胶层析的应用前面介绍了凝胶层析的基本理论以及基本实验操作,下面简单介绍一下凝胶层析在生物学方面的应用。(1)生物大分子的纯化凝胶层析是依据分子量的不同来进行分离的,由于它的这一分离特性,以及它具有简单、方便、不改变样品生物学活性等优点,使得凝胶层析成为分离纯化生物大分子的一种重要手段,尤其是对于一些大小不同,但理化性质相似的分子,用其它方法较难分开,而凝胶层析无疑是一种合适的方法。例如对于不同聚合程度的多聚体的分离等。(2)分子量测定前面已经介绍了,在一定的范围内,各个组分的Kav 以及Ve 与其分子量的对数成线性关系。Kav=-b lg MW+cVe=-b" lg MW+c"由此通过对已知分子量的标准物质进行洗脱,作出Ve 或Kav 对分子量对数的标准曲线,然后在相同的条件下测定未知物的Ve 或Kav,通过标准曲线即可求出其分子量。凝胶层析测定分子量操作比较简单,所需样品量也较少,是一种初步测定蛋白分子量的有效方法。这种方法的缺点是测量结果的准确性受很多因素影响。由于这种方法假定标准物和样品与凝胶都没有吸附作用,所以如果标准物或样品与凝胶有一定的吸附作用,那么测量的误差就会比较大;上面公式成立的条件是蛋白基本是球形的,对于一些纤维蛋白等细长的形状的蛋白不成立,所以凝胶层析不能用于测定这类分子的分子量;另外由于糖的水合作用较强,所以用凝胶层析测定糖蛋白时,测定的分子量偏大,而测定铁蛋白时则发现测定值偏小;还要注意的是标准蛋白和所测定的蛋白都要在凝胶层析的线性范围之内。(3)脱盐及去除小分子杂质利用凝胶层析进行脱盐及去除小分子杂质是一种简便、有效、快速的方法,它比一般用透析的方法脱盐要快得多,而且一般不会造成样品较大的稀释,生物分子不易变性。一般常用的是SephadexG-25,另外还有Bio-Gel P-6 DG 或Ultragel AcA 202等排阻极限较小的凝胶类型。目前已有多种脱盐柱成品出售,使用方便,但价格较贵4)去热源物质热源物质是指微生物产生的某些多糖蛋白复合物等使人体发热的物质。它们是一类分子量很大的物质,所以可以利用凝胶层析的排阻效应将这些大分子热源物质与其它相对分子量较小的物质分开。例如对于去除水、氨基酸、一些注射液中的热源物质,凝胶层析是一种简单而有效的方法。(5)溶液的浓缩利用凝胶颗粒的吸水性可以对大分子样品溶液进行浓缩。例如将干燥的Sephadex(粗颗粒)加入溶液中,Sephadex 可以吸收大量的水,溶液中的小分子物质也会渗透进入凝胶孔穴内部,而大分子物质则被排阻在外。通过离心或过滤去除凝胶颗粒,即可得到浓缩的样品溶液。这种浓缩方法基本不改变溶液的离子强度和pH 值。2023-07-14 20:54:162
联想笔记本flex 6 14lkb 是哪款机器,中关村找不到这个型号
可能是商场预定机 很多预定机 网上都没有的 是专供商场的 同样很多电子产品 比如电视机 某些型号只有商场有 网上是没有的 为了不给你们查价格2023-07-14 20:54:361
未经同意下被算命先生算命可以举报他吗?
在大街上那些摆摊的算命先生正常都是模塌不基码歼允许的,但是现在很多人都不怎么管,只要是不出事就没有人管的。如果被人举报的话,那么就搏冲会有人来管他。【lkb.ycjczs.cn/article/906317.html】【jez.lstdsq.cn/article/860425.html】2023-07-14 20:54:494
老哥们我想问一下联想LKBNM1 V:1.0主板可以装什么CPU啊?
把主板型号说清2023-07-14 20:54:562
1MB等于多少汉字
1mb=1024kb lkb=1024b 一个汉字2b 1024×1024÷2=524288 个汉字2023-07-14 20:55:075
如图,硬盘扫描出了一个坏道,如何判断是逻辑坏道还是物理坏道?
硬盘物理坏道表现为,轻则读盘速度极慢,经常出现文件不能拷贝的情况,重则表现为硬盘在BIOS下能识别,系统根本无法启动,挂到别的机器上当副盘系统极慢,进入系统以后看不到故障盘的任何分区。硬盘逻辑坏道也叫做软坏道,通常为软件操作或使用不当造成的。表现为:1、你在打开、运行或拷贝某个文件时硬盘出现操作速度变慢,且有可能长时间操作还不成功或表现为长时间死“啃”某一区域或同时出现硬盘读盘异响,或干脆Windows系统提示“无法读取或写入该文件”,这些都可表明你的硬盘某部分出现了坏道;2、每次开机时,Scandisk磁盘程序自动运行,肯定表明你的硬盘上有需要修复的重要错误,比如坏道。你在运行该程序时如不能顺利通过,表明硬盘肯定有坏道。当然,扫描虽然也可通过,但出现红色的“B”标记,表明其也有坏道。2023-07-14 20:55:373
油田水中短链有机酸的等速电泳法研究
一、原理毛细管等速电泳的分离过程及测定原理ITP是一种利用中空毛细管内的电解质溶液进行分离的分析技术。为了分离阴离子,分析毛细管和正极槽充满的前导电解质的阴离子必须具有大于所有待分离离子的迁移率。前导电解质的阳离子对进行分析的pH值有缓冲能力。负极槽充满尾随电解质,其阴离子的迁移率比所有离子都小。样品由微量注射器注入到前导和尾随电解质界面上(图11-1)。当正、负极槽之间的高压恒流电源接通后,离子就会在电位差影响下进行泳动,不同组分按淌度大小依次分成不同的分子带。泳动电荷的淌度取决于弱酸的离解程度,也就是说取决于电解质的pH值,以及其它因素。毛细管中的带电离子的浓度必须在每一段都相等,才能使通过毛细管的电流恒定。因此,先行离子的浓度决定了所有后续带中离子的浓度。测定每个带通过电导检测器的时间长度,就得到每个带中样品离子相对于先行离子的电导率,它取决于每种离子的有效浓度。对于给定的pH值和缓冲系统来说,每种化合物的阶梯高度为定值。图11-1 ITP分析示意图(L:前导;T:尾随)二、实验研究1.仪器与试剂1)实验仪器(1)LKB2127型等速电泳仪(瑞典LKB公司生产),配以200×0.5mm聚四氟乙烯毛细管、电导检测器、紫外检测器及记录仪。(2)IP-2A型等速电泳仪(日本岛津公司生产),配以50×1mm、100×0.5mm二级聚四氟乙烯毛细管、电位梯度检测器、紫外检测器及记录仪。(3)pH计(pHS-2型,上海分析仪器厂)。2)主要试剂所有的有机酸(或有机酸盐)标准均为分析纯,L-组氨酸、D,L-组氨酸单盐酸盐为层析纯,2-N-吗啉代乙磺酸(MES)为生化试剂,Triton X-100、HCl/β-丙氨酸为日本产,固体NaOH及盐酸均为分析纯。(1)有机酸标准溶液中各种有机酸均配成0.05mol/L溶液,低温保存备用,按实验要求再配成各种含量的工作液,现用现配。(2)前导电解质溶液有以下两种。①0.01mol/L组氨酸单盐酸盐-组氨酸溶液。称取组氨酸单盐酸盐1.0500g两份,分别溶于1000mL蒸馏水中。在pH计上,用0.01mol/L HCl及组氨酸调节溶液pH至3.3和5.5,分别加100g/L Triton X-100 10 mL,摇匀。②0.01mol/L HCl与β-丙氨酸混合溶液。pH3.6,含0.5g/L Triton X-100。(3)尾随电解质溶液也有两种。①0.005mol/L2-N-吗啉代乙磺酸(MES)溶液:称取MES0.4880g,用蒸馏水溶解后,稀释定容至500mL。②0.01mol/L正己酸溶液。(4)0.01mol/L HCl溶液。(5)1mol/L NaOH溶液。(6)分析纯丙酮、乙醚及无水乙醇。以上溶液均用二次蒸馏水配制。2.实验方法由于油田水的矿化度相当高,给测试带来了很大的困难。高含量的Cl-使得仪器运行时间过长,而且由于大量本底化合物的存在常易超载,达不到分离的目的,需要对高矿化度水样进行预处理。本文应用水相蒸发法,利用无机盐和有机盐在有机溶剂中溶解度的不同除去大量的无机盐类。1)实验步骤取水样10mL,水浴低温蒸发,温度控制在70℃左右,蒸发至盐类大部分结晶析出,取下冷却,加浓盐酸数滴,然后用有机溶剂(乙醇、乙醚、丙酮)洗涤过滤至结晶析出的盐类呈松散粉末状。滤液用1mol/L氢氧化钠调节pH值至8~9,置于70℃恒温水浴中蒸发,待有机溶剂挥发殆尽转至10mL容量瓶中,定容,摇匀。2)毛细管等速电泳法测定使用(a)LKB-2127及(b)IP-2A两台等速电泳仪同时进行测定,用仪器(a)时,分别采用pH值为3.3及5.5的组氨酸盐酸盐/组氨酸-MES体系,测定2~3次后更换新的电解质溶液,以保证电解质的缓冲能力。用仪器(b)时采用盐酸/β-丙氨酸-正己酸体系,每次正负极储液槽都更换新的溶液。对于仪器(a),其峰宽的微分信号用标尺测量,这会带来较大的误差。而仪器(b)则是用配套的数据处理器对峰宽的微分信号进行计算,但微分信号的微小波动也会打出时间数据,干扰记录。由于仪器(b)测定的紫外吸收峰较明显,因而采用两台仪器同时进行定性定量分析。3)分离条件见表11-1。表11-1 毛细管等速电泳分离条件三、结果与讨论1.实验条件的选择实验条件的选择首先是电解质体系的选择,所选择的前导及尾随电解质的迁移率必须分别大于和小于所有待测有机酸的有效迁移率。其次是前导电解质pH值的选择,只有选择了合适的pH值才能使待分离化合物获得最佳分离且本底干扰小。1)电解质体系的选择本文对HCl/β-丙氨酸-MES(A)、HCl/β-丙氨酸-正己酸(B)、组氨酸盐酸盐/组氨酸-MES(C)及组氨酸盐酸盐/组氨酸-正己酸(D)四组电解质体系分别进行了实验,结果发现A、D两组电解质体系均不适用于有机酸的分离,B组电解质体系对二元酸分离效果较佳,草酸阶高低,不易受甲酸的干扰,且苯甲酸阶高位于乙酸和乳酸之间,分离较好,紫外吸收也较明显(图11-2)。C组电解质体系对一元羧酸具有较好的分离效果(图11-3)。2)前导电解质pH值的选择等速电泳过程中的pH值的大小是由前导电解质所控制的,电解质的pH值直接影响着有机酸的解离度,从而决定了有机酸的有效迁移率,即阶梯高度随之变化。实验中对以组氨酸盐酸盐/组氨酸为前导电解质的系统,用组氨酸或0.01mol/L HCl溶液将其pH值调节为2.82、3.00、3.20、3.42、3.63、3.79、4.08、4.17、4.45、5.00、5.50及6.00.在上述pH条件下分别对C1—C8一元羧酸,C2—C4、C6二元羧酸及一个代表性水样(甲酸乙酸之间有多官能团羧酸)进行了测定。图11-4为所选代表性水样在上述pH条件下的几个特征图,图11-5为上述pH值下各酸相对阶梯高度曲线。由图可见,对于油田水样的测定,甲酸乙酸之间多官能团羧酸较多,但未检测出二元羧酸,因而本文选择在pH值为3.3处进行水样分离测定,但在此pH条件下苯甲酸峰位于乙酸之前,不易定量。在pH值为5.5处,C1—C6一元羧酸分离较好,且苯甲酸峰位于乙酸之后,苯甲酸既可定性又有利于定量,所以本实验选用了pH值为3.3及5.5的组氨酸盐酸盐/组氨酸-MES电解质体系。在pH值为3.3时,有机酸只有部分电离,分离效果主要取决于PKa值,在pH值为5.5时,有机酸电离度大于80%,分离效果则主要取决于绝对淌度。3)预处理有机溶剂选择配制含5mol/L的甲酸溶液及相应的人工卤水,溶解后按水相蒸发预处理除Cl,其它按实验方法部分进行测定。采用了不同的有机溶剂进行预处理,测定结果见表11-2。表11-2 不同有机溶剂溶解甲酸的测定结果由结果可见,以丙酮为有机溶剂,回收率96.5%,而乙醚为91.9%,且乙醚毒性及挥发性大,燃点低。用氯仿、乙醇等进行了实验,均未达到要求。故本实验选用丙酮为预处理有机溶剂。图11-2 模拟水样分析谱图(IP-2A)图11-3 C1—C6一元酸标准(LKB-2127)其它各有机酸使用丙酮为有机溶剂的测定结果见表11-3。表11-3 丙酮为有机溶剂时有机酸的测定结果注:加星号者为在LKB上测到的数据。综合上述实验,最后选择了pH值为3.3及5.5的组氨酸盐酸盐/组氨酸-MES、HCl/β丙氨酸-正己酸体系,预处理有机溶剂为丙酮。图11-4 组氨酸盐酸盐/组氨酸体系(LN10井4790~4793m油田水)A—pH值为2.28;B—pH值为3.2;C—pH值为3.63;D—pH值为5.5四、定性分析1.相对阶梯高度在pH值为3.3及5.5组氨酸盐酸盐/组氨酸体系(LKB上测)和HCl/β丙氨酸-正己酸体系(IP-2A仪上)中各有机酸相对乙酸的阶梯高度见表11-4。表中同时给出了相重叠化合物及紫外吸收情况。表11-4 有机酸标准相对阶高注:AC为乙酸。2.定性分析对油田水样采用三个体系及标准共注法进行定性分析。以LN10井4790~4793m油田水为例,图11-6A为pH值为3.3的组氨基盐酸盐/组氨酸-MES体系中该水样乳酸定性情况,图11-6B、6C为pH值为5.5的组氨酸盐酸盐/组氨酸-MES体系该水样苯甲酸定性情况,图11-6D、6E为HCl/β-丙氨酸-正己酸体系该水样苯甲酸定性情况,同时苯甲酸还可观察到紫外吸收。与此类似,对其它各有机酸在三种体系、三种pH值条件下均进行了测定,只在一种体系下存在的酸则排除其存在的可能性。定性结果LN10水样所含有机酸成分为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸及苯甲酸;还有二种未知有机酸,由于标样所限,未能一一检出。图11-5 不同pH值下各酸阶高(1)—甲酸;(2)—乙二酸;(3)—乳酸;(4)—乙酸;(5)—丁二酸;(6)—苯甲酸;(7)一己二酸;(8)—丙酸(9)—丁酸;(10)—丙二酸3.定量分析在pH值为3.3的组氨酸盐酸盐/组氨酸-MES及HCl/β-丙氨酸-正己酸体系分别对1mol/L甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、苯甲酸、乳酸进行10~20次测定,由记录的谱带长度与进样量得到工作曲线。各酸进样量1~20nmol。得到的工作曲线线性较好,相关系数大于0.99。在电解质储备液浓度发生变化时,工作曲线需重新测定。上述分离测定条件同实验方法部分。4.检出限检出限与前导离子浓度C1、毛细管内径及检测器有关: ,r为毛细管内径,l0为检测器可检出的最小区带长度。不同检测器l0不同,电位梯度检测器l0=0.2cm,电导检测器(CD)l0=0.1cm。本实验所用毛细管内径0.5mm,C1=0.01mol/L。PGD检出限:qp=π·(0.5/2)2×0.01×0.2×10=3.90×10-3μmol。CD检出限:qc=π·(0.5/2)2×0.01×0.1×10=1.95×10-3μmol。5.分析方法的精密度和准确度测定1)精密度实验配制含1mmol/L甲酸、3mmol/L乙酸、1mmol/L乳酸、0.5mmol/L苯甲酸、0.5mmol/L丙酸、0.5mmol/L丁酸混合有机酸标准溶液。吸取上述标准溶液10mL,加入NaCl1g、CaCl20.5g及少量MgCl2,待溶解后按水样预处理手续进行分析。此水样Cl-离子浓度约3mol/L,经预处理后Cl-离子浓度为0.1~0.2mol/L。测定结果见表11-5。进样20μL。有机酸标准溶液在实验过程中进样三次,进样量20μL,取其平均值得到标准值。图11-6 LN10井4790~4793m油田水在不同条件下的谱图A—LKB,pH值为3.3;B—LKB,pH值为5.5;C—加入苯甲酸标准,LKB,pH值为5.5;D—IP-2A;E—加入苯甲酸标准,IP-2A测定在pH值为3.3的组氨酸盐酸/组氨酸-MES、HCl/β-丙氨酸-正己酸两体系进行,其它分离条件同实验方法部分。由表11-5可知,测定的相对标准偏差为2.4%~7.6%。2)准确度测定对YM10井埋深4881~4884m的水样进行了四次预处理及分析测定,并进行了加标回收率实验,水样加标经预处理后进行分析测定,结果见表11-6,回收率97%~105%.表11-5 精密度实验表11-6 准确度测定2023-07-14 20:55:451
计算机基础知识
一、计算机发展1956年,晶体管电子计算机诞生了,这是第二代电子计算机。只要几个大一点的柜子就可将它容下,运算速度也大大地提高了。1959年出现的是第三代集成电路计算机。 最初的计算机由约翰·冯·诺依曼发明(那时电脑的计算能力相当于现在的计算器),有三间库房那么大,后逐步发展而成。 从20世纪70年代开始,这是电脑发展的最新阶段。到1976年,由大规模集成电路和超大规模集成电路制成的“克雷一号”,使电脑进入了第四代。超大规模集成电路的发明,使电子计算机不断向着 小型化、微型化、低功耗、智能化、系统化的方向更新换代。 20世纪90年代,电脑向“智能”方向发展,制造出与人脑相似的电脑,可以进行思维、学习、记忆、网络通信等工作。 进入21世纪,电脑更是笔记本化、微型化和专业化,每秒运算速度超过100万次,不但操作简易、价格便宜,而且可以代替人们的部分脑力劳动,甚至在某些方面扩展了人的智能。于是,今天的微型电子计算机就被形象地称做电脑了。 世界上第一台个人电脑由IBM于1980年推出。IBM推出以英特尔的x86的硬体架构及微软公司的MS-DOS操作系统的个人电脑,并制定以PC/AT为PC的规格。之后由英特尔所推出的微处理器以及微软所推出的操作系统发展几乎等同于个人电脑的发展历史。Wintel架构全面取代了IBM在个人电脑主导的地位。二、分类 从计算机的类型、运行方式、构成器件、操作原理、应用状况等划分,计算机有多种分类。 从数据表示来说,计算机可分为数字计算机、模拟计算机以及混合计算机三类; 数字计算机按构成的器件划分,曾有机械计算机和机电计算机,现用的电子计算机,正在研究的光计算机、量子计算机、生物计算机、神经计算机等等。 电子计算机就其规模或系统功能而言,可分为巨型、大型、中型、小型、微型计算机和单片机。 综合起来说,计算机的分类是这样的: (1)按照性能指标分类 ① 巨型机: 高速度、大容量 ② 大型机: 速度快、应用于军事技术科研领域 ③ 小型机: 结构简单、造价低、性能价格比突出 ④ 微型机: 体积小、重量轻、价格低 (2)按照用途分类 ① 专用机: 针对性强、特定服务、专门设计 ② 通用机: 科学计算、数据处理、过程控制解决各类问题 (3)按照原理分类 ① 数字机: 速度快、精度高、自动化、通用性强 ② 模拟机: 用模拟量作为运算量,速度快、精度差 ③ 混合机: 集中前两者优点、避免其缺点,处于发展阶段三、计算机系统的基本组成 不论何种计算机,它们都是由硬件和软件所组成,两者是不可分割的。人们把没有安装任何软件的计算机称为裸机。 硬件 ①存储器。 ②中央处理器--控制器和运算器 ③外部设备--I/O设备 软件 计算机的软件系统可分为系统软件和应用软件两部分。计算机软件系统包括: ①操作系统 ②数据库管理系统 ③编译系统 ④网络系统 ⑤标准程序库 ⑥服务性程序四、硬件系统的组成及各个部件的主要功能硬件 计算机系统中所使用的电子线路和物理设备,是看得见、摸得着的实体,如中央处理器( CPU )、存储器、外部设备(输入输出设备、I/O设备)及总线等。 ①存储器。主要功能是存放程序和数据,程序是计算机操作的依据,数据是计算机操作的对象。存储器是由存储体、地址译码器、读写控制电路、地址总线和数据总线组成。能由中央处理器直接随机存取指令和数据的存储器称为主存储器,磁盘、磁带、光盘等大容量存储器称为外存储器(或辅助存储器) 。由主存储器、外部存储器和相应的软件,组成计算机的存储系统。 ②中央处理器的主要功能是根据存储器内的程序 ,逐条地执行程序所指定的操作。中央处理器的主要组成部分是:数据寄存器、指令寄存器、指令译码器、算术逻辑部件、操作控制器、程序计数器(指令地址计数器 )、地址寄存器等。 ③外部设备是用户与机器之间的桥梁。输入设备的任务是把用户要求计算机处理的数据、字符、文字、图形和程序等各种形式的信息转换为计算机所能接受的编码形式存入到计算机内。输出设备的任务是把计算机的处理结果以用户需要的形式(如屏幕显示、文字打印、图形图表、语言音响等)输出。输入输出接口是外部设备与中央处理器之间的缓冲装置,负责电气性能的匹配和信息格式的转换。五、数值在计算机中的表示形式详细介绍见:http://www.scutde.net/t10courses/1007-fboljfdmjh/page/c010301.html六、常用外部设备键盘、鼠标、显示器、打印机七、什么是CPUCPU是中央处理单元(Central Process Unit)的缩写,它可以被简称做微处理器。(Microprocessor),不过经常被人们直接称为处理器(processor)。不要因为这些简称而忽视它的作用,CPU是计算机的核心,其重要性好比心脏对于人一样。实际上,处理器的作用和大脑更相似,因为它负责处理、运算计算机内部的所有数据,而主板芯片组则更像是心脏,它控制着数据的交换。CPU的种类决定了你使用的操作系统和相应的软件。CPU主要由运算器、控制器、寄存器组和内部总线等构成,是PC的核心,再配上储存器、输入/输出接口和系统总线组成为完整的PC。 CPU的基本结构、功能及参数CPU主要由运算器、控制器、寄存器组和内部总线等构成。寄存器组用于在指令执行过后存放操作数和中间数据,由运算器完成指令所规定的运算及操作。八、内存的概念在计算机的组成结构中,有一个很重要的部分,就是存储器。存储器是用来存储程序和数据的部件,对于计算机来说,有了存储器,才有记忆功能,才能保证正常工作。存储器的种类很多,按其用途可分为主存储器和辅助存储器,主存储器又称内存储器(简称内存,港台称之为记忆体)。 内存是电脑中的主要部件,它是相对于外存而言的。我们平常使用的程序,如Windows操作系统、打字软件、游戏软件等,一般都是安装在硬盘等外存上的,但仅此是不能使用其功能的,必须把它们调入内存中运行,才能真正使用其功能,我们平时输入一段文字,或玩一个游戏,其实都是在内存中进行的。通常我们把要永久保存的、大量的数据存储在外存上,而把一些临时的或少量的数据和程序放在内存上,当然内存的好坏会直接影响电脑的运行速度。九、微处理器的概念中央处理器是指计算机内部对数据进行处理并对处理过程进行控制的部件,伴随着大规模集成电路技术的迅速发展,芯片集成密度越来越高,CPU可以集成在一个半导体芯片上,这种具有中央处理器功能的大规模集成电路器件,被统称为“微处理器”。 十、计算机安全常识这个网页介绍的很详细:http://blog.sina.com.cn/s/blog_50f2eab10100cigq.html有一些可能总结的不到位。如果你要考三级PC,那多做些题。2023-07-14 20:55:565
硬盘怎么看是物理坏道?
硬盘出现坏道,怎样辨别是物理坏道还是软件坏道? 当提示你的硬盘可能有坏道的时候,你可以使用WINDOWS自带的磁盘扫描程序扫描磁盘,如果错误被修复说明你的硬盘出现的是逻辑坏道,如果不能修复,说明你的磁盘可能出现了物理坏道,如果出现物理坏道,最好的办法是将硬盘低级格式化,硬盘在低级格式化的时候会自动修复硬盘错误,如果出现物理坏道,他会将坏道隐藏,以保证在读写磁盘的时候跳过出现物理坏道的磁盘区域,但做硬盘低级格式化的后果是磁盘上的所有数据都会被清空,而且是不可逆的。一般出现无法修复的逻辑坏道可以高级格式化磁盘,这样可以修复磁盘错误,但高级格式化也会删除磁盘数据,所以格式化之前请备份重要文件,当然你也可以找一些专业的软件来修复硬盘错误,比如诺顿的磁盘医生等软件,虽然用这些软件可以在不丢失磁盘数据的基础上修复磁盘错误抚但有的时候可能无法修复一些疑难的磁盘问题。当磁盘出现错误的时候,选择什么样的修复手段就要看实际的情况了。 怎么判断硬盘的坏道是逻辑坏道还是物理坏道? 1.硬盘的坏道分为物理坏道和逻辑坏道两种:物理坏道 是指硬盘物理盘片表面发生了严重的损坏而形成的坏道, 这种坏道是硬性损伤,一般无法修复。物理坏道也有软性的,它的形成足由于外界影响而造成数据写入错误时,系统 会认为是物理坏道,但这种坏道是可以修复的;逻辑坏道通 常是指硬盘在写入数据时受到意外干扰,造成ECC(Error checking and cor—recting)错误。从过程上讲,硬盘在写入数 据时会用ECC的逻辑重新组合这些数据,一般lkb的空间 要写入512个字节,但实际上硬盘会多写出几十个字节,而 且所有的这些字节都要用ECC进行校验码。如果原始字节 算出的ECC校验码和从硬盘读取数据时读出字节算出的 ECC校验码不同,就会产生ECC错误,从而也就产生了逻 辑坏道。 硬盘出现坏道后,无论是物理坏道还是逻辑坏道,其故 障表现是极其相似的:开机后不能正常进入操作系统,而是 出现了scandisk,对盘面进行自动扫描,按ESC键取消后,可 以进入操作系统:开机后,可以看到硬盘盘符但无法正常访 问,在BIOS中反复设置均无效果;在读取某些文件或运行 某个软件时会经常出错,处理速度变慢,要经过很长时间才 能操作成功:硬盘磁头不能正常寻道导致读盘时发出刺耳 的杂音;正常使用电脑时无故频繁出现蓝屏u22efu22ef。凡是出现上述表现之一者,说明硬盘巳出现了坏道,但对于属哪一种 坏道,则要进行进一步判断。 2判断硬盘坏道类型及修复 首先用windows自带的磁盘扫描程序判断硬盘坏道究 竟属于哪一种类型。在能够正常进入windows的情况下,可 以通过选择 开始一程序一附件一系统工具一磁盘扫描程 序 对硬盘作完全扫描,并且对可能出现的坏道做自动修 正:如果不能进入windows,就用windows启动盘启动计算 机,执行scandisk x:命令(x指具体盘符)对硬盘进行扫描 和修复。如果在扫描过程中坏点能被修复,说明是逻辑坏 道,若是不能修复,那也只能暂时且认为它是物理坏道,因 为简单的磁盘扫描工具对于严重的逻辑坏道同样是无能为 力的,有必要进行下一步判断。 第二步,采用专用硬盘检测工具来测硬盘的坏道属于 哪一种类型。一般各硬盘厂商都相继推出了旨在检测自己 品牌硬盘的硬盘工具,这些工具有相当强的针对性,可以准 确地对自己的品牌硬盘的状态做出判断。仪以西部数据的 WD Data Lifeguard Tools为例,此款程序全是西部数据公 司针对WD硬盘推出的配套工具,它将程序自解压到一张 软盘上,只须通过此软盘来启动系统即可诊断WD硬盘。解激 压缩后,软盘中含有23个文件,一般只用WD的硬盘测试 与低级格式化程序。它能够为用户全面检测硬盘,包括简洁 的快速检测与详尽的全面检测,并且能修复检测中发现的 错误和打印检测报告,同时它还能进行硬盘的低级格式化。 运用该工具盘启动将出现Diag—nostics程序的画面 (注意:如果在硬盘上直接运行有可能会造成硬盘数据的 丢失或者扫描错误等结果),在界面中直接选择 Select Driv 项查看硬盘列表,用键盘上的上下箭头选择需要检测的硬盘,确定即可。千万注意不要在程序主菜单上选择 te Zeros to Drive(低格硬盘)项,程序对硬盘的检测结束后可 能会有以下几种结果: 一Drive Has No Errors"-表示所检测的硬盘没有错误; 一Co.ntact WD Tech Support 一表示所检测的硬盘没有通 过检测,但可以寻求WD厂商的技术支持; 一Non......>> 硬盘坏道怎么判断是物理坏道还是逻辑坏道? 有坏道且无法修复,说明是物理坏道! 逻辑坏道是由于非正常关机等软件问题引起的,一般可以通过格式化等方法加以去除;而物理坏道则是因盘体受到冲击、灰尘等原因而受到了屋里损坏,物理坏道通过一般方法是无法修复的。一旦发现硬盘出现坏道,备份数据,赶紧去修。如果情况不是特别严重,可以用Partit Magic 对硬盘进行处理。基本思路是将有坏道的区域划分在一个分区中,然后将此坏分区隐藏起来。具体方法是将Partit Magic的DOS版拷在软盘上,用Windows XP启动盘引导系统,运行软盘上的PQ,然后Operations菜单下的"check"命令来扫描硬盘,标记坏处,在把坏处集中到一个分区,通过Hide Partition 菜单项把含有坏道的分区隐藏。也就是说无法从根本上修复坏道,只能隐藏,让它不影响电脑的运行。 最后强调一句,硬盘一旦出现坏道,一般预示著硬盘的寿命将到极限,赶紧更换最好! 怎么查看硬盘是物理坏道还是逻辑坏道 硬盘出现坏道除了硬盘本身质量以及老化的原因外,还有很大程度上是由于平时使用不当造成的。 硬盘的坏道共分两种:逻辑坏道和物理坏道。 逻辑坏道为软坏道,大多是软件的操作和使用不当造成的,可以用软件进行修复。 物理坏道为真正的物理性坏道,是硬盘盘片本身的磁介质出现问题,例如盘片有物理损伤,大都无法用软件进行修复,只能通过改变硬盘分区或扇区的使用情况来解决。 如果你的硬盘一旦出现下列这些现象时,你就该注意硬盘是否已经出现了坏道: (1)在读取某一文件或运行某一程序时,硬盘反复读盘且出错,提示文件损坏、“无法读取或无法写入文件”等信息,或者要经过很长时间才能成功;有时甚至会出现蓝屏等; (2)硬盘声音突然由原来正常的摩擦音变成了怪音; (3)在排除病毒感染的情况下系统无法正常启动,用SYS命令传导系统也不能成功,出现“Sector not found”或“General error in reading drive C”等提示信息; (4)Format硬盘时,到某一进度停止不前,最后报错,无法完成; (5)每次系统开机都会自动运行Scandisk扫描磁盘错误;或硬盘扫描时出现红色的“B”的标记。 (6)对硬盘执行FDISK时,到某一进度会反复进进退退 。 逻辑坏道低格就可以修复,物理坏道哪里都修复不了,只能屏蔽,一般硬盘自己就可以屏蔽,用预留区域更换坏道区域。修复软件只能是加快这一过程,一般用MHDD,HDDreg等可以全面扫描检测,有一部分可以修复,另一部分屏蔽,这部分根据硬盘型号也是有限度的,超过了就修复不了,就得自己手分区动屏蔽。 硬盘出现坏道,怎么区分是物理坏道还是逻辑坏道? 逻辑坏道低格就可以修复, 物理坏道哪里都修复不了,只能屏蔽, 一般硬盘自己就可以屏蔽,用预留区域更换坏道区域 修复软件只能是加快这一过程,一般用MHDD,HDDreg等可以全面扫描检测, 有一部分可以修复,另一部分屏蔽,这部分根据硬盘型号也是有限度的,超过了就修复不了, 就得自己手分区动屏蔽。 硬盘出现物理坏道该怎么修 对于物理坏道而言,普通用户根本无法修复,我们惟一可以做的就是利用一些磁盘软件将其单独分为一个区并隐藏起来,让磁头不再去读它,这样可在一定程度上延长硬盘使用寿命。需要特别强调的是,使用有坏道的硬盘时,一定要时刻做好数据备份工作,因为硬盘上出现了一个坏道之后,更多的坏道会接踵而来。 (1)通过Disk Genius屏敝硬盘物理坏道 从网上下载Disk Genius后,根据前面讲述的方法,制作一张系统启动软盘,然后将下载得到的压缩包解压缩,将Disk Genius的主程序“Diskgen.exe”复制到该软盘上。当然,如果没有软盘,也可以将该软件存放在硬盘或其他介质中。 用该软盘启动电脑,在提示符下输入“Diskgen”命令并回车,便可启动该程序。进入程序主界面后,按下Alt键激活功能菜单,选择“工具→硬盘表面检测”菜单命令。此时系统会显示“测试当前分区硬盘表面?坏扇区清单将保存到BACDSECT.TXT中”提示,选择“扫描”并回车,此时会出现扫描方式选择对话框,其扫描方式分别为:按扇区扫描、按磁道扫描和按柱面扫描,建议选择“按扇区”选项。单击“按扇区”选项进行扫描之后,会出现扫描进程对话框,扫描到坏道时会发出“咯滋、咯绩”的声响。完成之后,会出现一个是否有坏扇区、共有几个坏扇区的提示信息。 重新启动Windows,将硬盘上的数据全部备份到其他介质中,然后打开软盘中的BACDSECT.TXT文件,在这个文件中详细地记录了刚才扫描的结果,用笔记录下来,在下面的操作中我们将用到这些信息。 重新用软盘启动电脑,在提示符下输入“Diskgen”命令并回车,进入程序主界面,按下Alt键激活功能菜单,选择“分区→删除分区”菜单命令,将原有分区全部删除。然后选择“分区→新建分区”(或建扩展分区)菜单命令,根据BADSECT.TXT文件所记录下的坏扇区位置,把坏扇区前后10~20MB的空间单独划分为一个区(这样做是为了给坏道扩散预留一部分空间)。 注意:分区操作过程中,如果有误,该软件提供有“重新加载”命令,可以把硬盘恢复到初始分区状态。因为这个软件在存盘之前的所有操作都只是保存在内存中,所以你可以用多次分区的方法把包含坏道的分区的大小控制在指定的范围之内。 最后,按下Alt键激活功能菜单,按下Tab键选中包含坏扇区的分区,选择“分区→隐藏”菜单命令,即可将包含坏道的分区隐藏起来。 怎么确定我的硬盘是逻辑坏道还是物理坏道 硬盘是电脑极重要的一部分,所有的资料和数据都会保存在硬盘中,一旦硬盘出现错误,有时数据的损失会比整个电脑报废的损失还要大。不过,作为电脑的硬件之一,许多人总以为硬盘轻易不容易损坏,一旦坏了就是不能启动的情况,还有人认为坏道是很容易识别的,发现了用什么磁盘医生之类的软件修理就行了,再不行就低格吧!其实硬盘坏道,几乎可以称为硬盘的致命伤。笔者见识过许多因为延误时机,自己乱用各种软件修理,最后把偌大个硬盘整成一块废铁的例子。 修理硬盘坏道 对于逻辑坏道,我们可以修复,对于物理坏道,我们应采用隔离的办法,以最大程度减少损失,防止坏道进一步扩散为目标。我见过有些人在报纸上吹说用某个特殊软件能修理物理坏道,最要命的是许多人对低格硬盘的迷信,实在是误人之语。所谓低级格式化,指的是将空白的磁盘划分出柱面和磁道,然后再将磁道划分为若干个扇区,每个扇区又划分出标识部分ID、间隔区GAP和数据区DATA等。低级格式化只能在DOS环境下完成,而且只能针对—块硬盘而不能支持单独的某一个分区。有些坏磁道和坏扇区能够通过低级格式化来修复,但对于真正的硬盘磁盘表面物理划伤则无法进行修复,这只有通过各种办法标出坏扇区的位置,以便让操作系统不去使用,以防止扩大坏道进而延长硬盘使用。特别想强调,低级格式化是一种损耗性操作,对硬盘的寿命有一定的负面影响,所以,如无必要,用户们尽量不要低级格式化硬盘。 对于逻辑坏道,一般情况下我们用操作系统自带的工具和一些专门的硬盘检查工具就能发现并修复。如:Windows自带的Scandisk磁盘扫描程序就是发现硬盘逻辑坏道最常用的工具,而我们常见的Format命令不能对任何硬盘坏道起到修补作用,这点大家要明白。我们可在Windows系统环境下,在“我的电脑”中选中要处理的硬盘盘符,选择其“属性”,在出现的“工具”按钮中选择“查错状态”,再在“扫描类型”中选“全面检查”,并将“自动修复错误”打上“勾”,然后“开始”即可。如果系统在启动时不进行磁盘扫描或已不能进入Windows系统,我们也可用软盘或光盘启动盘启动电脑后,在相应的盘符下,如“A:”下运行Scandisk *:(注:*为要扫描的硬盘盘符),回车后来对相应需要扫描修复的硬盘分区进行修理。 但是,如果是硬盘物理坏道,那么千万千万记住不要试图用这些方法来修复,相反用各种工具反复扫描,就是对硬盘的物理坏区强制进行多次读写,必然会使坏道变多,进而扩散,正确的方法是用下面的方法果断地把已有坏道的地方隔离开。这是一种很无奈的办法,但是一个20G的硬盘,如果因为坏道,屏蔽了15G,总还有5G空间可用,如果不这样做,最后的结果是整个硬盘全部报废。 方法一:用PartitionMagic等磁盘软件完成工作 如 PartitionMagic分区软件,先用PartitionMagic4中的“check”命令或Windows中的磁盘扫描程序来扫描磁盘,算出坏簇在硬盘上的位置,然后在Operation菜单下选择“Advanced/badSectorRetest”,把坏簇所在硬盘分成多个区后,再把坏簇所在的分区隐藏,以免在Windows中误操作,这个功能是通过HidePartition菜单项来实现的。这样也能保证有严重坏道的硬盘的正常使用,并免除系统频繁地去读写坏道从而扩展坏道的面积。但是这需要对这些软件熟悉,并且有计算硬盘的经验,许多人并不容易做到准确。 方法二:用FDISK和格式化命令FORMAT 具体的方法是这样的,第一要搞清硬盘的容量,对于有问题的磁盘先用Fdisk分成一个......>> 怎么查看硬盘坏道 硬盘坏道分为逻辑坏道和物理坏道两种,前者为逻辑性故障,通常为软件操作或使用不当造成的,可利用软件修复;后者为物理性故障,表明您的硬盘磁道产生了物理损伤,只能通过更改或隐藏硬盘扇区来解决。 1. 逻辑坏道的修复 对于逻辑坏道,Windows自带的“磁盘扫描程序(Scandisk)”就是最简便常用的解决手段。如果硬盘出现了坏道,我们可在Windows系统环境下运行“磁盘扫描程序”,它将对硬盘盘面做完全扫描处理,并且对可能出现的坏簇做自动修正。 除了Scandisk之外,还有很多优秀的第三方修复工具,如诺顿磁盘医生NDD(Norton Disk Doctor)及PCTOOLS等也是修复硬盘逻辑坏道的好帮手。 NDD的界面如图1所示,选择好要处理的分区后再选中“自动修复错误”,点击“诊断”即可。经过一系列对“分区表”、“引导记录”、“文件结构”和“目录结构”的诊断以及“表面测试”之后(如图2),它会自动给出一份诊断统计报告(如图3),让您对硬盘的“健康”状况胸有成竹。 NDD 2001汉化版下载地址: diyup/WEB/SYSTEM/TOOLS/NDD2001.EXE 此外,各硬盘厂商推出的针对本厂硬盘系列的特定DiskManager程序,更熟悉硬盘本身的电路结构和固化程序,也更容易修复硬盘错误。因此建议大家都去下载一份自己厂商的专用Disk Manager程序,更方便修复您自己的硬盘。 2. 物理坏道的隔离 对于硬盘上出现的无法修复的坏簇或物理坏道,我们可利用一些磁盘软件将其单独分为一个区并隐藏起来,让磁头不再去读它,这样可在一定程度上令您的硬盘延长使用寿命。需要特别强调的是,使用有坏道的硬盘时,一定要时刻做好数据备份工作,因为硬盘上出现了一个坏道之后,更多的坏道会接踵而来,让您面对荡然无存的资料库欲哭无泪。 修复这种错误最简单的工具是Windows系统自带的Fdisk。如果硬盘存在物理坏道,通过前面介绍的Scandisk和NDD我们就可以估计出坏道大致所处位置,然后利用Fdisk分区时为这些坏道分别单独划出逻辑分区,所有分区步骤完成后再把含有坏道的逻辑分区删除掉,余下的就是没有坏道的好盘了。 用PartitionMagic、DiskManager等磁盘软件也可完成这样的工作。如PartitionMagic分区软件(如图4),先选择硬盘分区,用“操作”菜单中的“检查错误”命令扫描磁盘,算出坏簇在硬盘上的位置,然后在“操作”菜单下选择“高级/坏扇区重新测试”;把坏簇所在硬盘分成多个区后,再利用“操作”菜单下选择“高级/隐藏分区”把坏簇所在的分区隐藏。这样也能保证有严重坏道的硬盘的正常使用,并免除系统频繁地去读写坏道从而扩展坏道的面积PowerQuest PartitionMagic Pro v7.0简装汉化版下载地址: ......>> 硬盘的逻辑坏道和物理坏道是什么? 逻辑坏道 这是日常使用中最常见的硬盘故障,实际上是磁盘磁道上面的校验信息(ECC)跟磁道的数据和伺服信息对不上号。出现这一故障的原因,通常都是因为一些程序的错误操作或是该处扇区的磁介质开始出现不稳定的先兆。一般在操作中的表现就是文件存取时出错,或者硬盘克隆的时候到了出错的地方就弹出出错信息,不能再继续下去。消除这些逻辑坏道的方法其实比较简单,最常用的方法就是用系统的磁盘扫描功能。在DOS下面场Scandisk扫描,系统可以把逻辑出错的扇区标出来,以后在进行存取操作时就会避免操作这些扇区。当然,如果单单是软件的错误操作造成的,也可以用原厂的工具进行全盘低格来重新恢复所有有逻辑错误的地方。也有的人利用HDD Regenerator、效率源之类的软件消除扇区错误,重新激活这个扇区。不过对于那些因为是该扇区的磁介质不稳定造成的错误,这里还是不推荐使用重新激活的方式,以免在储存了重要信息后再次出错。 物理坏道 这个也是比较常见的硬盘故障,实际上是因为震荡、划伤等原因导致一些扇区的磁介质失去磁记忆能力而造成的。通常这样的损坏修复都比较麻烦,因为在硬盘内部的磁道列表中,这个扇区是被标记为正常的,是真实的物理存在,所以它不能通过扫描、格式化、低级格式化或者激活扇区的方法消除,而必须把这个扇区加入到设置在硬盘内部的系统保留区内,由工厂设置的缺陷列表(G列表和P列表)中去,才能在硬盘控制系统的可见范围内消除这个坏道。当然,这样做需要专门的软件(目前能够比较容易找到,而且已经经过长时间市场实践检验的就是PC-3000),价格也非常高,如果大家想要这样做,只能找具有这样设备的专门维修商来修理了。对普通用户的价格大概是每个硬盘100~150元,是否值得就让大家自己考虑了。 不过,这里有必要提醒大家一下,请多多关注各大硬盘厂商的网站,有些厂商提供的原厂工具也可以对少量物理坏道进行处理,把它们加入G列表甚至P列表。譬如IBM/日立的DFT和西部数据的Data LifeGuard Diagnostics。这些原厂的工具软件都是作为向购买该厂硬盘的消费者提供的售后服务而免费提供的,不但扫描速度快,而且辨别准确率高,能够对比较普遍出现的硬盘问题作出相应的处理。对硬盘内部进行操作毕竟是比较危险的,还是原厂的东西比较可靠。除非碰上原厂工具不能解决的问题,否则不推荐大家使用第三方工具软件2023-07-14 20:56:131
怎么判断硬盘的坏道是逻辑坏道还是物理坏道?
买个心得算了2023-07-14 20:56:236
qq宠物乐扣贝在哪弄?
开宝藏图2023-07-14 20:57:0116
在表示存储器的容量时,如果用1MB作为单位,其准确的含义是( )。
【答案】:D存储容量以字节为基本单位,一个字节(B)为8位二进制代码;更大的单位依次是KB、MB、GB,它们之间的换算率都是1 024;即lKB=1 0248,1MB=1 024KB,IGB=1 024MB。2023-07-14 20:57:361
在表示存储器的容量时,如果用1MB作为单位,其准确的含义是( )。A.1 024BB.1 024TB
【答案】:D存储容量以字节为基本单位,一个字节(B)为8位二进制代码;更大的单位依次是KB、MB、GB,它们之间的换算率都是1024;即lKB=10248,1MB=1024KB,IGB=1024MB。2023-07-14 20:57:431
根据汉字国标GB2312-80的规定,lKB存储容量可以存储汉字的内码个数是 .
【答案】:B一个汉字等于28,也就是说,1KB=10248,所以可以放512个。2023-07-14 20:57:501
联想电脑330C-14lKB 如何增加固态硬盘?
目前主流的M2和sata这两种接口。1、SATA接口时常备接口,在没有M2接口的时候,选择更换硬盘。2、如果双接口都有的话,选择一个容量小的更换。希望可以帮到你 。2023-07-14 20:57:591
lkb等于多少MB
1MB = 10241Byte = 8bit1/1024*8 = 0.00012207031252023-07-14 20:58:082
联想110-15lkbbios默认设置
IntegratedPeripherals。根据百度百科查询得知:开机按“Del”键,进入主板BIOS设置。用↑,↓箭头移动到IntegratedPeripherals(综合外部设备设置),回车即可。2023-07-14 20:58:151
lenovo TianYⅰ310-15lkb电脑怎么拆后盖
联想一体机电脑拆机,1.首先拆下一体机固定底座支架螺丝。2.然后拆下后盖四周螺丝,检查后盖螺丝,确定拆完后,3.把后盖塑料外壳用工具延四周边框慢慢撬开后盖,4.注意:力度要把握恰到好处,不要把后壳弄破损。5.最好是由电脑维修人员进行拆机操作!2023-07-14 20:58:241
RJ,SJ,LKB分别是教科书的什么版本
人民教育也就是人教版江苏教育也就是苏教还有一个真的不知道。。2023-07-14 20:58:321
二进制数100100.11011转换为十六进制数是?求3,4,8,9题答案 谢谢拉
3.采用补码表示到8位二进制数真值范围是(c):-128~+127。4.小写字母d的ASCII码值是(c):100。8.二进制数100100.11011转换为十六进制数是(a):24.D8。9.下列等式中正确的是(c):LKB=1024B。2023-07-14 20:58:411
一个字节是用8位二进制数表示为什么是8个?
麻.烦`采纳^·.·`··.·.2023-07-14 20:59:013
QQ宠物如何简单获得大量乐贝扣
乐扣贝获得途径 免费版: 1.许愿树许愿 旧版有几率获得2个/5个/10个 新版未知 2.嘉年华游戏,跨栏 20YB有机会得到1个,50YB有机会得到2个 由于跨栏赢的几率比较小,即使花了元宝也无法保证能胜利,且很多时候活动物品价值不及元宝高,不推荐 3.守农仓(免费版),仅二,三关有 第二关 100元宝+2乐扣贝 第三关 150元宝+4乐扣贝 4.吹气球 免费组:(免费一共四种奖励,因此只要吹了气球就有) LKB*1+蓝宝石*2+冰淇淋+宝宝金水 LKB*3+黄宝石*4+强力电吹风+下岛咖啡 LKB*4+冰红茶+青松茶笋+含香凝露 LKB*3+黄宝石*2+漂漂孔雀果+柠檬洗面奶 5.送信 随机得到5元宝/10元宝/20元宝/30元宝/乐扣贝*1+一点积分 每两点成长可送信一次,注意不累积成长 6.南瓜VS番茄 使用二个乐扣贝PK,输了有几率得到LKB*1 赢了有几率得到一个小礼包,包括挚爱蛋糕*1,乐扣贝*2,营养元宵*1,圈圈冰淇淋*1 使用一个红宝石PK,一般都会赢 得到奖励请见楼上[红宝石使用方法] 7.家园状态:玩耍 较大几率获得LKB*1 8.开油桶 每天免费找监狱猫,开一次油桶有机会活动LKB*52023-07-14 20:59:081
excel读取导入网页上的json数据
可以写软件给你弄2023-07-14 20:59:183
电泳法测电位时应注意什么?
上样前冲去上样空底部未聚合的丙稀酰胺,否则电泳过程中会发生聚合; 2.现在有商品化的等电聚焦凝胶,但只限于水平平板电泳系统(如Pharmmacia-LKB,Hoefer)...2023-07-14 20:59:322
DNA测序技术的操作
成功地使用银染测序系统需要对提供的操作方法进行仔细考虑。银染不如放射性检测法灵敏,而需要更多的模板量,此外,也不可能通过延长X-光胶片曝光时间的方法增加信号强度。因此,请使用推荐的DNA模板量, 每次均使用所提供的对照检查系统的可靠性,并且注意如下几点:(1) DNA的浓度和纯度必须经过琼脂糖凝胶电泳或荧光法测定, 样品应与已知量DNA一起电泳。(2) 分光光度法对于很多DNA提取物包括质粒小量制备来说,并不能给出一个可信的DNA浓度估计,混杂的染色体DNA、蛋白、RNA、有机物及无机化合物均可能有260 nm光吸收。因此,分光光度法常常错误地高估DNA浓度。 (3) DNA制备过程中用核糖核酸酶处理所产生核糖核苷酸,虽然它们在电泳后DNA样品的前面,并不能观察到,但它们仍会有260nm光吸收。 1. 对于每组测序反应,标记四个0.5ml eppendorf管(G、A、T、C)。每管加入2ml适当的d/ddNTP混合物(d/ddNTP Mix)。各加入1滴(约20ml)矿物油,盖上盖子保存于冰上或4℃备用。2. 对于每组四个测序反应,在一个eppendorf管中混合以下试剂:(1) 样品反应:质粒模板DNA 2.1pmol5×测序缓冲液 5ml引物 4.5pmol无菌ddH2O 至终体积16ml(2)对照反应pGEM-3Zf(+)对照DNA(4mg) 4.0ml5×测序缓冲液 5mlpUC/M13正向引物(4.5pmol) 3.6ml无菌ddH2 O 至终体积 16 ml3. 在引物/模板混合物(以上第2步)中加入1.0ml测序级Taq DNA聚合酶(5u/ml)。用吸液器吸动几次混匀。4. 从第3步的酶/引物/模板混合物中吸取4ml加入每一个d/ddNTP混合物的管内。5. 在微量离心机中离心一下,使所有的溶液位于eppendorf管底部。6. 把反应管放入预热至95℃的热循环仪,以[注意]中循环模式为基准,开始循环程序。对于每个引物/模板组合都必须选择最佳退火温度。下列程序一般能读出从引物开始350碱基的长度。7. 热循环程序完成后,在每个小管内加入3μl DNA测序终止溶液,在微量离心机中略一旋转,终止反应。[注意] 1、测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入:模板种类/长度 模板量200bp (PCR产物) 16ng(120fmol)3000-5000bp(超螺旋质粒DNA) 4mg (2pmol)48000bp(λ,粘粒DNA) 1mg(31fmol)由于超螺旋质粒产生的信号比松弛的线性双链DNA弱,因此使用超螺旋质粒作为模板时其用量要比其它模板大一些。2、计算与4.5pmol相当的引物纳克数可用以下一般公式:4.5pmol=1.5ng×n,其中n为引物碱基数计算与1pmol相当的引物微克数可用以下一般公式:dsDNA:1pmol=(6.6×10-4 mg)×n,其中n为模板碱基对数ssDNA:1pmol=(3.3×10-4 mg)×n,其中n为模板碱基数3、为阻止Taq DNA聚合酶延伸非特异性退火引物, 热循环仪必须预热至95℃。温度变换应越快越好。下面的循环时间不包括变温时间。如果你无法确定使用何种模式,建议从模式1开始。模式1:适用于引物<24碱基或GC含量<50%95℃ 2分钟。然后: 95℃ 30秒(变性), 42℃ 30秒(退火), 70℃ 1分钟(延伸)。模式2:适用于≥24碱基或略短的GC含量≥50%的引物。95℃ 2分钟, 然后: 95℃ 30秒(变性), 70℃ 30秒(退火/延伸)。 4. 在加入终止溶液之后样品可在4℃保存过夜。 玻璃板的处理银染测序的玻璃板一定要非常清洁,一般先用温水和去污剂洗涤,再用去离子水冲洗玻璃板,除去残留的去污剂,最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高(棕色)。短玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重要。短玻璃板的处理A. 在1ml 95%乙醇, 0.5%冰乙酸中加入5ml粘合硅烷(Bind Silane), 配成新鲜的粘合溶液。B. 用经浸透新配的粘合溶液浸透的吸水棉纸擦拭仔细清洗过并已经自然干燥的玻璃板, 整个板面都必须擦拭。C. 4-5分钟后, 用95%乙醇单向擦玻璃板, 然后略用力沿垂直方向擦拭。重复三次这一清洗过程, 每次均须换用干净的纸, 除去多余的粘合溶液。[注意] 1. 在95%乙醇单向擦玻璃板时过度用力会带走过多的粘合硅烷, 使凝胶不能很好地粘附。2. 准备长玻璃板之前要更换手套,防止粘染粘合硅烷。3、防止粘合溶液沾染在长玻璃板上是很重要的, 否则将导致凝胶撕裂。长玻璃板的处理A. 用浸透Sigmacote溶液的棉纸擦拭清洗过的长玻璃板。B. 5-10分钟后用吸水棉纸擦拭玻璃板以除去多余的Sigmacote溶液。[注意] 1. 用过的凝胶可在水中浸泡后用剃须刀片或塑料刮刀刮去。玻璃板须用去污剂完全清洗。或者凝胶用10% NaOH浸泡后除去。为防止交叉污染, 用于清洗短玻璃板的工具必须与清洗长玻璃板的工具分开, 如果出现交叉污染, 以后制备的凝胶可能撕裂或变得松弛。凝胶的制备(1)玻璃板经粘合硅胶和Sigmacote处理后,即可固定玻璃板。该方法是用0.2mm或0.4mm厚的边条置于玻璃板左右两侧,将另一块玻璃板压于其上。在长玻璃板的一侧插入鲨鱼齿梳平的一面边缘,用夹子固定住。(2)根据所需要的凝胶浓度,按下表制备测序凝胶,一般6%-8%的胶浓度可获得较好的结果。配制过程中,先用适量双蒸水溶解尿素,再加入 Acr&Bis和10×TBE缓冲液,再用双蒸水调终体积至99.2ml,并用0.45mm的滤膜过滤,然后加过硫酸铵和TEMED。溶解尿素时不必加热。如果确需加热则应等溶液完全冷却后,方可加入TEMED和过硫酸铵。一般在胶灌制后4-6分钟,即开始聚合,如果聚合不好,则应使用高浓度的 TEMED和过硫酸铵。凝胶终浓度3 4 5 6 8 12 16 18尿素(g) 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0Acr&Bis(ml) 7.5 10.0 12.0 14.5 20.0 30.0 40.0 50.010×TBE缓冲液(ml) 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0双蒸水(ml) 47.5 45.0 43.0 40.5 35.0 25.0 15.0 5.010%过硫酸铵(ml) 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.7 0.7TEMED(ml) 87 80 80 80 80 70 47 40(3)胶配制好后,即可灌制胶板。一般是将凝胶沿着压条边缘缓慢地倒入玻璃板的槽中,倒完后,静止放置使之聚合完全。[注意] 1、使用夹子固定玻璃板时,最好夹子的力量稍大一些,防止因力量不足使灌胶的过程中出现漏胶液现象。2、灌制凝胶的过程中要严防产生气泡,否则影响测序的结果。 预电泳(1)当凝胶聚合完全后,拨出鲨鱼齿梳,将该梳子反过来,把有齿的一头插入凝胶中,形成加样孔。(2)立即将胶板固定在测序凝胶槽中,一般测序凝胶槽的上下槽是分开的,因而只有在固定好凝胶板后,方能加入TBE缓冲液。(3)稀释10×TBE缓冲液至1×TBE,将该缓冲液加入上下二个电泳槽中,去除产生的气泡,接上电源准备预电泳。(4)有些电泳槽,如LKB的Macrophor等是使用水浴加热的,则应先将水浴加热至55℃后进行预电泳。有的不使用水浴加热,依靠电泳过程中自身产生的热进行保温,如上海求精有机玻璃仪器生产的测序电泳槽,这种槽需夹上二块散热铝板,使整个凝胶板的温度一致。(5)按30V/cm的电压预电泳20-30分钟。预电泳的过程是去除凝胶的杂质离子,同时使凝胶板达到所需的温度。高温电泳可防止GC丰富区形成的发夹状结构,影响测序的结果。[注意](1). 用鲨鱼齿梳制作加样孔时,应注意将齿尖插入胶中0.5mm左右,千万注意不能使加样孔渗漏,否则得不到正确的结果。(2). 应时刻注意上面电泳槽中的缓冲液是否渗漏,否则极易造成短路而损坏电泳仪。样品的制备当在预电泳时,即可进行样品的制备,将反应完毕的样品在沸水浴中加热1-3分钟,立即置于冰上即可。如果样品长时间不用,则应重新处理。可使用4- 6%聚丙烯酰胺凝胶,胶厚0.4mm。厚度小于0.4mm的胶可能导致信号太弱。加样时不必吸去上层覆盖的矿物油,但要小心地吸取矿物油下的蓝色样品。上样及电泳关闭电泳仪,用移液枪吸缓冲液清洗样品孔,去除在预电泳时扩散出来的尿素,然后立即用毛细管进样器吸取样品,加入样品孔中。上样顺序一般为G、A、 T、C。加样完毕后,立即电泳。开始可用30V/cm进行电泳,5分钟后可提高至40-60V/cm,并保持恒压状态。一般来说,一个55cm长, 0.2mm厚的凝胶板,在2500V恒压状态下电泳2小时即可走到底部,同时在电泳过程中,电流可稳定地从28mA降至25mA。为了能读到更长的序列,可采用两轮或多轮上样。[注意]1、上样电泳时,一定要注意凝胶板的温度是否达到55℃左右,如果还没有达到,则应等温度达到后才能上样电泳。2、一般来说电泳时,不宜使用太高的电压,因为太高的电压会使凝胶的分辨率降低,并且使带扩散。电泳中可进行恒功率电泳。 染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子,大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。1. 电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板,凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。2. 固定凝胶:将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘,用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品中染料完全消失,胶可在固定/停止溶液中保存过夜(不振荡)。保留固定/停止溶液,用于终止显影反应。3. 洗胶:用超纯水振荡洗胶3次,每次2分钟。从水中取出, 当转移至下一溶液时拿着胶板边沿静止10-20秒,使水流尽。4. 凝胶染色:把凝胶移至染色溶液充分摇动30分钟。5. 凝胶显影:(1). 在显影溶液中加入甲醛(3ml)和硫代硫酸钠溶液(400μl)以完成显影液的配制。(2). 从染色溶液中取出凝胶放入装有超纯水的盘中浸洗5-10秒。注意,把凝胶从超纯水转移到显影溶液的总时间不能长于5-10秒。浸泡时间过长则导致信号微弱或丧失信号。若浸泡时间过长,可重复第五步用染色液浸泡。(3). 立刻将凝胶转移至1升(总量的一半)预冷的显影液充分振荡直至模板带开始显现或开始出现第一批条带,把凝胶移入剩下的1升显影液中继续显影2--3分钟,或直至所有条带出现。6. 固定凝胶:在显影液中直接加入等体积的固定/停止溶液。停止显影反应,固定凝胶。7. 在超纯水中浸洗凝胶两次,每次2分钟,注意在本操作中戴手套拿着胶板边缘避免在胶上印上指纹。8. 将凝胶置于室温干燥或用抽气加热法干燥。在可见光灯箱或亮白,黄色背景(如纸)上观察凝胶,若需永久保存的记录, 则可用EDF胶片保留实验结果。[注意] 测序产物的银染是显现序列信息的一种新方法,本系统的成败受几个因素的影响。1. 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水(NANOpureR 或Milli-QR 的水)或双蒸水可获得较好的效果, 如果水中有杂质, 则低分子量条带可能无法出现。2. 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的,美国化学学会级碳酸钠较好,如Fisher和Kodak ACS试剂级碳酸钠(Fisher Cat #S263-500或S262-3,或Kodak Cat #109-1990),一般可获得较好的结果。3. 染色后的洗涤步骤是非常关键的。如果凝胶洗涤时间太长,银颗粒会脱离DNA, 产生很少或没有序列信号。如果洗涤时间过长,染色步骤可以重新进行。4. 如果凝胶厚度超过0.4mm或丙烯酰胺浓度高于4-6%,则有必要延长固定和染色的时间。如果凝胶比0.4mm薄,染色反应后的洗涤必须缩短至不超过5秒。5. 在室温下进行所有步骤,显影反应除外。显影溶液必须预冷至10-12℃以减小背景杂色。注意:临用前在显影溶液中加入甲醛和硫代硫酸钠。用新配的染色及显影溶液。不要重复使用任何溶液。2023-07-14 20:59:491