清晨励志歌曲

好象没有这个词啊!

也可以指喜欢PUNK乐队的人

双写。hopper不过一般都是叫做hip-hop artist有。punker=punk rocker,或者直接punk也可以。

RockersGuitar Maniacs

米迦勒,加百列和拉斐尔

有很多哦，都是一些不太文雅的用语bastardwretchassholepervertson of bitchmotherfuckerdickhead

非主流就是很时髦的

立定跳远是一项需要速度和力量的运动，因此选择适合的鞋子非常重要。以下是一些适合立定跳远的鞋子推荐：轻量化鞋底：轻量化鞋底可以减轻脚部的负担，让你更轻松地跳跃。例如，Lunar的抗震跑鞋系列就是一款很好的选择，采用气垫减震缓冲技术，有助于保护双脚免受震荡。较软的鞋底：较软的鞋底可以提供更好的缓冲和支撑，减少受伤的风险。例如，Adidas Cloud Combat 25 Pro Midboost II就是一款具有良好缓震性能的鞋子，采用气垫设计，可以提供更好的支撑和稳定性。支撑性好的鞋面：鞋面应该有足够的支撑性，帮助脚部稳定地着陆。例如，New Balance 997 XTS Foampunker采用高腰设计，可以提供更好的包覆和支撑。透气性好的鞋面：透气性好的鞋面可以保持脚部干爽，防止汗水过多而影响发挥。例如，Asics Gel Kayano 29 Pro Plus采用网眼设计，可以提供良好的透气性和通风性。总之，选择适合立定跳远的鞋子需要考虑到鞋底、鞋面和支撑性等因素，以提供最佳的跳跃效果和保护。

punker不是疯子,只是勇敢叫嚣的人,有自己的想法,崇拜自由

a class of thing with common features all attribute

乐队的运作方式。。是注重销量还是注重音乐实质 比如说Arch_Enemy乐队 他们最好的专辑销量也就20万张 乐队里面的人个个技术牛叉 可是他们就是愿意做他们自己的音乐 不愿意为了唱片销量改变什么。。。

噢I愿望我是一个庞克音乐的表演者与花在我的头发 在77和69革命在天空中 我出生太晚对不关心的世界 噢I愿望我是一个庞克音乐的表演者与花在我的头发 当国家首脑没有弹吉他，不是大家驾驶了汽车，当音乐真正地事关，并且，当收音机是国王，当会计没有控制并且媒介不能买您的灵魂并且计算机是可怕和我们didn ？t知道一切噢I愿望我是一个庞克音乐的表演者与花在我的头发 在77和69革命在天空中 我出生太晚对不关心的世界 噢I愿望我是一个庞克音乐的表演者与花在我的头发 [合唱]当popstars仍然依然是神话并且无知能仍然是极乐并且，当上帝保存了女王/王后她转动了一片更加白色的树荫苍白当我的妈妈和爸爸到在他们的十几岁之内并且无政府状态仍然是梦想并且唯一的方式停留在接触是一封信件邮件[合唱]当纪录商店在上面并且乙烯基是他们库存的并且超级信息高速公路在空间仍然漂移孩子佩带别人用过的东西，并且演奏比赛意味反撞力arounds并且足球运动员仍然有长的头发和土横跨他们的面孔[合唱]我出生太晚对不关心的世界噢I愿望我是一个庞克音乐的表演者与花在我的头发

先打开以下网站,根据你想找的国家而定.美国http://spaces.msn.com/?mkt...英国http://spaces.msn.com/?mkt...然后就可以看到旁边有加新朋友的选项,一般第一个空格不填，第二个和第三个你可以选择你想加的人的性别和年龄段！点serch就可以搜出来了!点你要加入人的图片或者旁边的字可以进入以下画面（也就是被加入人的msn空间）注意看地址栏，把//后面.前面的一段字母复制到msn的添加联系项上面，后面还要加上@hotmail.com在点添加联系人，只要通过对方认证后！你就可以和老外聊天啦！，看到他的地址是：http://zonapunker.spaces.l...zonapunker就是他的账号，所以此人hotmail账号就是zonapunker@hotmail.commsn:)明白了吧，添加就可以加上这个老外了总结：很简单的，先找到老外的空间===>再看他们的空间网址xxx.spaces.live.com===〉xxx@hotmail.com就是他的msn账号了.怎样使用任意邮件地址登陆MSN?在用MSNMessenger聊天过程中，肯定发现有的人使用的msn帐号并不是以hotmail.com或者msn.com结尾的，有的甚至是以163.com结尾的。这是怎么回事呢？是不是只要有电子邮件地址就可以使用msnmessenger呢？答案是肯定的。那么如何实现呢？步骤如下：第一步，首先登陆www.msn.com然后点击右上角的signin第二步，点右侧的signup进入注册页面第三步，输入你想要使用的邮件地址，并设定密码，输入验证码，在页面最下面还要重复输入一次邮件地址第四步，点击continue完成，然后登陆MSNMessenger就可以使用了。注：当然登陆MSNMessenger后，还需要一个"验证"的步骤，在此就不赘述了。其实不做也没关系，只是MSN中会显示“你的邮件地址未经验证”，但丝毫不影响使用。如果需要去除这个显示，就需要去MSN网站上去验证一下，很简单的

叛逆的才是K妞

x香港的货好贵的！！

去女人街看看吧，去的人比较多还有我收集了些地址，给你参考下尖沙咀 - 香港之最, 加连威老道Take 5 - 架野集中营必扫品牌: Evisu,￥Jeans,Allen&Hanson,Dry Bone"s,Stromy Blue4...(加老威41A号兴明大厦一楼B&C室)B-Sound - For Hip Hop人仕, rapper... 必扫品牌: National league,Dickies,Phat Farm( lee间好似系Take it easy老板开既....)(加老威16号永兴大厦G/F,M/F)巨集物坊 - 专卖水货,好多都系日本版,黎到香港就变限量版-_-"必扫品牌: NB,Simple,Puma,Converse..(利时地下11号铺)铺 加连威老道 - 利时商场 红磡ADIDAS WAREHOUSE 红磡民裕街51号凯旋工商中心2期1楼G座 2364 9122中环1001 ORIGINAL 中环威灵顿街43号 2525 3221湾仔SPORT GALLERY .LTD 湾仔轩尼诗道70号C地下 2891 6868鸿兴玩具 湾仔太源街19号C铺 2891 4739保捷行 湾仔轩尼诗道46号地铺 2529 6988怀古角 湾仔轩尼诗道302-308号集成中心UG23铺 2832 4998铜锣湾LABINNAH 铜锣湾希慎道1号地库B01铺 2881 6050STUSSY 铜锣湾耀华街37号1楼 2895 0267PUMA SHOP 铜锣湾时代广场6楼603室 2506 2882CATALOG 铜锣湾时代广场6楼607-608室 2310 6783HOSO 铜锣湾时代广场6楼629-630室 2506 3088ADIDAS SHOP 铜锣湾罗素街60A地下 2882 3311APPLICATION SHOP 铜锣湾黄金广场307铺 2915 7882KURA CHIKA 铜锣湾SOGO 3楼 2834 6675NIKE SHOP 铜锣湾SOGO 4楼402铺 2895 5668PUMA SHOP 铜锣湾SOGO 4楼 2834 3821KURA CHIKA 铜锣湾柏宁酒店商场121铺 2764 5787I.T. 铜锣湾柏宁酒店商场109铺 HEI B 铜锣湾世贸中心1216室 2636 6821J-01 铜锣湾百德新街57号地下 2808 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尖沙咀利时商场3楼316铺 2739 3384RAMAMA 尖沙咀利时商场3楼323铺 3013 0188QUARTER 尖沙咀利时商场4楼416铺 2311 6221MULTI CRAYON 尖沙咀利时商场地下 2311 1385ACURA 尖沙咀嘉兰围18号地下 2311 5626 STUSSY NO8 尖沙咀漆咸围8号A地下 2302 0015STUSSY 尖沙咀漆咸道121-123号地下 2302 0015EXIT 尖沙咀漆咸道73-75号地库 2722 1751B23B 尖沙咀漆咸道南41-51号地库B23B铺 2366 8386TOGO 尖沙咀漆咸道南41-51号地库B27铺 2366 8011欧洲坊 尖沙咀东部麼地道65号安达中心地下4A铺 2723 0623BANANA CO. 尖沙咀百利商场13号地下 2957 8588CONCEPT SHOP 尖沙咀山林道运通商场2楼226铺 2376 1176 UNIVERS 21 尖沙咀山林道运通商场1楼 21铺 2311 1298WRAPPER SNAPPER 尖沙咀山林道运通商场1楼27铺 SIMPLE THINGS 尖沙咀山林道运通商场1楼4铺 2730 8263IDEE PRODUCRION 尖沙咀山林道运通商场1楼8铺 3113 1183DOUBLE-PARK 尖沙咀新港中心地库37铺 2377 4622WAREHOUSE 尖沙咀新港中心地库43铺 2388 0185RIDERS 尖沙咀新港中心2楼40铺 2302 0856X-GIRL 尖沙咀新港中心1楼105-107铺 2736 2201华兴公司 尖沙咀海防道46号地下 2368 5867龙城大药房 尖沙咀加连威老道28号地下 2367 9274TAKE 5 尖沙咀加连威老道41A-B号1楼B&C铺 2375 5731OHIO 尖沙咀加连威老道53号1楼 2316 2318 MVP 尖沙咀加连威老道60A地下 2368 0106RECURSIVE 尖沙咀加连威老道62号1楼 2780 3287DOUBLE BROTHER 尖沙咀加连威老道71号1楼 2311 6790UNTITLE 尖沙咀加连威老道73号2楼 2721 8654 GRAND尖沙咀加连威老道75号1楼 27398118DOUBLE-PARK 尖沙咀海港城2612铺 2175 5111ADIDAS SHOP尖沙咀海港城2202铺 2730 6685URBAN SOUL 尖沙咀太阳广场地库B03A铺 2730 5138REEBOK CONCEPT SHOP 尖沙咀汉口道8号地下 2881 77241001 ORIGINAL 尖沙咀漆咸道南81号 2375 3001PHASE 02 尖沙咀麼地道20号1楼 2369 2712WHAT`S UP 尖沙咀UPDATE MALL 122铺 2312 7755TOY 2R 尖沙咀中间道 5-6号3铺 2723 6833私物店 - 成日上Mike...多入日本野,必扫品牌: Swimmer....(利时地下22-23号铺)Low B Club - 阿Sa同佢经理人Mani开既,专卖明星2手衫..都系日本野多,必扫品牌: CA4LA,Dizzy,Ggc...(利时地下13号铺)De~javu - Punker必去Underground Boot专卖...英国underground衫,皮鞋,波鞋,Band Tee,英国,澳洲和法国牌子衫必扫品牌: Underground Denim , dupeclothes manchester england,angry,vision....(437号铺连对面铺)Yoluk - 卖旧野,系利时好耐历史...有卡通图案衫必扫品牌: Nike....1970,1980恤衫....Gucci...有1960款-_-"(利时2楼19号铺)Beatmike - 古著,专卖旧野...必扫品牌: Lee,Nike,Levi"s.都系古著款..Levi"s 1966的Red Line..1970 Lee Denim Jacket...(利时地下1号铺)漆咸道南 - Street Mart23B - 专卖日本,美国水货特别版必扫品牌: NikeXStussy Air Huarache,NikeXGraffiti Futura Blazer,KawsXBape T恤,Swagger(Street Mart B23)Supernova - 专走英国水货必扫品牌: Paul Frank,Marc Jacobs,Vivienne Westwood(Street Mart G19)Special - 专卖美日水货...有D系Crossover限量版必扫品牌: 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器定时40几秒，一个产生音乐，为什

需要定时器和计数器一起用

这个理论上成立，可是实际操作上是有困难的，还有这个转化率是个大难题，就算能全部转化为电能对家庭用电也是杯水车薪，而且如何进入家庭用电也是一大难题，国家现阶段正在向电动汽车方面研发，鼓励，引导。广州这方面已经有蓄电池快速充电设备，国家是在利用更清洁的能源减少环境污染。

打算

不怎么样 很低端的了

只发了 白雪姬"和"好色＊メーカーズ" 请查收 [url=http://www.geocities.jp/cypunker3/QQFile.html?fd=http://51.dc.ftn.qq.com/ftn_handler/510196007c069bfd8c9521e3d8bd38724374362fefd96c64e8de02464530e8631ddab5eb56c46fd785d78fc056477c8e4bf52e8b3aa333b030f81bb1050116e0/武若集.rar&f99f4d5f][color=#ff0000][size=4]武若集.rar[/size][/color][/url]

这个好象没有个标准吧，反正100公里时速如果40米能刹停那就算是优秀的了！

只要控制好重心用胸带臂推就可以了(经验)

Punk girl

GottaHaveYou这首跟你说的很像如果不是这首的话，也祝你听得开心o(∩_∩)o

做过

well,the person i would like to talk about is my old friend Cristina, who had moved to LA with his parent about 5 years ago.we are best friend during my childhood, We met each other last month,I hadn"t seen her for..4-5 years when I bumped into her during a rock festival... She was so changed, lots of pierces on her face, beer in one hand, cigarrette in the other... I was shocked. I remebered her as the Britney Spears kind of girl, she was keep on sports, she loved dancing, parties...now she"s a punker!

a little something refreshing 打印此页 歌手：no doubt 专辑：no doubt YeahI"m hungryI"m starvingI want some food for my tummyI want somePizza coke and ice creamPopcorn cotton candyMarshmallows milkshake and peanutsWould be so greatNo DoubtPies chips candy applesTwinkies frosted flakesDonuts french friesAnd some chocolate cake with mustardCookies avocados pancakesPineapple juiceWhipped cream on some raw meatThat"s not all i could eatI"m hungryI"m starvingI want some food for my tum...Honey roasted walnutsPepperoni slicesPasta and burritosDifferent kinds of ricesCherries dipped in chocolateCottage cheese and jellyColonel sander"s chickenStill won"t fill my bellyBroccoli sticky syrupChurros dipped in sauceDrippy sloppy joesThen i"m full at lastAhhh ahhhI"m full at lastBurp.另一首pizza day 打印此页 歌手：aquabats the 专辑：myths legends and other amazing adventures vol 2 Well i remember my first day at public schoolI was very scared of getting pummeledAnd sure enough i did at first recessI got pegged in the head by a big red ballIt stung and my head hungBack to class with a bloody noseAnd soon it was lunchtimeMom said i should ask about how poor kids can get fedSo i got a book of tickets and a schedule and it read:Monday - hot dog, tuesday - tacoWednesday - hamburgers and chocolate milkThursday - sloppy joes and burritos in a bagFriday was pizza day, the best day of the weekAll the kids would line up super early just to eatMonday - hot dog, tuesday - tacoWednesday - hamburgers and chocolate milkThursday - sloppy joes and burritos in a bagFriday was pizza day, the best day of the weekIt always came with salad and a side of cold green beansHooray for pizza dayHooray for pizza dayI miss pizza dayAquabats, TheThe best day of the weekWell, i remember my first day in jr. highI had hairspray in my hairAnd my pants were way too tightAnd all the breakers and new waversAnd the rockers and the prepsWould all be in their placesOn the front lawn or the stepsI hung out with some punker kidsWho used to make me laughI got thrown in the dumpsterBy some rich kids near the caf?br>As time went on we figured outIt was totally uncoolTo eat the welfare lunchProvided by the schoolSo in poser-punker fashionWe just mooched off all the kidsAnd lived off eating candy barsAnd bags of nacho chipsMonday - hot dog, tuesday - tacoWednesday - hamburgers and chocolate milkThursday - sloppy joes and burritos in a bagFriday was pizza day, the best day of the weekIt always came with salad and a side of cold green beansHooray for pizza dayHooray for pizza dayI miss pizza dayThe best day of the weekWell now i"m out of schoolAnd i don"t have a job(you"re a slob!)I just sit around all sweaty and lethargicAnd i"m just thinking ‘bout where it all went wrongWhy i can"t concentrateOn anything but rerunsI wish i had some more stabilityI wish i had somebody making lunch for meI guess i miss the seventh grades in lifeThe thought of pizza dayI thought it was stupid thenBut i wish i had it nowI miss myMonday - hot dog, tuesday - tacoWednesday - hamburgers and chocolate milkThursday - sloppy joes and burritos in a bagFriday was pizza day, the best day of the weekIt always came with salad and a side of cold green beansHooray for pizza dayHooray for pizza dayI miss pizza dayThe best day of the week!只看到这两个,不知道是不是你要找的...

vs左边工具箱

邮箱留下，可以放大的模拟器发给你。。。

有，必须绑定密保50天。解锁游戏里面所有东西。

院校专业：长沙理工大学城南学院是经教育部批准由长沙理工大学按新机制、新模式与社会力量合作举办的本科层次的独立学院。学院座落在长沙理工大学美丽的金盆岭校区，具有得天独厚的资源优势和一流的办学条件。这里功能完整，设施齐全，环境优雅，文化底蕴深厚，交通方便，是一个读书学习的好地方。,学院自 2002年成立以来，在母体学校、上级主管部门及社会各界的大力支持下取得了飞速发展，办学实力不断增强，办学水平和教育质量稳步提高，办学影响逐步扩大，毕业生得到用人单位和社会认可，就业率处于独立学院前列，考研录取率达到全国高校平均水平，大部分学生入学分数线接近或超过二本线，已具有良好的办学基础和发展平台。2010年被评为全国先进独立学院。,学院实行董事会领导下的院长负责制。设有土木工程（建筑、道路、桥梁、隧道）、水利水电工程、港口与航道工程、电气工程及其自动化、热工过程自动化、热能与动力工程、汽车服务工程、机械设计制造及自动化、艺术设计、工程管理、物流工程、计算机科学与技术、通信工程、电子信息工程、会计学、金融学、国际经济与贸易、英语、法学、新闻学、市场营销和财务管理等 31个本科专业和专业方向。在校本科生7000余人。,学院招生计划纳入国家普通高等教育招生计划，面向全国招生。学生在校期间，与长沙理工大学本科学生共享师资、设备、就业网络等优质资源。学生学习期满，成绩合格，颁发长沙理工大学城南学院本科文凭及相应的学士学位。条件成熟者还可到与长沙理工大学对口合作的国外高校去深造，或报考硕士研究生。,学院在办学过程中始终坚持全面发展的人才观、注重特色的质量观和以人为本的教育观，按照 “全面发展，突出专长，强化实践，着重应用”的人才培养目标，不断深化教育教学改革，推进素质教育，实施“5+1+2”人才培养模式，构建学校、家庭、社会三位一体育人体系，创新大学生思想政治教育和校园文化建设，扎实培养学生的基础素质和实践能力，努力造就适应二十一世纪社会经济发展需要的应用型高级工程技术人才和管理人才，积极为国家和地区经济建设和社会发展服务，为交通、电力、水利等行业建设服务，为科教兴国作贡献。已产生良好的育人效应和强烈的社会反响，教育教学成果多次被《中国教育报》、《中国青年报》、《湖南日报》、《潇湘晨报》、《长沙晚报》等主流媒体报道。,面向未来，学院将本着 “质量立校、人才兴校、特色强校、立足湖南、面向全国”的原则，充分依托长沙理工大学学科专业优势和资源优势，强化教育教学管理，注重“因材施教，学以致用”，以满足广大学子及社会的需求。同时，发挥和交通、电力、水利行业联系紧密的优势，积极推行校企合作，吸引相关企业参与办学，探索具有自身特点的办学模式，形成城南学院的鲜明办学特色。,我们坚信：一条崭新的铺满鲜花的道路已经展现在我们面前，我们将承朱张之绪，取欧美之长，华实并茂，兰芷齐芳，振我民族！扬我国光！其他信息：长沙理工学院不是长沙理工大学。长沙理工学院一般指长沙理工大学城南学院。 长沙理工大学城南学院位于湖南省长沙市，由原长沙交通学院公路学院和长沙电力学院科技学院于2003年合并组建，是经湖南省人民政府批准成立、教育部确认，由长沙理工大学按新机制、新模式与社会力量合作举办的本科层次的独立学院。材料补充：长沙理工大学城南学院具有得天独厚的资源优势和一流的办学条件，学校功能完整，设施齐全，环境优雅，文化底蕴深厚，交通方便。现有专任教师625人，其中高级职称教师219人。学院现有全日制本科在校生一万余人，设有25个本科专业，分属工、管、经、文、法、艺等六个学科门类，是一所以工为主，多学科协调发展的具有鲜明的交通、电力及水利等行业特色的新型高等院校。2010年被评为全国先进独立学院。学院坚持立足湖南、面向全国，实施“质量立校、人才兴校、特色强校”的发展战略，充分依托长沙理工大学的学科特色和优质教育资源，深化教育教学改革，推进素质教育，努力造就适应21世纪科学技术进步和社会经济发展的高素质应用型人才，积极为行业繁荣与社会经济发展服务，为科教兴国作贡献。

“悉尼的空气很清新,它的景色也很美。”翻译成英语的原文是：The air in Sydney is very clean and the scenery is beautiful.

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这个还是找房东或者宗介商量最好把。我和6个人合租的房子，当时房子里有一个人不是学生，还有一个人是交换生。交换生不满半年学校也不给开证明的。最后房东把这两个人的名字从合同踢出去了，再去说，就免了council tax了。要和信得过的中介商量。

双击NO $ GBA游戏，游戏加载文件（必须是*。NDS）但不玩...选项>仿真设定，NDS游戏卡把他们设置为512K FLASH，其他设置自己看着做什么，没什么，控制拨乱反正召回的关键点选项>保存选项后，未来是否播放不会重新设置

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SCENERY叶片泵品牌是哪个公司生产的？回答：SCENERY品牌的叶片泵是山西斯普瑞机械制造股份有限公司生产的，质量不错，国内领先。

A: x^2-2x-8>=0,得(x-4)(x+2)>=0,得x>=4或x<=-2B: a-|x-1|>0,即|x-1|<a, 当a<=0时，B为空集，此时A∩B=空集； 当a>0时，-a<x-1<a,得B为-a+1<x<a+1, 要使A∩B为空集，则须有-2=<-a+1=<a+1<=4,解得0<a<=3综合得：a<=3

cos＜a，b＞=向量a点乘向量b 除以 向量a的模乘以向量b的模 =【（4.3）（2,4）】/根号下（16+9）乘以根号下（4+16）=5分之2根号下5

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中国湖南省长沙市天心区赤岭路178号长沙理工大学1号教学楼

这是一个定语从句。time作先行词，省略了关系代词that。

是你输入错误了将sqrt错写成sprt%by dynamic%see also http://www.matlabsky.com%2009.2.15% >> int("x^2-x+sin(y)+sqrt(2*y)","y","a","b") ans = -x^2*a+x*a+cos(a)-2/3*2^(1/2)*a^(3/2)+x^2*b-x*b-cos(b)+2/3*2^(1/2)*b^(3/2)

材料与方法 1.1 血清采集 MG患者全血来自2004～2005年就诊于辽宁中医学院附属医院的门诊患者。根据典型临床表现、新斯的明试验、低频重复电刺激及单纤维肌电图等确诊，无其他自身免疫性疾病，未经其他免疫抑制治疗，并参照1994年版《中医病证诊断疗效标准》辨证为脾肾虚型。正常人血清取自同时期健康志愿者。-70 ℃冰箱冷冻保存备用。 1.2 主要试剂 固相pH梯度干胶条IPG strip（Amersham公司产品， 非线性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（胆酰胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸盐｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫苏糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙酰胺（iodoacetamide， IAA），丙烯酰胺（acrylamide）、甲双丙烯酰胺（N， N"-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），过硫酰胺（am-monium persulfate， APS），三羟甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate， SDS）均为Bio-Rad公司产品。琼脂糖为华美生物公司产品。其他试剂均使用国产分析纯试剂。所有溶液均用MilliQ水配制。 1.3 主要仪器 高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司产品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司产品;P-2000分光光度仪，Hitachi公司产品;SE-600电泳仪，Amersham公司产品;纯水装置，Millipore公司产品;GS-710光密度扫描仪，Bio-Rad公司产品;冷却水循环系统，Cole-Parmer公司产品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美国Bruker-Daltonics公司产品;LCQ Deca XP Plus，美国Thermo Finnigan公司产品。 1.4 双向电泳 1.4.1 血清总蛋白质的提取及定量 血清-70 ℃反复冻融4次后，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column处理去除高丰度蛋白。使用Agilent 5K超滤管进行浓缩除盐，冻干回收的样品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制剂）进行复溶，并采用考马斯亮蓝法进行蛋白质定量。 1.4.2 等电聚焦 自-20 ℃取出的胶条，室温下平衡10 min，以500 μg上样量在每份样本中加入上样缓冲液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及标准蛋白质分子，上样于泡胀槽中，加入矿物油覆盖。程序设置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恒温20 ℃。等电聚焦电泳后IPG胶条在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚蓝0.002%和DTT 100 mg）中于振荡器上振荡 15 min; 然后置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙酰胺代替100 mg DTT）同样于振荡器上振荡15 min。 1.4.3 SDS-PAGE垂直电泳 采用12.5%的均匀SDS2聚丙烯酰胺凝胶（水23.2 ml，30%丙烯酰胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl缓冲液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，胶总体积80 ml）。将平衡后的IPG胶条移至凝胶的上方，胶条一端放入低分子量蛋白质标准，0.5%的琼脂糖封胶。上下槽加入电极缓冲液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始电流为每块胶40 mA，电泳20 min，然后以每块胶60 mA电流，直至溴酚蓝前沿。 1.4.4 银染色 电泳结束后，采用硝酸银染色法，通过固定，硝酸银染色，显影，停显及脱色，至背景清晰。 1.5 图像分析 每个样品常规进行3次二维电泳，用GS-710光密度扫描仪对电泳后的胶图分别进行扫描，所得扫描图像输入计算机，采用Image-master软件对图像进行背景消减、蛋白质点检测和校正，获取蛋白质点的位置坐标和表达量等分析。选取 Ratio ≥1.5的蛋白质点认为有差异。所有数据的统计分析均采用SPSS 12.0软件，统计学分析采用 t 检验。 1.6 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析 用手术刀片切下胶上目标条带，进行切胶、胶上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脱盐后点样，行基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飞行管长2.7 m，加速电压 20 kV ，反射电压23 kV）。将第1级质谱得到的肽片段质量指纹图谱、肽质量指纹图谱与第2级质谱得到的肽序列信息一起用来检索蛋白质数据库，找出匹配的蛋白质。 1.7 数据库检索 将质谱鉴定所得的肽质量指纹谱（peptide mass fingerprinting， PMF）数据于Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）软件搜索相应的库。搜索使用的数据库为IPI human蛋白库（SEQUEST结果过滤参数为:当Charge+1，Xcorr≥1.9;当Charge+2，Xcorr≥2.2;当Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗余蛋白库（redundant data-base）。检索参数为胰蛋白酶解;氨基酸固定修饰方式为脲甲基半胱氨酸;模式为单同位素峰;肽片断最大误差控制在100 ppm;肽片断最大分子量误差为±0.5 Da;每个肽允许有1个不完全裂解位点。 2 结果 2.1 脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱 的建立及分析 经2-DE技术及银染色后，得到了两组血清的双向凝胶电泳图，并于相同的条件下重复实验3次。在正常对照组细胞蛋白质组双向电泳图谱上可观察到1 463±179个蛋白点，而脾肾虚型重症肌无力组可见到1 508±89个蛋白点

慢 和你配置有关 窗口有放大的一个软件的

It is does not matter whether are you care or not.Forget it.

你去藏宝阁以卖出的角色那看下

歌曲名:scenery歌手:arab strap专辑:the red threadYou used to be part of the sceneryBut now i know your name.And my mind wonders what my hands would doTo make sure that you came.She hardly said a word again tonight.Arab StrapI threw a book and grabbed my keys.And on the way here i swore to myself,I"d fuck whoever i please.Everywhere i go,There"s so much on show.Everyone is beautifulAnd i stay dutiful.The only solid solution is to sever my hands.Wrap me up and pack me tight.Leave me somewhere you"ll never find me.Everywhere i go,There"s so much on show.Everyone is beautifulBut i stay dutiful.It must just be the sunAnd my desire for fun.If you did it, would you tell us?I think i"ll always be jealous.http://music.baidu.com/song/14285399