求英语care ,careless ,careful ,carefully ,的用法 区别~语法知识~还有例子？

carefree和careless的区别：中文含义不同、用法不同。carefree作为形容词，中文含义为无忧无虑的，不负责任的，无牵挂的。careless作为形容词，中文含义为不小心的，粗心的，疏忽引起的，不担忧的。carefree的基本含义及用法介绍carefree作为形容词时，意为无忧无虑的，无牵挂的，不负责任的。例句：He looked happy and carefree。他看起来轻松愉快。My mother lives a carefree life in the country。我的母亲在乡村过着无忧无虑的生活。She had made their childhood so joyous and carefree。她使他们的童年充满欢乐，无忧无虑。Thumbing a lift had once a carefree，easy-going image。伸手搭便车曾经给人以轻松随意的形象。Robert remembered the carefree summers at the beach。罗伯特记起了在海滩上度过的无忧无虑的夏日时光。He turned his face to look up at the sky in a carefree manner。他仰首望着天，做出一副满不在乎的神气。Learning Chinese in daily life is carefree and easy。生活之中学汉语，让你轻松又好记。careless的基本含义及用法介绍careless作为形容词，意为不小心的，不仔细的，粗心的，粗心造成的，疏忽引起的，不担忧的，无忧无虑的。例句：It was careless of me to leave the door open。怪我粗心忘了关门。He seemed careless of his own safety。他仿佛已把自己的安危置之度外。She gave a careless shrug。她漠然地耸了耸肩。I"m sorry，How careless of me。对不起,我太不小心了。With a careless flip of his wrists，he sent the ball quickly on its way。他手腕轻轻一抖，球就飞出去了。Careless drivers hazard passengers lives as well as their own。粗心大意的驾驶者拿乘客和自己的生命冒险。

careless副词:carelessly;名词:carelessness。关于如何学好英语的方法如下：1、培养学习英语的兴趣：如何学好英语的五条建议之一：兴趣是最好的老师，培养学习英语的兴趣非常重要。我们可以通过看美剧、电影、英文原版书等来培养自己的学习兴趣。爱上英语后，学英语就容易多了。2、每周至少做四次五至十分钟的听力练习：如何学好英语的五条建议之二：如果你下定决心一次苦练两个小时，很可能短时间内不会做任何额外的听力。相反，如果你开始得慢，练习得多，就更容易养成经常听的习惯。3、时不时背英语单词：如何学好英语的五条建议之三：经常背单词，一直复习，才能记忆深刻。最好随身携带一本单词小册子，这样可以在零碎时间背诵，效率很高。英语单词不能死记硬背，要在句子或文章中记忆，这样更容易记住，也不容易忘记。4、交个外国的朋友：如何学好英语五条建议之四：事实上，和自己的外国朋友一起学习英语会很有效率，过程也会很快乐。交一个外国朋友不仅可以提高你的社交能力，还可以学习英语，一举两得。5、每天都练习口语：如何学好英语五条建议之五：想学好英语口语的人，可以选择每天固定时间段练习口语，可以大声朗读英语文章，也可以跟着朗读。总之，如果你想学好英语口语，你不应该害羞，而是大声说英语。

careless是形容词简写“adj.”粗心的,疏忽的;草率的careful也是形容词，仔细的;小心的。care是既是名词又是动词（及物不及物都行），有小心注意，保护，照料的意思。基本上没什么联系，lz可以自己参考一下

Careless Whisper歌曲背景：这首歌讲的是情圣乔治同时爱上了三个女孩，别人在谈论这件事情，他的正式女友知道了这个秘密，结果大家心照不宣，跳最后一个舞……，可是他是爱她的。他不敢说话，却在心里唱着歌，交织着悔恨、伤感和表白，但一切已是无可挽回了，沉默中感情正在趋向破裂。你会发现在人的内心，背叛和忠诚竟然是一对共生的本性歌者本人感情也相当细腻，事实上，他是个同性恋者。不管性取向如何，他的感情是真诚的，爱情永远没有错。。。Careless whisper(无心快语）I feel so unsure 我并无丝毫的把握As I take your hand and lead you to the dance floor 虽然牵着你的手,带你步入旋转的舞池As the music dies, something in your eyesCalls to mind the silver screenAnd all its sad good-byes 一曲终了,虽然看得见你眼中闪现的温柔，只有伤感地说声再见*I"m never gonna dance again 我不愿再跳舞Guilty feet have got no rhythm 内疚的舞步毫无节奏Though it"s easy to pretend 尽管这一切很容易去掩饰I know you"re not a fool 可我知道你会看穿Should"ve known better than to cheat a friend 这总比对朋友的欺骗,要好得多And waste the chance that I"ve been given 因而也能错过我本该放弃的机会So I"ll never gonna dance again 所以我不再去跳舞The way I danced with you 不再去重温跟你走过的舞步(Never without your love) 决不能失去你的爱Time can never mend 时间无法弥补the careless whispers of a good friendTo the heart and mind, ignorance is kindThere"s no comfort in the truthPain is all you"ll find (*) 朋友之间的心心相印,无心快语,无所能及,痛苦时最好不要试图去解释Tonight the music seems so loud 今晚的音乐太吵I wish that we could lose this crowd 我想我们应该远离这喧嚣的人群Maybe it"s better this wayWe"d hurt each other with the things we"d want to say 用我们心中的话去温暖彼此的心，也许我们早该如此We could have been so good together 我们原本可以好好地在一起We could have lived this dance forever 我们原本可以好好的共舞,But none"s gonna dance with me 但是今夜谁陪我一起跳舞Please stay (*) 请你留下(Now that you"re gone) Now that you"re gone 如今你已离去(Now that you"re gone) was what I did so wrongThat you had to leave me alone 是不是我做错了什么让你离我而去..........！

careless的音标英 /u02c8keu0259lu0259s美 /[u02c8kerlu0259s]adj.不小心的;不仔细的;粗心造成的;疏忽引起的;不担忧的;无忧无虑的;淡漠的双语例句：I am a careless owner, I am guilty, very sad! 我是一个不小心的主人，我有罪过，非常难过！Suppose you met somebody just as careless as yourself." “假定你碰到一个像你一样不小心的人呢？”It only takes one careless driver to cause an accident. 只要有一个粗心大意的驾驶员便会发生车祸。It"s your own fault for being careless. 你粗心大意是你自己的过失。He signed cheques with careless abandon. 他无所顾忌地乱开支票。

care 的意思有：n. 关怀；照料；谨慎；忧虑vi. 照顾；关心；喜爱；顾虑vt. 在意；希望或喜欢n. (Care)人名；(英)凯尔；(塞)察蕾careful 是care的形容词adj. 仔细的，小心的carefully是care 的副词adv. 小心地careless是careful 的反义词adj. 粗心的；无忧无虑的；淡漠的n. (Careless)人名；(英)凯尔利斯carelessly是careless的副词adv. 粗心地；不注意地；无忧无虑地

略略略

你好：careless英语读作：["kεu0259lis]汉语谐音：克儿丽丝。不清楚的请追问！合作愉快！希望对你有帮助！满意请采纳！

option [op·tion || "ɑpu0283n /"u0252p-]n. 选择权, 选项optional [op·tion·al || "ɑpu0283u0259nl /"u0252p-]adj. 可选择的, 随意的careless [care·less || "keu0259lu026as]adj. 粗心的, 无忧无虑的, 不关心的

carefree a.1.无忧无虑的;轻松愉快的 We all felt carefree after the exams.考试後我们大家都感到轻松愉快.时代英英－英汉双解辞典 adj.1.without cares or worries 无忧无虑的；快乐的 careless a.1.粗心的,疏忽的;草率的 He made a careless mistake.他犯了一个粗枝大叶的错误.2.随便的;自然的 He sat into a chair with careless ease.他随便往椅子里舒舒服服一坐.3.漫不经心的;淡漠的[(+of/about)] She"s careless about her clothes.她对穿著一点都不讲究.4.无忧无虑的 careless days 无忧无虑的日子 时代英英－英汉双解辞典 adj.1.neglectful; heedless 轻率的；不注意的 He is careless of his health.他对自己的健康漠不关心.2.free from trouble or responsibility 无忧无虑的 3.unstudied; easy 自然的；轻松自在的 4.done without care 草率做成的 5.unconcerned about; uncomplainingly accepting 不在乎的；不抱怨地接受的

carevi.照顾；关心；喜爱；顾虑n.关怀；照料；谨慎；忧虑vt.在意；希望或喜欢常用carefor关心，愿意，照顾。。careabout表示在乎在意。。carefuladj.仔细的，小心的常用becareful形式carefullyadv.小心地，仔细地常用dosthcarefully小心地做某事carelessadj.粗心的；无忧无虑的；淡漠的常用carelessabout对...不留心，对...不小心，对...不关心carelesslyadv.粗心地；不注意地；无忧无虑地一般用dosthcarelessly粗心地做某事careful/carefully/careless/carelessly都是由care衍生出来的。care就是我们常说的词根。从意义上讲：carefulcareless互为反义词。carefullycarelessly也是反义词。

《Careless Whisper》歌曲原唱：WHAM!填词：乔治·迈克尔，安德鲁·瑞吉里，田宇谱曲：乔治·迈克尔，安德鲁·瑞吉里Time can never mend，the careless whispers of a good friend时间也无法弥补好友无心的耳语To the heart and mind ignorance is kind对心灵而言无知是福There"s no comfort in the truth真相总令人难爱Pain is all you"ll find疼痛是所有你找到早知道该多好Should"ve known better我感觉如此的不确定I feel so unsure当我牵起你的手As I take your hand and lead you to the dance floor带你走进跳舞的地方一曲终了As the music dies something in your eyes我看到了什么Calls to mind the silver screen让我想起一个银幕及其所有的悲伤And all its sad good-byes我再也不跳舞了I"m never gonna dance again，guilty feet have got no rhythm充满内疚感的韵律抓不住节奏Though it"s easy to pretend虽然伪装很容易I know your not a fool但我知道你并非蠢物Should"ve known better than to cheat a friend早知不该欺骗朋友And waste the chance that I"ve been given也浪费被赐予的大好机会So I"m never gonna dance again因此我不再跳舞The way I danced with you如果无法与你共舞Time can never mend，the careless whispers of a good friend时间也无法弥补好友无心的耳语To the heart and mind，ignorance is kind对心灵而言无知是福There"s no comfort in the truth现实中没有舒适Pain is all you"ll find，I"m never gonna dance again疼痛是所有你找到我再也不跳舞了Guilty feet have got no rhythm充满内疚感的韵律抓不住节奏Though it"s easy to pretend虽然伪装很容易I know your not a fool但我知道你并非蠢物Should"ve known better than to cheat a friend早知不该欺骗朋友And waste this chance that I"ve been given应该早点知道也浪费被赐予的好机会So I"m never gonna dance again因此我不再跳舞The way I danced with you如果无法与你共舞Never without your love从未和你一起Tonight the music seems so loud今晚的音乐似乎过于喧嚣I wish that we could lose this crowd但愿我们能避开人群Maybe it"s better this way也许这样会比较好We"d hurt each other with the things we"d want to say我们可以用真心话来伤害彼此We could have been so good together我们本该是令人羡慕的一对We could have lived this dance forever我们本该让这曲共舞没有终结But now who"s gonna dance with me但再也没有人愿与我共舞Please stay留下来，好吗And I"m never gonna dance again我再也不能跟你一起跳舞了Guilty feet have got no rhythm充满罪恶的双脚抓不住节奏Though it"s easy to pretend虽然伪装很容易I know your not a fool但我知道你并非蠢物Should"ve known better than to cheat a friend早知不该欺骗朋友And waste the chance that I"ve been given也浪费被赐予的好机会So I"m never gonna dance again因此我不再跳舞The way I danced with you无法与你共舞(Now that you"re gone) Now that you"re gone（如今你已远去）如今你已远去What I did"s so wrong，that you had to leave me alone犯错的我让你不愿再相守扩展资料歌曲创作背景：乔治·迈克尔写下这首歌曲时只有17岁。1980年的一天，在英国芬契列电影院当引座员的乔治·迈克尔在乘坐公共汽车时，脑海里一直盘旋着一个旋律，回到家后，他急忙把它写了下来。歌词描述了一段迟迟不敢表白的暗恋心情。完整歌曲的时间长达六分半钟，但唱片公司为了打歌宣传而用了另外剪辑约五分钟的版本。虽然《Careless Whisper》获得了各种积极地评论，不过乔治·迈克尔在日后接受记者访问时，他却表示对这首歌曲不是很满意，他觉得写的可以再更好。歌曲MV：歌曲的MV是采用的五分钟版本。MV开头出现了城市的夜景，然后乔治·迈克尔从一个漆黑的房间出现，他穿过绳子来到一个铁索前。然后，镜头转向乔治·迈克尔正面，他开始演唱歌曲。过程中，浮现了许多乔治·迈克尔与女友的亲热画面。一天晚上与另一个女友做了爱之后，被第一个女友发现，而第一个女友悄悄离开了。最后，两人在城市的不同地方四处瞭望。获奖记录：于1984年9月17日，在《滚石》杂志被评为年度最佳100首歌曲中的第24名。参考资料来源：百度百科-careless whisper

粗心的，形容人做事大意不用心

carefully是副词，认真地careful是形容词，认真的careless是形容词，careful的反义词，粗心大意的care是名词，关心，如takegoodcareofyourself照顾好你自己。

carefully是副词，认真地careful是形容词，认真的careless是形容词，careful的反义词，粗心大意的care是名词，关心，如take good care of yourself照顾好你自己。

carelessly 是副词,他可以修饰动词,如此句中的drove,但careless是形容词,一般修饰名词,如he is a careless boy

MAMAEXO-KCareless,careless.Shootanonymous,anonymous.Heartless,mindless.Noone.whocareaboutme?（D.O）一咯波林才为面哈嫩go嘎他擦么苏吧给饿索怒呢(嘎m)几曼（白贤）MAMA一怎内给得大陪就为撒蓝的里太拉就嫩几啊冷大on系则里拉嫩给总结哈gin黑嫩几（suho）一届都嫩撒狼哈嫩波都一则go拍流哈嫩吗都一咯go等了都林才咯萨拉嘎gi吧本go（齐）一名也卡名内嘎错等撒里嘎的看几系跟特bua都白go碰都谈（白贤）一怎曼组尅？（齐）无林都一桑怒呢吗组哈吉安呢嘎索同哈吉安呢嘎撒狼哈吉安呢嘎啊碰很系雷大系怒目力胡咯吧go苏一大go吧股面顿大go吗雷哟mamamama（KAI）恩接嘎部头无林斯吗特汗嘎莫给咋吧则了咯嘎求（sehun）用挂一咯曼等地几头雷内因giu个吗giu（灿烈）gogin僧面都嘎曾都大的谈都饿go恩弄斯雷gi曼那顿股嫩撒吗看波盘（D.O.)那里卡苏咯为咯无曼都黑就无力嘎因干你苏吧给饿嫩共桑求吧嫩goYeah（齐）曼那go索呢咋go你gi灭汗给无rgo无go大拉嘎go所咯妍giu对（白贤）都里kigo系大面（齐）无林都一桑怒呢吗组哈吉安呢嘎索同哈吉安呢嘎撒狼哈吉安呢嘎啊碰很系雷大系怒目力胡咯吧go苏一大go吧股面顿大go吗雷哟mamamama（KAI）组go组gigo撒无go为起go一个怎曾一阿尼亚都哇就哟mamamamamamamamaTurnback.给当给mamamamamamamamaRollingback.（KAI）吧go起go片呢那怒go撒无go一共给一都阿尼亚都哇就哟mamamamamamamamaTurnback（D.O）Yeah（齐）Careless,careless.(mama)Shootanonymous,anonymous.(mama)Heartless,mindless.(mama)Noone.Whocareaboutme?(mama)（suho）撒累后拉等粗波办等那得雷嘎撒哈go没一sei咯on因年的了曼的go（白贤）给就波林吗恩美波大gi本撒狼了莫度汗给无色苏一大面（齐）无林都一桑怒呢吗组哈吉安呢嘎索同哈吉安呢嘎撒狼哈吉安呢嘎啊碰很系雷大系怒目力胡咯吧go苏一大go吧股面顿大go吗雷哟mamamamaCareless,careless.Shootanonymous,anonymous.Heartless,mindless.Noone.whocareaboutme?

细心的，细心地，粗心的，粗心地，ly结尾的副词，比如他做什么是细心地，就是用ly，他是一个细心的男孩，就用carefull

词典解释 ：careless;hoity-toity 不谨慎;不细心。工作上粗心必然出差错。我没有认出那位显贵人物实在是太粗心了。

词典解释 ：careless;negligent;skimping;sloppy 漫不经心;不介意;疏忽;轻率。这人太马虎。

careful 意思是 细心的反义词是 careless 粗心的Peter was careless. 意思是: 皮特粗心大意。

careless的意思是：粗心的;无忧无虑的;漫不经心的，不介意的;淡漠的。whisper的意思是：vt. 私语;低声说;密谈，密谋坏事;私下说。vi. 耳语;沙沙地响;密谈。n. 低语，耳语;飒飒声;[医]嗫音;传闻。所以careless whisper的意思就是：无心快语;无心呢喃。

care的变形容词有2个 一个是careful,是“仔细的”,一个是careless,是“粗心的” 由题意可知这是个比较句,意思就是“他们2个谁更仔细（粗心）”

选B感叹形容词用howHow careless he is！他多么粗心啊！

A

[00:00.08] 　　[00:01.98]Careless whisper 　　[00:05.23] 　[00:26.98]I feel so unsure 　　[00:33.02]As I take your hand 　　[00:35.21]and lead you to the dance floor 　　[00:39.49] 　　[00:39.71]As the music dies 　　[00:43.11]something in your eyes 　　[00:45.79]Calls to mind the silver screens 　 　　[00:48.81]and all it"s sad good-byes 　 　　[03:10.69][00:52.35] 　　[01:55.41][00:52.73][03:11.32]I"m never gonna dance again 　 　　[03:13.88][01:57.93][00:55.11]Guilty feet have got no rhythm 　　[03:17.50][02:01.59][00:58.67]Though it"s easy to pretend 　　[03:20.03][02:04.15][01:01.17]I know you are not a fool 　[03:22.77][02:06.95][01:04.09] 　[03:23.29][02:07.35][01:04.56]Should"ve known better than to cheat a friend [03:26.40][02:10.41][01:07.74]And waste the chance that I"ve been given [03:29.99][02:13.91][01:11.22]So I"m never gonna dance again 　　[03:32.59][02:16.67][01:13.99]The way I danced with you [03:38.26][02:21.59][01:19.57] 　[01:29.74]Time can never mend [01:35.76]The careless whispers 　　[01:39.05]of a good friend 　　[01:42.20] 　　[01:42.57]To the heart and mind 　　[01:45.91]Ignorance is kind 　　[01:48.57]There"s no comfort in the truth [01:51.68]Pain is all U"ll find 　　[01:55.21] 　[02:45.19]Tonight the music seems so loud 　　[02:48.34]I wish that we could lose this crowd 　　[02:51.68]Maybe it"s better this way 　　[02:54.80]We"d hurt each other with the things we want to say [02:57.58] 　　[02:57.97]We could have been so good together[03:01.05]We could have lived this dance forever [03:04.16]But now 　　[03:05.61]who"s gonna dance with me [03:09.06]Please stay [03:38.32] 　　[03:49.20][04:02.24](Now that U"re gone) 　　[03:52.84]Now that U"re gone 　　[03:56.20] 　[04:04.37]Was what I did is so wrong 　　[04:07.31]So wrong 　　[04:09.51]that you had to leave me alone [04:13.96]

1 Try2 careless3 powerful4 unfair5 confident 6 organized7 qualities8 pleasure

是你的不小心才犯了这么多错You are careless to make so many mistakes,这样的话 你会选那个

歌曲名:Careless World歌手:Tyga专辑:Careless World: Rise of the Last KingTyga - Careless WorldI awoke from a dreamFilled of a world full of greed and hateThe world was my thoughts, and surroundingsI realized I needed to rise... and become kingMy own destinyTake a look around, tears from they eyesKnees on the ground, money in the skyTake a look around, ain"t sh*t nice?Praying for my life, hope I make it through the nightTake a look around, the city on fireIt"s all taking place in the middle of my mindI stand in the middle, cause death right besideMurdering is simple, get your life simplifiedWhere the bones lie, rebuild another lifeAmerica"s pie, put my hand in the potI can"t get caught in the streets I was taughtRaised off anger, but it wasn"t my faultN*gga, take a look around, it"s needles on the groundNever gave three f*cks, and I still don"t nowI"m f*ckin" in the house, babysitter on the couchThirteen like, "What this sh*t comin" out?"Pass me a jimmy, I ain"t ready for a childI hope nobody hears "b*tch, why you so loud?"Turn on the tube, put my head on the cloudBreathe, inhale, the angels can"t helpTyga, take a look aroundTake a look aroundTake a look around, tears from they eyesKnees on the ground, money in the skyTake a look around, ain"t sh*t nice?Praying for my life, hope I make it through the nightTake a look aroundTake a look around(Take a look around)All night, fighting ‘em for my lifePraying that everything gon" be right(Take a look around)Ain"t it nice, truth over the lies?Young Knights, we kings in the skies(Take a look around)I ride around in my cityB*tches pictures up in they tittiesMan, you fake, all of us know itI"m original and I show itRoll one time for everyone down andT-two times for the n*gga that bounceThen why you sitting round that couch sh*tMy money building, like housesFeeling like you wiseTruth be told, it"s all liesThese the days of our livesWhy you wasting all of your time?Voices from the skiesSaid that evil fall in yo riseThey judge me low to the dirtThen they celebrate to my highsWhy you, why you wanna be fake, I f*cking hate youWhy you made cause I ain"t take you?Last day alive, I wouldn"t even date you"I"ll replace you with somebody better" that you only make upWe just make up, wake up king and queenand rule the world a little laterLater on in that day, tears all in her faceI said I"m going awayShe begging me to stayTook a look in her eyes, then she put my hands on her waistSaid, “Don"t leave, we"ve got a baby on the way”(Take a look around)All night, fighting em for my lifePraying that everything gon" be right(Take a look around)Ain"t it nice, truth over the lies?Young Knights, we kings in the skies(Take a look around)I ride around in my cityB*tches pictures up in they tittiesMan, you fake, all of us know itI"m original and I show it(Take a look around)I ride around in my cityB*tches pictures up in they tittiesMan, you fake, all of us know itI"m original and I show it(Take a look around)http://music.baidu.com/song/13923174

careless

歌曲名:Careless Whisper歌手:Franco Lorca专辑:The Ultimate Pan Pipe Love AlbumCareless whisper 无心快语I feel so unsure.我没有丝毫把握As I take Ur hand.当我牵着你的手And lead U 2 the dance floor.带你步入舞池时As the music dies.一曲终了Something in Ur eyes.你眼中的遗憾Calls 2 mind the silver screen.唤起了过去的一幕幕And all its sad good-byes.但对这一切我只能伤感的说再见了I"m never gonna dance again.我以后不会再跳舞Guilty feet have got no rhythm.因为内疚的舞步毫无节奏Though it"s easy 2 pretend.尽管我内心的难过很容易掩饰I know U"re not a fool.但我知道你不是傻瓜Should"ve known better than 2 cheat a friend.我本不该欺骗朋友的And waste the chance that I"ve been given.我错过了本应该把握的机会So I"m never gonna dance again.所以我打算不再跳舞The way I danced with U.以不去重温与你走过的舞步MUSIC................Time can never mend.时光永远无法弥补The careless whispers of a good friend.好友间的无心细语To the heart & mind.于内心深处。Ignorance is kind.无知是福There"s no comfort in the truth.真相只会让你难过Pain is all U"ll find.你发掘出的只会是痛苦I"m never gonna dance again.我以后不会再跳舞Guilty feet have got no rhythm.因为内疚的舞步毫无节奏Though it"s easy 2 pretend.尽管我内心的难过很容易掩饰I know U"re not a fool.但我知道你不是傻瓜Should"ve known better than 2 cheat a friend.我本不该欺骗朋友的And waste the chance that I"ve been given.我错过了本应该把握的机会So I"m never gonna dance again.所以我打算不再跳舞The way I danced with U.以不去重温与你走过的舞步MUSIC.................We could have been so good together.我们本好好的在一起的We could have lived this dance forever.我们本可以让这舞曲无限延续But now,who"s gonna dance with me ? 但今夜谁与我共舞？Please stay.请留步MUSIC.....stay..........http://music.baidu.com/song/8009860

歌曲：carelesswhisper歌手：wham好友将离,为茫茫然之前途而打拼,吾亦喜亦悲。其爱曲之意境如我,最爱carelesswhisper,译之以壮声色！timecannevermend.时光永远无法弥补。thecarelesswhispersofagoodfriend.好友间的无心细语。totheheart&mind.于内心深处。ignoranceiskind.无知是福。theresnocomfortinthetruth.真相只会让你难过。painisallullfind.你所发掘出的只有是痛苦。shouldveknownbetterthan.我知道事情本可以更好些的。ifeelsounsure.我没有丝毫的把握。asitakeurhand.当我牵着你的手。andleadu2thedancefloor.带你步入舞池时。asthemusicdies.一曲终了。somethinginureyes.你眼中的遗憾。(虽然看得见你眼中闪现的温柔)calls2mindthesilverscreen.唤起了过去的一幕幕。andallitssadgood-byes.但对这一切我只能伤感的说再见了。imnevergonnadanceagain.我以后不会再跳舞了。guiltyfeethavegotnorhythm.因为内疚的舞步毫无节奏。thoughitseasy2pretend.尽管我内心的痛苦很容易掩饰。iknowurenotafool.但我知道你不是傻瓜。ishouldveknownbetterthan2cheatafriend.我知道本不该欺骗朋友的。andwastethechancethativebeengiven.我错过了本该把握住的机会。soimnevergonnadanceagain.所以我打算不愿再跳舞。thewayidancedwithu.以不再去重温与你一起走过的舞步。

for后面要加名词或语法上与名词等价的结构,careless是形容词,不能直接用在for后面.而being careless构成名词短语,因此必须要有being

歌曲名:Careless Whisper歌手:Tamia专辑:TamiaCareless WhisperTamiaTamia (1998)BY: GTime can never mendThe careless whisper of a good friendTo the heart and mindIgnorance is kingThere"s no comfort in the truthPain is all you"ll findI feel so unsureAs you take my handand lead me to the dance floorAs the music diesSomething in your eyesCalls to mind a silver screenAnd you"re its sad goodbye－1 I"m never gonna dance againGuilty feet have got no rhythmThough it"s easy to pretendI know you"re not a foolShould have known better thatto cheat a friendAnd waste the chance that I"ve been givenSo I"m never gonna dance againThe way I dance with you, ohTime can never mendThe careless whisper of a good friendTo the heart and mindIgnorance is kingThere"s no comfort in the truthPain is all you"ll findRepeat 1- I"m never gonna dance againGuilty feet have got no rhythmThough it"s easy to pretendknow you"re not a foolShould have known better that to cheat a friendAnd waste the chance that I"ve been givenSo I"m never gonna dance againThe way I dance with you, ohway I dance with youoh~~~~ight the music seems so loudI wish that we could lose this crowdMaybe it"s better this wayIf we"d hurt each other with the thingsWe want to sayWe could have been so good togetherWe could have lived this dance foreverNow who"s gonna dance with mePlease danceRepeat 1－I"m never gonna dance againGuilty feet have got no rhythmThough it"s easy to pretendknow you"re not a foolShould have known better that to cheat a friendAnd waste the chance that I"ve been givenSo I"m never gonna dance againThe way I dance with you, ohThe way I dance with youNow that you"re goneWhy"d you have to leave me aloneha～～～ha～～～ha～～～ha～～～ha～～～ha～～～ha～～～I"m never gonna danceDance with you againXXXXXXXXXXXXXXThe way I dance with youha ~~~~ha ~~~en~~~~后面的实在是听不清，连的太快。。。http://music.baidu.com/song/7446166

I could not be careless.我不能粗心大意。

我来答，lmd文件是Beckman机器的ListMode文件格式，您可以用免费的WinMDI打开哈。

这么明显了，还会是假的吗= =答应他吧

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核酸的性质 核酸的理化性质及研究方法内容十分庞杂，本节只可能对若干比较重要的核酸理化性质和研究方法作概要叙述。 一、一般物理性质 1. 溶解度 DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体，它们都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。它们可溶于2-甲氧乙醇，但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂，因此，常用乙醇从溶液中沉淀核酸，当乙醇浓度达50%时，DNA就沉淀出来，当乙醇浓度达75%时RNA也沉淀出来。DNA和RNA在细胞内常与蛋白质结合成核蛋白，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同，DNA核蛋白难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于高浓度（1~2mol/L）的NaCl溶液，而RNA核蛋白则易溶于0.14mol/L的NaCl溶液，因此常用不同浓度的盐溶液分离两种核蛋白。 2. 分子大小 DNA分子极大，分子量在106以上，RNA的分子比DNA分子小得多。核酸分子的大小可用长度、核苷酸对（或碱基对）数目、沉降系数（S）和分子量等来表示。 3. 形状及粘度 核酸（特别是线形DNA）分子极为细长，其直径与长度之比可达1：107，因此核酸溶液的粘度很大，即使是很稀的DNA溶液也有很大的粘度。RNA溶液的粘度要小得多。核酸若发生变性或降解，其溶液的粘度降低。 二、核酸的紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在230nm处为吸收低谷，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。 实验室中最常用的是定量测定小量的DNA或RNA。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出260nm与280nm的OD值，因为蛋白质的最大吸收在280nm处，因此从A260/A280的比值即可判断样品的纯度。纯DNA的A260/A280应为1.8，纯RNA应为2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。对于纯的核酸溶液，测定A260，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μg／mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。通常以1OD值相当于50μg／mL双螺旋DNA，或40μg／mL单螺旋DNA（或RNA），或20μg／mL寡核苷酸计算。这个方法既快速，又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。 三、核酸的沉降特性 溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形，开环，超螺旋结构）、蛋白质及其他杂质在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超离心法纯化核酸，或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 应用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。RNA分离常用蔗糖梯度。分离DNA时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大的溶解度。可以制成浓度很高（8mol／L）的溶液。 应用啡啶溴红—氯化铯密度梯度平衡超离心，很容易将不同构象的DNA、RNA及蛋白质分开。这个方法是目前实验室中纯化质粒DNA时最常用的方法。如果应用垂直转头，当转速为65 000r/min（Beckman L-70超离心机），只要6h即可以完成分离工作。但是如果采用角转头，转速为45 000r/min时，则需36h。离心完毕后，离心管中各种成分的分布可以在紫外光照射下显示得一清二楚（图3-26）。蛋白质漂浮在最上面，RNA沉淀在底部。超螺旋DNA沉降较快，开环及线形DNA沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋DNA区带部位刺入，收集这一区带的DNA。用异戊醇抽提收集到的DNA以除去染料，然后透析除CsCl，再用苯酚抽提1~2次，即可用乙醇将DNA沉淀出来。这样得到的DNA有很高的纯度， 可供DNA重组、测定序列及绘制限制酶图谱等。在少数情况下，需要特别纯的DNA时，可以将此DNA样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。 四、核酸的两性解离及凝胶电泳 核酸既含有呈酸性的磷酸基团，又含有呈弱碱性的碱基，故为两性电解质，可发生两性解离。但磷酸的酸性较强，在核酸中除末端磷酸基团外，所有形成磷酸二酯键的磷酸基团仍可解离出一个H+，其pK为1.5；而嘌呤和嘧啶碱基为含氮杂环，又有各种取代基，既有碱性解离又有酸性解离的性质，解离情况复杂，但总的来看，它们呈弱碱性。所以，核酸相当于多元酸，具有较强的酸性，当pK>4时，磷酸基团全部解离，呈多阴离子状态。 核酸是具有较强的酸性的两性电解质，其解离状态随溶液的pH而改变。当核酸分子的酸性解离和碱性解离程度相等，所带的正电荷与负电荷相等，即成为两性离子，此时核酸溶液的pH就称为等电点（isoelectric point, 简称pI）。核酸的等电点较低，如酵母RNA的pI为2.0~2.8。根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，把pH调至RNA的等电点，可使RNA从溶液中沉淀出来。 根据核酸的解离性质，用中性或偏碱性的缓冲液使核酸解离成阴离子，置于电场中便向阳极移动，这就是电泳（electrophoresis）。凝胶电泳可算是当前核酸研究中最常用的方法了。它有许多优点：简单、快速、灵敏、成本低。常用的凝胶电泳有琼脂糖（agarose）凝胶电泳和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶电泳。可以在水平或垂直的电泳槽中进行。凝胶电泳兼有分子筛和电泳双重效果，所以分离效率很高。 (一)琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持物。电泳的迁移率决定于以下因素： 1. 核酸分子大小 迁移率与分子量对数成反比； 2. 胶浓度 迁移率与胶浓度成反比。常用1%胶分离DNA； 3．DNA的构象 一般条件下超螺旋DNA的迁移率最快，线形DNA其次，开环形最慢。但在胶中加入过多的啡啶溴红时，上述分布次序会发生改变； 4．电压 一般不大于5V／cm。在适当的电压差时，迁移率与电流大小成正比； 5．碱基组成 有一定影响，但影响不大； 6．温度 4~30℃都可，常在室温。 琼脂糖凝胶电泳常用于分析DNA。由于琼脂糖制品中往往带有核糖核酸酶（RNase）杂质，所以用于分析RNA时，必须加入蛋白质变性剂，如甲醛等，以使核糖核酸酶变性。 电泳完毕后，将胶在荧光染料啡啶溴红的水溶液中染色（0.5μg／ml）。啡啶溴红为一扁平分子，很易插入DNA中的碱基对之间。DNA与啡啶溴红结合后，经紫外光照射，可发射出红—橙色可见荧光。0.1μgDNA即可用此法检出，所以此法十分灵敏。可根据荧光强度可以大体判断DNA样品的浓度。若在同一胶上加一已知浓度的DNA作参考，则所测得的样品浓度更为准确。可以用灵敏度很高的负片将凝胶上所呈现的电泳图谱在紫外光照射下拍摄下来，作进一步分析与长期保留。图3-27即为凝胶电泳图谱。 应用凝胶电泳可以正确地测定DNA片段的分子大小。实用的方法是在同一胶上加一已知分子量的样品（如图3-27中的λDNA／HindⅢ的片段）。电泳完毕后，经啡啶溴红染色、照相，从照片上比较待测样品中的DNA片段与标准样品中的哪一条带最接近，即可推算出未知样品中各片段的大小。目前许多试剂公司都能提供各种不同分子量的标准样品。凝胶上的样品，还可以设法回收，以供进一步研究。回收的方法很多，可参考其他资料。最常用的方法是在紫外光照射下将胶上某一区带切割下来，切下的胶条放在透析袋中，装上电泳液，在水平电泳槽中进行电泳，使胶上的DNA释放出来并进一步粘在透析袋内壁上，电泳3~4小时后，将电极倒转，再通电30~60s，粘在壁上的DNA重又释放到缓冲液中。取出透析袋内的缓冲液（丢弃胶条），用苯酚抽提1~2次，水相用乙醇沉淀。这样回收的DNA纯度很高，可供进一步进行限制酶分析、序列分析或作末端标记。回收率在50%以上。 （二）聚丙烯酰胺凝胶电泳 以聚丙烯酰胺作支持物。常用垂直板电泳。单体丙烯酰胺在加入交联剂后，就成聚丙烯酰胺。由于这种凝胶的孔径比琼脂糖凝胶的要小，所以可用于分析分子量小于1 000bp的DNA片段。聚丙烯酰胺中一般不含有RNase，所以可用于RNA的分析。但仍要留心缓冲液及其他器皿中所带的RNase。 聚丙烯酰胺凝胶上的核酸样品，经啡啶溴红染色，在紫外光照射下，发出的荧光很弱，所以浓度很低的核酸样品不能用此法检测出来。 五、核酸的变性、复性 （一）变性 变性（denaturation）作用是核酸的重要物化性质。核酸的变性指核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链的无规则线团，使核酸的某些光学性质和流体力学性质发生改变，有时部分或全部生物活性丧失（图3-28），并不涉及共价键的断裂。多核苷酸骨架上共价键（3", 5"-磷酸二酯键）的断裂称核酸的降解。降解引起核酸分子量降低。 当将DNA的稀盐溶液加热到80~100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链分开，形成无规则线团。一系列物化性质也随之发生改变：粘度降低，浮力密度升高等，同时改变二级结构，有时可以失去部分或全部生物活性。 DNA变性后，由于双螺旋解体，碱基堆积已不存在，藏于螺旋内部的碱基暴露出来，这样就使得变性后的DNA对260nm紫外光的吸光率比变性前明显升高（增加），这种现象称为增色效应（hyperchromic effect）。常用增色效应跟踪DNA的变性过程，了解DNA的变性程度。 可以引起核酸变性的因素很多，如加热、极端的pH、有机溶剂、酰胺、尿素等。由温度升高而引起的变性称热变性。由酸碱度改变引起的变性称酸碱变性。尿素是用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定DNA序列常用的变性剂。甲醛也常用于琼脂糖凝胶电泳法测定RNA的分子大小。 DNA变性的特点是爆发式的。当病毒或细菌DNA分子的溶液被缓慢加热进行DNA变性时，溶液的紫外吸收值在到达某温度时会突然迅速增加，并在一个很窄的温度范围内达到最高值。其紫外吸收增加40%，此时DNA变性发生并完成。DNA热变性时，其紫外吸收值到达总增加值一半时的温度，称为DNA的变性温度。由于DNA变性过程犹如金属在熔点的熔解，所以DNA的变性温度亦称为该DNA的熔点或熔解温度（melting temperature），用Tm表示。DNA的Tm值一般在70~85℃之间（图3-29），常在0.15mol/L NaCI，0.015mol/L柠檬酸三钠（sodium chloride-sodium citrate, SSC）溶液中进行测定。 DNA的Tm值大小与下列因素有关： 1． DNA的均一性 均一性愈高的DNA样品，熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围内。 2． G≡C的含量 G≡C含量越高，Tm值越高，二者成正比关系（图3-30）。这是因为G≡C对比A=T对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可推算出G≡C对的含量。其经验公式为： G≡C% = （Tm – 69.3）×2.44 3． 介质中的离子强度 一般说离子强度较低的介质中，DNA的熔解温度较低，熔解温度的范围较宽。而在较高的离子强度的介质中，情况则相反（图3-31）。所以DNA制品应保存在较高浓度的缓冲液或溶液中。常在1mol／L NaCl中保存。RNA分子中有局部的双螺旋区，所以RNA也可发生变性，但Tm值较低，变性曲线也不那么陡。 （二）复性 变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的链重新缔合（reassociation）成为双螺旋结构的过程称为复性（renaturation）。DNA复性后，许多物化性质又得到恢复，生物活性也可以得到部分恢复。复性过程基本上符合二级反应动力学，其中第一步是相对缓慢的，因为两条链必须依靠随机碰撞找到一段碱基配对部分，首先形成双螺旋。第二步快得多，尚未配对的其他部分按碱基配对相结合，象拉锁链一样迅速形成双螺旋。 反应的进行与许多因素有关。将热变性的DNA骤然冷却时，DNA不可能复性，例如用同位素标记的双链DNA片段进行分子杂交时，为获得单链的杂交探针，要将装有热变性DNA溶液的试管直接插入冰浴，使溶液在冰浴中骤然冷却至0℃。由于温度降低，单链DNA分子失去碰撞的机会，因而不能复性，保持单链变性的状态，这种处理过程叫―淬火‖ （guench）。热变性DNA在缓慢冷却时，可以复性，这种复性称为退火（annealing）。DNA的片段越大，复性越慢。DNA的浓度越大，复性越快。在一定条件下，复性反应的速度可以用Cot来衡量。Co为变性DNA的原始浓度，以核苷酸的摩尔浓度表示，t为时间，以秒表示。实验证明，两种浓度相同但来源不同的DNA，复性时间的长短与基因组的大小有关（图3-32）。具有很多重复序列的DNA，复性也快。 DNA复性后，其溶液的A260值减小，最多可减小至变性前的A260值，这现象称减色效应（hypochromic effect）。引起减色效应的原因是碱基状态的改变，DNA复性后其碱基又藏于双螺旋内部，碱基对又呈堆积状态，它们之间介电子的相互作用又得以恢复，这样就使碱基吸收紫外光的能力减弱。可用减色效应的大小来跟踪DNA的复性过程，衡量复性的程度。 (三)核酸的杂交(hypidization) 根据变性和复性的原理，将不同来源的DNA变性，若这些异源DNA之间在某些区域有相同的序列，则退火条件下能形成DNA-DNA异源双链，或将变性的单链DNA与RNA经复性处理形成DNA-RNA杂合双链，这种过程称为分子杂交（molecular hypidization）。核酸的杂交在分子生物学和分子遗传学的研究中应用极广，许多重大的分子遗传学问题都是用分子杂交来解决的。 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用较广的是用硝酸纤维素膜作支持物进行的杂交。英国的分子生物学家E．M．Southern所发明的Southern印迹法（southern blotting）就是将凝胶上的DNA片段转移到硝酸纤维素膜上后再进行杂交的。这里以 DNA-DNA杂交为例，较详细地介绍Southern印迹法。将DNA样品经限制性内切酶降解后，用琼脂糖凝胶电泳进行分离。将胶浸泡在碱（NaOH）中使DNA变性，并将变性DNA转移到硝酸纤维素膜上（硝酸纤维素膜只吸附变性DNA!），在80℃烤4~6h，使DNA牢固地吸 附在纤维素膜上。然后与放射性同位素标记的变性后DNA探针进行杂交。杂交须在较高的盐浓度及适当的温度（一般68℃）下进行数小时或十余小时，再通过洗涤，除去未杂交上的标记物。将纤维素膜烘干后进行放射自显影。全部过程见图3-33。 除了DNA外，RNA也可用作探针（probe）。用32P标记核酸时（用作探针），可以在3"，或5"末端标记，也可采用均匀标记。 应用类似的方法也可分析RNA，即将RNA变性后转移到纤维素膜上再进行杂交。此方法称Northern印迹法（Northern blotting）。 不同来源的核酸链的杂交形成了近代分子遗传学许多重要实践技术的基础。在有一段合适的互补DNA单链的情况下（通常对这个DNA链进行适当的标记），通过杂交可以在许多其他DNA顺序存在时检出一个特殊DNA序列或基因。应用核酸杂交技术，可以将含量极少的真核细胞基因组中的单拷贝基因钓出来。 六、核酸的酸解、碱解与酶解 核酸在酸、碱和酶的作用下，发生共价键断裂，多核苷酸链被打断，分子量变小，此过程称为降解。下面简要讨论酸、碱和酶对核酸的降解作用。 （一）酸解 酸对核酸的作用因酸的浓度、温度和作用时间长短而不同。用温和的或稀的酸作短时间处理，DNA和RNA都不发生降解。但延长处理时间或提高温度，或提高酸的强度，则会使核酸中的部分糖苷键发生水解，先是嘌呤碱基被水解下来，生成无嘌呤的核酸，同时少数磷酸二酯键也发生水解，使链断裂。若用中等强度的酸在100℃下处理数小时，或用较浓的酸（如2~6mol/L HCl）处理，则可使嘧啶碱基水解下来，更多的磷酸二酯键断裂，核酸降解程度增加。 （二）碱解 RNA在稀碱条件下很容易水解生成2"-核苷酸和3"-核苷酸。因为RNA中的核糖具有2"-OH，在碱催化下3",5"-磷酸二酯键断裂，先形成中间物2", 3"-环核苷酸，它不稳定而进一步水解，生成2"-核苷酸和3"-核苷酸的混合物。反应过程见图3-34。 RNA碱解所用的KOH（或NaOH）的浓度可因温度和作用时间而不同，如1 mol/L KOH（或NaOH）在80℃下作用1h，或0.3 mol/L KOH（或NaOH）在37℃下作用16h均可以使RNA水解成单核苷酸。在同样的稀碱条件下，DNA是稳定的，不会被水解成单核苷酸，因为DNA中的脱氧核糖C2"位没有-OH，不能形成2", 3"-环核苷酸。DNA在碱的作用下，只发生变性，不发生磷酸二酯键的水解。 根据碱对DNA和RNA的不同作用，可用碱解法从RNA制取2"-和3"-核苷酸；用碱处理DNA和RNA混合液，使RNA水解成单核苷酸保留在溶液中，再把DNA从溶液中沉淀下来，分别进行定量测定。 图3-34 RNA碱解反应过程 （三）核酸的酶解 1. 核酸的酶法水解与核酸酶的分类 能水解核酸的酶称为核酸酶（nucleases）。实际上所有的细胞中都含有各种核酸酶。它们参加正常的核酸代谢过程。有些器官如胰脏，可以提供含有大量核酸酶的消化液以水解食物中的核酸。核酸酶都是―磷酸二酯酶‖（phospho diesterases），它们催化在水参与下磷酸二酯键的断裂。由于核酸链是由两个酯键将核苷酸连接而成的，核酸酶切割磷酸二酯键的位置不同会产生不同的末端产物。 核酸酶分为内切核酸酶（endonuclease）和外切核酸酶（exonuclases）。外切核酸酶只从一条核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键释放单核苷酸。而内切核酸酶在核酸链的内部切割核酸链，产生核酸片段（参见第九章）。 与大部分的酶一样，核酸酶对它们作用底物的性质表现出选择性或特异性。有些核酸酶只作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNases），而有些核酸酶只作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNases）。既能水解DNA亦能水解RNA的称非特异性核酸酶，例如两种非特异性核酸酶蛇毒磷酸二酯酶和脾磷酸二酯酶，它们在特异性上是互补的，蛇毒磷酸二酯酶以游离的3"-OH末端开始切割产生5"-单磷酸核苷，而脾磷酸二酯酶从游离的5" -OH末端开始切割产生3"-单磷酸核苷。 核酸酶还表现出对二级结构的特异性，有些核酸酶只水解单链核酸；有些则只水解双链核酸。有些核酸酶选择核酸链含某一碱基的核苷酸处切割核酸链（碱基特异性）；有些则要求切割点具有4~8个核苷酸残基的特殊核苷酸顺序，对分子生物学家来说，核酸酶是在实验室中切割和操作核酸的工具。 2. 限制性内切酶 限制性内切酶（restriction endonuclease）也称限制性酶（restriction enzyme），是由W. Arber，H. Smith和D. Nathans等人（1979年）从细菌中分离的一类酶。限制酶具有极高的专一性，识别双链DNA上特定的位点，将两条链都切断，形成粘末端或平末端。限制酶可以用来解剖纤细的DNA分子，在分析染色体结构、制作DNA的限制酶谱、测定较长的DNA序列、基因的分离、基因的体外重组等研究中是不可缺少的工具。对于研究DNA的分子生物学家来说，这是一把天赐神刀——分子生物刀。 限制性酶的生物学功能在于防御或―限制‖入侵细胞的外DNA（如噬菌体DNA）。原核生物利用他们独特的限制性内切酶把外来DNA切成无感染性的片段。但不能降解自身细胞中的染色体DNA，因为细胞内还有―共座‖的DNA甲基化酶修饰相应序列使之受到保护。 限制酶可被分成三种类型。I型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。I型限制性内切酶在随机位点切割DNA；Ⅲ型限制酶识别双链DNA的特异核苷酸序列，并在这个位点内或附近切开DNA双链。 Ⅱ型限制性内切酶已被广泛应用于DNA分子的克隆和序列分析，这是因为它们水解DNA不需要ATP，并且也不以甲基化或其他方式修饰DNA。最重要的是它们在它们所识别的特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA链。这些特殊序列常常含4个或6个核苷酸残基，通常具回文结构（palindromic structure），切割后形成粘末端（或平末端）。例如，大肠杆菌的一限制酶称EcoR I，它识别下列六核苷酸顺序： 5"……GAATTC……3" 3"……CTTAAC……5" 这种回文结构的两条链以5"→3"方向阅读序列都是一样的结构，当EcoR I遇到DNA的这种序列时，它会对这种DNA链进行交错切割，产生突出的5"末端。 5"……G AATTC……3" 3"……CTTAA C……5" 有些限制酶，如Pst I，它识别序列5"-CTGCAG-3"，并在A与G之间切割DNA双链产生3"突出粘性末端。还有些限制酶，如Bal I，DNA链产生具有平末端（blunt end）的DNA片段。 限制酶的命名较为特殊。以EcoR I为例加以说明。第一个大写字母E为大肠杆菌E. coil的属名的第一个字母，第二、三两个小写字母co为它的种名的头两个字母。第四个字母用大写R，表示所用大肠杆菌的菌株。最后一个罗马字表示从该细菌中分离出来的这一类酶的编号。目前提纯的限制酶已很多，常用的约有100多种，并且已转化成为商品。大大节约了研究人员的时间。 3. DNA的限制酶图谱 在研究某一种DNA时，弄清楚这种DNA分子有哪些限制酶切点是很重要的，这就是制作DNA的限制酶图谱（restriction map）。建立限制酶图谱是进一步深入分析此DNA的基础。 图谱的制作十分简单。将纯化的DNA（往往用分子克隆法，从单一克隆中扩增而制备）用不同的限制酶切割，进行凝胶电泳分析。对环形DNA要先找出一个对该DNA只有一个切点的酶，以此点作为参考点。根据测量凝胶电泳图上各酶切片段的长度，就可以决定各切点的位置。有时，需要用两种酶相继降解，有时需要用一种酶部分降解才能决定其酶切位点的位置。 如果将DNA的一端（3"，或5"端都可）先进行放射性同位素标记，再用不同酶分头切割（完全降解，部分降解或双酶相继降解），各切点位置的决定就要容易得多了。 图3-35为一种小分子环形DNA分子质粒pBR322DNA的限制酶图谱（参阅第十章）。此图表明限制图实际上是各种限制性内切酶在某一DNA分子上或DNA片段上切点的排列。由于各种酶切位点之间的距离是以碱基对表示的[对大的染色体DNA则以千碱基对 （kilobase pair, kb）或百万碱基对（Mb）表示，也可计算出两切点间的绝对距离，因此，限制图也称物理图谱。

Nummer der Firma翻译成中文是：在公司的电话相关单词学习：der abbr. derivation 引出; derivative 引出的; dernier (Fench=last) （法语）最后的; derive 引伸出; [例句]But for the van der Waal"s gas, now it"s going to be different.但是对于范德瓦尔斯气体，情况就不一样了。

smile的过去式是：smiled。　　【附】规则动词过去式的变化规律　　1.一般在词尾加-ed（即一般-ed）。如：　　play---played，rain---rained，visit---visited　　2.以e结尾只加-d（即e尾-d）。如：　　like---liked，name---named，close---closed　　3.以辅音字母+y结尾的单词，先将y改成i，再加-ed（即辅y先改i）。如；　　study---studied，carry---carried，cry---cried　　4.以重读闭音节结尾，且词尾只有一个辅音字母时，先双写这个辅音字母，再加-ed（即重闭单辅先双写）。如：　　stop---stopped，plan---planned，drop---dropped，prefer---preferred　　注意：travel和quarel在英式英语中要双写，在美式英语中不双写。

随着电子 游戏 发展的越来越成熟，开发商不再拘泥于像素形式的 游戏 表现，无论画面亦或是 游戏 类型都有了更多样的选择。当电子 游戏 成长为主流 娱乐 方式的不二之选，意味着那些令玩家深度沉迷的作品，潜移默化的在改变或影响玩家的心理。于是某些擅于含沙射影的 游戏 厂商，试图通过放大玩家的潜意识来让 游戏 更受欢迎，或通过 游戏 传播 社会 舆论。 放眼 游戏 界，最初的 游戏 作品以 耐玩 有趣为主，天马行空为辅，虽然谈不上多正派，但纯粹的“反 社会 色彩” 游戏 几乎鲜有问世。直到《Payday: The Heist》（收获日：掠夺）的出现 ，一家瑞典的小工作室“Overkill”将反派 游戏 带入了这个圈子 ，成功吸引一众玩家的高度关注。 小到街边的便利店，大到和其他队友一起组队“抢银行”，在《PAYDAY》中玩家“无恶不作”，制作它的初衷对于Overkill工作室的创始人安德森兄弟来说，仅仅因为一个简单而又直接的理由——“打心底里，人人都想当个抢劫犯。”老谈常说，一款爆红的 游戏 背后总会或多或少的另辟蹊径，《PAYDAY》系列正是如此。聊起它背后的故事，追根溯源我们便从此次的“电子 游戏 ，从头细看”深度谈一谈“ 将氪金搬上了Steam，还弱弱联合了的Overkill ”。 谈起《收获日》在 游戏 界的名气，玩家们通常会以第二部作为标准侃侃而谈，自发选择忽略初代“收获日”另辟蹊径的成果。其实这也在情理之中，要怪只能怪当时该 游戏 背后的厂商实在是只能用一个字来形容——穷。常年处于穷困潦倒的Overkill，就连工作室前身都显得格外心酸。最初，一家名为“ GRIN ”的 游戏 工作室艰难的在 游戏 界靠着为各大 游戏 厂商代工研发维持生计，他们曾参与了卡普空《生化尖兵》的制作，最终却因为代工SE《最终幻想》衍生 游戏 的计划泡汤而破产。 对于 游戏 界太多小工作室来说，如果接不到指派的话破产就像家常便饭。 无奈之余GRIN的创始人安德森兄弟，重新创建了新的工作室“Overkill” 。这一次，他们准备自己研发 游戏 。老谈猜测他们在穷困潦倒的处境下放大了自己内心的欲望，才选择设计“反 社会 色彩”风格的作品。小成本、反英雄主义、合作FPS类型的 《收获日：掠夺》 诞生在小作坊之中。因为工作室没有多余的资金，老板亲自上阵参与脸模和配音的开发。没有实体版的《收获日》就像是一款想要靠着另辟蹊径而发家的小众 游戏 ，在PS3上没有激起太多水花，反而Steam上得到了玩家们的些许关注。 混迹于 游戏 圈儿的重度玩家或许听说过“ Starbreeze ” 游戏 公司（简称S社）的名号。不错，它正是毁誉参半的 《收获日2》开发商 ，或者说是以Overkill工作室为核心研发力量的背后金主。如果没有S社当初坚决地收购计划，或许业界也不会出现一款曾引起轩然大波的反派 游戏 。说起创立于1998年的这家公司，最初的境遇与Overkill几乎同病相怜。他们创业初期便致力于“想要做出伟大的 游戏 ”，但几款立项的 游戏 相继夭折，数年下来没有任何营收的S社很快走到了破产边缘，直到收购“O3 游戏 ”后才有了第一款作品《光暗包围战》。然而，单凭一款 游戏 无法令S社起死回生，欲求无门的他们还遇上了 游戏 界的毒瘤“ 维旺迪 ”，费尽心力去研发 游戏 也没有从维旺迪手中拿到多少好处。 而后S社深思熟虑，决定暂时放弃“伟大 游戏 ”的梦想，接受相对小体量的 游戏 方案。这次他们找到了在TGA上大骂奥斯卡的导演Josef Fares，联手开发出了 好评如潮的《兄弟：双子传说》 。这款 游戏 的诞生终于解决了S社资金上的燃眉之急，颇有疲倦感的S社决定转型发展业务，一眼看中了Overkill旗下《收获日》的发展前景。苦于资金受限，有着浓厚收购欲望的S社甚至增发了股票，套现来实现Overkill的收购。事实证明他们的坚持是正确的，日后 Overkill成为了S社最核心的研发主力 。只不过这一次两者的合并在 游戏 界总归显得那么辛酸、弱小。 时间回溯到2013年8月，正值Overkill被Starbreeze收购的第二年，《收获日2》诞生并在Steam平台大放异彩。短短一个月的时间内该 游戏 就大卖100万份， 瞬间成为2013年最亮眼的现象级 游戏 作品 。作为黑马的《收获日2》之所以能够取得如此耀眼的成绩，一方面是当年Steam平台在国内玩家看来更多像是Dota2、CSgo的启动器，其他优秀 游戏 的普及度并不高；另一方面则是《收获日2》在 游戏 内容上独特的定义，说到底还是厂商抓住了玩家的潜在心理。 作为第一部小成本《收获日》的续作，《收获日2》在画面以及操作体验上有了质的飞跃， 游戏 的核心价值观也被完整的保存了下来。癫狂的设定、充满刺激感的警匪突袭，在世界一流的电音BGM下做一名疯狂且优雅的反派激发了玩家的欲望，无疑令《收获日2》备受好评，跻身千万销量殿堂。然而事实真的如此么？其实不然，商业成功下的它同样有一大堆致命缺点，首当其冲的便是“ 臭名昭著的DLC泛滥兜售 ”。 按 游戏 史的发展来讲，《收获日2》属实不是第一款在Steam搞氪金DLC的 游戏 ，但却没有任何一款 游戏 像它这么疯狂。Starbreeze在取得成功后便一直着手研发该 游戏 的DLC，早期承诺的“不加入内购”变成了一纸空谈。据数据表明后期《收获日2》竟然成为了 本体内容占比20%，DLC内容占比80%的 游戏 ，并且像国内网游一样，只要氪金就能变强。除此之外，只要更新就会检索全部 游戏 文件令其被玩家称为“ 硬盘毁灭者 ”。Starbreeze公司口碑逐渐崩坏，钱倒是赚得盆满钵盈。紧接着，他们迎来了噩梦般的结尾。 享受了一夜暴富之后的Starbreeze开始着手签约一系列独立 游戏 ，几乎没有一款能给公司带来正面收益，除了《黎明杀机》外全军覆没。而膨胀后投资上千万美元的VR领域更加石沉大海，几番波折下Starbreeze终于从内部管理上开始瓦解，各自为政的管理层使得公司发展遇到了空前的阻碍。如果再不突破重围，公司将面临破产。这次，他们把宝押在了 游戏 《超杀行尸走肉》上，却也成为了压死他们的最后一根稻草。 试图捡起“行尸走肉”IP而开发的《超杀行尸走肉》毫无疑问失败了，它的崩盘与如今凉凉的《圣歌》如出一辙。投入巨资的 游戏 作品预计要销售500万份才能让公司继续运转，但最终销量仅仅10万份左右。 Starbreeze迎来了意料之中的破产 ，甚至因为公司内部问题而遭遇了来自瑞典警方的突击调查。曾经引领无数玩家持枪突击的 游戏 公司，最终在现实中被警方持枪破门而入，不禁有些讽刺。

access读作【诶课赛斯】（进入，通道，使用，接近的意思）；accuse读作【额Q资】（控告，指控的意思）

in 是“静三动四”的介词，也就是说可加三格可加四格，简单的说:“去哪”加四格，"在哪"加三格。希望对你有帮助~

转子的类型及用途北京英格恩赵2022-05-25 14:43·字数:723·阅读:318转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。角式转子用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后沿管壁滑落，导致颗粒与管壁的摩擦。例子：Sorvall SS -34 或Beckman JA-20 、近垂直转子(Beckman) 、高速离心的垂直转子。外摆式转子（也称为水平转子）用途：材料分离。常在临床医疗中用来分离各种细胞。说明：样品将从旋转枢纽上甩向旋转平面。优点：材料必须经过离心管的整个长度，而且穿过管中通常呈黏性的介质。这对样品来说比较温和，而且可以保持梯度与分层。转子中的外摆桶可以更换，这样就可以采用不同大小与形状的离心管，不易导致气雾。缺点：更长表观离心力，沉淀要求的时间比角式转子要求的长。有很多活动部件。用久后更易损坏。例子：SW55 Ti(Backman) 。连续流式转子用途：在大容量液体中分离颗粒与细胞。例如，沉淀几升的细菌及单克隆抗体的制备。说明：设计用于大容量的分离，带有进样口与出样口。随着样品液体缓慢而连续地加入离心机，管内的沉淀块逐渐增大。不同体系每小时可以处理10-100 L 不等。优点：可以处理的体积大。缺点：离心机必须配以进样口和出样口；清理与保养耗费时间；许多部件容易遗失或损坏；产生气雾。例子：SharplesTM （用千奶酪的分离）， Avanti J 系列(Beckman) 。区带转子用途：密度梯度上大规模分离颗粒，可以分离液体、细胞或组织样品。说明：细胞悬液与梯度介质可以用泵从专门的入口打进转子里面，速度可调，以选择性排出密度不同的细胞。优点：可处理的体积大。缺点：需一定技巧。例子：离心淘析器、CF-32Ti (Beckman

意思是：笑。单词：laugh英［lɑ：f］释义：v.笑，发出笑声；笑着说n.笑（声）；引人发笑的事或人［复数：laughs；第三人称单数：laughs；现在分词：laughing；过去式：laughed；过去分词：laughed］短语：Laugh at嘲笑；笑话；取笑；讥笑词语辨析：laugh，smile，giggle，grin，beam，sneer这些动词均含“笑”之意。1、laugh最常用词，指因喜悦、愉快或轻视而出声的笑或大笑。2、smile指面露微笑，侧重于无声。3、giggle指发出咯咯的笑声，较多地用于女人或孩子。4、grin指露齿而笑。5、beam书面用词，指人因心情舒畅而发出的笑，即喜形于色地笑。6、sneer指冷笑、嘲笑。

DCBDC 本文讲述了英国人怎样互相做以称呼.说了见到男性会说MR+姓氏,如果互相熟悉则可以直接称呼他的名字.见到女性且不知道她是否结婚,会说MS+姓氏.文末讲了英国姓名的来历有很多方式,举了rose 和 wolf的例子.,9,26.D 27.C 28.B 29.D 30.C,1,26. D 27.C 28.B. 29.D 30.C,0,dcbdc,0,In England,people never use Mr,Mrs,Miss or Ms before their first names.They use them with their family names.If you meet a man with the name Philip Allan Beckman,you can call him Mr.Beckman.If you"re very close,you can call him Philip.If you meet a woman named Alice White,and you don"t know whether she is married or not married,you can tell her Ms.White.In English,people call Elizabeth “Liz” for short. The English names e from different things.For example,“Rose” es from a kind of flower.And “wolf” es from a animal.To many people,the meaning of a name is very important. 26.In English,people use Mr,Mrs,Miss or Ms before their __________ names. A.first B.given C.middle D.last 27.If you"re not close with Philip Allan Beckman,you can call him_______. A.Philip B.Mr Philip C.Mr Beckman D.Mr Allan 28.You don"t know whether Alice White is married or not,you can call her ________. A.Mrs White B.Ms White C.Ms Alice D.madam White 29.English names e from ________. A.flowers B.animals C.flowers and animals D.different things 30.To many people,the meaning of a name is _________. A.popular B.easy C.important D.good

is肯定是要的,splitting夸张了点,建议不要 his face is in a wide grin.

BD公司的 就是很贵 但是性能确实好 很多实验室都用的是BD公司的