考马斯亮蓝测定可溶性蛋白质样品提取后是否要定容?是先离心再定容还是先定容再离心?植物生理学实验书写法都不一样,我昨天是按

考马斯亮蓝测定蛋白的标准曲线绘制

考马斯亮蓝测定蛋白的标准曲线绘制
我做了好几次考马斯亮蓝蛋白的标准曲线,曲线还算标准,但是吸光度总是大于1,各种试剂我都是准确配制的.但就是找不出原因.麻烦能告诉我到底是怎么回事,谢谢!

zlovelxyxx1年前2

janejaneF6 共回答了14个问题 | 采纳率78.6%

1.分光光度计预热下会准些
2.是否调0100,
3.用紫外的试试看
楼主可曾换一台分光光度计试试,有些仪器时间长了不准的

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关于考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的含量问题

关于考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的含量问题
测的是豆芽的蛋白质含量,我按照那个公式算,得出的结果竟然非常之大,明明显是错误的.请问一般蛋白质含量范围是什么呢?单位是ug/g.
豆芽样品我测定的吸光度是0.068（老师说我这个数据太小了）,从标准曲线中查蛋白质含量大概是800/3 ug.

twengo1年前1

至西汉入朝 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

1 要减去空白对照.
2 注意公式里的单位和稀释倍数别搞错.
3 降低稀释倍数,大约比现在浓3-8倍,使吸光度在0.2-0.6范围内,以减少误差.

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为什么实验室都是用考马斯亮蓝测蛋白而不用茚三酮呢

baoxiangbao1年前1

melyan 共回答了15个问题 | 采纳率100%

考马斯亮蓝可以很好的与蛋白质结合,且结合牢固,检测方便.茚三酮是用来检测氨、一级胺、二级胺,尤其是氨基酸.所以也就是说考马斯亮蓝一般用来检测蛋白质,而茚三酮是用来检测氨基酸的.

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考马斯亮蓝测定蛋白质浓度考马斯亮蓝法测蛋白,做标准曲线时,梯度BSA是溶解在水或氯化钠溶液中,请问：我的样品该怎么处理?

考马斯亮蓝测定蛋白质浓度
考马斯亮蓝法测蛋白,做标准曲线时,梯度BSA是溶解在水或氯化钠溶液中,请问：我的样品该怎么处理?因为我的样品不是固体,是液体的.应该怎样处理来测OD值.
就是说待测样品是液体的，在测定浓度的时候要不要加水或者氯化钠，就像测标准蛋白那样。还是就直接把液体的样品取出一定量来测。
我看到有的文献是取的100ul,有的是取的1mL，那有什么区别吗？

射蛆yy鸭1年前2

rr水瓶人 共回答了20个问题 | 采纳率95%

是液体就好测了呀
把样品取出1ml,按照做标准曲线时一样的处理,再测OD值就行了

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考马斯亮蓝测蛋白时 考马斯亮蓝主要与蛋白质中的碱性氨基酸结合 那么考马斯亮蓝会与游离的碱性氨基酸结合吗

考马斯亮蓝测蛋白时 考马斯亮蓝主要与蛋白质中的碱性氨基酸结合 那么考马斯亮蓝会与游离的碱性氨基酸结合吗
就是溶液中的碱性氨基酸会影响蛋白质的测定吗

fortepiano1年前1

wqrag 共回答了20个问题 | 采纳率90%

会的.不仅碱性氨基酸,去垢剂,如SDS,还有高浓度的缓冲液都会有影响.而且由于蛋白质酸性,碱性氨基酸含量不同,即使蛋白质浓度相同,所测出的值也会不同.

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电泳蛋白质 考马斯亮蓝没有脱色完全 能不能照相

aixue_1211年前2

lrxjs 共回答了25个问题 | 采纳率84%

可以,但拍出来的图片背景很黑,条带会不清晰不太好看,如果实在着急,可把胶和脱色液一起放到微波炉里面加热1分钟

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我在做考马斯亮蓝测蛋白质含量,在标准曲线制作时.老师要求R值0.99以上,我现在只徘徊在0.984附近,

我在做考马斯亮蓝测蛋白质含量,在标准曲线制作时.老师要求R值0.99以上,我现在只徘徊在0.984附近,
我实验用的就是移液枪.但是有点不准,我就是想知道是不是移液枪不准会对实验结果影响有我的这么大

花漂零1年前1

钟麦 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

没做过这个实验 但是可以确定的是做曲线这个活儿 要看运气 配标准品时量具要准 尽量小体积来配制 这样可以用枪 枪比其他量具的稳定性（误差拨动小）好 用小体积的标准品时 可以用96孔酶标板来测定OD值 保证测量误差均一
我现在做蛋白浓度测定是用的pierce的BCA试剂盒 用酶标板测定 r值一般在0.997以上
移液器一般要定期校准,一般至少半年到一年得校准一次,枪的不稳定性确实会给实验带来比较大的麻烦,还有你可以试试另外一种方法“深吸浅打”,就是将枪按到第二档位吸液,打的时候打到第一档

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我看到蛋白质和考马斯亮蓝染料结合后引起染料最大吸收的改变,从465nm变为595nm,光吸收增加.染料复合物具有高的消光

我看到蛋白质和考马斯亮蓝染料结合后引起染料最大吸收的改变,从465nm变为595nm,光吸收增加.染料复合物具有高的消光系数,因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度,最低检出量为1μg蛋白.
不太明白消光系数的定义

chenbinyongan1年前1

紫慕云 共回答了14个问题 | 采纳率100%

消光系数是被测溶液对光的吸收大小值；
被测溶液浓度高,溶液显色后颜色深,对光吸收大,光透射率低,反之就小.
同种溶液对不同波长的光谱有不同的吸收峰,为了提高灵敏度,一般选用光的互补色来作为波长的优选条件,蓝色对黄色光是互为补色,595nm波长正是此范围,可以测出最大吸收值,提高了灵敏度.
而465nm是绿色光,蓝色溶液吸收低,灵敏度自然低了.

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考马斯亮蓝是什么?

cccc1年前1

逸群 共回答了31个问题 | 采纳率93.5%

考马斯亮蓝属于三苯甲烷类染料,可与蛋白质形成较强的非共价复合体.考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分.
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量成正比.
　考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色.

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SDS-聚丙烯酰胺聚胶电泳--通过考马斯亮蓝（CBB）染色

SDS-聚丙烯酰胺聚胶电泳--通过考马斯亮蓝（CBB）染色
SDS-聚丙烯酰胺聚胶电泳,考马斯亮蓝（CBB）染色应该在什么时候?电泳开始前还是一段时间后,还是其他什么?

xuxiaoguoxiang1年前1

wangxu586 共回答了18个问题 | 采纳率77.8%

是电泳结束后,把分离胶切下来放在平皿里,用考马斯亮蓝染液（0.05%）染色过夜,之后换脱色液（醋酸：乙醇：水 1：4：5）泡一段时间就能看到清晰的条带了~

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