硫酸铵沉淀蛋白质酶液用硫酸铵30%去过一次杂质,离心过,然后我直接加到75%把蛋白沉淀了,充分溶解4度过夜保藏 ,120

不能 因为高浓度硫酸铵溶液会发生电离,电离出铵根离子和硫酸根离子.铵根离子又水解,使溶液中氢离子浓度很高.这样高的氢离子浓度会使蛋白质变性.嗯,就这么多了,加分呦.

很多蛋白都是有实验数据的
如果没有实验数据
可以通过做一个梯度然后电泳的方法进行确定
其实硫酸铵的浓度
和提取方法也有关
因为还取决于杂质蛋白的沉淀

硫酸铵可能会损坏某些蛋白.加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀.
对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析.
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效.
沉淀所需溶液：
饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解）.
1M Tris-HCl,pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液.
方法：
1,过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）.
2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值.
3,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度.搅拌1小时.
4,10000g离心20min.
5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次.再次离心.
6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀.
7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去.

铵根离子水解显酸性,氨基酸中的胺基显碱性可以与酸反应转化为盐而溶解