考马斯亮蓝法测可溶性蛋白含量制作标准曲线时,横坐标说是蛋白质含量,这个含量是指标准蛋白的质量还是浓度.如果是浓度的话,是

所在城市在那里2022-10-04 11:39:542条回答

考马斯亮蓝法测可溶性蛋白含量
制作标准曲线时,横坐标说是蛋白质含量,这个含量是指标准蛋白的质量还是浓度.
如果是浓度的话,是标准蛋白的浓度,还是加上考马斯亮蓝后的浓度呢.

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syhk75 共回答了20个问题 | 采纳率95%
我觉得都可以,当你计算其他蛋白浓度时候统一就行了.
1年前
剑贱 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%
加入亮蓝浓度
1年前

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考马斯亮蓝法测蛋白质时为什么浓度越高而吸光度越低
我在用考马斯亮蓝测定透明质酸中的蛋白质时,吸光度还没有空白样的吸光度高,指针向反方向打,有时会出现浓度越高而吸光度越低,带入标准方程中为负数,麻烦你们能告诉我该怎么办?
在做标准曲线时没问题,可是在测样品时,就会出现吸光度为负数的问题 糖胺聚糖怎么去除
大吾小路1年前2
sweetlemonade 共回答了18个问题 | 采纳率100%
透明质酸中的蛋白质指的是一种蛋白聚糖中的蛋白质吗,是否应该考虑除去其中的糖胺聚糖,将蛋白质纯化,因为考马斯亮蓝需要与蛋白质结合才能显色,样品中的糖胺聚糖可能有影响,或者是样品污染
考马斯亮蓝溶液应为酸性,并且变成蓝绿色是就不能再使用了
实验时一定要最后加入蛋白质溶液,
另外,样品中的Tris、乙酸、2-巯基乙醇、EDTA等物质对实验结果有少量颜色干扰,可以在做标准曲线时可以用缓冲液代替蒸馏水,就可以将干扰扣除,
但是大量的去污剂如SDS对颜色的影响太大不容易去除,只能想办法从样品中去除去污剂,
考马斯亮蓝法注意事项!为什么我用这个方法在做标准曲线时,分光光度计用0 调零后,刚开始 2个标准浓度的吸光度都是上升趋势
考马斯亮蓝法注意事项!
为什么我用这个方法在做标准曲线时,分光光度计用0 调零后,刚开始 2个标准浓度的吸光度都是上升趋势,到了后面 就全是负值.而且越负越厉害.
amoyu1年前1
cherry4167 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%
我刚做过了,刚开始做也是这样的,后来发现我用的考马斯亮蓝是R250,做标准曲线要用G250的,换过之后一次就测出来了,而且R有两个9.
您好,我用的考马斯亮蓝法测污泥蛋白质,为什么样品比空白组吸光度还低?
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您好,我用的考马斯亮蓝法测污泥蛋白质,为什么样品比空白组吸光度还低?如果要用缓冲液,应该怎么配置呢?
x3y2z11年前1
bus012 共回答了25个问题 | 采纳率92%
空白组是水?
出现这个情况可能是你的样品中的蛋白质含量确实很低,低过一定浓度时,结果就没有参考价值了.
也有可能是考蓝工作液存放时间太久失效了,可以用一些蛋白标准品(比如BSA)来检验一下考蓝工作液是否正常.
如果要用缓冲液做空白组的话,就用和蛋白样品一样的缓冲液就可以了
考马斯亮蓝法测蛋白质含量用这个方法测紫外时,是用什么做空白调零的呢?是水还是染色剂+0.1ml的水呢?还有,标准的考马斯
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
用这个方法测紫外时,是用什么做空白调零的呢?是水还是染色剂+0.1ml的水呢?还有,标准的考马斯亮蓝染色剂是什么颜色的呢?为什么我的有点儿发青呢,黑黑的,但好像不是红褐色,然后上面有好像又红棕色油层漂浮着,过滤也过滤不出什么东西.
ttfang19821年前1
心生刀巴 共回答了22个问题 | 采纳率90.9%
调零当然是用染色剂了,加和蛋白一样的水.商品化的和我们自己配的颜色都不一样,我们自己配的就是有点发青,用起来还是蛮不错的,和BCA的试剂盒差不多,蛮不错的.
考马斯亮蓝法测牛血清蛋白标准曲线,为什么蛋白含量与A595值是负相关的?
kelvin_lj1年前3
moneyanhuhu 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%
当然不对,你可用BCA法定量
考马斯亮蓝法测蛋白浓度,具体步骤有哪些,需要什么试剂?
vikings1年前2
h0dybvb 共回答了19个问题 | 采纳率100%
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量.如核糖核酸酶或溶菌酶.去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果.如TritonX-100、SDS、NP-40等.
1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定.
2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准.如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白.通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线.
3.将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS).
4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去.
5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30rain.染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度.注意,显色反应不得超过30min.
6.根据标准曲线计算待测样本的浓度.
注意:
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合,反应快速,并且稳定,无法用普通试剂洗掉.待一两周左右,皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍
三、 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作
(一)、试剂:
1、 考马斯亮蓝试剂:
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤.最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4.
2、 标准蛋白质溶液:
纯的牛血清血蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液.
(二)、器材:
1、722S型分光光度计使用及原理().
2、移液管使用().
(三)、标准曲线制作:
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl (ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂 (ml) 5 5 5 5 5 5 5
摇匀,1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
1、
2、以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐标轴上绘制标准曲线.
1)、利用标准曲线查出回归方程.
2)、用公式计算回归方程.
3)、或用origin作图 ,测出回归线性方程.即A595nm=a×X( )+6
一般相关系数应过0.999以上,至少2个9以上.
4)、绘图时近两使点在一条直线上,在直线上的点应该在直线两侧.
(四)、蛋白质含量的测定:
样品即所测蛋白质含量样品(含量应处理在所测范围内),依照操作步骤1操作,测出样品的A595nm,然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量.
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间,所以上述样品如果A595nm值太大,可以稀释后再测A595nm值,然后再计算.
(五)、注意事项:
1、 玻璃仪器要洗涤干净.
2、 取量要准确.
3、 玻璃仪器要干燥,避免温度变化.
4、 对照:用被测物质以外的物质作空白对照.
考马斯亮蓝法测蛋白质含量标准曲线不过原点怎么办
考马斯亮蓝法测蛋白质含量标准曲线不过原点怎么办
以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白质.称50mg考马斯亮蓝G-250溶于25mL 95%乙醇和50 mL 85%(w/v)的磷酸混合液中,用蒸馏水定容至500mL,快速滤纸过滤后储存于棕色瓶中备用.  称取100mg BSA,溶于蒸馏水中,定容至100mL,则其浓度为1000μg/mL.按表在6支具塞试管中分别加入BSA溶液和蒸馏水,配制成0~100μg/ml牛血清蛋白溶液各1ml,混匀后加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,盖塞、混匀,室温静置2min,用分光光度计在595nm处检测吸光
core_shara1年前1
zhaobo7788 共回答了16个问题 | 采纳率100%
用标准加入法,必过原点.
酸和水混合后,最好多静置一会,要不测出来的数值会不稳定.
考马斯亮蓝法测蛋白质含量标准曲线不过原点怎么办
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以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白质.称50mg考马斯亮蓝G-250溶于25mL 95%乙醇和50 mL 85%(w/v)的磷酸混合液中,用蒸馏水定容至500mL,快速滤纸过滤后储存于棕色瓶中备用.
  称取100mg BSA,溶于蒸馏水中,定容至100mL,则其浓度为1000μg/mL.按表在6支具塞试管中分别加入BSA溶液和蒸馏水,配制成0~100μg/ml牛血清蛋白溶液各1ml,混匀后加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,盖塞、混匀,室温静置2min,用分光光度计在595nm处检测吸光度.以测得的吸光值为纵坐标,表中各管蛋白浓度为横坐标,做标准曲线.
可是测出来的吸光度分别为0.366,0.420,0.482,0.523,0.576,做出来的标准曲线不过原因,
lcd19791年前1
一夜柔情 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%
不过原点是很正常的实验结果呀
如果你一定要过原点,那么做线性回归的时候把常数强制设为0,对斜率进行回归.
影响考马斯亮蓝法测定蛋白质的因素有哪些
xzzhm20081年前1
bj7250el 共回答了20个问题 | 采纳率95%
Bradford法的突出优点是:
(1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多.
(2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.
(3)干扰物质少.如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法.
此法的缺点是:
(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差.
(2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH.(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样).
(3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度.
请问绘制标准曲线要不要减空白?我用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,用酶标仪测得OD值,请问绘制标准曲线时用不用减去空白对照?谢
请问绘制标准曲线要不要减空白?
我用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,用酶标仪测得OD值,请问绘制标准曲线时用不用减去空白对照?谢谢大家了
ronnyww1年前1
qianlei_ 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%
要做的合乎标准的话,应该是用空白调零的,那个数值应该是很接近零的,所以可以不管的,不用减去.
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亦梦亦醒1181年前3
zzhhkk 共回答了11个问题 | 采纳率63.6%
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(2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.
(3)干扰物质少.如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法.
此法的缺点是:
(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差.
(2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH.(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样).
(3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度.
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hszouk1年前2
我爱你红儿 共回答了21个问题 | 采纳率85.7%
大概与样品中的干扰物质有关.
干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等.
干扰考马斯法的:主要是去污剂,如 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH.(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样).
植物样品经常会含有酚类、有机酸等,提取蛋白可能用到Tris,这是常见的干扰物.检查一下操作程序吧.
测定浓度时用buffer作空白对照了吧?
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bluesaka1年前1
越唱越爱 共回答了15个问题 | 采纳率93.3%
标准曲线可以自己测定的.
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