试述凯氏定氮法测定粗蛋白质的原理、方法及注意事项.试说明该方法存在的不足,并对该方法提出改进方法.
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继往开来 共回答了14个问题
|采纳率92.9%- 原理是:蛋白质由氨基酸组成,氨基酸含氮,且含量较高,平均在16%左右,故通过测得氮元素的质量就可以粗略算出蛋白的含量,即m(N)/16%即为蛋白含量.一般将蛋白中的氮转化为氨气,测的氨气的量即可.不足很明显了,太粗略,不准确.比如三聚氰胺就是钻了凯氏定氮法的空子.改进的话,改用其他方法,现在谁还用这方法?考马斯亮蓝法就可以,Folin酚法也行.
- 1年前
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shencker1年前1
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黄昏碎了 共回答了15个问题
|采纳率100%(1) 样品应是均匀的.固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀.
(2) 样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上.万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低.
(3) 硝化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入30%过氧化氢(H2O2)2-3ml,促使氧化.
(4) 在整个消化过程中,不要用强火.保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失.
(5) 如硫酸缺少,过多的硫酸钾会引起氨的损失,这样会形成硫酸氢钾,而不与氨作用.因此,当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时,要增加硫酸的量.
(6) 加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点,硫酸铜为催化剂,硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂.
(7) 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色.如果没有溴甲酚绿,可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液.
(8) 氨是否完全蒸馏出来,可用PH试纸试馏出液是否为碱性.
(9) 吸收液也可以用0.01当量的酸代表硼酸,过剩的酸液用0.01N碱液滴定,计算时,A为试剂空白消耗碱液数,B为样品消耗碱液数,N为碱液浓度,其余均相同.
(10) 以硼酸为氨的吸收液,可省去标定碱液的操作,且硼酸的体积要求并不严格,亦可免去用移液管,操作比较简便.
(11) 向蒸馏瓶中加入浓碱时,往往出现褐色沉淀物,这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应,生成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀.有时铜离子与氨作用,生成深l蓝色的结合物[Cu(NH3)4]2+
12) 这种测算方法本质是测出氮的含量,再作蛋白质含量的估算.只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量.1年前查看全部
- 凯氏定氮法测定蛋白质时,其消化过程中所用的硫酸的作用是使蛋白质被消化(分解)生成(NH4)2S04 ,硫酸钾的作用为 ,
凯氏定氮法测定蛋白质时,其消化过程中所用的硫酸的作用是使蛋白质被消化(分解)生成(NH4)2S04 ,硫酸钾的作用为 ,硫酸铜的作用为 .加热蒸馏过程中用 来吸收蒸馏出来的氨;用 来滴定所吸收的氨.
ldxzc1年前2
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人不风hh少年 共回答了15个问题
|采纳率93.3%提高溶液温度、催化剂和指示剂、40g/L硼酸、盐酸1年前查看全部
- (2009•扬州)凯氏定氮法中用硼酸(H3BO3)等试剂进行蛋白质含氮量测定,硼酸中硼元素的化合价是( )
(2009•扬州)凯氏定氮法中用硼酸(H3BO3)等试剂进行蛋白质含氮量测定,硼酸中硼元素的化合价是( )
A. +1
B. +2
C. +3
D. +6喃喃自语的回音壁1年前1
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kakafusji 共回答了12个问题
|采纳率83.3%解题思路:根据在化合物中正负化合价代数和为零,进行解答.根据在化合物中正负化合价代数和为零,可得硼酸中硼元素的化合价为:
(+1)×3+x+(-2)×3=0,
则x=+3;
故选C.点评:
本题考点: 有关元素化合价的计算.
考点点评: 本题考查学生根据在化合物中正负化合价代数和为零计算指定元素化合价的能力.1年前查看全部
- 用凯氏定氮法测蛋白质第一步消化,无论消化多长时间都呈牛黄色是什么原因.
用凯氏定氮法测蛋白质第一步消化,无论消化多长时间都呈牛黄色是什么原因.
我加了10ml水解液 0.2g硫酸铜 2g硫酸钾 20ml硫酸tt4tt1年前1
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快乐幸福每一天 共回答了14个问题
|采纳率92.9%0.2g硫酸铜 2g硫酸钾 20ml硫酸,
这个用量一般来说可以了,
消化液到最后只要是澄清透明就可以了,一般是墨绿或者浅绿的.
不知道10ml水解液是什么东西,看看消化的温度是否不够啊?1年前查看全部
- 凯氏定氮法中反应管内加碱后颜色变为棕灰色的原因
aaron05711年前1
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51feige 共回答了26个问题
|采纳率80.8%加入浓碱时,往往出现褐色沉淀物,这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应,生成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀.1年前查看全部
- 凯氏定氮法消煮时消煮液浑浊是为什么
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用凯氏定氮法测植物组织中蛋白氮的含量,在消煮时,消煮很长一段时间后消煮液仍然浑浊,没有变的澄清透明,这是为什么呢?一地鸡毛19801年前1
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xtka 共回答了19个问题
|采纳率84.2%是在加入硫酸消化时吗,如果是在这个时间的话有两点:一是你忘了加催化剂,这个有可能会消化很长时间溶液也不会变色,解决方法是加入催化剂,或是加热更长时间才会消化好,但是一般不建议加长时间.再一个就是加入硫酸的量太少了,我们消化一些含水量大的物品时就出现过这种情况.
再有其它问题再给我留言吧!1年前查看全部
- 化学实验计算题1. 用凯氏定氮法处理0.300g某食物试样,生成的NH3收集在硼酸溶液中.滴定消耗0.100mol/LH
化学实验计算题
1. 用凯氏定氮法处理0.300g某食物试样,生成的NH3收集在硼酸溶液中.滴定消耗0.100mol/LHCl溶液25.00mL.计算试样中蛋白质的质量分数.(N的摩尔质量为14)
2. 准确称取无水Na2CO3试样0.1060g,溶于适量水中.以甲基橙为指示剂,用HCl滴定至终点时,消耗25.00mL.计算HCl溶液的准确浓度.(Na2CO3的摩尔质量为106)
3. 测定固体饮料中的总酸度,称取样品5.000g,置于研钵中,加少量无CO2蒸馏水研磨成糊状,用无CO2蒸馏水加入250mL容量瓶中充分摇动过滤.准确移取上述滤液50.00mL,加酚酞指示剂3滴,用0.1000mol/LNaOH标准溶液滴至微红色30s不退色,消耗体积为5.00mL.计算该固体样品的总酸度.(以草酸的百分含量表示,草酸的摩尔质量为90)
ramguy1年前1
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bao_1975 共回答了26个问题
|采纳率100%第一题:提问不准确,应该是问试样中N的质量百分比含量:
0.100*0.025*14/0.300=11.67%
第二题:
(2*0.1060/106)/0.025=0.0800mol/L
第三题:
0.1000*0.00500*90/(5.000*50/250)=4.50%1年前查看全部
- 凯氏定氮法的适用范围及其优缺点
subin20018911年前1
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轻沙轻舞 共回答了13个问题
|采纳率76.9%药典中的凯氏定氮针对有机氮化合物,主要是指蛋白质,aa,核酸,尿素以及大量合成的氮为负三价的有机氮化合物.它不包括叠氮化合物,联氮,偶氮,腙,硝酸盐,亚硝酸盐,硝基,腈,肟和半卡巴腙类的含氮化合物.
凯氏定氮法只是一个氧化还原反应,把低价氮氧化并转为氨盐来测定,而不能把高价氮还原为氮盐的形式,所以不可以测出物质中所有价态的氮含量.1年前查看全部
- 关于酶的计算题.有1克酶制剂,用凯氏定氮法测得蛋白质含量为10%,该酶的比活力为2000U/mol酶蛋白,
关于酶的计算题.有1克酶制剂,用凯氏定氮法测得蛋白质含量为10%,该酶的比活力为2000U/mol酶蛋白,
问该酶制剂的总活力单位数是多少?若一个酶活力单位数(U)规定为:在最适条件下,10分钟内水解300mmol底物所需的酶量.问每毫克酶制剂在每秒钟内水解了多少摩尔底物?此酶分子量为125000,由单一肽链组成,问每毫克纯酶中有多少mol的活性中心?jeffyang1年前1
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A20011919 共回答了9个问题
|采纳率77.8%第一问,我们先知道比活力的定义,根据国际酶学委员会规定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示,表示纯度 ,这就可以知道该酶制剂总活力=1/125000*2000u
第二问,若一个酶活力单位数(U)规定为:在最适条件下,10分钟内水解300mmol底物所需的酶量,即1mol酶蛋白10min能水解底物2000*300mmol,那么每毫克酶制剂在每秒钟内水解底物为2000*300/125000/10/60mol
第三问.总活力除以纯蛋白就好,由凯氏定氮法测得纯蛋白为0.1*1000mg.
总活力=1/125000*2000u除以纯蛋白为0.1*1000mg.1年前查看全部
- 生化老师在说凯氏定氮法测定蛋白质中氮含量的时候还说了一种方法,叫硝化法.
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求硝化法测定的具体机理!具体.跪谢.xiaowei1661年前1
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布卢姆斯伯里 共回答了16个问题
|采纳率100%凯氏定氮法测定蛋白质中氮含量时,前面有一硝化过程,就是将有机胺转化成无机铵盐的过程,所以实际是同一种方法.1年前查看全部
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子杰缘 共回答了19个问题
|采纳率73.7%冷凝管下端进入页面以下是因为氮是也氨气的形式蒸馏出来的,如果不在页面以下,就不能完全的被吸收液吸收,造成结果偏小.氨是否完全蒸馏完全,可用PH试纸试检测馏出液是否为碱性.蒸馏完全后就去滴定.如果是用的凯氏定氮仪的话,结束后只要注意机子的保养就好了,如果是自己组装的装置那就要就要注意:蒸馏结束后,掐紧簧夹,断绝蒸气,使反应室内溶液全部吸人回流管中,再放松簧夹,从小漏斗加入蒸馏水40~50ml,再通蒸气加热和回流,放掉回流管中残液,这样反复3~4次,将反应室洗涤干净,才能备下一次测试用(标准书上只洗一次,不易洗净).1年前查看全部
- 关于凯氏定氮法用盐酸滴定到终点时是什么颜色阿?
jake_feier1年前1
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芝道95 共回答了20个问题
|采纳率85%用盐酸滴定至灰色或蓝紫色为终点.
具体可以参考GB/T5009.5-2003《食品中蛋白质的测定》1年前查看全部
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我心以uu1年前1
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gfdsa1231 共回答了15个问题
|采纳率100%称取样品约
2.00g
(±
0.001g
)
,移入干燥的
100mL
凯氏烧瓶中,加入
0.2g
硫酸铜和
6g
硫酸钾,
稍摇匀后瓶口放一小漏斗,加入
20mL
浓硫酸,将瓶以
45
0
角斜支于有小孔的石
棉网上,使用万用电炉,在通风橱中加热消化,开始时用低温加热,待内容物全部炭化,泡
沫停止后,
再升高温度保持微沸,消化至液体呈蓝绿色澄清透明后,继续加热
0.5h
,取下放
冷,小心加
20mL
水,放冷后,无损地转移到
100mL
容量瓶中,加水定容至刻度,混匀备
用,即为消化液.1年前查看全部
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因为所用混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色.如果没有溴甲酚绿,可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液.1年前查看全部
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(2009•滨湖区一模)蛋白质是一种含氮的有机高分子化合物.现代食品工业普遍采用一种叫做“凯氏定氮法”的方法来测定蛋白质的含量.测定原理为:把蛋白质样品用强酸处理,使其中的氮元素释放出来,通过测定氮元素的质量从而换算出蛋白质的含量.
(1)准确称量1.0g某品牌奶粉置于凯氏定氮器中,在一定条件下完全反应,使奶粉蛋白质中的氮元素全部转化为(nh4)2so4.
(2)将(nh4)2so4与naoh反应.写出发生反应的化学方程式:______.
再将生成的nh3用硼酸(h3bo3)溶液完全吸收,发生的化学反应如下:2nh3+4h3bo3=(nh4)2b4o7+5h2o,(nh4)2b4o7属于______类物质(填酸、碱、盐或氧化物).
(3)用溶质质量分数为0.365%的盐酸与(nh4)2b4o7完全反应,消耗盐酸的质量为20.0g,反应的化学方程式如下:
(nh4)2b4o7+2hcl+5h2o=2nh4cl+4h3bo3 ;则根据上述反应可计算出1.0g奶粉样品中氮元素的质量为______.若蛋白质中氮元素的平均含量为16.0%,此奶粉中蛋白质的质量分数为______.
凯氏定氮法测定奶粉中蛋白质含量灵敏度高,操作简单.但在2008年“***奶粉事件”中,却暴露出了这种方法的缺点.你认为其缺点是______.慕容棠1年前1
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浩然轩蓝 共回答了18个问题
|采纳率100%解题思路:(2)根据(NH4)2SO4与NaOH的反应原理:(NH4)2SO4与NaOH发生复分解反应;根据盐的概念判断:金属离子和酸根离子构成的化合物;
(3)结合题意再根据此方程式(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3可以计算出(NH4)2B4O7的质量,根据N元素守恒,
即(NH4)2B4O7中的氮元素来自1.0g奶粉,所以只要计算出(NH4)2B4O7中的氮元素质量即可计算出该奶粉中N元素的含量;
根据N元素守恒,设此奶粉中蛋白质的质量分数为x,则可以得到关系式0.028=1×16%x,从而计算出此奶粉中蛋白质的质量分数;因为“凯氏定氮法”的原理是用其它方法让蛋白质样品中的N元素释放出来,然后通过测定氮元素的质量从而换算出蛋白质的含量.此方法的局限性很明显,它把样品中释放出来的N元素全部归为蛋白质中的N元素,而样品中释放出来的N元素也可能不是从蛋白质中来的.答:(2)(NH4)2SO4可以与NaOH反应,化学方程式为:(NH4)2SO4+2NaOH=Na2SO4+2NH3↑+H2O,
盐:电离时生成金属阳离子(或NH4)和酸根离子的化合物,叫盐.所以(NH4)2B4O7属于盐.
故答案为::(NH4)2SO4+2NaOH=Na2SO4+2NH3↑+H2O,盐
(3)设消耗20g盐酸需要(NH4)2B4O7中的N元素x,则
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
28 73
x 20×0.365%
[28/73]=[x/20×0.365%]
解得x=0.028g
根据题意可知,该奶粉中的N元素都转化为了(NH4)2B4O7中的N元素,即1.0g奶粉中含N元素的质量为0.028g
又因为蛋白质中氮元素的平均含量为16.0%,所以含0.028gN元素的蛋白质的质量=[0.028/0.16]=0.175g,
所以此奶粉中蛋白质的含量=
0.175
1×100%=17.5%
因为此方法是让蛋白质中的N原素释放出来,通过测定氮元素的质量从而换算出蛋白质的含量.可见该方法有局限性,若奶粉中含有其他含氮化合物,则无法准确测出蛋白质含量.
故答案为:0.028g 17.5% 缺点:若奶粉中含有其他含氮化合物,则无法准确测出蛋白质含量.点评:
本题考点: 实验数据处理或者误差分析的探究;常见的氧化物、酸、碱和盐的判别;书写化学方程式、文字表达式、电离方程式;根据化学反应方程式的计算.
考点点评: 在有关化学方程式的计算中,利用元素守恒法可以省去很多中间步骤,从而简化计算过程.1年前查看全部
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|采纳率93.3%解题思路:根据在化合物中正负化合价代数和为零,进行解答.根据在化合物中正负化合价代数和为零,可得硼酸中硼元素的化合价为:
(+1)×3+x+(-2)×3=0,
则x=+3;
故选C.点评:
本题考点: 有关元素化合价的计算.
考点点评: 本题考查学生根据在化合物中正负化合价代数和为零计算指定元素化合价的能力.1年前查看全部
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第二问,若一个酶活力单位数(U)规定为:在最适条件下,10分钟内水解300mmol底物所需的酶量,即1mol酶蛋白10min能水解底物2000*300mmol,那么每毫克酶制剂在每秒钟内水解底物为2000*300/125000/10/60mol
第三问.总活力除以纯蛋白就好,由凯氏定氮法测得纯蛋白为0.1*1000mg.
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第二步是在硫酸铵中倒入足量碱,通过水蒸气加热直接将产生的氨气带出.
第三步是用已经标定的酸吸收并中和气态氨.
用盐酸滴定,所以N元素和盐酸物质的量是1:1的关系,所以N元素物质的量是V*c=37.036*0.2012=7.451mol,乘上N的相对原子质量再除以样品质量就能得到氮的质量分数.
不过你滴定滴了三万多毫升,这个工作量有点大哦,而且感觉你样品取多了,1g左右就行了.1年前查看全部
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汪汪上自习 共回答了20个问题
|采纳率100%结果是样品中蛋白质的含量
蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍
【GB/T 5009.5—1985】
食品中蛋白质的测定方法
本标准适用于各类食品中蛋白质的测定.
1 原理
蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量.
2 试剂
所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制.
2.1 硫酸铜.
2.2 硫酸钾.
2.3 硫酸.
2.4 2%硼酸溶液.
2.5 混合指示液:1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合.也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合.
2.6 40%氢氧化钠溶液.
2.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液.
3 仪器
定氮蒸馏装置:如图所示.
(图略)
4 操作方法
4.1 样品处理:精密称取0.2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取10~20ml液体样品(约相当氮30~40mg),移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上.小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5h.取下放冷,小心加20ml 水.放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验.
4.2 按图装好定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处,加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水.
4.3 向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻杯的棒状玻塞.将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧,并加水于小玻杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏.蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min.移动接受瓶,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min.然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点.
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作.
4.4 计算
式中:X——样品中蛋白质的含量,%;
V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度;
0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;
m——样品的质量(体积),g(ml);
F——氮换算为蛋白质的系数.蛋白质中的氮含量一般为15~17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30.1年前查看全部
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