RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些?
hansol5162022-10-04 11:39:543条回答
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- 笨笨7758521 共回答了21个问题
|采纳率95.2% - 我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!
- 1年前
- lu0430lu 共回答了6个问题
|采纳率 - 1.引物;2目的基因是否整合;3PCR体系是否合适(主要是退火温度);4.RNA完整性
- 1年前
- 天津冷雨轩 共回答了1个问题
|采纳率 - 如果内参跑出来了,目的基因没有,一般可能是引物的问题,还有PCR设计条件的问题。不能是RNA降解。
- 1年前
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PCR用的引物建议使用primer primer等软件来设计.首先自己估算你目标条带的Tm值,然后在软件里面设定引物的Tm为目标的Tm附近,通常引物与模板配对区长度在20-25bp,扩增长度超过10k的话引物中与模板配对的要延长到30bp或更长,扩增长度、自由能、二聚体等要求就按照软件列出做填空就行了.最后,软件会给出一些引物对选择,你自己选择上下游引物Tm差值小的、二聚体和cross dimer以及false priming情况可以接受的那对引物组合.
空说太空泛了,需要的话跟我给我发消息,然后mail联系.1年前查看全部
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|采纳率100%你理解错了,考察DNA复制过程,DNA聚合酶通过模板连,利用dNTP来合成新DNA链.
PCR是聚合酶链式反应,70度是延伸温度,这个温度是TAQ酶的最适温度,不是什么能量来源.
来源是发生在TAQ酶聚合DNA时产生的.dNTP加入到延伸链的3`端,与上一个核苷酸形成2酯键.同时释放一个焦磷酸PPi,焦磷酸不稳定,极易水解,释放能量产生磷酸.这2个反应互相偶联.
所以.推动TAQ酶聚合DNA的能量是由PPi水解这个反应推动的.1年前查看全部
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