洗脱体积1BV等于多少毫升的?

只要不在蛋白质等电点附近 不会沉淀的 酸性过强会使蛋白变性

吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂.当待分离的混合物溶液流过吸附柱时,各种成分同时被吸附在柱的上端.当洗脱剂流下时,由于不同化合物吸附能力不同,往下洗脱的速度也不同,于是形成了不同层次,即溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若干色带,再用溶剂洗脱时,已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或将柱吸干,挤出后按色带分割开,再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来.常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等.吸附剂一般要经过纯化和活性处理,颗粒大小应当均匀.对于吸附剂而言,粒度愈小表面积愈大,吸附能力就愈高,但颗粒愈小时,溶剂的流速就太慢,因此应根据实际分离需要而定.供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性、碱性三种,本实验选择中性氧化铝.化合物的吸附性与它们的极性成正比,化合物分子中含有极性较大的基团时,吸附性也较强.各种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减：酸和碱 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 卤代物、醚 >烯 > 饱和烃.溶剂的选择是重要的一环,通常根据被分离物中各化合物的极性、溶解度和吸附剂的活性等来考虑.先将要分离的样品溶于一定体积的溶剂中,选用的溶剂极性要低,体积要小.如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小,则可加入少量极性较大的溶剂,使溶液体积不致太大.色层的展开首先使用极性较小的溶剂,使最容易脱附的组分分离.然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂,将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来.

主要考虑极性和分子量谁占优势
极性起主导作用时,不一定是分量大的先洗下来

meishi

具体配方你问试剂公司吧 有可能告诉你 也有可能不告你
pw一般就是70%-75%乙醇 也许有tris edta 也许没有
去蛋白液 一般是含异丙醇（可能50%）和sds等去污剂的水溶液
洗脱液eb 和咱常用的TE溶液配方差不多 有的公司产品不含edta

大孔吸附树脂?
有几种可能
一种可能是树脂加工过程中残留的一些东西
如果是国产的比如南开树脂厂的必须用稀的碱液或者酸液预处理过不然会有残留
罗门哈斯或者三菱一般直接用洗脱剂空洗一下就ok
的没有这个问题
还有一种可能是你用高浓度酒精洗脱下来东西乳化了
加入抗乳化剂或者表面活性剂会改善

谷氨酸 >精氨酸 >丙氨酸
谷氨酸 含有羧基,亲水性最强,
精氨酸 含胍基,亲水性次之
丙氨酸 全为疏水基团,最次

D

A、海水洗脱燃煤烟气中的SO2的反应中有新物质生成，发生的是化学变化，故A正确；
B、二氧化硫是形成酸雨的原因，通过废气处理装置吸收二氧化硫，可减少酸雨的形成，故B正确；
C、海水法脱硫工艺生成物具有腐蚀性，所以要求设备耐腐蚀，故C正确；
D、海水中的氯化钠、水等一定要参与脱硫过程的化学反应，最后生成硫酸钠和盐酸，氢元素来自水，故D错误．
故选D．

洗脱前首先要用特定的溶液清洗吸附剂,然后在分离过程中调整料液压力和料液速率,最后再选择合适的洗脱液……你可以问的再具体点

离子交换树脂一般为有机高聚物为基体,使用DMSO容易造成树脂溶解,所以不能使用DMSO洗脱.
一般阴阳离子交换树脂的交换能力与离子半径和离子价态有关,价态越高,越容易吸附,同时跟离子浓度也有关系,一般都是从高浓度向低浓度交换.

实验室实在没条件,我觉得可以重复使用的,但是在使用前我觉得应该用极性高于洗脱液极性的洗脱剂清洗,好洗脱上次样品中的杂质.

BV(bed volume):床体积,比如你用了一L树脂,用1L再生液,就是1BV, BV/h当然就每小时的床体积流量

1）凝胶层析又称分子筛层析,主要根据混合物中分子的大小和形状不同,在通过凝胶时,分子的扩散速率各异而达到分离的目的.凝胶颗粒具有多孔性网状结构,小分子易进入凝胶网孔,流程长而移动速度慢,而大分子物质不能进入凝胶网孔,沿凝胶颗粒间隙流动,流程短移动快,从而最先被洗脱下来.补充一下B选项,分子量大的被洗脱下来,剩下的不就是分子量小的了么?
2）C和D涉及的是电荷性,这并非凝胶层析能解决的,所以无所谓洗脱的概念,而是大学微生物实验中经常用到的蛋白电泳.所谓蛋白电泳,在碱性环境里,血清蛋白皆带阴电荷,在电场中向阳极泳动,因各蛋白质等电点和分子量有差异,分子量小、阴电荷多泳动最快；分子量大、阴电荷较少者泳动较慢.
所以,我对LZ提个建议啊,很多时候,特别是高中的时候,我们总喜欢穷举所有题目的选项,认为不把选项完全搞清楚就不对,而其实里面的很多选项都是随机放入扰乱视线的,很多时候,特别是精力有限的情况下,我们只需要记得正确答案,而不是排除错误答案

这个要看具体情况.
如果直接层析,盐会进入凝胶内部,出来最晚.如果你要的蛋白是分子量较大,出来早的,影响就不大；如果你要小分子量的,就和盐分不开,就要先除盐.
不过,盐析时加的盐很多,如果样品体积大,这么多盐会对层析造成干扰,所以一般都会先除盐.

乙醇处理时脂质溶解,细胞壁通透性增加,原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来,菌体变为无色,被复染剂染后变为复染剂的颜色.
当乙醇洗脱过度时,革兰氏阳性菌也可能被洗脱初染时的蓝紫色,被复染成复染剂的颜色,造成假阴性.
当乙醇脱色不够时,革兰氏阴性菌的细胞壁上的碘-结晶紫复合物没有被洗脱而保有原有的蓝紫色,造成假阳性.
选取适龄（一般为生长期）菌体主要是为了保证菌体有正常的形态,细胞壁有良好的通透性,老龄菌体有很大概率存在畸变而影响实验结果.

我厂生产的醇溶性聚酰胺树脂,用无水乙醇可以完全溶解掉,不知道这条对你有没有帮忙

在固相萃取操作中,小柱被活化后是必须保持湿润状态,在进样过程中也必须保持湿润状态,洗脱之前要抽真空尽量使小柱干燥,洗脱过程中最好保持湿润（号称这个操作要求较严--液面在筛板上的高度要控制好---要看你的目标物及洗脱要求啦）

洗脱液面低于石英砂或者吸附剂面,会导致洗脱的压力或流速不够,使得不同物质分离程度不够,造成接收到混合物.同时再次加入洗脱剂的时候,会使得分离物面不均匀.

流动相极性大于固定相极性的情况,称为反相色谱.那极性强的应该先出来!正已醇正已烷苯

邻位,形成分子内氢键

普通硅胶的表面积800-900m2/g,孔径10-70A,分离效能取决与孔径和含水量,对CO2有吸附能力,可以把永久气体中的CO2和H2/O2/N2/CO/CH4分开.

根据你样品成分的极性来解释,同时还要看你使用的正向柱还是反相柱,如果用的是反向色谱柱（C8、C18等）,色谱柱填料极性较弱,那么被分析的物质就是极性大的先出峰；如果用的是正向色谱柱（CN、NH2）,色谱柱填料极性较强,那么被分析的物质就是极性小的先出峰.

完全人译
Single factor analysis method is applied to investigate the factors of affecting the purifying the hypericin by D101 macroporous resin, including the flow rate of sample injection, sample concentration, eluent concentration and flow rate of elution, which is further supplied the data for optimizing the process parameters and liquid chromatography was applied to test.
The experiment results showed the optimum condition is that when sample concentration is 0.0041mg/ml and the sampling rate is 3BV/h, the eluent is 80% ethanol and elution flow rate is 2BV/h, a sample of purity 45.03% is gained.
好难,难的不是翻译,是汉语.

你可以用TLC点板观察,看看你的分离物纯度如何.如果烤板后出现两个点,那就表明蓝色和甲基橙混在一起；如果出现一个点,那就表明是纯净度的.不过要合理选择显色剂,要选择那种能够让甲基蓝和甲基橙都能够显色的显色剂.

Uses the modified activated charcoal absorbent in the soda wash removing acidic material as well as in the partial sulfocompound's foundation to adsorb RFCC in diesel oil materials and so on alkalinity nitrogen to improve the RFCC diesel oil stability.Inspected the soda wash condition,the activated charcoal loading condition,the adsorption condition to purify the effect the influence.Under the room temperature,the RFCC diesel oil passes through 40% caustic soda solution 1:200 soda wash,the laundering,then with carries the acid concentration 30% phosphoric acid under 250℃ the condition the modified activated charcoal,under airspeed 0.5h-1 condition infiltration adsorption.The result indicated that the RFCC diesel oil percentage of desulfurization is 46.36%,the denitrogenation rate is 91.87%,room temperature contact air storage 30 days later the chromaticity value is 13.

The premise of the pilot test on the basis of a SO2 removal rate of major indicators,Discussion on the use of citric acid elution and alcohol elution SO2 purification KGM better conditions.The results showed that (A) of citric acid purification glucomannuronate SO2 renounce the best conditions for the temperature was 70 ° C and pH 5.0,Swelling time 1 h; (B) alcohol elution SO2 purification glucomannuronate the best conditions for the concentration of alcohol is 20%,compared with a liquid material :two,three times the number of elution.

可能是树脂质量问题
请认真查看树脂

你说的洗脱体积之差是指两个组分的洗下来的体积?你这个问题第一次见,没有听说过样品体积要小于洗脱体积之差这种说法,你在哪里看到的.一般使用凝胶过滤层析,想要获得高分辨率,上样体积控制在柱床体积的0.5—4%,最好是2%,群组分离时可以达到30%,小于0.5%没有意义了.另外,目前市面上分辨率最好的柱料是GE的Superdex,手填柱子的话可以达到10K分辨率.预装柱应该更高,但是十分昂贵,没有试过.其他柱料分离的分辨率要求两种蛋白的分子量相差一倍以上,如果不满足这个条件,大多是骗人的.还有柱料的选择,缓冲液的选择和样品的处理等等很多条件都影响了凝胶层析的效果.

谷氨酸和谷胱甘肽最先洗脱,其次是血红蛋白,最后是细胞色素C,谷氨酸和谷胱甘肽达不到分离的效果,因为二者分子量小于Sephadex-G-100的分离范围.而血红蛋白和细胞色素C的分子量在Sephadex-G-100的分离范围内,所以根据分子筛的原理可以达到分离效果

D

这种情况最好是用色谱板,在板上点一滴淋洗液,展开（有可能需要显色）就能看到了.不过最适宜、最有效的方法你还要查.

你说的是检测方法吗,两个一般是：归一、百分比、外标、内标

Total extract (crude extracts),10% ethanol ses components (10% ethanol eluent),30 percent ethanol elution ingredients (30 percent ethanol eluent) in 6.25 muon g/ml of H2O2 induced CHO - K1 cell DNA damage repair function,and the strongest 30% ethanol elution composition of repair function is the most obvious.On 12.5 muon g/mL of H2O2 induced CHO - K1 cell DNA damage of protection,and always the strongest extracts of protection is most obvious.

大孔树脂吸附的时候是大分子物质先被洗脱下来,同时还与被洗脱物质和洗脱剂的极性有关 ,凝胶色谱分析的理论,

亚甲基蓝极性小于亚甲基橙,根据相似相溶原理,亚甲基蓝较亚甲基橙易溶于极性小的流动相,所以亚甲基蓝流动快,先出峰!

因为聚酰胺分离黄酮是根据黄酮化合物分子结构中羟基数目来定的,分子中羟基多跟聚酰胺结合的比较牢固,自然洗脱慢

目前多糖含量的测定方法尚无统一标准,广泛应用的是苯酚一硫酸比色法.该法具有简单、快速、无需多糖纯品和贵重仪器等优点,且对水溶性样品和非水溶性样品均可测定.苯酚一硫酸比色法测定多糖含量是由Dubois等提出的.其原理是：多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解,产生单糖,并迅速脱水成糠醛衍生物,该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应,生成橙色物质,在波长490nm处和一定浓度范围内,其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系,从而可用比色法测定其含量.

流动相中消耗的时间＝洗脱时间 ＋ 死时间
死时间为1000s 分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题,基本上问题都能得到解答,有问题可去那提问,百度上搜下就有.

相似相溶

吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂.当待分离的混合物溶液流过吸附柱时,各种成分同时被吸附在柱的上端.当洗脱剂流下时,由于不同化合物吸附能力不同,往下洗脱的速度也不同,于是形成了不同层次,即溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若干色带,再用溶剂洗脱时,已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或将柱吸干,挤出后按色带分割开,再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来.常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等.吸附剂一般要经过纯化和活性处理,颗粒大小应当均匀.对于吸附剂而言,粒度愈小表面积愈大,吸附能力就愈高,但颗粒愈小时,溶剂的流速就太慢,因此应根据实际分离需要而定.供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性、碱性三种,本实验选择中性氧化铝.化合物的吸附性与它们的极性成正比,化合物分子中含有极性较大的基团时,吸附性也较强.各种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减：酸和碱 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 卤代物、醚 >烯 > 饱和烃.溶剂的选择是重要的一环,通常根据被分离物中各化合物的极性、溶解度和吸附剂的活性等来考虑.先将要分离的样品溶于一定体积的溶剂中,选用的溶剂极性要低,体积要小.如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小,则可加入少量极性较大的溶剂,使溶液体积不致太大.色层的展开首先使用极性较小的溶剂,使最容易脱附的组分分离.然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂,将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来.

你们是不是这样分析的：组氨酸的PI是7.59,赖氨酸是9.74,这证明赖氨酸碱性更强,酸性更弱,而用H+洗脱时,先洗脱是应该是酸性弱的物质所以赖氨酸应该先洗脱下来?或许可以这样解释：碱性氨基酸和阳离子交换树脂的结合是以...

看你scx柱子的结合能力吧,建议你在合适的范围内选用一组不同浓度的标准蛋白混合物来上样,通过比较起结果来确定上样量

　　其实原因很简单,相似相溶原理.极性大的组分在极性大的溶剂中溶解度较大,易于（和极性小的组分分离）洗脱.

看你所描述的应该是利用不同浓度的NaCl进行梯度洗脱,最后用2M NaCl目的是将0.4M NaCl未洗脱的物质全部洗脱下来,同时也是为了清洗凝胶.

流动相中消耗的时间＝洗脱时间 ＋ 死时间
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阴离子交换柱是吸收阴离子的.蛋白质在PHPI的环境下主要是羧基发生电离,带负电荷.在该洗脱液中,A显负电,B显正电,因此A先洗脱.

许多色谱工作者在操作液相色谱时,色谱柱是在室温环境下工作的.如果实验室的温度能保持不变的话,不会有什么大问题.但大多数的工作环境温度是不断变化的,因此若想将在某实验室开发的一种液相色谱方法应用到其他实验室的话,温度的差别就会引起较复杂的问题.温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的,本文就来讨论液相色谱方法中的梯度洗脱方式受温度影响的问题. 等度保留 大多数色谱工作者知道等度洗脱时温度会影响保留时间.图1显示了三个不同温度下的分离结果.我们发现当温度升高时所有的色谱峰都前移了,等度洗脱时一般温度每升高一摄氏度保留时间会缩短1-3%,在图1中,保留时间变化率约为2%/℃. 拥有温控系统的实验室一般都有全天候温控设置,但这种设置可能引起室温显著变化,这对整夜运行的色谱系统就会有一些影响,例如我们实验室的夜间温度就设为4-7℃.在不同的季节,实验室的夜间温度可能比正常工作日的温度高或低,这种温度的变化就会使色谱峰离开“保留时间窗”,造成连续进样中产生一系列的无效数据. 还有一个可能的温度影响因素就是色谱仪器在实验室的位置.当色谱柱正对着空调的送风口时,虽然整个实验室的温度非常稳定,但色谱系统的温度就会不断的变化.这就是我们要使用柱温箱的原因之一. 梯度保留 温度变化对梯度洗脱和等度洗脱的影响趋势是一样的.图2是苯胺和苯酸在三个温度条件下的色谱图.图1中,20℃的温度变化引起保留因子的变化大约为两倍,然而在图2中,40℃的变化使保留改变了约20%.平均来说,图2中的色谱保留变化约为0.2%/℃.由此可见,温度变化对梯度洗脱的影响要小于对等度洗脱的影响（假定本例具有普遍代表意义）.即便如此,若梯度洗脱时不控制温度的话,保留值一般都会有较大的变化. 选择性的变化 25℃时第二个峰和第一个峰很接近,但当温度升高后,第二个峰却远离第一个峰,接近第三个峰.从三个图来看,对于前三个峰的最佳分离条件是35℃.值得注意的一个有趣现象是,选择性的变化是和成分相关的. 峰位置的相对变化和温度的变化是有规律可循的.当条件确定以后,这个规律就是可预测的.例如,在图2中当温度升至77℃以上时,峰3和峰4将会合并.而当温度更高时,峰3将会移到峰4之后.温度引起的选择性变化的多年来一直未受重视.最近,施耐德等人发现能够将温度作为一个调整选择性的有力工具. 温度控制 从实践出发,为了获得一致的结果我们必须要控制柱温,使用柱温箱是最好的办法.目前商业化的柱温箱有两种形式：直接加热色谱柱和通过空气传热,每种设计都有其优缺点,而且不同厂商设计的LC系统也有不同的限制.在直接加热型柱温箱中色谱柱是被夹在金属加热器中或被加热器包裹起来；而在空气传热型的柱温箱和气相色谱柱温箱很相像,色谱柱是被悬挂在静止或流动的空气中,通过加热空气来保持柱温.第三种设计是把色谱柱浸在液体中（比如水浴中）,这在实验室中很容易搭建,但通常这种设计也并不比其他设计省力. 如果没有柱温箱,最有效的办法就是将色谱柱隔绝在一个温度波动最小的地方.例如,可把色谱柱置于泡沫塑料套中或色谱包装盒中,当实验室温度基本不变时效果很好,但这种方法必须要允许保留有一些波动.隔绝色谱柱也可以避免结果受环境温度影响. 温度平衡 我们知道,为了保证分离的重现性,色谱柱在梯度洗脱状态下的必须有平衡过程.当一次梯度洗脱分离完成后,一定要用10-15倍柱体积的流动相来冲洗柱子以恢复柱子的平衡.例如,如果使用B溶剂5-100%的梯度,柱子为150mm′4.6mm(柱体积为1.5ml),当流动相从100%的B溶剂换回到5%的B溶剂时,大概需要保持1.5ml/min的流速10分钟来恢复系统平衡,在进行下一次梯度变换之前如果系统没有平衡,那么保留时间的重现性就会很差. 正如柱子不能完全平衡将导致保留时间的重现性差一样,柱温不平衡也会导致不理想的后果,这个问题在峰宽上的影响尤其明显.当温度变化时除了选择性和保留时间的变化之外,峰宽也会发生变化.升高温度通常会使理论塔板数（N）升高,峰宽变窄,由于峰面积不变,峰越窄就会越高,因此升高温度可以达到更小的检测限.（这篇文章里的色谱图不是按同一个y轴比例来画的,所以峰高的变化没有表示出来） 不用平衡的流动相充分的冲洗柱子会导致化学不平衡状态,但是当柱子在程序升温的环境中我们怎样确定不平衡问题呢?答案取决于柱子中的流动相,如果柱子是在室温条件下,溶剂瓶、泵和自动进样器也在室温下,那么整个系统中的温度就应该是稳定的.但是,如果柱子是热的,系统的其他部分和溶剂是室温,柱头将比柱尾凉.柱子里的温度变化将会影响峰形. 进柱的溶剂为室温（约22℃）,最后一个峰有很明显的变形.把溶剂瓶、泵、自动进样器加热至与柱温相同是不现实的,所以溶剂预热器是最好的选择.我们用1米长,0.25mm内径的不锈钢管作为预热器,把这个不锈钢管盘成直径大约10cm的平面紧贴在柱温箱里的预热器上,再让流路垂直以便预热器能够位于自动进样器和柱子之间,这样,凉的溶剂从自动进样器里出来到柱子之前经过这个预热盘升高了温度. 当流动相和柱子之间的温差增大时,由温度不平衡而导致的峰变形就会加剧.在77℃时后一个峰变形很大以至于会认为它是两个成份或者认为柱子有了死体积.在上述情况下当使用了预热盘以后峰型都变得很漂亮. 为什么会看到这些峰变形了呢?这很容易从峰展宽的角度来解释.前段的温度比尾部的温度高,所以前段走的快.当前面比后面走的快的时候就会产生展宽的峰.这种现象和梯度洗脱中有种情况是相对的,就是在一开始使用弱极性溶剂小流速后用强极性大流速.虽然使用预热器来改善峰形是一个很著名的结论但峰变形的原因仍然很复杂.在理想梯度洗脱中,每个峰都应该在相同的环境中出来而且以相同的速度通过柱子,最后得到相同的峰宽.但是很奇怪后出的峰变形问题比先出的峰要严重,正如图4所示.或许读者对这个现象会有简单的解释. 结论 我们发现柱温在液相色谱梯度洗脱过程中扮演了一个重要的角色,首先,提高柱温可以缩短保留时间,其次,我们看到柱温还可以影响选择性,最后,温度的不平衡会导致峰扭曲变形.这些提醒我们,如果想得到稳定可靠的分离结果,色谱柱的温度变化是不可忽视的. 详情请参考国家标准物质网 www.***.com

看你先用什么做洗脱剂了.如果用乙醇就是先亚甲基蓝,如果是氨水或者水（也就是极性比较大的溶剂）那就是甲基橙先下来.因为它们极性不同.洗脱剂不同就顺序不同了

原因：氨基酸与阳离子交换树脂的静电引力大小依次是 碱性氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸,所以洗脱的顺序就
先是酸性氨基酸（负电荷最多）,然后是中性氨基酸,最后是碱性氨基酸（带正电荷最多）.
详见《生物化学》王镜岩 第三版 上册 153页