反向PCR引物设计的原理?怎样设计反向pcr的引物?急

konglingjianke2022-10-04 11:39:543条回答

反向PCR引物设计的原理?怎样设计反向pcr的引物?急
我是想知道具体的原理和方法，最好有个例子！
还有我有个反向PCR 的引物，就是在原来的序列上找不到引物的序列？为什么？

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aku118mi 共回答了27个问题 | 采纳率96.3%: 可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了,这是引物的设计,至于其他条件可以参考相关文献.; 1年前

爱里袄特共回答了16个问题 | 采纳率: 和正向引物一样的啊，软件上都可以完成的; 1年前

战斗ff磕到底共回答了97个问题 | 采纳率: 在已知序列上游设计反向引物，在下游设计正向引物。
反向PCR
http://baike.baidu.com/view/896324.html?wtp=tt
把你的序列反向互补后再搜一边; 1年前

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我有一个质粒,大小5.3k,设计的一对引物有18bp的同源区,做反向pcr来矫正这个质粒上的某个突变位点,但总 淘米饭饭1年前1: frank025 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

嗯首先要把质粒单酶切分别进单引物PCR,分别回收2个片段之后,混合PCR产物再进行第三次PCR（大引物PCR）,回收连接便是你的新质粒了.你看看是不是哪一步不合理.
此外,一般地定点突变采用“大引物PCR”18bp有点短了.
原理如下：
引物1（向左方向）-----------+----
单酶切质粒 ------------------------------------------------------
---+------------引物2（右向）

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