先用PCR裂解液裂解细胞,再将细胞放入-80℃冷冻保存,以此积累细胞数量.冷冻对PCR测MicroRNA结果有影响吗

DMSO,本品几乎是无臭、无色透明的液体,味苦,可与水、乙醇、丙酮等完全混溶,在无条件下也可以与醚、苯、氯仿完全混溶.对乙炔、含硫化合物及其它不饱和烃都具有很大的溶解能力；许多无机盐也溶于其中.
DMSO溶解范围很广,易被皮肤和黏膜吸收,有“万能溶媒”之称.
DMSO是冻存细胞时常用的保护剂,它可使冰点降低,在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,从而可避免冰晶的形成.

Abstract:this experiment need fresh Aristichthys keeped in the 75% ethyl alcohol ; digesting the fresh Aristichthys nobilis'muscle ,liver and fin by lysate and Proteinase K,extracting genome DNA by phenic acid ,then proceed the inspection of agarose gel electrophoresis and spectrophotography.result showing:phenic method can get more condensed ,higher quality and low-cost DNA.all in all,the result of inspection for nobilis'muscle ,liver and fin is:live>muscle>fin.DNA distilled from fresh tissue is better than that preserved in ethyl alcohol.diluting for 20 times,condensity of spectrophotography is about 6.9.8μg•mL – 1,A260/A280 is 1.712-1.983.

根据我们实验室所用的实验手册,组织的粉碎使用的是臼和杵（非专业实验器具,市场买的陶瓷的）,而且是加入液氮来降温,在液氮的浸泡中进行的.液氮蒸发极快,并不会跟裂解液混合.用冰块不能够很好的冷却.用剪刀剪也不能够很好的粉碎.
不过如果楼主需要的蛋白在所取组织中大量表达,该蛋白本身较为稳定,楼主所需的量又不多,在冰上剪碎也不是不行,应该也提取得到.理论上组织离体之后就不应该暴露在室温,对于蛋白质的保存温度越低越好,所以建议楼主从剪碎到裂解液之后全程都要使用冰块.

一般最好使用专用的蛋白提取液,里面有蛋白酶抑制剂,可以防止蛋白降解.
另外,你的目的蛋白的位置不同可能也需要不同的提取液比较好.
而且如果是磷酸化的蛋白最好还需要加入磷酸化酶抑制剂.
如果,现下都没有这些东西,只是看下预实验!
可以加上样缓冲液后煮沸5分钟来裂解细胞,之后离心取上清上样,注意离心要充分!

PMSF一定要现用现加的.因为PMSF在水液体溶液中不稳定,30分钟就会降解一半,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1h,补加一次.长期储存需要放在-20度

CTAB ,异硫氰酸胍

裂解细胞是为了获得其DNA,方法有很多种,超生裂解,碱裂解等等
细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；2.溶解蛋白；3.蛋白变性使其稳定；4.抑制蛋白酶活性
一般细胞裂解液的成分如下（用于提取DNA,如果要提取蛋白质,不建议使用SDS,而是用TritonX-100）：
50mmol/L Tris-HCl （缓冲液,保证细胞裂解时PH值也能稳定.Tris是一种有机碱）
1.0 mmol/L EDTA （金属螯合剂）
150 mmol/L NaCl （电解质,用于协调细胞膜内外离子平衡）
0.1% SDS （十二烷基硫酸钠,是一种表面活性剂和还原剂.有增溶作用）
配制方法
取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml）,加双蒸H2O定容至200ml,高压灭菌备用.

降解了,DNA降解成单核苷酸也有吸光度
看质量还的电泳

裂解液是：盐酸胍
结合液是：生物磁珠
洗脱液是：蒸馏水

羽毛不属于细胞结构,是皮肤的附属物.

从原理上说,加完裂解液是可以剧烈震荡的,为的是彻底裂解细胞.取上清之后进入酚/氯仿/异戊醇抽提,就要小心轻柔了,因为此时对象是DNA,操作猛烈会打断的.你的三条带有可能从大到小依次是基因组、质粒开环、质粒超螺旋.你提的是什么菌株,怎样的来源,遗传背景清楚吗?至于紫外检测A260-A280无吸收峰但能测出浓度的情况,我也遇到过,有时候是样品浓度过高不在可测量范围内,需要进行适当稀释再测；有时候是样品中杂质太多（注意下其他波长有没有吸收峰?）干扰了DNA检测；有时候是仪器本身出问题了,要进行调试和整修.另,建议不要用试剂盒配的elution溶解最终的基因组DNA,用灭菌的双蒸水比较好,便于紫外检测.