我要做荧光定量PCR,测细胞因子mRNA,要测三种因子,是否是把三种引物和内参基因引物分别加入到四个体系中
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cgr2008 共回答了13个问题
|采纳率84.6%- 是的,你需要用等量体系分别用每对引物进行PCR.
实际操作时,我们要求至少3份biologic replica,用来检测你所测到的表达变化确实是因为实验组与对照组之间的差别.同时这3份biologic replica需要2份technical replica,以确认差异不是由于具体实验操作过程的失误产生的. - 1年前
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ygx2009 共回答了30个问题
|采纳率90%具体情况要看你做的这个基因在两个物种中的同源性.如果同源性很高,可以用同一对引物,同一条探针的话,那我们就认为它在realtimePCR中的扩增效率是一样的,标准曲线只要做一次就行了,对数据分析不会有影响1年前查看全部
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wwwwandy1年前2
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kt308bwsgracdnj 共回答了23个问题
|采纳率87%引物若跨内含子的话,引物仅能以3'端的一小部分结合基因组DNA,这样的话Tm会很低.在较高的退火温度下,引物几乎无法和基因组DNA结合来引发聚合,而主要是与能够完全配对的cDNA结合并引发反应.1年前查看全部
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puppetwj 共回答了14个问题
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说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛1年前查看全部
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italiabello 共回答了23个问题
|采纳率87%小于10的3次方表示你的体内的病毒少,控制的比较好,10^4、10^5、10^6、10^7越高越不好.常规药:阿德福韦,拉美夫定,还有新出来的.荧光PCR定量是以10^4、10^5、10^6、10^7标曲标准来定你曲线的CT,或者来判断你用药前后的“病毒载量”,以这个依据来给临床医生安排用药.1年前查看全部
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hongxiaoyu1986 共回答了22个问题
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另外,能否麻烦老师把您的Rapid and direct quantitative RT-PCR method to measure promoter activity.这篇文章发给我吗?我邮箱wenjiezhu08@163.com.美乡的醉梦者1年前1
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小楼一夜听春雨P 共回答了22个问题
|采纳率81.8%应该是用每个样本算出的基因表达的相对量来做统计分析.用2-delter delter值也不能说错,不过感觉很怪.简单的组间分析,用不着用SPSS吧.Excel就全部搞定了.
你应该是做三次实验,至于每次试验重复几次完全取决于你自己.如果样本加样,PCR反应的误差很大,建议多重复几次.不然2次就完全够了.主要是看有无系统误差.我的那个文章要的人很多,我发到百度文库了.就不再一一发email了.1年前查看全部
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之前认为是先提取RNA,然后反转录,然后做荧光定量.
现在发现貌似反转录PCR也是可以做定量的,请问是不是这样?
这两个怎么都叫RT-PCR.我纠结死了.那要是做荧光定量的话是不是就不需要单独的做反转录PCR了.
不要贴这种段子行不。xuna_momo1年前3
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碧海微澜AAA 共回答了20个问题
|采纳率90%一个是RT-pcr,reverse transcription pcr的简写
一个是real-time,一般不会简化为“rt-pcr”,又称实时定量pcr,Q-pcr,应该就是你说得荧光定量
而你要测mRNA的量,就是先反转录成cDNA,再作定量pcr,就是前两者的合,常称为qRT-PCR
有很多real-time的试剂盒,你可以网上看下说明书1年前查看全部
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风籁 共回答了22个问题
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得到的得到cDNA可以保存的时间比较长.这样荧光定量PCR就可以集中一起做.1年前查看全部
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求荧光定量PCR高手
原来好好的,突然坏了,找不到原因,求有经验的高手指教.
用的是Taqman探针法,原先已摸索好条件,做好了质粒的标准曲线,E都在98%--102%之间,R2都在0.99以上.已用做好的标准质粒检测了几天样品了.这两天做的时候突然坏了,E变得很大、R2也乱七八糟的了.重新稀释了质粒标准品,换了试剂盒,也还是不行.可能是什么原因呢?flyfox-041年前4
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怡然自乐2000 共回答了22个问题
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hesue 共回答了19个问题
|采纳率89.5%Southern 的结果最后是体现在胶片,或者是膜上,能看到深浅不一的条带,但是这种条带如果进行胶片曝光的话,很容易过曝,也就是条带的深浅并不能精确反应具体的拷贝数.所以只能选择拷贝数已知的样品作为对照,根据最后的条带灰度判断有可能的拷贝数,但是这个数量并不精确.
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pontific 共回答了22个问题
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公司提供荧光定量PCR,RT-PCR、蛋白表达与纯化、Western blot等分子生物学技术服务及细胞生物学服务等!1年前查看全部
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楼主的做法我并没有做过,因为我使用的是Tagman试剂盒带有特异性探针,所以并无特异性问题.
我理解楼主的意思是:
1505及1489曲线不正常,1505条带正常,1489条带不正常
659与1491曲线正常,但是两个条带都不正常
我的意见如下:
1.楼主的引物是自己设计的吗?目标只有二十多碱基,哪里来的特异性?
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三条腿的蛤蟆蹦跶 共回答了23个问题
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如果没有标明,可以根据数值的大小看出来:CT 值一般在0-40之间,而拷贝数则为好几千,好几万的大数字1年前查看全部
- 荧光定量PCR RT-PCR荧光定量PCR和RT-PCR是一回事吗?若不是,它们之间有什么区别?谢谢!
邪kk1年前1
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普通用户普通用户 共回答了17个问题
|采纳率88.2%RT可能含义:
reverse transcribe 是逆转录,那么相应pcr应该是由rna凡转录cdna过程
real time 实时定量 那么就是荧光定量pcr了1年前查看全部
大家在问
- 1下列物质加热后不能得到相应氧化物的是
- 2sinxy =xy 求dy
- 3xy^+arctany=π/4 求dy x=0 坐着想了半个小时了请高手帮帮我,
- 4e^(xy)+tan(xy)=y,求dy
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- 11造句 那.竟然.像.造的句子不要太长万盛米行的和卓头,横七竖八的停泊着乡里出来的敞口船(缩句)用耐人寻味和应接不暇造句
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