质粒上,每种酶的切割位点最好只有一个,以便获得结构单一的重组DNA,这句话是什么意思
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songshu789 共回答了18个问题
|采纳率94.4%- 这个跟遗传学有类似的地方比如质粒是D目的基因是d,则两两组合的结果有DD,Dd,dd。那一个切割位点,可以跟好的获得不是组合的DNA
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2,确定你的PCR没有问题,PCR时放阳性对照.
3,你用的是什么载体.考虑你的引物是否正确.1年前查看全部
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第三步将目的基因导入受体细胞中 就是将带有目的基因的质粒导入受体细胞
运载体也可以灭活的病毒或者噬菌体的衍生物 高中选修三课本上都有介绍的
而且是目的基因导入受体细胞而不是动物细胞导入受体细胞(受体细胞可以是植物 动物 微生物)1年前查看全部
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|采纳率100%质粒在基因工程中是一类重要的载体,其作用主要是携带一些基因片段(可以是编码基因,也可以是调控区等),在细胞内环境中进行表达或参与通路的相互作用,达成人们希望的目的,这些目的一般包括:取得蛋白产物(有直接提取的,也有表达酶进行药物合成的),探究基因相互作用关系(比如过表达某一特定基因观察表型变化).
总之质粒的作用一句话,将一段属于或者不属于这个物种的基因片段引入细胞/个体环境中.并进行后续研究.
有问题一起讨论解决哦~1年前查看全部
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1.质粒和拟核是同一种物质吗?若不是,“细菌DNA复制只发生在拟核”哪错了?
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3.多倍体育种为什么不需经过愈伤组织,而单倍体育种要经过?或潜在渊1年前3
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kcviouaiosufiopa 共回答了22个问题
|采纳率86.4%1.质粒和拟核是同一种物质吗?若不是,“细菌DNA复制只发生在拟核”哪错了?
答:质粒和拟核不是同一种物质,拟核是细菌细胞内的大型的DNA,而质粒是中型环状的DNA.因此说细菌的DNA制不只是拟核的复制还有质粒的复制.
2.“分别用含有放射性同位素35s和放射性同位素32P培养噬菌体”怎么错了?
答:噬菌体是病毒的一种,只能在活的细菌中增殖.此句话可改成“用噬菌体去侵染分别用35S和32P培养的大肠杆菌”.
3.多倍体育种为什么不需经过愈伤组织,而单倍体育种要经过?
多倍体育种是一开始先进行染色体加倍,是用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗,不经过组织培养过程.而单倍体育种则是先用某植物的花药进行离体培养,培养到幼苗阶段后再用秋水仙素加倍.在花药离体培养阶段要形成愈伤组织.1年前查看全部
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hmliu2008 共回答了22个问题
|采纳率90.9%你的受体细胞是什么?不同种类的细胞方法是不同的,转化效率也是不同的.所有转化法都需要先把受体细胞制作成感受态细胞.
最好操作的就是大肠杆菌细胞.可选择的方法有:热激法,电穿孔法,化学转化法等.
酵母:氯化锂转化法,电穿孔法,这两种方法一般需要把环形质粒线性化.
真核细胞:原生质体融合,基因枪法,精子介导法,病毒载体介导法,显微注射法,花粉管介导法等等.1年前查看全部
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将外源目的基因导入大肠杆菌的质粒,质粒上本来有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,(顺利导入的话会破坏氨苄青霉素抗性基因)导入后放在含四环素的培养基上培养,长出来的大肠杆菌为什么有2种?
我认为有4种,分别是:
1,导入质粒但导入到无遗传效应的DNA片段上
2,导入大肠杆菌但未成功导入质粒
3,导入到氨苄青霉素抗性基因中
4,未导入大肠杆菌陆秀夫1年前1
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-恬儿 共回答了17个问题
|采纳率82.4%题目说将外源目的基因 导入 大肠杆菌的质粒,导入后 放在含四环素的培养基上培养.2,4都是没导入,不合题意.导入大肠杆菌但未成功导入质粒的话,外源基因会被分解掉,相当于没导入.1年前查看全部
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没有了长发 共回答了16个问题
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真陶吉吉 共回答了29个问题
|采纳率93.1%这个对照不太对,因为加质粒涂板一般那个平板是有抗生素的,而不加质粒涂板一般是需要不加抗生素的,没有对照的意义.一般是找一个以前做过的或者比较有代表性的质粒转化后作为对照,这样才能显示出感受态的好坏,否则不转质粒,“感受态细胞”这个词也无从说起.1年前查看全部
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肆舞忌淡 共回答了8个问题
|采纳率100%不知道你没杂出条带是因为什么原因,还有你杂交的抗体是目的蛋白的抗体吗?你杂杂标签蛋白试试,看看有没有条带啊?我这么说是因为,膜蛋白确实不好提取,而且提取后可能空间构想改变了,你的抗体可能识别不了了,而标签蛋白是多肽,构象不会受影响,只要不被你的目的蛋白档上就行,所以你可以用标签蛋白的抗体杂交下,试试.一般最好把标签和目的蛋白融合表达一下1年前查看全部
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|采纳率90%设计一对引物,针对基因两端(覆盖酶切位点),在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基,扩增以后,酶切产物和空载体,再连接一遍,转化,小提拿去测序.
最好上游换另一个内切酶位点,这样方便双酶切检测,区别于原来的质粒.1年前查看全部
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9850615ll 共回答了18个问题
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溶液一:重悬菌体,提供缓冲环境.
溶液二:氢氧化钠和SDS裂解菌体细胞壁、在细胞膜上穿孔,释放细胞内的质粒.
溶液三:中和氢氧化钠、SDS中的钠被钾替换,吸附菌体产生沉淀.
复杂的说:
让我们先来看看溶液I的作用.任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了.那么50 mM葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部.因此,如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言,几乎没有任何影响.所以说溶液I中葡萄糖是可缺的.那么EDTA呢?大家知道EDTA是Ca2+ 和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,配在分子生物学试剂中的主要作用是:抑制DNase的活性,和抑制微生物生长.在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA,无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉.如果不加EDTA,其实也没什么大不了的,只要不磨洋工,只要是在不太长的时间里完成质粒抽提,就不用怕DNA会迅速被降解,因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA.如果哪天你手上正好缺了溶液I,可不可以抽提质粒呢?实话告诉你,只要用等体积的水,或LB培养基来悬浮菌体就可以了.有一点不能忘的是,菌体一定要悬浮均匀,不能有结块.轮到溶液II了.这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2%的SDS等体积混合后使用的.要新从浓NaOH稀释制备0.4N的NaOH,无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性.很多人不知道其实破细胞的主要是碱,而不是SDS,所以才叫碱法抽提.事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞,碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解,这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化所导致.用了不新鲜的0.4 N NaOH,即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌(不妨可以自己试一下),自然就难高效率抽提得到质粒.如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒,因为SDS也是碱性的,只是弱了点而已.很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性,以便沉淀,这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致.有人不禁要问,既然是NaOH溶解的细胞,那为什么要加SDS呢?那是为下一步操作做的铺垫.这一步要记住两点:第一,时间不能过长,千万不要这时候去接电话,因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂;第二,必须温柔混合(象对待女孩子一样),不然基因组DNA也会断裂.基因组DNA的断裂会带来麻烦,后面我再详细说明.每个人都知道,溶液III加入后就会有大量的沉淀,但大部分人却不明白这沉淀的本质.最容易产生的误解是,当SDS碰到酸性后发生的沉淀.如果你这样怀疑,往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了.大量沉淀的出现,显然与SDS的加入有关系.如果在溶液II中不加SDS会怎样呢,也会有少量的沉淀,但量上要少得多,显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质.既然SDS不是遇酸发生的沉淀,那会不会是遇盐发生的沉淀呢?在1%的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl,你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的.因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀.但如果你加入的不是NaCl而是KCl,你会发现沉淀的量要多的多.这其实是十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate)遇 到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾(potassium dodecylsulfate, PDS),而PDS是水不溶的,因此发生了沉淀.如此看来,溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶性的PDS,而高浓度的盐,使得沉淀更完全.大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,钾钠离子置换所
产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了,让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了.这个过程不难想象,因为基因组DNA太长了,长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了,尽管SDS并不与DNA分子结合.那么2 M的醋酸又是为什么而加的呢?是为了中和NaOH,因为长时间的碱性条件会打断DNA,所以要中和之.基因组DNA一旦发生断裂,只要是50-100 kb大小的片断,就没有办法再被PDS共沉淀了.所以碱处理的时间要短,而且不得激烈振荡,不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入,琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带.很多人误认为是溶液III加入后基因组DNA无法快速复性就被沉淀了,这是天大的误会,因为变性的也好复性的也好,DNA分子在中性溶液中都是溶解的.NaOH本来是为了溶解细胞而用的,DNA分子的变性其实是个副产物,与它是不是沉淀下来其实没有关系.溶液III加入并混合均匀后在冰上放置,目的是为了PDS沉淀更充分一点.不要以为PDS沉淀的形成就能将所有的蛋白质沉淀了,其实还有很多蛋白质不能被沉淀,
因此要用酚/氯仿/异戊醇进行抽提,然后进行酒精沉淀才能得到质量稳定的质粒DNA,不然时间一长就会因为混入的DNase而发生降解.这里用25/24/1的酚/氯仿/异戊醇是有很多道理的,这里做个全面的介绍.酚(Phenol)对蛋白质的变性作用远大于氯仿,按道理应该用酚来最大程度将蛋白质抽提掉,但是水饱和酚的比重略比水重,碰到高浓度的盐溶液(比如4M的异硫氰酸胍),离心后酚相会跑到上层,不利于含质粒的水相的回收;但加入氯仿后可以增加比重,使得酚/氯仿始终在下层,方便水相的回收;还有一点,酚与水有很大的互溶性,如果单独用酚抽提后会有大量的酚溶解到水相中,而酚会抑制很多酶反应(比如限制性酶切反应),应此如果单独用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次将水相中的酚去除,而用酚/氯仿的混合液进行抽提,跑到水相中的酚则少得多,微量的酚在乙醇沉淀时就会被除干净而不必担心酶切等反应不能正常进行.至于异戊醇的添加,其作用主要是为了让离心后上下层的界面更加清晰,也方便了水相的回收.回收后的水相含有足够多的盐,因此只要加入2倍体积的乙醇,在室温放置几分钟后离心就可以将质粒DNA沉淀出来.这时候如果放到-20℃,时间一长反而会导致大量盐的沉淀,这点不同于普通的DNA酒精沉淀回收,所以不要过分小心了.高浓度的盐会水合大量的水分子,因此DNA分子之间就容易形成氢键而发生沉淀.如果感觉发生了盐的沉淀,就用70%的乙醇多洗几次,每次在室温放置一个小时以上,并用tip将沉淀打碎,就能得到好的样品.得到的质粒样品一般用含RNase(50 ug/ml)的TE缓冲液进行溶解,不然大量未降解的RNA会干扰电泳结果的.琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时,多数情况下你能看到三条带,但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带.碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA,不信的话你用EcoRI来线性化质粒后再进行琼脂糖电泳,就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样.其实这三条带以电泳速度的快慢而排序,分别是超螺旋、开环和复制中间体(即没有复制完全的两个质粒连在了一起).如果你不小心在溶液II加入后过度振荡,会有第四条带,这条带泳动得较慢,远离这三条带,是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断.非常偶然的是,有时候抽提到的质粒会有7-10条带,这是由于特殊的DNA序列导致了不同程度的超螺旋(超螺旋的圈数不同)所致.这里暂不深究.想说的,终于说完了.谢谢你的耐心.留下一个思考题,为什么真核生物的基因组DNA不能用碱法抽提?1年前查看全部
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A. 所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
B. 质粒是基因工程中唯一的运载体
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限制酶:主要从原核生物中分离纯化出来.特异性:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂.
常用的运载体:质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒.作为运载体必须具备的条件:①要具有限制酶的切割位点;②要有标记基因(如抗性基因),以便于重组后重组子的筛选;③能在宿主细胞中稳定存在并复制;④是安全的,对受体细胞无害,而且要易从供体细胞分离出来.A、一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列,说明酶具有专一性,故A错误;
B、质粒是基因工程中常用的载体,除此之外还有动植物病毒、噬菌体等,故B错误;
C、载体必须具备条件之一是:具有一个或多个限制性核酸内切酶切点,以便与外源基因连接,故C正确;
D、基因治疗是把正常基因导入病人体内有缺陷的细胞中,使该基因的表达产物发挥功能,从而达到治疗疾病的目的,故D错误.
故选:C.点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题考查基因工程的工具,意在考查考生的识记能力和理解能力,属于容易题.1年前查看全部
- 科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄植株的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长.质粒上有Pst I、
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄植株的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长.质粒上有pst i、sma i、hind iii、alul 等四种限制酶切割位点,下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr 为抗氨苄青霉素基因),其中①-④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤,i、ii 表示相关结构或细胞.请据图作答:
(l)基因工程的核心是______.
(2)构建基因表达载体时,可用一种或多种限制酶进行切割.为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,在此实例中,应该选用______酶,分别对目的基因和质粒进行切割,切割后产生的dna 片段分别为______种和______ 种.
(3)要筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应首先选择含______的培养基中筛选番茄组织细胞.
(4)研究人员通常采用______法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.
(5)基因工程操作中的第四步是目的基因的检测与鉴定,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用______技术,.采用______ 方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达.
(6)图中③④分别指的是______、______,欲获得人工种子应培养到______阶段.将ii细胞培养成完整植物体所用技术的理论基础是______.防雨淋1年前1
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箭客浪心 共回答了22个问题
|采纳率95.5%解题思路:据图分析,①表示基因表达载体的构建,②表示将目的基因导入受体细胞,③表示脱分化,④表示再分化.应该选用PstⅠ、SmaⅠ限制酶,分别对鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割.切割下来的鱼抗冻蛋白基因左侧是SmaI的切口,右侧是PstI的切口,粘性末端不同,这样切出的目的基因(鱼抗冻蛋白基因)不会发生自生环化现象,质粒的处理同上.(1)基因表达载体的构建是基因工程的核心.
(2)在构建基因表达载体中,如果目的基因和载体用同一种限制酶切割,获得的黏性末端相同,将会发生自身环化现象,故应选用不同的限制酶分别对目的基因和载体切割,以获得不同的黏性末端,故应选用PstⅠ和SmaⅠ对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割,PstⅠ和SmaⅠ在鱼抗冻蛋白基因的DNA上共有3个酶切位点,切割后产生4个DNA片段,而环状质粒上有两个酶切位点,切割后产生2个DNA片段.
(3)能在含氨苄青霉素的培养基中细胞具有抗氨苄青霉素基因,故基因表达载体Ⅰ中应含有抗氨苄青霉素基因作为标记基因.
(4)将目的基因导入植物细胞的方法是农杆菌转化法.
(5)检测目的基因是否翻译通常采用抗原-抗体杂交技术,采用低温培养方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达.
(6)图中③④分别指脱分化和再分化;欲获得人工种子应培养到胚状体阶段,植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性.
故答案为:
(1)基因表达载体的构建
(2)PstⅠ、SmaⅠ4、2
(3)抗氨苄青霉素基因(ampr)
(4)农杆菌转化
(5)抗原-抗体杂交 低温培养
(6)脱分化、再分化 胚状体 植物细胞的全能性点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术;植物培养的条件及过程.
考点点评: 本题考查基因工程、细胞工程的相关知识,相对综合,可以通过理解记忆的方法平时加以训练.1年前查看全部
- 质粒DNA为何保存在TE缓冲液中
我来说一句吧1年前2
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hmilyvvm 共回答了13个问题
|采纳率100%TE为含EDTA的Tris-HCl(PH 8.0)缓冲液:
其中比较关键的成分是EDTA,日常环境中不可避免的存在DNase,而DNase的活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活.镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端.
TE中含有的EDTA可以螯合金属离子,从而使DNase失活.
而Tris-HCl的作用主要是维持一定碱性PH值,有助于DNA的溶解和稳定.
一般长期保存需要TE缓冲液比较好,短期应用的可以使用ddH2O,有助于DNA连接等效果.1年前查看全部
- 农杆菌侵染植物细胞,进去的是质粒还是农杆菌
tangjia0081年前5
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可爱的桃太郎 共回答了17个问题
|采纳率88.2%哎,农杆菌的机理都很清楚了.
不清楚,看以看看这个网页,描述的很好.
根癌农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将Ti质粒上的T-DNA 区域插入到植物基因组中.1年前查看全部
- 如图是某质粒的示意图,其中ori为复制必需的序列,amp为氨苄青霉素抗性基因,tet为四环素抗性基因,箭头表示酶切后目的
如图是某质粒的示意图,其中ori为复制必需的序列,amp为氨苄青霉素抗性基因,tet为四环素抗性基因,箭头表示酶切后目的基因插入位点.下列有关叙述正确的是( )
A. 基因amp和tet是一对等位基因,常作为基因工程中的标记基因
B. 将重组质粒1、2、4导入大肠杆菌,大肠杆菌都能在含氨苄青霉素培养基上生长
C. 若要确定目的基因是否表达,应首选重组质粒2导入受体细胞
D. 将重组质粒4导入大肠杆菌,该菌不能在含四环素的培养基上生长lys78781年前1
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千古一剑 共回答了16个问题
|采纳率93.8%解题思路:分析题图:重组质粒1的ori被破坏;重组质粒2的ori、amp、tet均未被破坏;重组质粒3的氨苄青霉素抗性基因被破坏;重组质粒4的四环素抗性基因被破坏.A、等位基因是位于同源染色体相同位置上控制相对性状的基因,所以基因amp和tet不是一对等位基因,故A错误;
B、重组质粒1的复制原点被破坏,虽然含有氨苄青霉素抗性基因,但仍然不能在含有含氨苄青霉素培养基上生长,故B错误;
C、若要确定目的基因是否表达,可选重组质粒2、3或4导入受体细胞,再进行筛选和检测,故C错误;
D、重组质粒4的四环素抗性基因被破坏,因此导入重组质粒4的大肠杆菌不能在含有四环素的培养基上生存,故D正确.
故选:D.点评:
本题考点: 基因工程的应用.
考点点评: 本题考查基因表达载体的构建,意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力;能运用所学知识作出准确的判断和得出正确的结论.1年前查看全部
- 请问:怎样提取微生物的质粒(DNA)?
julycln20071年前4
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very_boy 共回答了22个问题
|采纳率95.5%碱提法:
一、试剂准备
1.溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0).1M Tris-HCl(pH 8.0)12.5ml,0.5M EDTA(pH 8.0)10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml.在10 lbf/in2高压灭菌15min ,贮存于4℃.
2.溶液Ⅱ:0.2N NaOH,1% SDS.2N NaOH 1ml,10%SDS 1ml,加ddH2O至10ml.使用前临时配置.
3.溶液Ⅲ:醋酸钾(KAc)缓冲液,pH 4.8.5M KAc 300ml,冰醋酸 57.5ml,加ddH2O至500ml.4℃保存备用.
4.TE:10mM Tris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA(pH 8.0).1M Tris-HCl(pH 8.0)1ml,0.5M EDTA(pH 8.0)0.2ml,加ddH2O至100ml.15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用.
5.苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)
6.乙醇(无水乙醇、70%乙醇)
7.5×TBE:Tris 碱54g,硼酸27.5g,EDTA-Na2·2H2O 4.65g,加ddH2O 至1000ml.15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用.
8.溴化乙锭(EB):10mg/ml
9.RNase A(RNA酶A):不含DNA酶(DNase-free) RNase A的10mg/ml,TE配制,沸水加热15min,分装后贮存于-20℃.
10.6×loading buffer(上样缓冲液):0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,40%(W/V)蔗糖水溶液.
11.1% 琼脂糖凝胶:称取1g琼脂糖于三角烧瓶中,加100ml 0.5×TBE,微波炉加热至完全溶化,冷却至60℃左右,加EB母液(10mg/ml)至终浓度0.5μg/ml(注意:EB为强诱变剂,操作时带手套),轻轻摇匀.缓缓倒入架有梳子的电泳胶板中,勿使有气泡,静置冷却30min以上,轻轻拔出梳子,放入电泳槽中(电泳缓冲液0.5×TBE),即可上样.
二、操作步骤
1.挑取LB固体培养基上生长的单菌落,接种于2.0ml LB(含相应抗生素)液体培养基中,37℃、250g振荡培养过夜(约12-14hr).
2.取1.5ml培养物入微量离心管中,室温离心8000g×1min,弃上清,将离心管倒置,使液体尽可能流尽.
3.将细菌沉淀重悬于100μl预冷的溶液Ⅰ中,剧烈振荡,使菌体分散混匀.
4.加200μl新鲜配制的溶液Ⅱ,颠倒数次混匀(不要剧烈振荡),并将离心管放置于冰上2-3min,使细胞膜裂解(溶液Ⅱ为裂解液,故离心管中菌液逐渐变清).
5.加入150μl预冷的溶液Ⅲ,将管温和颠倒数次混匀,见白色絮状沉淀,可在冰上放置3-5min.溶液Ⅲ为中和溶液,此时质粒DNA复性,染色体和蛋白质不可逆变性,形成不可溶复合物,同时K+使SDS-蛋白复合物沉淀.
6.加入450μl的苯酚/氯仿/异戊醇,振荡混匀,4℃离心12000g × 10min.
7.小心移出上清于一新微量离心管中,加入2.5倍体积预冷的无水乙醇,混匀,室温放置2-5min,4℃离心12000g×15min.
8.1ml预冷的70%乙醇洗涤沉淀1-2次,4℃离心8000g×7min,弃上清,将沉淀在室温下晾干.
9.沉淀溶于20μl TE(含RNase A 20μg/ml),37℃水浴30min以降解RNA分子,-20℃保存备用.1年前查看全部
- 用人工诱变的方法使黄色短杆菌的质粒中脱氧核普酸序列发生如下变化:CCGCTAACGATC→CCGCGAACGATC.下列
用人工诱变的方法使黄色短杆菌的质粒中脱氧核普酸序列发生如下变化:CCGCTAACGATC→CCGCGAACGATC.下列有关推断正确的是( )
可能用到的相关密码子:脯氨酸一CCG、CCU;甘氨酸一GGC、GGU;天冬氨酸一GAU、GAC;丙氨酸一GCA、GCU、GCC、GCG;半光氨酸一UGU、UGC;终止密码一UAA、UAG.
A.该脱氧核苷酸序列控制合成的一段肽链中肽键数为3
B.该脱氧核苷酸序列控制合成的一段肽链中肽键数为2
C.该黄色短杆菌没有发生基因突变
D.该黄色短杆菌性状会发生改变面对面的背影1年前1
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静静我来了 共回答了18个问题
|采纳率83.3%解题思路:由题意知,用人工诱变的方法使黄色短杆菌的质粒中脱氧核普酸序列发生CCGCTAACGATC→CCGCGAACGATC的变化,由DNA转录形成的mRNA的密码子变化是:GGC GAU UGC UAG→GGC GCU UGC UAG,因此mRNA编码的氨基酸序列的变化是:甘氨酸-天冬氨酸-半光氨酸→甘氨酸-丙氨酸-半光氨酸.A、由题意知,该脱氧核苷酸序列编码3个氨基酸,因此含有2个肽键,A错误;
B、由A分析可知,B正确;
C、该黄色杆菌发生了基因突变,C错误;
D、由分析知,突变后基因编码的蛋白质的氨基酸序列发生了变化,因此该黄色短杆菌性状会发生改变,D正确.
故选:BD.点评:
本题考点: 遗传信息的转录和翻译;蛋白质的合成——氨基酸脱水缩合;基因突变的特征.
考点点评: 对于基因的转录和翻译过程及基因突变与生物性状之间的关系的理解,把握知识的内在联系,并应用相关知识对某些生物学问题进行解释、推理、判断的能力是本题考查的重点.1年前查看全部
- 1.DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒的工具酶
1.DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒的工具酶
2.细胞具有全能性的根本原因是体细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能
3.温室条件下,通过增施农家肥可以提高农作物对有机物的吸收.Hellen_08221年前1
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cql54110 共回答了18个问题
|采纳率100%你需要的是理解:DNA是双链的吧.比如说左边一条是1的,右边的是2的.
1 2
1 2
1 2
1 2
1 2
1 2
那么上下隔开1与1间就要用DNA聚合酶``连接单个链上的DNA片段
左右1和2的就需要DNA连接酶```连接两条DNA片段.
连接酶作用于两个DNA片段,而聚合酶作用于核苷酸间的磷酸二脂键
构建重组质粒就是目的基因与质粒重组
是两个DNA之间的连接,只要用DNA连接酶///
第二题:细胞具有全能性的根本原因是体细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能 很像对的了.
不过要记得要离体的细胞,对吧,呵```书上有.概念问题这是
第三题:
有机物的吸收这里错了,增施农家肥是为了根更好也更多的吸收矿质离子````
回答完毕,就是打字有点儿累``如果我有说错也请你指出,我也是学生物的..可以交流一下.1年前查看全部
- 27.一种新发现的细菌质粒中有a、b、c等基因,下图表示用限制性内切酶处理后得到的片段.下列有关叙述中不正确的是( )
27.一种新发现的细菌质粒中有a、b、c等基因,下图表示用限制性内切酶处理后得到的片段.下列有关叙述中不正确的是( )
a b c
A.基因a、b、c对该细菌的生长、繁殖是非必需的
B.基因a控制合成的蛋白质含有m个氨基酸,比水稻中控制合成含有m个氨基酸的蛋白质的基因长度要短很多
C.若利用某药物阻止基因a的表达,则基因b、c也不能表达
D.组成基因a、b、c的基本单位相同,而且基因a、b、c中都有RNA聚合酶的结合位点
错误的是前半句还是后半句,为什么
还有C为什么是正确的
复制半条表达半条不行吗
yj1241年前2
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kissdevel 共回答了17个问题
|采纳率100%答案应该是C
阻止基因a的表达可以有很多方法,可以阻止转录,也可以阻止翻译等,所以若利用某药物阻止基因a的表达,基因b、c也有可能表达
另外复制和表达是相对独立的,一般不会出现复制半条就表达的情况
D是正确的,组成基因a、b、c的基本单位都是脱氧核苷酸,都有RNA聚合酶的结合位点1年前查看全部
- 质粒DNA琼脂糖凝胶电泳图分析其他组在比较明显的条带下能看到另一条比较浅的,为什么我的没有啊,而且上面的有一些变形了,怎
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳图分析
其他组在比较明显的条带下能看到另一条比较浅的,为什么我的没有啊,而且上面的有一些变形了,怎么回事啊chenhanqiu1年前1
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赵璟 共回答了14个问题
|采纳率92.9%那是他们提取的时候变性时间太长,变性的质粒DNA电泳的时候走在超螺旋DNA的前面,染色较淡.
变形的原因通常是上样量太大,也有可能是凝胶、缓冲液的原因.1年前查看全部
- 转座子,质粒,拓扑异构酶?是不是说自然状态下细菌仍可发生基因重组?比如R型菌被转变成S型菌?
转座子,质粒,拓扑异构酶?是不是说自然状态下细菌仍可发生基因重组?比如R型菌被转变成S型菌?
请专业人士回答,高考考试中如果出现:一个细菌只能诱导机体产生一种抗体.这种说法正确吗?为什么?沉默21年前2
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sunchangping 共回答了14个问题
|采纳率92.9%是的,可以发生.如S型菌是获得了R型菌的DNA,并且整合到了自己的DNA上,这就是一个重组的过程啊.不要以为重组就只是减数分裂时发生的.
无荚膜的R型细菌有非常重要的“感受态因子”位点,保证了S型细菌的DNA可以进入.S型细菌有荚膜,无“感受态因子”位点,不能作为受体菌直接培养而发生转化.那么S型细菌有可能变成R型细菌吗?当然有!
转化之所以会发生:
一、因为R型与S型的DNA可以同源区段配对,形成杂合细菌,通过分裂生殖形成R型和S型两种后代,不象许多人认为的(R型直接变成S型);
二、无荚膜的R型有非常重要的感受态,保证了S型的DNA可以进入.反之则不会发生:S型有荚膜,无感受态,不能作为受体菌,若人为除去荚膜,培养出无荚膜的后代,它就同时丧失了毒性,变成R型,当然就会有了感受态.
三、真核生物的细胞膜表面结构与原核生物的大不相同,不会发生转化(转化本身只发生在同种菌株间或近缘菌株间).我们可以放心去吃想吃的东西,包括被加热杀死的S型肺炎双球菌.
四、S型可以变成R型吗?当然可以!产荚膜细菌由于有黏液物质,菌落表面湿润、有光泽、黏液状,称光滑型—S型(smooth);无荚膜细菌由于无黏液物质,菌落表面干燥、粗糙,称粗糙型—R型(rough).自然状态下通过基因突变来完成,不是转化.人工方法是诱变,物理、化学方法都行,变过来的还能再变回.
关于"一个细菌只能诱导机体产生一种抗体.这种说法正确吗?为什么?"的问题:抗原与抗体的关系正如一把钥匙开一把锁,一个细菌只能诱导机体产生一种抗体,但如果细菌变异了,那机体也会相应产生对应的抗体.1年前查看全部
- 科学家在某种植物中找到了抗枯萎的基因,并以质粒为运载体,采用转基因方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品种,下列有关说法正确的
科学家在某种植物中找到了抗枯萎的基因,并以质粒为运载体,采用转基因方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品种,下列有关说法正确的是 [ ]
A.质粒是最常用的运载体之一,它仅存在于原核细胞中
B.将抗枯萎基因连接到质粒上,用到的工具酶仅是DNA连接酶
C.用叶肉细胞作为受体细胞培育出的植株不能表现出抗枯萎性状
D.通过该方法获得的抗病金茶花,产生的配子不一定含抗病基因流浪猪011年前1
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You-zi 共回答了15个问题
|采纳率93.3%D1年前查看全部
- 举一个例子:大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可
举一个例子:大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体是否吸饱具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因.当人们用选择培养基(比如含有青霉素的培养基),来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了..这是百度百科上的,对于标记基因我有些迷惑,首先我想问的是标记基因究竟在哪里?是在质粒上还是随同目的基因一同导入?如果实在质粒上那么为什么如果目的基因没有成功导入标记基因就没有效用?如果随同目的基因一同导入为什么不直接检测目的基因?而且这样所谓质粒的优越性又在哪里?请高手帮忙解答一下,如果能够解释清楚,会有加分.谢谢
感谢回答,但是我想问的是为什么?就如同我最后提出的几个问题一样如果在质粒上,那么如果没有目的基因为什么标记基因就不表现,这是什么原理,难道说目的基因能够激发标记基因表达???
同样感谢回答,但可能是我的问题问的不清楚,我明白标记基因在质粒上,然后如果标记基因能够表达就说明有目的基因,这样做很简便。但是我不明白的是为什么如果标记基因能够表达就说明有目的基因?就如同ylgtwcat回答的“不是的,2个基因有分别的启动子。而抗药基因的启动子始终是处于激活状态。”抗药基因的启动子始终处于激活状态,那么如果我的目的基因并没有连接在质粒上(因为鸟枪法很可能连上别的基因,而这些基因有相同的粘性末端),这两者的区别仅仅是一个有目的基因,一个没有,而抗药基因的启动子始终处于激活状态,那么这两个质粒应该都能够表达抗药基因啊!这种区别对标记基因是否表达又有什么影响呢?为什么会有这种影响??到底用什么ID呢1年前2
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seekeys 共回答了13个问题
|采纳率84.6%“难道说目的基因能够激发标记基因表达?”
不是的,2个基因有分别的启动子.而抗药基因的启动子始终是处于激活状态.
标记基因这个名字起的不好,应该是筛选基因,比较好理解.
当目的基因和抗药基因在同一质粒时,抗药基因用来分离成功转染了该质粒的细菌.没有转染的细菌就不能存活.“这样所谓质粒的优越性又在哪里?” 这样很简便.不用一个一个细菌来检测是否有目的基因.1年前查看全部
- 质粒DNA可以直接做PCR模板吗?
fudaying1年前3
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风中的云儿 共回答了20个问题
|采纳率95%绝大多数情况下可以,但一般要稀释
个别情况下需注意,譬如你的PCR产物纯化后直接做电转,此时要注意你的模板质粒是否会同时发生转化影响筛选1年前查看全部
- 请问用PCR克隆已知基因的步骤中为何要将回收的目的基因重组在大肠杆菌质粒上去呢?
灰hui1年前1
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yyq73 共回答了15个问题
|采纳率93.3%1、这是作为保藏的手段,不然你怎么保存你的基因?
2、这是获得自引物之间完整序列的必要途径,因为测序是无法获得待测序列起始部分和约800-1000bps之后的序列,因此需要连接到质粒上测序,俗称TA克隆.为什么会这样我就不说了,懒得打字.1年前查看全部
- 导入了目的基因的一个质粒,导入到一个大肠杆菌中,那么 大肠杆菌中的限制酶和原有质粒不会对携带目的
导入了目的基因的一个质粒,导入到一个大肠杆菌中,那么 大肠杆菌中的限制酶和原有质粒不会对携带目的
基因的质粒进行破坏么?yflame1年前2
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chenxu5949 共回答了19个问题
|采纳率84.2%在质粒导入大肠杆菌的过程中,有两个机制对质粒有影响,第一个是限制性,即新导入的质粒会被限制酶切然后降解,这是微生物抵御外界感染的的机制,另一个机制是修饰机制,会对自身的遗传物质进行修饰,如甲基化等,在质粒在初进入大肠杆菌,度过限制这一过程后,其修饰机制即会发生作用,使外源的质粒与染色体进行同样的修饰.因此,在此之后,质粒将不再被限制酶破坏.1年前查看全部
- 生物上CACL2用途是增加细菌细胞壁通透性便于质粒通过吗?PS:只对细菌有用?比如说,为了提高重组质粒导入金茶花细胞的成
生物上CACL2用途
是增加细菌细胞壁通透性便于质粒通过吗?
PS:只对细菌有用?
比如说,为了提高重组质粒导入金茶花细胞的成功率,可用氯化钙处理金茶花细胞,之所以错是因为金茶花不是细菌?
求解~~~涤尘杭州1年前2
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jiejie1510 共回答了16个问题
|采纳率93.8%用CACL2来处理,是利用钙离子处理法,使细胞处于感受态,促进质粒进入.如果是导入金茶花细胞,就属于导入植物细胞了,常用花粉管通道法,基因枪法,农杆菌转化法.1年前查看全部
- 关于切割质粒和目的基因,我真心不懂,我知道目的基因是双链 ,需要两个切口,形成4个粘性末端,我知道质粒是环状的,为什么只
关于切割质粒和目的基因,我真心不懂,我知道目的基因是双链 ,需要两个切口,形成4个粘性末端,我知道质粒是环状的,为什么只需要一个切口?连接目的基因的时候是连接两个吗?而且目的基因形成的粘性末端下面那个短的该和谁接呢?
ligs20001年前2
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许若莹 共回答了14个问题
|采纳率85.7%质粒也是双链首先,你说的基因双酶切之后,是有两个切口,但应该是两个粘性末端,(当然了,这只是个说法问题).质料是双链环状,一个切口之后,也是有两个末端,那这两个末端就可以与基因上的末端连接了.另外,在真正的实难...1年前查看全部
- 基因工程没导入目的基因的质粒中的抗性基因在正常情况下不表达吗?如果也能表达,那怎么还能用这种方法来进行检测是否成功导入目
基因工程
没导入目的基因的质粒中的抗性基因在正常情况下不表达吗?如果也能表达,那怎么还能用这种方法来进行检测是否成功导入目的基因呢?
也就是说为什么大肠杆菌细胞的质粒中有这种抗青霉素抗性基因,而大肠杆菌确没表现出来这种性状呢,基因不是应该表达的吗?善良是幸福的1年前1
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wenchong78 共回答了27个问题
|采纳率100%抗性基因也表达,但是可能质粒中不止一个抗性基因,一个表达,另一个插入失活;或者插入失活的是半乳糖苷酶操纵子,又或者插入失活的是致死基因ccdB.1年前查看全部
- 染色体和质粒都可以作为基因工程的载体么
不喔喔1年前2
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狂找mm的人 共回答了23个问题
|采纳率91.3%质粒可以.染色体不可以1年前查看全部
- 农杆菌转换法是将带目的基因的质粒插入染色体吗?
乔灌争辉1年前1
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qll200208 共回答了19个问题
|采纳率89.5%农杆菌转化法就是将目的基因整合到植物染色体DNA上,从而实现外源目的基因的表达1年前查看全部
- 为什么当宿主细胞是细菌细胞时,质粒不用整合到染色体DNA上?要考试了,
ysj2321年前1
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ghp_1983 共回答了19个问题
|采纳率94.7%第一,细菌没有染色体
第二,别忘了,质粒是从细菌中取得的,因此,质粒在细菌中可以稳定存在并表达
因此,得解1年前查看全部
- PCR产物纯化后,连接载体PGMT,转化如DH5α后为何不能直接测序,还要再酶切和提取质粒呢?
彩怡1年前2
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乐乐晓蒙 共回答了21个问题
|采纳率90.5%你们是自己测序,还是送公司测序?
如果是送公司的话,可以直接测序,测序引物为M13通用引物.但是测序之前需要把挑出来的克隆,扩繁、PCR检测后再测序.测序公司再提取质粒-测序.
如果是自己测序,酶切应该是检测用,阳性的质粒再测序.
总之,一般情况下,测序都是用质粒.酶切或者PCR只是用来检测阳性克隆,酶切更准确.现在PCR产物也可以直接用来测序.1年前查看全部
- 一个质粒和一个目的基因,上面都有两种酶的切割位点,为什么用一种酶切后,再连接,有三种连接产物,而...
一个质粒和一个目的基因,上面都有两种酶的切割位点,为什么用一种酶切后,再连接,有三种连接产物,而...
一个质粒和一个目的基因,上面都有两种酶的切割位点,为什么用一种酶切后,再连接,有三种连接产物,而同时用2种酶切后再连接的产物只有质莉和目的基因连的产物,这两种切法有什么不同?gjj43081年前3
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叶辛 共回答了20个问题
|采纳率90%连接产物有:质粒和质粒连,目的基因和目的基因连,质粒和目的基因连.
至于你说的用两种酶切的产物,需要具体看酶的位置关系再作判断,情况就多了1年前查看全部
- 下列有关基因工程的说法不正确的是( )A.基因治疗遵循基因重组的原理B.质粒都可直接用于基因工程中
下列有关基因工程的说法不正确的是( )A.基因治疗遵循基因重组的原理B.质粒都可直接用于基因工程中
下列有关基因工程的说法不正确的是( )
A.基因治疗遵循基因重组的原理
B.质粒都可直接用于基因工程中的运载体
C.将目的基因与载体结合在一起,需要用到两种工具酶
D.即使检测出受体细胞中含有目的基因,也不能说明基因工程就一定成功
wyes20031年前1
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zzxxyy1425 共回答了12个问题
|采纳率83.3%A、基因治疗是基因工程技术的重要应用之一,而基因工程的原理是基因重组,A正确;
B、天然的质粒不能直接作为载体,基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的,B错误;
C、将目的基因与载体结合在一起,首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体,其次还需要用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组质粒,C正确;
D、目的基因成功导入受体细胞后不一定能成功...1年前查看全部
- 如何区分相差400bp的两个质粒dna
流浪的舞蝶1年前1
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火星人怎么了 共回答了19个问题
|采纳率89.5%如果你是想知道哪个是大的质粒,哪个是小的质粒的话,跑一个琼脂糖凝胶电泳就可以看出来了.1年前查看全部
- 用氯化钙法将质粒DNA转化入大肠杆菌实验中,转化成功的关键因素有哪些?
雅加1年前1
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youyou118 共回答了14个问题
|采纳率92.9%1.细菌的生长状态和密度:OD006=0.0.5 细菌出于对数期或者对数前期
2.质粒DNA:数量:质粒DNA不超过感受态细胞体积的5%
大小:分子量越大转化效率越低,超过30Kb的质粒DNA很难转化成功
构型:超螺旋的DNA具有较高的转化效率,重组DNA效率低一些,环状DNA相比线性DNA转化效率高一些
3.所用试剂纯度、质量、器皿的洁净程度
4.防止杂菌和其他外源DNA的污染1年前查看全部
- 在添加抗生素培养基上长出的单克隆是否都含有重组质粒?
在添加抗生素培养基上长出的单克隆是否都含有重组质粒?
TA克隆在添加抗生素培养基上生长出的菌斑是否都来自于转化的细胞?shui_er1年前1
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xdz13 共回答了11个问题
|采纳率81.8%不一定.转化成功的细胞会在选择培养基上生长,但也可能存在T载体自身环化的情况,目的基因未连接到T载体上.1年前查看全部
- 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因.
如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因.
1.如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因并在大肠杆菌中进行表达?简要说明试验中可能遇到的问题及可能的解决方法?
2.分别指出DNA复制,RNA合成,蛋白质合成三个过程的忠实性是如何保持的?
3.现在分离出一DNA片段(如下),可能含有编码某一多肽基因N端的一段基因序列
5`CGCAGGATCAGTCGATGTCCTGTG3`
3`GCGTCCTAGTCAGCTACAGGACAC5`
1)哪一条链作为转录的模板链
2)其mRNA序列如何?
3)翻译从哪里开始?朝哪个方向进行?
4)此DNA最可能是从原核细胞还是真核细胞中分离的?
4.原核生物和真核生物在遗传信息传递,表达,及调控中有何主要区别?、
5.某一基因的编码序列中发生了一个剪辑突变,那么这个基因的表达产物在结构上会发生哪些变化?
6.简述mRNA,tRNA和rRNA的结构特点及其在蛋白质生物合成过程中的作用?
还有拜托那些说高中生物的朋友仔细想想!你们会发现高中生物根本解释不了,它或许可以解释些皮毛,要详细的答案必须学过分子生物学才可以,这是医学院大二的《生物化学与分子生物学》题目,wslx51842861年前1
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cattysl 共回答了14个问题
|采纳率78.6%用大肠杆菌表达载体就行啊!问题就是,ORF要正确,表达的蛋白可能被降解,激素基因要把内含子去掉,启动子、终止子都要用大肠杆菌的等等.1年前查看全部
- (2/2)还是说这种质粒能复制一次或几次.
smallpanel1年前1
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你的老四 共回答了17个问题
|采纳率88.2%生化书里说的 “每个细胞只有一个或少数几个拷贝”是指的:在同一个细胞内有几个完全相同质粒同时存在的数量,而不是复制多少次.
我想你输错了,松弛控制的质粒,每个细胞可以有几十直到几百个拷贝,也就是说,同一个细胞内,有完全相同的质粒几十直到几百个.现在基因工程里常用的大肠杆菌质粒如pUC19等就属于这一类.
严谨型的质粒,才只有一个或少数几个拷,比如大肠杆菌的F质粒,在人类基因组中用得很多的BAC质粒就属于这一类质粒.
严谨型的质粒的复制,受基因组的复制的调控.而松弛型的质粒不受其调控,也就是在细胞不分裂时,松驰型的质粒还会继续复制,而严谨型的则一般会停止.
在适当的宿主细胞内,质粒总是会随着细胞一直不停的复制下去的,所以质粒的复制能力是无限的,因此,生化书里说的是指的在一个细胞内有几个拷贝数,而不是复制多少次.1年前查看全部
- 怎样构建质粒?将大肠杆菌中的木糖异构化酶基因、木酮糖激酶基因、转醛缩酶基因和转酮糖酶基因分为两组组成两个操纵子,分别置于
怎样构建质粒?
将大肠杆菌中的木糖异构化酶基因、木酮糖激酶基因、转醛缩酶基因和转酮糖酶基因分为两组组成两个操纵子,分别置于z.mobilis自身的3一磷酸甘油醛脱氢酶启动子和烯醇酶启动子下,并将这两个操纵子构建在一个质粒中.求具体实验方案小傻瓜21211年前1
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牛奶和咖啡 共回答了17个问题
|采纳率88.2%分别将这两个基因插入到相应的载体中使用酶切,连接,转化,鉴定的方法就可以进行质粒构建了!1年前查看全部
- 提取质粒还没加Rna酶为何电泳中不见Rna
提取质粒还没加Rna酶为何电泳中不见Rna
最近三次都是这样.测出的质粒浓度不是很高,A260/A280比值正常,都在1.6-2.2之间,就是电泳中不见rna.有人说是菌种刚好在稳定期造成的,还有别的解释么?summerbecky1年前2
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wgh_333 共回答了14个问题
|采纳率92.9%一般来说,提取质粒所用的试剂盒已经加入了RNase,所以电泳跑胶不会出现RNA条带.即使是采用的人工方法提取,也不可避免的空气中,汗液,唾液等中丰富的RNase的降解.此外,按照你的问题来看,你应该是再提取质粒,提取质粒然后电泳渴望观察到RNA的条带,殊不知质粒分子一般较大,其所用的琼脂糖胶浓度一般小于1%,这种浓度的胶是检测不出RNA条带的,细胞总RNA条带在跑胶时是以tRNA(约占细胞总RNA的80%)条带形式展现的.而tRNA电泳所用的胶浓度在2%左右,是不可以同质粒电泳同时在一块胶上检测的.1年前查看全部
- 近期在质粒构建是PCR和酶切后都有目的条带,但是就是连接转化后没有点,或者有点但是是阴性的,
近期在质粒构建是PCR和酶切后都有目的条带,但是就是连接转化后没有点,或者有点但是是阴性的,
感受态不行?
目的片段没有酶切成功?
没有连接上?
载体不行?逍遥狂草1年前1
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暴雨caozhun 共回答了27个问题
|采纳率88.9%都有可能
你可以多做几个对照,如空载体转化、空细胞涂板等等,帮助缩问题小范围
你可以询问实验室其他人员,看看酶是否有问题,感受态是否有问题,抗生素是否有问题,等等
按你给的线索,菌落很少,很有可能是切开的线性质粒没有连上片段,转不进细胞,少量没有切开的空载体转进细胞,形成阴性菌落.问题可能在片段酶切上,建议连T载体再切,或双酶切换成两步单酶切,或换酶切位点,或重新设计保护碱基1年前查看全部
大家在问
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