我的酶切位点是Sfi1和xba1,准备分开切,应该先切xba1呢还是Sfi1呢?还有就是Sfi1需要在50度下反应么?
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yaoduodi 共回答了18个问题
|采纳率72.2%- 反应温度参照相应酶的说明书上给出的温度就行了,我一般是先切难的,再切相对容易的.
- 1年前
高射炮111 共回答了1个问题
|采纳率- 什么是Sfi1酶切?
- 1年前
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回答下列有关生物工程的问题.
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(1)若要构建重组质粒,需要对目的基因进行测序,并将测序结果与______酶的识别序列进行对比,以确定选用何种酶.该类酶作用的部位是______键.
(2)若用EcoRI酶对目的基因和质粒进行酶切,再用DNA连接酶处理,则由两个DNA片段连接形成的产物有______种.用上述几种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验.之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是______.
(3)为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选用的酶是______.
(4)酶与底物能特异性结合.以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有______(可多选)
A.分离得到核糖体,用蛋白酶酶解后提rRNA
B.用无水乙醇处理菠菜叶片,提取叶绿体基粒膜上的光合色素
C.通过分子杂交手段,用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位
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(5)从变异的角度看,基因工程的原理是______;而植物细胞杂交的原理是______.为晨不平1年前1
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梦迷陷花城 共回答了18个问题
|采纳率100%解题思路:在基因工程中,一般需要用同一种限制酶切割目的基因和质粒,而图中的质粒上存在两种限制酶的切割位点,并且切割位点均在四环素抗性基因.解答本题应着重围绕这两点有效信息.在第四小题中,蛋白酶能特异性水解蛋白质;分子杂交手段也是利用各物质分子结合的特异性;抑制成熟基因转录出的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA碱基互补结合,也具有特异性;光合色素易溶于有机溶剂,并不是特异性溶解.(1)若要构建重组质粒,一般要用同一种限制酶进行切割,形成相同的黏性末端,然后再用DNA连接酶连接.因此在目的基因和质粒上必须存在同一种限制酶的切割位点,需要对目的基因进行测序,以确定选用何种酶.限制酶的作用的部位是磷酸二酯键.
(2)若用EcoRI酶对目的基因和质粒进行酶切,再用DNA连接酶处理,则由两个DNA片段连接形成的产物有3种:重组质粒、目的基因与目的基因连接物、载体和载体连接物.由于EcoRI酶的识别位点刚好在四环素抗性基因上,因此重组质粒中,该抗性基因已经被破坏,而目的基因与目的基因连接物上没有该基因,只有载体和载体连接物上把两个切割后的四环素抗性基因进行拼接形成两个完整的四环素抗性基因.
(3)为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选用EcoRI和BamHI两种酶同时切割目的基因和质粒.由于这两种酶能切割形成不同的黏性末端,使得目的基因与目的基因、载体和载体之间无法连接,而目的基因和质粒却能够连接.
(4)核糖体由蛋白质和rRNA构成,可以利用酶的专一性用蛋白酶将蛋白质水解,从而提纯rRNA,A正确;无水乙醇可以溶解所有光合色素,没有利用生物分子间的特异性结合,B错误;分子杂交手段是利用了碱基互补配对的原则,C正确;抑制成熟基因的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA之间发生了碱基互补配对,也利用了分子间特异性结合,D正确.
(5)从变异的角度看,基因工程的原理是基因重组;而植物细胞杂交的原理是染色体变异.
故答案为:
(1)限制性DNA内切酶 磷酸二酯键
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(5)基因重组染色体变异点评:
本题考点: 基因工程的应用.
考点点评: 本题围绕分子间的特异性结合的性质,综合考查了基因工程、基因结构、酶的作用特性等知识,本题难度适中,主要考查对教材的熟悉程度及对生物术语的规范运用.1年前查看全部
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B.用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
C.用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
D.用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体zxs19601年前1
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hanrong5 共回答了17个问题
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jenbi 共回答了24个问题
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- 如何给一段序列增加一个酶切位点.
如何给一段序列增加一个酶切位点.
做SNP的,酶切的方法简单快捷,但是选择基因的位点没有酶切位点,想请问大家如何给一段序列增加一个酶切位点?具体的实验步骤和所用仪器设备.
PCR的过程就不用说了,我想问问引物如何能引入酶切位点啊?天崖旧恨血无情1年前1
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书生小明 共回答了24个问题
|采纳率100%你可以设计带有酶切位点的引物,对目的基因进行PCR,就可在目的基因上引入酶切位点.
步骤:引物设计(借助软件)——合成引物(公司合成)——PCR.
最重要的一个仪器就是PCR仪了,具体的加什么试剂,加多少,我想楼主应该是做分子生物学,这些应该挺清楚的了.
楼主,引物一般是用软件设计,例如Primer.5,你根据你的目的基因两端的特点,设计合适的引物,然后在引物上再添加酶切位点 ,例如EcoRⅠ 是应用最广泛的限制性内切酶,酶切位点和切割位点如下:5' G↓AATTC 3' 3' CTTAA↑G 5' ,你就可以在这两条引物上分别添加这几个脱氧核苷酸,这不就在引物中引入酶切位点了吗?经过PCR后引物和目的基因连在一起,酶切位点自然也连上去了.楼主,你可以根据需要,引入不同的限制性内切酶的酶切位点.1年前查看全部
- ,为什么目的基因有某酶的酶切位点就不能选择此限制酶
狼叼ww1年前2
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玩者 共回答了17个问题
|采纳率94.1%这位同学,你肯定把这句话误解了的.你可以试想目的基因如果有某酶切点,再用此酶,那不就会把目的基因切断了吗了?应该是目的基因两端有某酶切点,再用此酶,切取此目的基因,而不是切点在目的基因中间,那样只会破坏目的基因.1年前查看全部
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为了肥兔我拼命2 共回答了13个问题
|采纳率100%一般都会在表达蛋白前面加入序列标签,一般都是组氨酸标签,便于后续的蛋白纯化.但是不要加的太长了,还有就是多出的碱基一定要是3个3个一组的,不能打破了你的蛋白的开放阅读框.多出几个残基对蛋白的影响不会太大,基本可以忽略.这个就要看你的启动子序列之后有没有ATG,如果没有的话就需要加入,有的话就不需要.1年前查看全部
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包谷哥1年前1
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k3u0a8 共回答了15个问题
|采纳率100%按照你的表述,EcoRI酶切位点是在卡那霉素抗性基因内部?
那么,如果这个抗性基因插入了你的目的基因,那么这个基因就被破坏,也就失去了卡那抗性.
所以,插入了目的基因的质粒,应该是只有氨苄抗性的.所以转化之后涂平板,不能用双抗,只能用氨苄抗性.
要鉴别是否插入目的基因,很简单:
1,菌落pcr:从转化平板上随机挑选几个菌落,用普通pcr体系,以菌体为模板,做pcr,然后跑胶鉴定.(我的经验,这一步阳性了就基本准了)
2,从菌落pcr阳性菌内提质粒酶切鉴定.(这个最准)
3,如果你实在是要求用抗性来筛(其实抗性筛选不是很准),你用两种平板,一种是amp平板(也就是转化用的平板),一种是amp+kan平板,你用接种环或者灭过菌的牙签,从amp转化平板上的菌落点一下,再在amp
+kan平板上原位点一下,培养.
如果同一个菌落,只能在amp上长,而不能在双抗上长,就可能是重组质粒.1年前查看全部
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大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体.某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中,如果没有插入外源基因,LacZ基因便可表达出口一半乳糖苷酶.当培养基中含有IPTG和X-gal时,X-gal便会被β一半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落.反之,则形成白色菌落.下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程.
请分析并回答:
(1)已获得的目的基因可利用______技术进行扩增.
(2)目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中,需要DNA连接酶恢复______键.
(3)将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是______;大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理,目的是______.
(4)将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养,培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括______和生长因子,还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素,其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出______.
(5)若观察到培养基上出现______色菌落,则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒.如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因,则不利于重组质粒的筛选,原因是______.马蜂菜1年前1
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yanxuejiao 共回答了22个问题
|采纳率100%解题思路:分析题图:大肠杆菌pUC18质粒含有氨苄青霉素抗性基因和LacZ基因,但限制酶的切割位点位于LacZ基因上,所以构建成的重组质粒含有氨苄青霉素抗性基因,但LacZ基因被破坏,不能产生β一半乳糖苷酶.试管Ⅰ中是基因表达载体,试管Ⅱ中是大肠杆菌,将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是进行转化,最后用选择培养基进行筛选.(1)PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因,所以已获得的目的基因可利用PCR技术进行扩增.
(2)DNA连接酶连接形成的是磷酸二酯键.
(3)将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是使目的基因进人受体细胞内,并在受体细胞内维持稳定和表达,即进行转化;大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理,增大细胞壁的通透性,使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态.
(4)培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括碳源、氮源、无机盐、水和生长因子.由于质粒上含有氨苄青霉素抗性基因,因此导入质粒的大肠杆菌能抗氨苄青霉素,所以培养基中还应加入氨苄青霉素,作用是筛选出导入pUC18质粒的大肠杆菌.此外培养基中还应加入IPTG、X-gal.
(5)重组质粒上的LacZ基因被破坏,不能产生β一半乳糖苷酶,若大肠杆菌中已成功导入了重组质粒,则其在含有IPTG和X-gal的培养基中形成白色菌落.如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因,则无论大肠杆菌是否导入重组质粒,均会呈现蓝色菌落,这样不利于重组质粒的筛选.
故答案为:
(1)PCR
(2)磷酸二酯
(3)进行转化 使大肠杆菌细胞处于感受态
(4)碳源、氮源、无机盐、水 导入pUC18质粒的大肠杆菌
(5)白 无论大肠杆菌是否导入重组质粒,均会呈现蓝色菌落点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术;微生物的分离和培养;培养基对微生物的选择作用.
考点点评: 本题结合流程图,考查基因工程的相关知识,意在考查考生的识图能力和识记能力;能从题文提取有效信息的能力;能理解所学知识要点,把握知识间内在联系的能力;能运用所学知识,解决问题的能力.1年前查看全部
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|采纳率107.7%建议你去找个primer 5的教程看看,要不然教会了你这条,另外的基因你还是不会设计
酶切位点直接加在引物的头上,还得加上保护碱基
引物一般长度在16-25个碱基左右,最好两端的退火温度保持一致
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据图回答:
(1)将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切,酶切产物用DNA连接酶进行连接后,其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有______、______、______三种.若要从这些连接产物中分离出重组质粒,需要对这些连接产物进行______.
(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验.之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是______;
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(2)由于将细胞放入含四环素的培养基,要将存活tctR 为四环素抗性基因结构要保持完整,用EcoRI酶切后再用连接酶连接的三种产物只有载体-载体连接物基因结构保持完整.
(3)防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,需要有两种限制酶,而ampR为青霉素抗性基因,P启动子,T为终止子,ori为复制原点,结构不能被破坏,故选择EcoRⅠ和BamHⅠ这两种限制酶.
故答案为:
(1)目的基因-载体连接物载体-载体连接物目的基因-目的基因连接物分离纯化
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③结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端.
这道题目可以转化为单纯的数字计算题.每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种.A、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,不是3种,A错误;
B、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,不是4种,B错误;
C、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,C正确;
D、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,不是12种,D错误.
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(4)构建重组质粒时,同时使用______限制酶处理质粒、外源DNA可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化.
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(3)用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒时,会导致目的基因与抗性基因被破坏,因此不能用SmaⅠ构建重组质粒.
(4)BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶切割产生的黏性末端不同,若用这两种限制酶同时处理外源DNA和质粒,再用DNA连接酶连接两者时,可避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化.
(5)将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入DNA连接酶.
(6)重组质粒中抗生素基因的作用是鉴别和筛选含有目的基因的细胞.
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(2)高
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下游引物也没有终止密码子,要加上去吗?660366031年前1
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yiyi61813 共回答了25个问题
|采纳率96%不需要 只要你扩增出来的包含了该基因的完整CDS序列 上面有起始密码子和终止密码子1年前查看全部
- 阅读下图,其中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题: (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有_
阅读下图,其中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题: (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有______个游离的磷酸基团。
(2)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是___________。
(3)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入_______酶。
(4)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了____________。
(5)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在_________的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。阿酒1年前1
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crystaltennis 共回答了25个问题
|采纳率88%(1)0、2
(2)SmaⅠ会破坏质粒的抗药性基因外源DNA中的目的基因
(3)DNA连接酶
(4)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
(5)蔗糖为唯一含碳营养物质1年前查看全部
- miRNA靶标验证实验中,将预测靶标的3'UTR插入PGL3-control时怎样选择酶切位点
miRNA靶标验证实验中,将预测靶标的3'UTR插入PGL3-control时怎样选择酶切位点
我在做miRNA的靶标验证实验,想把预测靶标的3'UTR构建至PGL3-control载体中,我发现在荧光素酶基因下游只有XbaI酶切位点,之后还有一个HpaI,但位于SV40 late poly(A) signal 中,那这个HpaI是不是不能用呢?难道只能用单酶切吗?SV40 late poly(A) signal 是说SV40的复制终点吗?我要插入的3'UTR区是不是只能插在SV40 late poly(A) signal 之前?tian7111年前3
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豆浆娃娃 共回答了16个问题
|采纳率93.8%应该是吧.polyA是II型转录酶的转录终止信号,3’-UTR应该是在polyA之前.
一个酶切位点也不错,你正好可以考察一下3‘UTR正反向插入,mirna对其识别、作用的效果.1年前查看全部
- 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点.请回答下列问题: 限制酶 BamH
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点.请回答下列问题:
限制酶 BamHⅠ HindⅢ EcoRⅠ SmaⅠ 识别序列及切割位点 G↓GATCC
CCTAG↑GA↓AGCTT
TTCGA↑AG↓AATTC
CTTAA↑GCCC↓GGG
GGG↑CCC
(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越______.
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是______.
(4)与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止______
(5)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入______酶.
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了______
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在______的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测.
(8)cDNA探针是目前应用最为广泛的一种探针.制备cDNA探针时,首先需提取、分离获得______作为模板,在______的催化下合成cDNA探针
(9)基因工程中利用乳腺生物反应器生产a-抗胰蛋白酶,应选用______切割含有目的基因的DNA片段和载体,并用______方法导入______中,再利用SRY探针 (Y染色体上的性别决定基因)进行检测,将检测反应呈______(选填“阳”、“阴”)性的胚胎进行移植培养.amingaming20081年前1
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nycqw 共回答了18个问题
|采纳率88.9%解题思路:图1为质粒,在基因工程中常作载体.由图可知,质粒中有四个酶切割位点,其中SmaⅠ切割位点在标记基因中.
图2为含有目的基因的DNA分子片段,SmaⅠ切割位点位于目的基因中.
cDNA指mRNA反转录产生的多种互补DNA.(1)由图可知,质粒是环状的,切割前没有游离的磷酸基团,质粒中有一个SmaⅠ酶切割位点,所以切割后有两个游离的磷酸基团.
(2)DNA分子中C与G之间有三个氢键,A与T之间有两个氢键,所以C与G含量越多,热稳定性越高,由图可知,SmaⅠ酶切位点的配对方式是C与G配对.
(3)由图可知,目的基因和标记基因中都有SmaⅠ酶切割序列,如用SmaⅠ酶会破坏目的基因和标记基因.
(4)如只使用EcoRⅠ酶切割,会形成相同的黏性末端,可能出现质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化.
(5)DNA连接酶可将目的基因与质粒连接起来形成重组DNA.
(6)重组质粒中抗生素抗性基因是标记基因,作用是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞.
(7)大肠杆菌丧失吸收蔗糖能力,导入蔗糖转运蛋白基因后可恢复吸收蔗糖能力,所以在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养,可筛选出需要的表达成功的大肠杆菌.
(8)制备cDNA探针时,需提取、分离mRNA作用为模板,在逆转录酶的催化下合成cDNA探针.
(9)基因工程中,切割含有目的基因的DNA片段和载体时用同种限制酶.并用显微注射法导入受精卵中,再利用SRY探针 (Y染色体上的性别决定基因)进行检测,将检测反应呈阴性的胚胎进行移植培养.
故答案为:
(1)0、2
(2)高
(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
(5)DNA连接
(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
(7)蔗糖为唯一含碳营养物质
(8)mRNA 逆转录酶
(9)同种限制酶 显微注射 受精卵 阴性点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题考查基因工程,识记所列知识点,并能运用所学知识做出合理的判断或得出正确的结论的能力.1年前查看全部
- 引物加了保护碱基和酶切位点(共14个碱基)后退火温度需要调整吗?
好贴不能沉1年前2
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tooman 共回答了18个问题
|采纳率100%引物的3’端要与模板严格配对,而5’端碱基没有严格的限制,只要与模板DNA 结合的部分足够长,其5’端碱基可不与模板DNA配对而呈游离状态,这样,我们可以在引物的 5 末端加上酶切位点,因此退火温度依然取决于之前引物的退火温度.1年前查看全部
- 基因工程利用某目的基因(图甲)和Pl噬菌体载体(图乙)构建重组DNA.限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ、EcoR
基因工程利用某目的基因(图甲)和Pl噬菌体载体(图乙)构建重组DNA.限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ、EcoR I和Sau3A I.下列分析错误的是( )
A.构建重组DNA时,可用BglⅡ和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
B.构建重组DNA时,可用EcoR I和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
C.图乙中的P1噬菌体载体只用EcoR I切割后,含有2个游离的磷酸基团
D.用EcoR I切割目的基因和P1噬菌体载体,再用DNA连接酶连接,只能产生一种重组DNA龙跃_20071年前1
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wyn0926 共回答了13个问题
|采纳率100%解题思路:分析图解:图甲中可以看出,在目的基因上存在三种酶切位点,只有EcoR I具有两个切点,而BglⅡ和Sau3A I具有只有一个切点.图乙Pl噬菌体载体也具有这三种限制酶的切割位点.A、如果用BglⅡ和Sau3A I切割目的基因,目的基因两端将形成不同的黏性末端,同样用BglⅡ和Sau3A I切割Pl噬菌体载体也形成这两种相同的黏性末端,因此它们可构成重组DNA,故A正确;
B、由于Sau3A I的切割位点在EcoR I的左侧,因此用EcoR I和Sau3A I切割目的基因,目的基因两端将形成不同的黏性末端,同样用BglⅡ和Sau3A I切割Pl噬菌体载体也形成这两种相同的黏性末端,因此它们可构成重组DNA,故B正确;
C、P1噬菌体载体为环状DNA,其上只含有一个SmaⅠ的切点,因此用EcoR I切割后,该环状DNA分子变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此切割后含有两个游离的磷酸基团,故C正确;
D、从图甲看出,用EcoR I切割目的基因后两端各有一切口,与图乙中EcoR I切口对接时,可有两种可能,即可产生两种重组DNA,故D错误.点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题考查基因工程的相关知识,意在考查考生获取图示信息的能力、审题能力以及分析能力;能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力.1年前查看全部
- (2011•安徽模拟)已知某质粒上有2种限制性核酸内切酶的酶切位点,且两种酶的识别序列不同,如图所示.若在多个该质粒中,
(2011•安徽模拟)已知某质粒上有2种限制性核酸内切酶的酶切位点,且两种酶的识别序列不同,如图所示.若在多个该质粒中,加入限制酶Ⅰ、限制酶Ⅱ和DNA连接酶,得到的质粒碱基数目最少为( )
A.50
B.80
C.100
D.250哑-巴1年前1
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卷发白羊 共回答了15个问题
|采纳率60%解题思路:限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂.
DNA连接酶能够将两个相同的黏性末端或平末端之间的磷酸二酯键连接.分析图解可知,限制酶Ⅰ在该质粒上有三个限制酶切点,限制酶Ⅱ在该质粒上只有一个酶切位点,如果同时用两种限制酶切割,质粒将会切割形成四种片段,即200(酶Ⅰ和酶Ⅱ切割,黏性末端不同)、200(酶Ⅰ切割,黏性末端相同)、80(酶Ⅰ切割,黏性末端相同)、50(酶Ⅰ和酶Ⅱ切割,黏性末端不同).
用DNA连接酶处理,要求得到的质粒碱基数目最少,则为形成的片段自身连接,要求具有相同的黏性末端,因此得到的质粒碱基数目最少为80个.
故选:B.点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题考查了基因工程的有关知识,要求考生能够掌握限制酶和DNA连接酶的作用特点;能够结合题意和图解判断切割形成的片段类型;再根据DNA连接酶的作用特点进行判断,难度适中,属于考纲中理解、应用层次的考查.1年前查看全部
- 设计的一对引物的两端带上Xhol1和 Not1酶切位点,但是所P片段的内部有与酶切位点相似的序列是否酶切会失败
设计的一对引物的两端带上Xhol1和 Not1酶切位点,但是所P片段的内部有与酶切位点相似的序列是否酶切会失败
相似度只差一个碱基,是不是酶切得不到所P 的 目的基因?你不能说1年前1
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视觉米 共回答了15个问题
|采纳率93.3%放心好了 酶很聪明 呵1年前查看全部
- (2010•江苏)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点.请回答下列问题:
(2010•江苏)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点.请回答下列问题:
(1)一个如图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有______个游离的磷酸基团.
(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越______.
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SrnaⅠ切割,原因是______.
(4)与只使用EcoR I相比较,使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止______.
(5)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入______酶.
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了______.
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在______的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测.瑶瑶轩1年前1
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倩倩WENDY 共回答了22个问题
|采纳率95.5%解题思路:第一步:目的基因的获取
(1)目的基因是指:编码蛋白质的结构基因.
(2)原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成.人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法.
(3)PCR技术扩增目的基因
①原理:DNA双链复制
②过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成.
第二步:基因表达载体的构建
(1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用.
(2)组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
①启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质.
②终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的尾端.
③标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来.常用的标记基因是抗生素基因.
第三步:将目的基因导入受体细胞
(1)转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程.
(2)常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等.
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术.此方法的受体细胞多是受精卵.
将目的基因导入微生物细胞:
(3)重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达.
第四步:目的基因的检测和表达
(1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术.
(2)其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交.
(3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原--抗体杂交. (4)有时还需进行个体生物学水平的鉴定.如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状.
(5)基因文库:是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中通过克隆而储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,叫做基因文库.建立基因文库的目的就是为获得大量的目的基因作准备.如果基因文库中含有一种生物的所有基因,这个基因文库就叫基因组文库.(1)由于质粒在切割前是一个环状DNA分子,因此上面没有游离的磷酸基团;当质粒被切割后形成了两个末端各有1个游离的磷酸基团,故共有2个游离的磷酸基团.
(2)SmaⅠ酶切位点越多,表示G和C这一对碱基对所占的比例就超高,而G和C之间含有三个氢键,故其热稳定性超高.
(3)质粒抗生素抗性基因为标记基因,由图可知,标记基因和外源DNA目的基因中 均含有SmaI酶切位点,都可以被SmaI酶破环,故不能使用该酶剪切质粒和含有目的基因的DNA.
(4)构建含目的基因的重组质粒A时,选用 BamhHI 和HindⅢ酶对外源DNA和质粒进行切割,这样使目的基因两端的黏性末端不同,可以防止含目的基因的外源DNA片段自身环化,同理,也可以防止质粒自身环化.
(5)为了使目的基因和质粒之间的磷酸二脂键相连,需要用DNA连接酶相连接.
(6)抗生素抗性基因是一种抗性基因,抗性基因是为了鉴别和筛选目的基因是否导入到受体细胞内.
(7)由于分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入大肠杆菌内,然后所给的培养基应为蔗糖为唯一含碳源的培养基.
故答案为:
(1)0、2
(2)高
(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
(5)DNA连接
(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
(7)蔗糖为唯一含碳营养物质点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题以抗病香蕉味素材,考查基因工程和植物组织培养的相关知识,意在考查考生的理解能力、识记能力和应用能力.1年前查看全部
- PCR产物酶切遇到的问题选择的内切酶 酶切位点是CC/WGG 39
PCR产物酶切遇到的问题
选择的内切酶 酶切位点是CC/WGG
39 75
C C/AGG…… C C/TGG……
pcr产物 544 切割后出现40bp 36bp 468bp 酶切后如下图
较短酶切着产物看不清,而且电泳区分不开怎么办啊
上边的不是引物而据一,在另一个胶上跑了pcr产物和酶切产物,pcr产物的引物二聚体与这个条带不同。
左边那个条带是另一个试验的产物,不需要考虑。dong8811年前2
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张三就是某 共回答了16个问题
|采纳率81.3%能说一下你这样酶切的目的么?40bp和36bp的条带,只相差4个bp,基本上在琼脂糖胶上就不用考虑分清楚了.最好使用聚丙烯酰胺凝胶,很多用变性聚丙烯酰胺凝胶,可以分离到碱基数相差很少的条带,而某些变性梯度聚丙烯酰胺胶,甚至能分辨只相差一个碱基的核酸.
所以如果你一定要分清40和36bp的带,就用聚丙烯酰胺试试.1年前查看全部
- BamH I与Sau3A酶切位点个数问题
BamH I与Sau3A酶切位点个数问题
理论上,基因组DNA中有多少对核苷酸对就会出现一个BamH I的酶切位点?多少个核苷酸对会出现一个Sau3A酶切位点?我就用左眼看世界1年前1
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tomcat2046 共回答了17个问题
|采纳率88.2%BamH I:G'GATCC
Sau3A:'GATC
这是一个概率题.对BamH I来说,第一个G,每四个就会有,GG则每16个有,GGA则每64,GGAT=64*4=256,GGATCC=256*16=4096
每4096个核苷酸对就会出现一个BamH I的酶切位点.
同理,每256核苷酸对会出现一个Sau3A酶切位点1年前查看全部
- pUC克隆载体相邻酶切位点PstI,SalI,XbaI酶切效率如何?
AndyDufresnee1年前1
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zz夕阳 共回答了10个问题
|采纳率100%先用PstI酶切,再用SalI酶切,酶切效果很差
先用SalI酶切,再用PstI酶切,酶切效果较好
用PstI和SalI分步酶切:酶切效果很差1年前查看全部
- 已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如图中箭头所指。如果该线性DNA分子上有3个酶切位点都被该酶切断
已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如图中箭头所指。如果该线性DNA分子上有3个酶切位点都被该酶切断,则会产生四个不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该酶切割后,这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是 [ ]A.3
B.4
C.9
D.12zimu20021年前1
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ee風┌血禹 共回答了21个问题
|采纳率85.7%C1年前查看全部
- 哪个T载体上没有SacI和BamHI这两个酶切位点?现在需要连T,但是Pcr引物两端加了SacI和BamHI这两个酶切位
哪个T载体上没有SacI和BamHI这两个酶切位点?现在需要连T,但是Pcr引物两端加了SacI和BamHI这两个酶切位点,所以需要找一个合适的T载体.
Fantasy4281年前0
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共回答了个问题
|采纳率
- 设计引物的时候为什么先设计一对引物,再加上酶切位点后设计一对,为什么不直接加上酶切位点设计引物呢?
云雨情缘1年前2
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benney 共回答了22个问题
|采纳率90.9%这样设计只是为了准确一些,以免模板复杂造成错配,如果模板比较单一,可以直接加上酶切位点设计引物,扩增后的产物酶切后连入载体,要测序进行检测.1年前查看全部
- 两个相邻的酶切位点用双酶切能切开吗?
hh看客59151年前1
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阿胶融化 共回答了21个问题
|采纳率90.5%两个酶切位点没有碱基重叠,可担心一个位点切开了另一个缺少保护碱基而切不开,请各位大侠帮忙分析下.1年前查看全部
- 下图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因。te
下图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点,ampR为青霉素抗性基因。tetR为四环素抗性基因,P为启动子,T为终止子,ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。据图回答: (1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切,酶切产物用DNA连接酶进行连接后,其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________、_______、_______三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒,需要对这些连接产物进行___________。
(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________;若接种到含青霉素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有___________。
(3)目的基因表达时,RNA聚合酶识别和结合的位点是,其合成的产物是_____________。
(4)在上述实验中,为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选用的酶是________________。四与1年前1
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king05439836 共回答了14个问题
|采纳率92.9%(1)目的基因和载体连接物 载体和载体连接物 目的基因和目的基因连接物 分离、纯化(或筛选)
(2)载体和载体连接物 目的基因和载体连接物、载体和载体连接物
(3)启动子 mRNA
(4)EcoRⅠ和BamHⅠ1年前查看全部
- 双酶切的其中一个酶切位点可以在质粒的抗性位点上么?
双酶切的其中一个酶切位点可以在质粒的抗性位点上么?
个人觉得应该是不可以的 想确定下
我的酶切位点其中有个是Pst I,但是不能切开Pet-28a(+),实验室还有另外一种质粒Pgex-4T-R,但是Pst I刚好在这个质粒的Amp位点上,可以用么?
不然是不是应该改用其他的酶 或者买其他的质粒?
谢谢人间惆怅客_xf1年前1
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coffee1673 共回答了16个问题
|采纳率87.5%除非你这个质粒还有其它抗性筛选标记可以用,否则不行1年前查看全部
- 关于通用测序引物的问题现在要克隆一段基因,设计引物时,上游加入HindⅢ酶切位点,下游加入KpnI酶切位点.师兄要求再设
关于通用测序引物的问题
现在要克隆一段基因,设计引物时,上游加入HindⅢ酶切位点,下游加入KpnI酶切位点.师兄要求再设计一段通用测序引物,用来检测质粒重组时,目的基因片段是否连在质粒上.
那么这个通用测序引物,该怎样设计?是不是针对于HindⅢ和KpnI这两个酶切位点?波菜叶子1年前1
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五饼贰鱼 共回答了19个问题
|采纳率89.5%用质粒上的序列设计引物.不要跨越这两个酶切位点.就是在插入位点的上下游设计引物.这样才是“通用引物”,可以用于所有使用该质粒载体的PCR检测.1年前查看全部
- 质粒多位点酶切片段回收?我做质粒酶切,除了引物带的酶切位点外,但是相隔40-50bp还有另外一个酶切位点,是不是可以做一
质粒多位点酶切片段回收?
我做质粒酶切,除了引物带的酶切位点外,但是相隔40-50bp还有另外一个酶切位点,是不是可以做一个不完全酶切,得到我的目的片段,采用琼脂糖凝胶电泳是否可以分开,具体电泳的参数又是怎么设计的呢?OmbeL1年前1
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6772205 共回答了15个问题
|采纳率86.7%引物两端的酶切位点是否一样,还有,距离40-50bp的酶切位点是否也是同一个酶.如果是的话,环形质粒就会切成三段,有一个40-50bp,有一个目的条带,还有载体条带,是可以分开的.如果是不同的酶,你就可以选择使用不同的酶,根据你的要求进行切开.
建议在设计引物时,选择目的基因中没有的酶切位点,选择载体上有的,并且根据在载体上的位置,确定是上游引物还是下游引物,在连接表达载体时就不会出现反连,操作就容易多了.1年前查看全部
- 请问有几种t载体?分别克隆了什么基因,酶切位点是什么?
忧郁的烟斗1年前1
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溪之长 共回答了23个问题
|采纳率82.6%51年前查看全部
- 1个质粒,只有2个酶切位点.那么它跑电泳时,能跑出几条片段?
贝壳风1年前2
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tpzyidd 共回答了24个问题
|采纳率87.5%这主要要看你质粒的原始状态.质粒可有闭合环状、开环和线状2种.如果是闭合的质粒,则2酶切位点都酶切后,电泳是2条带;如果是线状的质粒,则是3条带.1年前查看全部
- 已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如图中箭头所指,如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断
已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如图中箭头所指,如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段.现在多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该酶切后,这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是( )
A. 3
B. 4
C. 9
D. 127897987897899871年前5
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断欲的小羔羊 共回答了16个问题
|采纳率87.5%解题思路:考查了限制性内切酶切割DNA片段的有关知识.
“分子手术刀”--限制性核酸内切酶(限制酶)
①来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的.
②功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性.
③结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端.
这道题目可以转化为单纯的数字计算题.每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种.A、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,不是3种,A错误;
B、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,不是4种,B错误;
C、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,C正确;
D、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断,可以切得的种类有:a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种,不是12种,D错误.
故选:C.点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 主要考查学生对DNA重组技术的基本工具等考点的理解,要求学生能够识记和运用相关知识.1年前查看全部
- 引物设计中忘记加入在上游序列的酶切位点后面加ATG,对蛋白质相互作用研究有影响吗?
无名-氏1年前3
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莫鸣 共回答了12个问题
|采纳率100%如果该ATG是翻译起始位点,就没有蛋白翻译了.
如果是in frame编码,就会少一个氨基酸1年前查看全部
- 如图箭头为某39肽的多个酶切位点(图中数字为氨基酸序号,此氨基酸可被该酶切除),则水解得到的全部肽链比原39肽(C)求详
如图箭头为某39肽的多个酶切位点(图中数字为氨基酸序号,此氨基酸可被该酶切除),则水解得到的全部肽链比原39肽(C)求详细解析!
我为笔狂01年前1
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山高水长_Hello 共回答了18个问题
|采纳率100%应该是D
五个酶切位点全部作用了以后是向上加了5个水,少了5个肽键,其他都不对1年前查看全部
- 酶切位点如何选择,我正向引物和反向引物的酶切位点选择的是BamHI,和Xho I,可以吗
fdggdfg44k1年前1
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wong12 共回答了22个问题
|采纳率95.5%首先要看目的基因中是否含有该酶切位点,只有没有的才可以选.其次,如果需要做表达,需要考虑起始密码子,防止移码突变;第三要考虑标签用于后面的蛋白纯化.如果仅仅用来拿到目的基因,那只需要第一点即可1年前查看全部
- 限制性核酸内切酶酶切后,再用连接酶连接,同一限制性内切酶酶切位点还能否产生?
到处都是我们的人1年前2
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bobo7689 共回答了21个问题
|采纳率85.7%如果用同种限制酶来切目的基因和运载体,再用DNA连接酶来接,则切点能恢复.如果用不同限制酶来切,则一般不能恢复.1年前查看全部
- 一环状DNA分子,设其长度为1,已知某种限制性核酸内切酶在该分子上有3个酶切位点,如图中箭头A、B、C所指.如果该DNA
一环状DNA分子,设其长度为1,已知某种限制性核酸内切酶在该分子上有3个酶切位点,如图中箭头A、B、C所指.如果该DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生0.2、0.3、0.5三种不同长度的DNA片段.现有多个上述DNA分子,若在每个分子上至少有1个酶切位点被该酶切断;则从理论上讲,经该酶切后,这些DNA分子最多能产生长度不同的线状DNA的种类数是( )
A. 4
B. 8
C. 6
D. 7cbxwy0011年前2
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tonyhw 共回答了24个问题
|采纳率100%解题思路:解答本题应分情况讨论,由于题中提出“若在每个分子上至少有1个酶切位点被该酶切断”,因此可以分三种情况:只被一种酶切割、被其中两种酶切割、被三种酶同时切割,然后将所得结果相加即可.由于该DNA分子为环状,此时分三种情况讨论:
只被其中一种酶切割:无论被那种酶切割,均是长度为1的环状变成长度为1的链状;
被其中两种酶切割:AB切割,产生0.3和0.7长度的线状DNA;AC切割,产生0.2和0.8长度的线状DNA;BC切割,产生两个0.5长度的线状DNA;
被三种酶同时切割时,产生0.2、0.3、0.5三种不同长度的线状DNA.
综上所述,这些DNA分子最多能产生:0.2、0.3、0.5、0.7、0.8、1六种长度不同的线状DNA.
故选:D.点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题考查了基因工程的工具酶,意在考查考生的分析能力和综合运用能力,难度适中.解题关键是考生能够根据题意分三种情况讨论切割产生的不同长度的片段,然后综合三种情况进行相加即可.1年前查看全部
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