免疫荧光定位今天考研,考一道免疫荧光的问题,叫我说出一种实例我是这样回答的：比如想知道一种蛋白质在细胞内的定位,可以用

zybliming2022-10-04 11:39:542条回答

免疫荧光定位
今天考研,考一道免疫荧光的问题,叫我说出一种实例
我是这样回答的：比如想知道一种蛋白质在细胞内的定位,可以用一这种蛋白质为抗原的抗体加上荧光标记,注入到细胞内,根据荧光便可以确定此蛋白在细胞中的位置
我知道我这样的回答是不对的,请问我这样大概能得几分?

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ailiyusuyin 共回答了20个问题 | 采纳率90%: 你所说的方法是采用荧光素分子直接标记抗体,在免疫荧光中被称为直接法.
更多的做法不是采用直接法而是采用间接法,也就是用对应某一种抗原的抗体（这里被称为一抗）与细胞孵育结合,在采用对应一抗（也就是抗一抗）的抗体（这里被称为二抗,二抗上偶联有荧光素分子）与细胞孵育结合后在荧光显微镜下观察.
间接法较直接法能够有效降低背景荧光,提高信噪比,同时由于抗体的放大效应使得检测灵敏度大大提升.
我就在做这方面的研究工作,如果需要的话可以共同探讨.
举例：对细胞微管蛋白进行亚细胞定位,用低聚甲醛固定细胞,NP-40穿孔,选择抗微管蛋白的抗体作为一抗,孵育后洗脱去背景,加入偶联荧光素的二抗孵育后洗脱去背景,上荧光显微镜观察.
希望能够对你有所帮助.; 1年前

请教免疫荧光双标中荧光二抗的选择是否合适? 请教免疫荧光双标中荧光二抗的选择是否合适? 最近要做免疫荧光双标实验,双标效果不理想,两种一抗分别是山羊多抗和小鼠单抗,荧光二抗选择了兔抗山羊和山羊抗小鼠,这两种荧光二抗可以一起用吗?因为单标两种效果挺好的跟文献一样,双标时有一种（山羊源性,标记胞浆蛋白）一直做不好. xgm09131年前1: mebest666 共回答了14个问题 | 采纳率100%

一般来说,选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：
1.二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源;
2.二抗需与一抗的类别或亚类相匹配.这通常是针对单克隆抗体而言.多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体;
3.一般来说,不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系,来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别.然而在一些特殊的实验里, 如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊来源的,一个是小鼠来源的,则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的.

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如题,细胞转染质粒24小时后能做免疫荧光实验吗?我们实验室一直是48小时候做,但是由于时间又冲突,我想提前做了,想问下转 如题,细胞转染质粒24小时后能做免疫荧光实验吗?我们实验室一直是48小时候做,但是由于时间又冲突,我想提前做了,想问下转染24小时候能不能做,效果会有影响吗? 湘风椰韵1年前2: qiuqiu810911 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

这个和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.
但是有些蛋白表达时间比较早,24h就可以检测到了.如果时间实在排不开,取一部分先做了,就当摸索时间点了.

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请问一种蛋白的免疫荧光定位在细胞核但核仁处没有,在功能上说明什么吗? xccz1231年前1: 甜到哀伤_ 共回答了14个问题 | 采纳率100%

说明这种蛋白在核中发挥作用,但与核仁无关,也就是与核糖体合成无关

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siRNA干扰细胞内蛋白关于免疫荧光的疑问 siRNA干扰细胞内蛋白关于免疫荧光的疑问 我做的是siRNA干扰细胞内的一种蛋白后利用免疫荧光去检测干扰结果,我想知道干扰后做出来的免疫荧光应该是什么结果? 免疫荧光的照片中是不是干扰后就没有该蛋白的荧光了?我是新手不懂急切期望大侠解答! 温暖的名字1年前1: 爱由希的T 共回答了17个问题 | 采纳率82.4%

实验里没有这么绝对的事情.
根据实验设计的目的,经过干扰后,检测不到荧光强度这是理想中的结果.但是事实可能达不到.
一方面可能存在干扰不彻底,有部分的RNA仍然存在,并且翻译表达.
另一方面,细胞内在干扰之前本来就可能存在该目标蛋白,蛋白的讲解速度是比RNA慢很多的,所以仍有可能检测到这部分蛋白.

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免疫荧光实验问题,设置两个对照和样本.对照1：非特异性对照,即样本孵育一抗时,以抗体稀释液代替一抗；对照2：阴性对照,没 免疫荧光实验问题, 设置两个对照和样本. 对照1：非特异性对照,即样本孵育一抗时,以抗体稀释液代替一抗； 对照2：阴性对照,没有待检抗原的样本 结果如果对照1是假阳性,对照2是阴性,待检测样品是阳性, 我的MJ是艾琳1年前1: ymusic 共回答了16个问题 | 采纳率68.8%

首先问你一下,你的假阳性结果和阳性结果有区别吗?对照1跟实验组相比就不能说明问题,你的抗原和二抗有结合,这是一种非特异性的结合,而且这种结果如果跟一抗的有无没有关系的话,那你的对照2就是没有意义的.我觉得这个实验不能说明你的结果是阳性的.

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TrKA跨膜蛋白在BV2上的表达,想先用免疫细胞化学或者免疫荧光定位,可是不知道选择哪个好,高手指导一下哦 大同小白人1年前1: 庚家的朵朵共回答了15个问题 | 采纳率93.3%

荧光的灵敏度要高很多

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免疫荧光 定位今天考研,考一道免疫荧光的问题,叫我说出一种实例我是这样回答的：比如想知道一种蛋白质在细胞内的定位,可以用