,分离胶中的TEMED和AP的作用是什么?

western 想分开65和93kd的蛋白用多大浓度的分离胶

linechang1年前2

雁鹊落 共回答了20个问题 | 采纳率95%

主要看你用什么方法转膜,如果用湿转的话,胶浓度高点也没有问题,12%的分离的效果会很好的.但是如果要用半干转,还要保证90多k的蛋白的转印效率的话,建议适当调低分离胶的浓度,这样可以保证大蛋白出胶,达到和分子量稍小蛋白差不多的转印效率.

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SDS-PAGE电泳条带我跑出来的胶分离胶上部染色脱色后没有任何条带,大概在分离胶和浓缩胶分界线下部1.5-2CM处才出

SDS-PAGE电泳条带
我跑出来的胶分离胶上部染色脱色后没有任何条带,大概在分离胶和浓缩胶分界线下部1.5-2CM处才出现条带的痕迹,是什么原因啊,

2007的611年前2

唐努乌梁海啊 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

我估计你把分离胶和浓缩胶放反了.先是浓缩胶,这样蛋白在进入分离胶之前都在一个起跑线上,在分离胶中就可以根据蛋白分子的大小而分离开来.离胶和浓缩胶分界线下部应该是分离胶,蛋白就是应该分布在这里.

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做蛋白电泳时,在不知道蛋白样品分子量的情况下如何选择分离胶的浓度

做蛋白电泳时,在不知道蛋白样品分子量的情况下如何选择分离胶的浓度
有没有方法可以快速测定样品中的蛋白浓度?

hansonleon1年前1

骄傲的王子 共回答了36个问题 | 采纳率100%

不知道分子量的情况下就尽可能选择浓度高的分离胶,因为浓度低的胶很有可能蛋白就跑出去了.先用高浓度的胶跑一次,然后看条带再调整下分离胶浓度再做一次就行了.另外,一般快速测定蛋白浓度的方法就是用分光光度计测量A280的吸光度,然后按照小牛血清蛋白（BSA）作标准曲线初步评估蛋白浓度.BSA在A280的吸光度为0.6的时候浓度为1mg/ml.

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如何配制20%的SDS-PAGE分离胶?

dushisanren1年前1

zaodeng 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%

A液20/3mL,B液2.5mL蒸馏水（7.5-20/3）mL,10%过硫酸铵50uL,TEMED5uL.

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做western blot配胶时,梳子的齿要正好碰到分离胶吗?

常惭愧居士1年前3

太阳04 共回答了12个问题 | 采纳率91.7%

不要碰到 应该给样品在浓缩胶上留出一段距离来跑 否则起不到浓缩的作用了

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sds-page电泳的分离胶凹凸不平怎么回事

smailrainw1年前1

herorn 共回答了15个问题 | 采纳率80%

可以考虑如下几个因素
1.玻璃是不是洗干净且烘干了
2.倒胶时胶是否刚配好混匀,没有凝固
3.槽底和四周是否密合,没有漏胶
4.水或有机溶液封胶面时,是否沿一侧轻轻加入小心放平
5.其它原因,未凝固时剧烈摇动?

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western-blot中分离胶的浓度怎么选择?比方10%的分离胶对26kd的好呢,还是15%分离胶的好分些?

sbjyss1年前4

yiranzhi 共回答了25个问题 | 采纳率88%

如果以溴酚蓝跑到胶的底部为准,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大约1/2（不太确定）的地方,对于分子量比较小的蛋白,当然是胶的浓度越大,分离效果越好.但是你必须考虑到,胶的孔径一旦小于蛋白-SDS复合体的直径,分子量大于这个蛋白的所有蛋白仍然不能有好的分离效果.如果孔径太大,所有蛋白都跑得那么快,也是分不开的.
所以,关键是看这个分子量附近的蛋白,比如±5kD以内的所有蛋白,在不同浓度的胶中的速度差要尽可能达到最大,假设是对数正态分布,那么方差要足够大,才会有较好的分离效果.另一方面,蛋白跑的路程越大,也越能和附近的蛋白分开.
我的建议是溴酚蓝跑到底,而目标蛋白正好在整块胶的1/2的地方,分离的效果时最好的

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在不连续体系SDS-PAGE中,分离胶与浓缩胶中均含有TEMED和AP,试述其作用?

在不连续体系SDS-PAGE中,分离胶与浓缩胶中均含有TEMED和AP,试述其作用?
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量

思无邪_蓝1年前1

zwj1060 共回答了25个问题 | 采纳率96%

AP为催化剂,提供自由基引发聚合；TEMED为加速剂,促凝作用,加速聚丙烯酰胺的凝固

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ND的quick cast 蛋白胶做western居然不分浓缩胶和分离胶,有人用过么?

bobo_l1年前1

飘舞秦 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

我用过,非常方便,一次就成型了.

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请问western blot 跑胶时积层胶和分离胶需要的电压是多大啊,还有转膜的,电压?

请问western blot 跑胶时积层胶和分离胶需要的电压是多大啊,还有转膜的,电压?
我跑的蛋白有14kd到130kd的都有

柠檬香皂1年前2

ford850 共回答了17个问题 | 采纳率94.1%

一般浓缩胶为80V,这样可以达到较好的浓缩效果,当条带达到分离胶时,可以调到220V,这样时间快点,做Wb时蛋白降解较少.转膜时一般为100V,转膜时间要根据蛋白大小确定,130kD蛋白分子较大,最好时间长点,不过太长也不好,蛋白转透过膜的,大约要1个半小时吧.

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在做聚丙烯酰胺凝胶电泳时为什么分离胶可以凝固,但浓缩胶很长时间都凝固不了

榴莲臭豆腐1年前3

zh9904 共回答了17个问题 | 采纳率88.2%

主要可能是TEMED和AP的量的问题,你可以参考一下我的配方：
分离胶12.5%（SDS）,10ml体系
分离缓冲：2.5ml
贮胶：4.167ml
纯水：3.233ml
10%SDS：0.1ml
10%AP：100微升
TEMED：5微升
————————————————————————
浓缩胶5%,4ml体系
浓缩缓冲：1ml
贮胶：0.6ml
纯水：2.35ml
10%AP：45微升
TEMED：15微升
————————————————————————
以上配方经本人亲用无数次证明切实有效,大概在一小时左右即可凝固,天冷凝得慢可放置于25度烘箱内帮助加速凝固.

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蛋白质电泳凝胶有几层..我记得有三层的.学长说只有两层分别是浓缩胶、分离胶.是不是不同电泳凝胶不同.

蛋白质电泳凝胶有几层..我记得有三层的.学长说只有两层分别是浓缩胶、分离胶.是不是不同电泳凝胶不同.
那种电泳凝胶有三层,and分别是什么.

zwin03031年前3

sibylsong 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

SDS-PAGE现在都是两层,浓缩胶、分离胶.以前在最前边还有一层样品胶,现在已经不用了.

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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的实验中.当加完分离胶后,为何要在其上加一层水?

mtdxw1251年前1

smile_xwp 共回答了23个问题 | 采纳率87%

这个步骤称为水封
目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直.
并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上.

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我最近做Tricine-sds-page 各项都按说明来配,但电泳条带刚进入分离胶,就发生弥散,分离胶电泳20min左右

我最近做Tricine-sds-page 各项都按说明来配,但电泳条带刚进入分离胶,就发生弥散,分离胶电泳20min左右,100V,弥散的条带很长,我怀疑是分离胶的配制哪出错了

吴志东1年前1

zzaipp1 共回答了21个问题 | 采纳率85.7%

分离胶缓冲液的pH有问题.建议测量一下,应该在8.8左右,你的pH肯定低于8.8,如果不是你弄错了,就是你的pH计出问题了.如果一时找不到准确的pH计,建议使用pH试纸.

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配制Tricine-SDS-PAGE分离胶时,为什么会产生气泡

nedhou1年前1

kourt 共回答了20个问题 | 采纳率95%

SDS溶液时很溶液产生气泡的,
你在制胶打枪时,不要把枪头的液体全部打完,也就是枪不要全部打到底,能减少气泡形成

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PAGE电泳5%的分离胶,谁可以给我配方啊?感激不尽啊~

非常小泡1年前1

那些vv 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

dH20 5.65 ml
30% acrylamide mix 1.65 ml
1.0M Tris pH6.8 2.5 ml
10% SDS 0.1 ml
10% ammonium persulfate 0.1 ml
TEMED 0.004 ml

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我做western,蛋白180KD,请问用多大浓度的分离胶即浓缩胶?

坐井观花1年前2

ypju 共回答了20个问题 | 采纳率80%

浓缩胶是固定的 分离胶配稀一点呗 10或者8%的 这么大得多跑跑

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35KD的蛋白,SDS-PAGE分离胶一般用多大的?

hy300001年前1

sammyandsammy 共回答了19个问题 | 采纳率84.2%

10%的刚刚好.10%的SDS-PAGE胶最小可以分离到20kDa；35kZDa的蛋白将正好处于全胶中间偏下的位置,所以刚刚好.

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【怎样根据分子量的大小来配制不同浓度的分离胶?】+【有效期至2008年12月20日】?

【怎样根据分子量的大小来配制不同浓度的分离胶?】+【有效期至2008年12月20日】?
电泳实验中,怎样根据分子量的大小来配制不同浓度的分离胶?【有效期至2008年12月20日】

踏着云游太平洋1年前1

single952 共回答了22个问题 | 采纳率95.5%

给楼主个建议：有什么问题要问一定要表述具体,以便有针对性地回复,譬如：“能不能再给出些具体些的说明呢”通过这句话,别人并不知道楼主到底想要具体了解什么!凝胶的筛分特性取决于它的孔径,孔径又是灌胶时所用丙烯酰胺和双丙烯酰胺绝对浓度的函数.（配制凝胶时,N’-亚甲双丙烯酰胺：丙烯酰胺的摩尔比为 1：29）.查看原帖

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我的分子量为62KD和65KD 用多大浓度的分离胶和浓缩胶

广铭1年前1

ps0521 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

浓缩胶基本都是5%的就可以,分离胶建议10%的吧,电泳大约1小时以内（电压170）,半干转膜大约40分钟以内（恒压）.

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最近做WB,发现SDS-PAGE上样后开始电泳不久就看见LOADING BUFFER漏到分离胶和浓缩胶分界,

bilibo20071年前2

peopleasd 共回答了20个问题 | 采纳率90%

一、可能是玻璃板没有加紧
二、浓缩胶没有凝固好,灌胶的问题
三、电压是否大了?我们常用浓缩胶80v,30min.
灌胶的问题可能性比较大,祝实验顺利

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电泳浓缩胶浓度怎么选取?我的蛋白大约21kd,找了很多配方,现决定用15％的分离胶,但是浓缩胶的浓度该怎么选取呢?是不是

电泳浓缩胶浓度怎么选取?
我的蛋白大约21kd,找了很多配方,现决定用15％的分离胶,但是浓缩胶的浓度该怎么选取呢?是不是有选择标准还是?
那5％的浓缩胶有没有配方？我用的是30％的单体储液，很多都是40％的配方。

雨寂影1年前2

vv曾经 共回答了18个问题 | 采纳率94.4%

浓缩胶一般都是5%的,下面的是5ML的配方,其余的你可以自己算了
5ml
H2O 3.6
acrylamide mix（30%） 0.62
1M Tris(PH6.8) 0.63
10% SDS 0.05
10% AP 0.05
TEMED 0.005

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配制分离胶缓冲液,Tris 18.15g,超纯水90ml,用浓盐酸调PH值至8.8后发现总容量超过100ml,请问这有影

配制分离胶缓冲液,Tris 18.15g,超纯水90ml,用浓盐酸调PH值至8.8后发现总容量超过100ml,请问这有影响吗?
我想问下 配制分离缓冲液 1.5mol/LTris-HCl.PH8.8,按照配方Tris加了18.15g,超纯水90ml,用浓盐酸调PH值至8.8,后发现总容量超过了100ml,不用在加超纯水定容了,但是Tris的溶度好像要小于1.5了?这对实验有没有影响?

qinjinchan1年前1

sunnyspookhome 共回答了20个问题 | 采纳率90%

其实影响不大,毕竟溶液是起缓冲作用的,只要PH对就好了.
不知道超了多少,如果一点点,实验不严谨的话可以试一下.但是下次就知道了,不要用90水了.少用点水就完了嘛.

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