实验操作

粗盐提出http://baike.baidu.com/view/1634783.html?wtp=tt里面有详细资料。

首先要明白三个观点：1、学习生物要有兴趣。兴趣是学习的动力，是学习的第一位老师，有了兴趣，才会积极而愉快地投入，不会觉得学习是一种负担。2、要亲其师。古人云:亲其师信其道，如果一个学生喜欢这个老师，那么这个老师所教的这门功课成绩他肯定不会差。3、要从高一抓起。高一是起点，是基础。打好基础，循序渐进，学习就不困难，就象登一座塔，看上去很高，有些怕，等到沿着阶梯一步步上来，其实并不困难。高中生物到底怎么学：1、 掌握规律规律是事物本身固有的本质的必然的联系。生物有自身的规律，如结构与功能相适应、局部与整体相统一、生物与环境相协调，以及简单→复杂、低等→高等、水生→陆生的进化等。掌握这些规律将有助于生物知识的理解与运用，如线粒体学习就应紧抓结构与功能相适应的规律：有双层膜，内膜向内折迭形成嵴，扩大了膜面积，有利于有氧呼吸酶在其上有规律地排布；因而线粒体是有氧呼吸的主要场所。这样较易理解并记住其结构与功能。2、观察比较观察是一种有目的有计划的感知，不仅可以获得新知，也能验证已知。生物学是实验科学，观察是获得生物知识的重要环节。如观察生物的形态结构、生活习性、生长发育等等，有效地发挥观察在生物学学习中的作用。而我们生物学的原理、规律都是在观察实验的基础上得来的。 比较是认识事物的重要方法，有比较才有鉴别，生物中能比较的东西很多，如动物细胞与植物细胞、光合作用与呼吸作用、冬眠与夏眠等等。比较时注意对比较对象全面了解，然后确定比较项目，并做到简明扼要，如光合作用与呼吸作用这两类生理过程，可从场所、条件、过程、结果、意义等进行全面了解。通过比较有利于理解光合作用，呼吸作用的实质。中学生物概念多，易混难记，比较是有效的方法之一。3、综合归纳教师授课尤其是新授课，一般是分块的，但各块各知识点之间有内在的本质的联系，各年级生物知识是连贯的，是一个整体。学习时要将分散的知识聚集起来，归纳整理成为系统的知识，这样易理解好记忆。 综合归纳要做到“三抓”。一抓顺序、二抓联系、三抓特点。抓顺序就是要将各知识点按照本身的逻辑关系将其串联，如高中遗传的物质基础知识可按中心法则这一主线串联。抓联系，如神经细胞与脑、脊髓联系点在于神经细胞分细胞体、突起两部分，细胞体组成：脑、脊髓灰质等。抓特点，就是要抓重点抓主流。综合归纳不是眉毛胡子一把抓，不是大杂烩，应该将次要的东西简化甚至取消。4、灵活运用这是学好学活生物的关键，认识的目的全在于应用。灵活运用知识才能记得牢，学了才真正有用。运用知识解理论题或解决生产、生活中的实际问题，尤其是后者正是中学生薄弱环节，必须高度重视。如高中学了有丝分裂、减数分裂、弄清了这两种细胞分裂过程中染色体形态、数目行为的变化，运用这些知识就可用来判别有丝分裂与减数分裂图。学了生态学等知识在自家尝试建设生态小区，发展庭院经济等等。只要有心，生物无处不在，无处不用，定能学好，学活。5、还需掌握好的记忆方法记忆是学习的基础，是知识的仓库，是思维的伴侣，是创造的前提，所以学习中依据不同知识的特点，配以适宜的记忆方法，可以有效地提高学习效率和质量。记忆方法很多，下面仅举生物学学习中最常见的几种。a 简化记忆法 即通过分析教材，找出要点，将知识简化成有规律的几个字来帮助记忆。例如DNA的分子结构可简化为“五四三二一”，即五种基本元素，四种基本单位，每种单位有三种基本物质，很多单位形成两条脱氧核苷酸链，成为一种规则的双螺旋结构。b 联想记忆法 即根据教材内容，巧妙地利用联想帮助记忆。例如记微量元素：铁锰硼锌钼铜这六种元素，可以用谐音记忆铁猛碰新木桶，这样就记住了，而且不容易遗忘。c 对比记忆法 在生物学学习中，有很多相近的名词易混淆、难记忆。对于这样的内容，可以运用对比法记忆。对比法即将有关的名词单独列出，然后从范围、内涵、外延乃至文字等方面进行比较，存同求异，找出不同点。这样反差明显，容易记忆。例如同化作用与异化作用、有氧呼吸与无氧呼吸、激素调节与神经调节、物质循环与能量流动等等。6、最后要形成良好的学习常规。建立良好的学习常规，是学好生物学知识的重要保证，所说的学习常规，是指我们学习过程中必须注意的几个步骤，包括预习、听讲、复习和作业，总结等步骤。

　　高中生物实验操作注意事项一 　　通常，在高中生物实验课中，凡是涉及到在试管中反应有沉淀生成的生物实验，往往要考虑实验结束后沉淀物的清洗问题。在高中生物蛋白质实验操作中涉及此问题比较多。所以要掌握高中生物实验基本操作中的问题处理方法。 　　在高中生物实验中经常用到滴管，生物实验过程中，有许多学生不注意滴管的区别使用，造成对比实验失败;交叉污染药品导致试剂不纯，并且还会影响后面班级的实验，所以高中生物实验一定要注意清洁。 　 　高中生物实验操作注意事项二 　　在高中生物实验操作中量筒的使用常被忽略。在生物实验中，有许多试剂的用量都是1ml或2ml。使用量筒量取，要求操作者要细心有耐心。有些学生觉得使用量筒麻烦，常常凭感觉来估计试剂的使用量。这会造成学生所做生物实验中试剂的使用量差别很大：同一组实验不同试管内的试剂量相差太大、不同组间试剂用量差别更明显。这样就不能保证生物实验的准确性，使高中生物定理实验的结果失去真实性。 　 　高中生物实验操作注意事项三 　　在高中生物实验中显微镜的操作有许多不妥之处。如，用显微镜观察固定切片时，镜臂可倾斜一定角度。在观察其他生物实验中，将新制成的装片固定在载物台上后，为了观察方便，不少学生将镜臂倾斜较大角度，以致装片中的液体往下面流，污染了实验显微镜，并造成生物实验失败。 　　 高中生物实验操作注意事项四 　　高中生物实验多采用分组实验来验证生物实验。有的学生直接从书上找到结论，再做实验;有的不做实验，也有结论。生物定量实验不如实记录结果，凭空捏造数据，导致生物实验失去意义。生物实验失败后，之后还得重做生物实验，找到问题所在。所以在做生物实验是一定要认真。

高中生物实验操作注意事项一 通常，在高中生物实验课中，凡是涉及到在试管中反应有沉淀生成的生物实验，往往要考虑实验结束后沉淀物的清洗问题。在高中生物蛋白质实验操作中涉及此问题比较多。所以要掌握高中生物实验基本操作中的问题处理方法。 在高中生物实验中经常用到滴管，生物实验过程中，有许多学生不注意滴管的区别使用，造成对比实验失败;交叉污染药品导致试剂不纯，并且还会影响后面班级的实验，所以高中生物实验一定要注意清洁。 高中生物实验操作注意事项二 在高中生物实验操作中量筒的使用常被忽略。在生物实验中，有许多试剂的用量都是1ml或2ml。使用量筒量取，要求操作者要细心有耐心。有些学生觉得使用量筒麻烦，常常凭感觉来估计试剂的使用量。这会造成学生所做生物实验中试剂的使用量差别很大：同一组实验不同试管内的试剂量相差太大、不同组间试剂用量差别更明显。这样就不能保证生物实验的准确性，使高中生物定理实验的结果失去真实性。 高中生物实验操作注意事项三 在高中生物实验中显微镜的操作有许多不妥之处。如，用显微镜观察固定切片时，镜臂可倾斜一定角度。在观察其他生物实验中，将新制成的装片固定在载物台上后，为了观察方便，不少学生将镜臂倾斜较大角度，以致装片中的液体往下面流，污染了实验显微镜，并造成生物实验失败。 高中生物实验操作注意事项四 高中生物实验多采用分组实验来验证生物实验。有的学生直接从书上找到结论，再做实验;有的不做实验，也有结论。生物定量实验不如实记录结果，凭空捏造数据，导致生物实验失去意义。生物实验失败后，之后还得重做生物实验，找到问题所在。所以在做生物实验是一定要认真。

【 #高一# 导语】高中生物离不开实验，那么高中生物的实验操作有哪些注意事项？下面 无 将为大家带来高中生物的实验操作有哪些注意事项，希望能够帮助到大家。 　　1、应注意实验选材的合理性 　　如：⑴所选材料应有利于实验现象的观察：如可溶性还原糖的鉴定中应选择“白色或近白色”的材料; 　　⑵所选材料应容易获得：尽可能选择无明显季节性、地域性的材料; 　　⑶所选材料应价格便宜 　　2、应注意操作细节的合理性 　　如：⑴溶液或培养基灭菌后是否要冷却后使用?冷却后 　　⑵向淀粉糊中加了唾液后是否要振荡试管呢?要 　　⑶酶促反应的试管如何加热?是直接加热，还是水浴加温?水浴加热 　　⑷用酒精溶解叶中叶绿素时，酒精直接或隔水加热?隔水加热 　　⑸使甲状腺激素、胰岛素、生长激素进入动物体内的方法应如何操作?是饲喂，还是注射?甲状腺激素饲喂，胰岛素、生长激素注射 　　⑹不同的情况下要合理地选用不同的水。如：清水、池水、凉开水、蒸馏水、生理盐水。 　　3、应注意操作顺序的合理性 　　例：为“验证pH对唾液淀粉酶活性的影响”。在如下实验步骤中，顺序应该是 　　①在1-5号试管中分别加入0.5%的淀粉液2mL; 　　②加完淀粉液后，向各试管中加入相应的缓冲液3mL，使各试管中反应液的pH依次稳定在5.00、6.20、6.80、7.40、8.00; 　　③分别向1-5号试管中加入0.5%唾液1mL，然后进行37℃恒温水浴; 　　④反应过程中，每隔1min从第3号试管中取出一滴反应液，滴在比色板上，加一滴碘液显色，待呈橙黄色时，立即取出5支试管，加碘液显色并比色，记录结果; 　　A.①②③④B.③①②④C.③②①④D.①③②④ 　　答案：C 　　4、应注意实验方案的可操作性 　　例：为“验证镁是植物生活的必需元素”。请写出你的设计思路。 　　方案1：将幼苗中运载Mg2+的载体去掉 　　方案2：用去掉镁的砂性土壤培养幼苗 　　方案3：将植物体内的Mg2+分离出来 　　方案4：取生长状况一致的大豆幼苗，用符合实验要求的容器，对照组盛有含植物必需的各种矿质元素的完全培养液，实验组盛有不含镁离子的完全培养液，两组置于相同的适宜条件下培养;观察比较两组植物的生长发育情况。 　　方案1、2、3均缺乏可操作性，正确思路应该是方案4。

1、就读高中期间考的实验操作是不会计入高考总分的，但全国统一高考部分理科科目（化学或物理）是包括实验操作考试内容的，所以考生还是要按照高考考试大纲的要求进行复习。2、明年高考全国有25个省份使用全国卷，由于中学教学大纲不变，全国都一样，高考命题的具体内容和依据都是统一的考试大纲，因此，对于高考考生来说，只要按照原有复习备考安排去做即可，对考生不会有多大影响。3、试卷改变后主要还是试卷结构的不同，对于明年参加高考的考生来说，平时可以做一做前些年的高考全国卷，最好将近十年的高考全国卷系统做一遍，逐渐了解全国卷命题重点、命题方式、题型特点。

实验操作成绩5分计入会考成绩。就是物化生将要计入中考总分，理化实验操作具体的考核与计分方式是，物理、化学、生物实验操作考试卷面分值各10分，每科考试时长为5分钟。物理按满分7分折算、化学按满分5分折算、生物按满分5分折算，物理成绩按笔试成绩63分加实验操作成绩7分、化学成绩按笔试成绩45分加实验操作成绩5分，计入中考总分。生物成绩按笔试成绩45分，加实验操作成绩5分计入会考成绩。2024年中考理化合卷满分120分，但是卷面分只有108分，理化操作12分。（其中物理操作卷面分X0.7计入中考成绩，化学操作卷面分X0.5计入中考成绩）生物操作只是影响生地会考成绩，深圳生地会考成绩只作为中考末位同分比较的参考。

14、制取气体常用的发生装置和收集装置：发生装置收集装置[固（+固）][固+液]简易装置[固+液]排水法向上排空气法向下排空气法15、三种气体的实验室制法以及它们的区别：气体氧气（O2）氢气（H2）二氧化碳（CO2）药品氯酸钾和二氧化锰或高锰酸钾（KMnO4）或双氧水（H2O2）和二氧化锰（MnO2）[固（+固）]或[固+液]锌粒（Zn）和稀硫酸（H2SO4）或盐酸（HCl）[固+液]石灰石（大理石）（CaCO3）和稀盐酸（HCl）[固+液]反应原理2KMnO4==K2MnO4+MnO2+O2↑或2H2O2====2H2O+O2↑Zn+H2SO4=ZnSO4+H2↑Zn+2HCl=ZnCl2+H2↑CaCO3+2HCl=CaCl2+H2O+CO2↑仪器装置P36图2-17(如14的A)或P111.图6-10（14的B或C）P111.图6-10(如14的B或C)P111.图6-10(如14的B或C)检验用带火星的木条,伸进集气瓶,若木条复燃,是氧气；否则不是氧气点燃木条，伸入瓶内，木条上的火焰熄灭，瓶口火焰呈淡蓝色，则该气体是氢气通入澄清的石灰水，看是否变浑浊，若浑浊则是CO2。收集方法①排水法(不易溶于水)②向上排空气法(密度比空气大)①排水法(难溶于水)②向下排空气法(密度比空气小)①向上排空气法(密度比空气大)（不能用排水法收集）验满(验纯)用带火星的木条,平放在集气瓶口,若木条复燃,氧气已满,否则没满<1>用拇指堵住集满氢气的试管口；<2>靠近火焰,移开拇指点火，若“噗”的一声，氢气已纯；若有尖锐的爆鸣声，则氢气不纯用燃着的木条,平放在集气瓶口,若火焰熄灭,则已满；否则没满放置正放倒放正放注意事项①检查装置的气密性(当用第一种药品制取时以下要注意)②试管口要略向下倾斜(防止凝结在试管口的小水珠倒流入试管底部使试管破裂)③加热时应先使试管均匀受热，再集中在药品部位加热。④排水法收集完氧气后,先撤导管后撤酒精灯(防止水槽中的水倒流,使试管破裂)①检查装置的气密性②长颈漏斗的管口要插入液面下；③点燃氢气前，一定要检验氢气的纯度（空气中，氢气的体积达到总体积的4%—74.2%点燃会爆炸。）①检查装置的气密性②长颈漏斗的管口要插入液面下；③不能用排水法收集

高考物理化学没有实验操作，是卷面考试，但全国统一高考部分理科科目（化学或物理）是包括实验操作卷面考试内容的。普通高等学校招生全国统一考试，简称高考，是合格的高中毕业生或具有同等学力的考生参加的选拔性考试。普通高等学校招生全国统一考试由国家主管部门授权的单位或实行自主命题的省级教育考试院命制；由教育部统一调度，各省级招生考试委员会负责执行和管理。教育部要求各省（区、市）考试科目名称与全国统考科目名称相同的必须与全国统考时间安排一致。

突击一下重点中的重点

1.固体药品用镊子夹取 ；2.试管夹夹在试管1/3处试管倾斜约45度外焰加热；3.用玻璃棒蘸取液体滴在ph试纸上，将试纸与染色卡对比；4.将滤纸紧贴漏斗壁，玻璃棒抵在3层滤纸一侧，烧杯抵在玻璃棒上缓缓倾倒液体

生物实验技能是指一种生物实验能力，包括确定实验课题能力、设计实验方案能力、生物实验操作能力、实验观察能力、全面地反映了生物实验素质，其中特别是实验操作能力是学生生物实验素质最基本地 体现。学生实验素质的高低，跟教师的生物实验意识有很大的关系。 作为教师，在生物实验教学中的酸、甜、苦、辣只有自己清楚，因为教材内容的改变，原有的实验仪器有些已不符合现在教材的要求，在不得已的情况下，有些实验只能在课堂上讲，造成了学生动手能力比较差。学生观察实验现象时，有些学生只觉得新鲜、有趣、好玩、导致对实验现象记忆不深刻，学生的实验素质低，影响了教学质量。作为生物教师，我们如果能在教学中依据生物科的特点和学生的年龄特征来培养他们的能力，相信学生的综合素质将会有所提高。 一、 注重方法、面向全体 七年级学生由于受到条件的限制，在小学的时候从来没有用过显微镜，而显微镜的使用又是七年级实验教学中的一个重点。如何在有限的时间里让学生熟练掌握显微镜的使用，成为我们需要认真思考的问题。因此在《显微镜的使用》一节的实验教学中，我根据多年的教学经验，首先我交会他们如何快速对光的方法：1、眼睛看着反光镜和通光孔下部，一手转动反光镜，直到看见有一束白光反射到通光孔下部为止。2、眼睛对准目镜，双手微调反光镜，直到看见明亮的视野。交会他们如何升、降镜筒：首先要把物镜降到离玻片大概有2厘米，同时要用眼在一侧观察，然后再对着目镜，双手缓慢地往上并且只能往上旋转粗准焦螺旋，直到看到清晰的物像，这样即可以避免损坏玻片，又可以节省时间。由于学校条件有限，只能5个学生共用一台显微镜，为了让每一个层次的学生都能在一节课里使用到显微镜，我还在每个组里选出一个动手能力强的学生作为组长，把显微镜操作顺序打乱后再让组长手把手地教其他动手能力弱的学生。通过这样的教学，既体现了一部分学生的领导才能，又照顾了弱势学生，使全体学生的实验操作技能都得到了初步地培养。 二 、加强操作示范，强化学生的技能练习 学生的实验操作很多是在模仿教师的操作中获得的，因此，教师的规范操作对学生实验素质的培养影响很大，教师在操作中不但要规范，还要引导学生注意观察现象。例如：在使用显微镜时，我能坚持用左眼看目镜，这样有利于绘图。俗话说“熟能生巧”，生物实验技能是在不断的实际操作中形成和发展的，只有通过动手做实验，学生的操作技能才能得到提高。 三、 正确地引导 在实验教学中应重视对学生进行科学方法的教育和指导，指导得法与否，是学生能否获得培养技能的关键。例如，在怎样盖盖玻片才不会出现气泡上，我经常强调学生用镊子夹住盖玻片，一边靠在载玻片上，与载玻片形成一定的角度(45度左右）后才能轻轻地往下放，这样才不会由于有气泡而干扰学生的观察。在这几年来，七、八年级的段考、期考中，实验探究题出现的频率相对较多，大部分学生都懂得做探究的四个步骤：1、提出问题，2、作假设，3、作实验，4、得出结论。但是还有一部分的学生不懂得如何根据给出的材料提出问题、作假设。因此平时上课时，我就在课堂上指导一些学生：提出问题就是对探究题目的提问，作假设就是对探究题目作肯定或否定的回答。通过对七年级学生多次做这类练习后，学生做探究题的能力有了进一步的提高。 四、提高学生学习生物的兴趣 俗话说，兴趣是最好的老师，在教学实践中，我们常会遇到这样的情形，当做完一个实验后问学生观察到了什么现象，一部分学生会回答不上来，由此看来，一部分学生有着“内行看门道，外行看热闹”的心态，即他们正处于一种“非学习状态”，也说明他们感兴趣的只是实验的表面现象，而要掌握的却被他们忽略了，要让学生学到、观察到实质的东西，只有让他们对这些实验感兴趣，才能使他们产生探究的动力，才能从实际意义达到培养实验素质的目的。 总之，学生的可塑性还是很大的，只要我们注重实验教学，无形中教师的言传身教，学生的耳濡目染，自然而然达到了培养学生的生物实验操作技能，也就达到了我们的目的。

尺子那个一定要把尺子放回原位，演算纸扔掉 小鱼的一定要找到流动的血液 找不到来得及的话可以重做 不要动显微镜 动鱼就行了 总之 先操作 在画图 在整理 再交卷 注意露出鱼的口1.一进教室，现对老师说：老师好， 2.在考试卷上写上学校，姓名，县市区 3.根据卷子上的要求，往下做（注意！总共15分钟） 一般第一步检查仪器 观察小鱼尾鳍血液流动试验： 注意有一次换鱼的机会，用纱布包裹小鱼，只露出小鱼的嘴和尾鳍即可，还要在小鱼口部滴两滴清水，防止小鱼死亡，先做片，做完片，切记不要拖显微镜，用右手那镜壁，左手托镜座，注意转换器，物镜是否是低倍物镜，对光完后，转动粗准焦螺旋，将培养皿放入显微镜上，观察，可以移片观察完后，给老师看，转动粗准焦螺旋，将培养皿拿出，放生，画图，最后整理 洋葱表皮试验： 注意是内表皮，不是外表皮，注意不要有气泡，先给老师看，再画图 种子试验： 水分（注意“分”的写法） 注意试管口向下倾斜，试管夹从下往上，到3分之1即可，不要将种子烧糊，出现水珠即可，给老师看，在卷子上写上：“证明种子里含有水分” 无机盐 有铁丝或探针，插一粒湿小麦种子，烧到种子出现白色固体为止，在卷子上写：“证明种子里含有无机盐” 脂肪 将花生切成4份，去其中的一份，在纸上划，出现油迹，给老师看，在卷上写：“证明种子里有脂肪” 蛋白质 在烧杯中导入一般水就行了 扣分的地方： 1、显微镜应先对光在放片 2、画图用铅笔 3、按照卷子上的来做（切记不要打乱顺序） 4、给老师看显微镜的时候，一定要吧最清晰的视野给老师看 5、不要写错字 6、尺子试验，两人的数据一定得是一样的 7、画图要用铅笔画图，向右引线，要平行 8、整理时要把垃圾带走 9、画图要清晰，不要画错图 10、对老师要有礼貌，老师打分是不要乱说话，使老师产生反感

第一题，查七下的血液那节，书上有个显微镜下的图片，照着画。记住，视野中最多的是红细胞，那个被染成蓝色的是白细胞，白细胞个头大些。第二题：告诉你个方法。提出问题：静脉中血液是否会倒流？做出假设：不会。制定计划：拿一跟猪静脉血管，先顺血流方向注水，会发现水正常流出去了。在逆血流方向注水，发现水不会流出去。得出结论：静脉中血液不会倒流，因为静脉里有防止血液倒流的静脉瓣。

细胞质壁分类..........就是加糖水那个..用显微镜观察效果

会考貌似实验占20分

实验能力的高低、实验素质的好坏，是衡量一个学生学习生物水平的标准之一。初中生要想取得好成绩，必须要提高生物实验的能力。在日常教学中，我一直在探索如何提高学生生物实验能力。在积极推进和全面实施素质教育的今天，生物科学在中学教学中显得很重要。初中生物课的大部分知识是要求学生动手实验去发现、理解、运用的。实验是学好生物科的最有效的手段。动手实验可以激发学生热爱生物课程的兴趣，有效地帮助学生发展智力，提高学生生物科学素质。然而，实验不是让学生玩玩而已。那么，在初中生物课程教学中，如何提高学生的实验能力呢？本文尝试就如何提高初中生生物实验能力提提点滴看法，以求抛砖引玉。 一、明确培养初中生生物实验能力教学目标 常听有人嘲讽，中国学生的记忆能力是世界一流的，不管是什么考试，甚至是托福雅思等等，跟以英语为母语的国家的人比赛考试都不会输，但说到动手能力，实践能力却长期为人所诟病，那么如何提高我们学生的动手能力，实践能力呢？提高动手能力是需要实验室和实习基地的，但我国有些学校的实验室的建设相当滞后，看实验仪器的台套数就很明显的，众所周知,动手能力是从小就要培养的。所谓实验能力包括以下几个方面：①操作能力：熟练使用显微镜、解剖器、安装实验装置、自行设计各种实验步骤、采集制作植物叶子制作书签；②获得知识的能力：即在实验过程中通过聆听、观察、阅读、质疑、记录分析实验结果等途径获得知识的能力；③整理分析能力：通过表解、图释记录实验的结果，对实验现象进行分析整理，找出实验成败原因，并能解释实验现象，写出实验报告；④解决问题的能力：学生应用与实验有关的知识寻求解答问题的能力。在生物实验教学中，应该根据学生不同的年龄特征和心理特征，采取不同的组织形式，循序渐进地培养学生的实验能力。长期以来，农村中学实验教学仪器设备严重不足，科任教师不够重视。同时，受传统考试方法的制约，对学生实验能力很难考核，助长了学生不爱动手的习惯，生物实验教学中依然存在讲实验的现象，这忽视了学生动手能力的培养，使学生对生物学科逐渐丧失了学习兴趣，更不用说什么创新了。为此必须改革生物的实验教学，通过实验教学，激发学生的学习兴趣，培养初中生生物实验能力，培养学生的动手能力，使他们在快乐有趣的氛围中学习，从而提高初中学生学习生物学科的成绩。 二、加强初中生物实验教学中学生创新能力的培养 创新是一个民族进步的灵魂，没有创新就会失去生存的权利。创新的关键是人才的开发，创新人才的培养要从基础教育抓起，而中学阶段是创新教育的关键时期。基础教育中的创新，尤其是对初中学生来说，就是利用已有的知识（基本概念和规律），对面临的事物和问题，提出自己的新观点、新见解，提出解决问题的办法，甚至包括习题的解题法。这种创新和科学家、发明家“从无到有”，惊天动地的那种意义上的创新是有区别的，甚至是微不足道的，但这种创新，哪怕是一个小小的火花，它可以发展，可以壮大，可以燎原，这种创新和实践的内在功底，必将在日后的生活和工作中显示出巨大的作用。创新教育的任务就是运用科学的方法开发每一位学生的创造性资源，充分展示每一位学生的聪明才智，从而培养一大批富有开拓精神和创新能力的新型人才。许多国家对培养学生的创新实践能力的研究已进行了几十年，取得了一系列的研究成果，科技发达的美国有“创造基金会”为中小学生创造力和实践能力的培养开发提供援助。在日本，不是只有少数学校开展学生创新和实践能力培养的研究，而是步入大面积的普及阶段。二十世纪八十年代初，创新教育在我国已引起广泛重视，并有许多教育工作者先后开展了研究，20年来，取得了一定的成绩。 三、精心设计实验是培养学生实验能力的有效途径 初中生物实验大多是验证性实验，学生在前人的科研成果基础上，通过动手实验，进行探索，有利于学生更好地理解实验原理、进行创造性思维。教师在教学中要尽可能提出一些问题，让学生设计实验来解决问题，从而培养学生的创新能力，例如“如何测定洋葱表皮细胞的细胞液浓度？”“如何证明细胞膜是一层选择透过性膜？”“如何证明蛋白质不是遗传物质？”初中学生已具备一定解决问题的能力，只要教师善于引导，他们会提出许多解决方案。据了解，在国外，积极探索实验之风很浓，教师总是创造条件让学生独立思考，让学生自己设计实验方法。利用简便易行的小实验，就能在教学上起到很重要的作用。测量、统计、比较都是生物学上最常用的研究方法，这些方法都可以应用到实验中；用座标图形式表达结果，有利于培养学生的信息表达和交流能力；对实验结果的分析，有利于学生进一步理解自然选择理论，并且有利于培养学生的思维能力；实验中总有一些不能解决的问题，并不能通过实验得到答案，尚需学生设计新的实验，这又有利于培养学生的研究能力和创造能力。如果实验能一次成功当然很好，如果一次达不到预期的目的，教师则指导学生分析实验失败的原因，改变实验方

其实初中的生物实验超级简单，没有高中的那么抽象化。主要就是考试切片这一块然后加碘酒，我想这一块再怎么不说你也会，因为就是自己动手，想想以前课上做的步骤，什么都想起来了，难点在显微镜这一块，你可以参考以下方法看看。临时装片法 植物学实验中常需借助显微镜来观察、研究一些新鲜植物材料的细胞、组织和器官的微细结构。对于这些只要求临时观察的内容，通常是先以徒手切片法将这些植物材料切成薄片，再用临时装片标本法制成临时装片，以便在显微镜下观察。而对于一些小的或扁平的材料（如单细胞、丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），则可以直接制成临时玻片标本加以贯彻。以上方法的使用，既简单又快捷，同时可以保持材料的生活状态和天然的色彩。 1. 清洁玻片： 将载玻片和盖玻片用清水洗净，再用纱布擦干。擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。 注意：盖玻片薄脆易碎，擦拭时要特别小心，用力要轻而均匀。2. 放置材料： 将载玻片平放在桌面上，中央加一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量植物材料，放在水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料小心的展平或分散开，避免材料折叠或干燥。 3. 盖片： 大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触 ，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以挤出盖玻片下的空气，避免产生气泡。 注意：载玻片中央的液滴量要适中，使其恰好充满盖玻片下方。盖玻片的上面及载玻片的其他区域必须保持干燥。液滴量如果不够，易产生气泡，可用吸管小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下面的水相接触；如果水太多，溢出盖玻片，会使盖玻片浮动或从盖片下外溢，此时可用吸水纸吸去。4. 染色： 如需染色，临时水装片做好后直接在盖玻片的一侧加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水，引入染液，静置片刻，以使盖片下的材料均匀着色。 5. 镜检。 注意：用以临时观察，不欲久留的装片均可用水封片，制成水装片；需要提前半天或一天就备出的装片或者观察后须保留一定时间的装片，则适宜制成甘油装片，以防止水分蒸发，出现材料收缩现象。用甘油封片时，保留时间短者，可用10%甘油水溶液，保留时间长者则须从10%甘油中再转入50%甘油水溶液中，或浸后再转入纯甘油中封片。甘油装片的不仅可使封片保留较长的时间，且有加强材料透明的作用。 如装片效果理想，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。

指细胞离体培养

孵育就是几种化合物或有机大分子混在一起在特定条件下放置一段时间。

基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。信息技术的发展改变了人类的生活方式，而基因工程的突破将帮助人类延年益寿。一些国家人口的平均寿命已突破80岁，中国也突破了70岁。有科学家预言，随着癌症、心脑血管疾病等顽症的有效攻克，在2020至2030年间，可能出现人口平均寿命突破100岁的国家。到2050年，人类的平均寿命将达到90至95岁。人类将挑战生命科学的极限。1953年2月的一天，英国科学家弗朗西斯·克里克宣布：我们已经发现了生命的秘密。他发现DNA是一种存在于细胞核中的双螺旋分子，决定了生物的遗传。有趣的是，这位科学家是在剑桥的一家酒吧宣布了这一重大科学发现的。破译人类和动植物的基因密码，为攻克疾病和提高农作物产发现绿色荧光蛋白量开拓了广阔的前景。1987年，美国科学家提出了“人类基因组计划”，目标是确定人类的全部遗传信息，确定人的基因在23对染色体上的具体位置，查清每个基因核苷酸的顺序，建立人类基因库。1999年，人的第22对染色体的基因密码被破译，“人类基因组计划”迈出了成功的一步。可以预见，在今后的四分之一世纪里，科学家们就可能揭示人类大约5000种基因遗传病的致病基因，从而为癌症、糖尿病、心脏病、血友病等致命疾病找到基因疗法。继2000年6月26日科学家公布人类基因组"工作框架图"之后，中、美、日、德、法、英等6国科学家和美国塞莱拉公司2001年2月12日联合公布人类基因组图谱及初步分析结果。这次公布的人类基因组图谱是在原"工作框架图"的基础上，经过整理、分类和排列后得到的，它更加准确、清晰、完整。人类基因组蕴涵有人类生、老、病、死的绝大多数遗传信息，破译它将为疾病的诊断、新药物的研制和新疗法的探索带来一场革命。人类基因组图谱及初步分析结果的公布将对生命科学和生物技术的发展起到重要的推动作用。随着人类基因组研究工作的进一步深入，生命科学和生物技术将随着新的世纪进入新的纪元。基因工程在20世纪取得了很大的进展，这至少有两个有力的证明。一是转基因动植物，一是克隆技术。转基因动植物由于植入了新的基因，使得动植物具有了原先没有的全新的性状，这引起了一场农业革命。如今，转基因技术已经开始广泛应用，如抗虫西红柿、生长迅速的鲫鱼等。1997年世界十大科技突破之首是克隆羊的诞生。这只叫“多利”母绵羊是第一只通过无性繁殖产生的哺乳动物，它完全秉承了给予它细胞核的那只母羊的遗传基因。“克隆”一时间成为人们注目的焦点。尽管有着伦理和社会方面的忧虑，但生物技术的巨大进步使人类对未来的想象有了更广阔的空间。

A、纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相．由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的，主要原理是毛细现象，故A正确；B、为防止液体重新混合而污染，应将分液漏斗中的下层液体从下口放出，上层液体从上口倒出，故B正确；C、萃取的原理是依据溶质在有机溶剂中的溶解度较大进行分离的操作，与密度无关，故C错误；D、pH试纸不能直接插入到溶液中，使用时不能湿润，应将pH试纸置于表面皿上，用玻璃棒蘸取溶液，点在pH试纸的中部，与对应的标准比色卡比较，故D正确．故选C．

在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译成蛋白质。所以，如果直接从真核生物的基因组DNA获取目的基因，克隆再表达，试图获取目的蛋白的思路是行不通的，因为获取的DNA里面会含有非编码区。要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白，只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径。1．RNA的提取RNA的提取其实原理很简单：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。1．1 分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。一般不必使用oligo(dT)选择性分离poly(A)+RNA。不管起始模板是总RNA还是poly(A)+ RNA，都可以检测到扩增结果。另外，分离poly(A)+RNA会导致样品间mRNA丰度的波动变化，从而使信息的检出和定量产生偏差。然而，当分析稀有mRNA时，poly(A)+RNA会增加检测的灵敏度。1．2 RNA提取的最大影响因素-RNA酶在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等，RNA酶催化的反应一般不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。1．3 常用的RNA酶抑制剂*焦碳酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。*异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。*氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。*RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。*其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。1．4 防止RNA酶污染的措施、RNA提取之前需要注意和准备的工作*尽可能在实验室专门辟出RNA操作区，离心机、移液器、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁，并定期进行除菌。*操作过程中应始终戴一次性橡胶手套和口罩，并经常更换，以防止手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNase带入各种容器内或污染用具。尽量避免使用一次性塑料手套。塑料手套不仅常常给操作带来不便，而且塑料手套的多出部分常常将器具有RNase处传递到RNase-free处，扩大污染。*尽量使用一次性的塑料制品，避免共用器具如滤纸、tips、tubes等，以防交叉污染。例如，从事RNA探针工作的研究者经常使用RNase H、T1等，在操作过程中极有可能造成移液器、离心机等的污染。而这些污染了的器具是RNA操作的大敌。*关于一次性塑料制品，建议使用厂家供应的出厂前已经灭菌的tips和tubes等。多数厂家供应的无菌塑料制品很少有RNase污染，买来后可直接用于RNA操作。用DEPC等处理的塑料制品，往往由于二次污染而带有RNase，从而导致实验失败。*所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。*无法用DEPC处理的用具可用氯仿擦拭若干次，这样通常可以消除RNase的活性。*配制溶液用的乙醇、异丙醇、Tris等应采用未开封的新瓶装试剂。*塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。*有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。*配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。1．5 RNA提取的一般步骤RNA提取的一般步骤是：破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。分离RNA一半用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc（pH-5.2）或异丙醇。洗涤RNA使用70％乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。融解RNA一般使用TE。保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g离心5分钟。1．6RNA抽提新方法-TRIZOL法TRIZOL试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。TRIZOL是有毒物，接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤，一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。TRIZOL在室温下能稳定保存12个月。尽管如此，为达到最佳效果，建议保存在2-8°C的环境下。2．RT-PCRRT-PCR是指将逆转录(Reverse Transcription；RT)反应和PCR (Polymerase Chain Reaction)反应组合在一起的方法。2．1 RT-PCR的原理RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。2．2 RT-PCR的步骤⑴在冰浴离心管里面加入模板RNA 4uL，引物2uL，去离子水5uL，混匀，离心3-5秒；⑵70度水浴5分钟，冰浴30秒（此处是为了使引物和模板正确配对）；⑶加入5×反应液4uL，RNase抑制剂1uL，dNTP 2uL（这些应该先配好，然后分再装到每一管），混匀；⑷37度水浴5分钟，加入1uL AMV-RT反转录酶，混匀；⑸37度水浴1小时（此步是反转录过程）；⑹70度10分钟结束反应（此处是灭活酶活性，避免对后续实验产生干扰），产物置冰上进行下一步PCR实验，余下的-70度保存。2．3 RT-PCR的引物设计RT-PCR引物设计和一般PCR引物设计可以遵循同样的原则。细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。设计理想的引物都有以下共同的特点，而设计失败的引物则各有各的缺点：* 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。* 选择GC含量为40％到60％或GC含量反映模板GC含量的引物。* 设计5"端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。* 避免引物对3"末端存在互补序列，这会形成引物二聚体，抑制扩增。* 避免3"末端富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。* 避免3"末端的错误配对。3"端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。* 避免存在可能会产生内部二级结构的序列，这会破坏引物退火稳定性。目的序列上并不存在的附加序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5"端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包括这些序列，但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。引物的稳定性依赖于储存条件。应将干粉和溶解的引物储存在-20℃。以大于10μM浓度溶于TE的引物在-20℃可以稳定保存6个月，但在室温（15℃到30℃）仅能保存不到1周。干粉引物可以在-20℃保存至少1年，在室温（15℃到30℃）最多可以保存2个月。2．4 引物退火温度引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）。这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。因为大部分公式提供一个估算的Tm值，所有退火温度只是一个起始点。可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm 5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5℃，就会由于在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃。或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后再根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严谨的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。2．5 提高逆转录保温温度较高的保温温度有助于RNA二级结构的打开，增加了反应的产量。对于多数RNA模板，在没有缓冲液或盐的条件下，将RNA和引物在65℃保温，然后迅速置于冰上冷却，可以消除大多数二级结构，从而使引物可以结合。然而某些模板仍然会存在二级结构，即使热变性后也是如此。较高的保温温度也可以增加特异性，尤其是当使用基因特异性引物（GSP）进行cDNA合成时。如果使用GSP，确保引物的Tm值与预计的保温温度相同。不要在高于60℃时使用oligo(dT)和随机引物。随机引物需要在增加到60℃前在25℃保温10分钟。除了使用较高的逆转录温度外，还可以通过直接将RNA/引物混合物从65℃变性温度转到逆转录保温温度，并加入预热的2×的反应混合物提高特异性（cDNA热启动合成）。这种方法有助于防止较低温度时所发生的分子间碱基配对。使用PCR仪可以简化RT-PCR所需的多种温度切换。2．6 促进逆转录的添加剂包括甘油和DMSO在内的添加剂加到第一链合成反应中，可以减低核酸双链的稳定并解开RNA二级结构，最多可以加入20％的甘油或10％的DMSO而不影响或MMLV的活性。AMV也可以耐受最多20％的甘油而不降低活性。为了在逆转录反应中最大限度提高RT-PCR的灵敏度，可以加入10％的甘油并在45℃保温。如果1/10的逆转录反应产物加入到PCR中，那甘油在扩增反应中的浓度为0.4％，这不足以抑制PCR。在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNase A，B，C对RNA的降解，并不能防止皮肤上的RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入RNase。使用无RNaseH活性（RNaseH-）的逆转录酶：逆转录酶催化RNA转化成cDNA，不管是M-MLV还是AMV，在本身的聚合酶活性之外，都具有内源RNaseH活性。RNaseH活性同聚合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。RNaseH-的MMLV逆转录酶及RNaseH-的AMV，比MMLV和AMV能得到更多量和更多全长。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响。RT-PCR产物的大小受限于逆转录酶合成cDNA的能力，尤其是克隆较大的cDNA时。RNaseH-的逆转录酶可以显著提高长RT-PCR产物的产量，同时增加了热稳定性，所以反应可以在高于正常的37-42℃的温度下进行。2．7 RNaseH处理在PCR之前使用RNaseH处理cDNA合成反应可以提高灵敏度。对于某些模板，据认为cDNA合成反应中的RNA会阻止扩增产物的结合，在这种情况下，RNaseH处理可以增加灵敏度。一般当扩增较长的全长cDNA目标模板时，RNaseH处理是必需的，比如低拷贝的。对这种困难模板，RNaseH的处理加强了或AMV合成的cDNA所产生的信号。对于多数RT-PCR反应，RNaseH处理是可选的，因为95℃保温的PCR变性步骤一般会将RNA：DNA复合物中的RNA水解掉。2．8 小量RNA检测方法的提高当仅有小量RNA时，RT-PCR尤其具有挑战性。在RNA分离过程中加入的作为载体的糖元有助于增加小量样品的产量。可以在加入Trizol的同时加入无RNase的糖元。糖元是水溶性的，可以同RNA保持在水相中以辅助随后的沉淀。对于小于50mg的组织或106个培养细胞的样品，无RNase糖元的建议浓度为250μg/ml。2．9 一步法同两步法RT-PCR的比较两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污染，因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总RNA，这是因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功的一步法RT-PCR，一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成。2．10 增加RT-PCR特异性第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法，各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5"末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模板获得cDNA。为了获得最长的cDNA，需要按经验确定每个RNA样品中引物与RNA的比例。随机引物的起始浓度范围为50到250ng每20μl反应体系。因为使用随机引物从总RNA合成的cDNA主要是核糖体RNA，所以模板一般选用poly(A)+RNA。Oligo(dT)起始比随机引物特异性高。它同大多数真核细胞mRNA 3"端所发现的poly(A)尾杂交。因为poly(A)+RNA大概占总RNA的1%到2％，所以与使用随机引物相比，cDNA的数量和复杂度要少得多。因为其较高的特异性，oligo(dT)一般不需要对RNA和引物的比例及poly(A)+选择进行优化。建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。ThermoScript RT-PCR System提供了oligo(dT)20，因为其热稳定性较好，适用于较高的保温温度。基因特异性引物（GSP）对于逆转录步骤是特异性最好的引物。GSP是反义寡聚核苷，可以特异性地同RNA目的序列杂交，而不象随机引物或oligo(dT)那样同所有RNA退火。用于设计PCR引物的规则同样适用于逆转录反应GSP的设计。GSP可以同与mRNA3"最末端退火的扩增引物序列相同，或GSP可以设计为与反向扩增引物的下游退火。对于部分扩增对象，为了成功进行RT-PCR，需要设计多于一个反义引物，因为目的RNA的二级结构可能会阻止引物结合。建议在20μl的第一链合成反应体系中使用1pmol反义GSP。2．11 提高逆转录保温温度为了充分利用GSP特异性的全部优点，应该使用有较高热稳定性的逆转录酶。热稳定逆转录酶可以在较高温度保温以增加反应严谨性。比如，如果一个GSP退火温度为55℃，那么如果使用AMV或M-MLV在低严谨性的37℃进行逆转录，GSP所带有的特异性就没有完全利用。然而某些特别的逆转录酶可以在50℃或更高进行反应，这就会消除较低温度时产生的非特异性产物。为获得最大的特异性，可以将RNA/引物混合物直接从65℃变性温度转移到逆转录保温温度。这有助于防止低温时分子间碱基配对。使用PCR仪可以简化RT-PCR所需的多种温度转换。2．12 减少基因组DNA污染RT-PCR所遇到的一个潜在的困难是RNA中沾染的基因组DNA。使用较好的RNA分离方法，如Trizol，会减少RNA制备物中沾染的基因组DNA。为了避免产生于基因组DNA的产物，可以在逆转录之前使用扩增级的DNaseⅠ对RNA进行处理以除去沾染的DNA。将样品在2.0mM EDTA中65℃保温10分钟以终止DNaseⅠ消化。EDTA可以螯合镁离子，防止高温时所发生的依赖于镁离子的RNA水解。为了将扩增的cDNA同沾染的基因组DNA扩增产物分开，可以设计分别同分开的外显子退火的引物。来源于cDNA的PCR产物会比来源于沾染的基因组DNA的产物短。另外对每个RNA模板进行一个无逆转录的对照实验，以确定一个给定片段是来自基因组DNA还是cDNA。在无逆转录时所得到的PCR产物来源于基因组。

【 #会考# 导语】 从宁夏教育考试院了解到，2021年5月宁夏普通高中学业水平实验操作测试工作的通知已发布，为方便考生了解情况，现将有关事宜通知如下： 　　各市、县（区）教育考试中心，厅直属高中学校： 　　根据《关于做好2021年普通高中学业水平考试和高级中等阶段教育同等学力认定考试报名工作的通知》(宁教考院〔2021〕28号)，2021年5月将进行全区普通高中学业水平实验操作测试工作。为了确保各项工作安全顺利平稳进行，现就有关事项通知如下： 　　一、提高认识，切实加强组织领导 　　2021年是实施“十四五”规划、全面开启社会主义现代化新征程的第一年，是我们党成立100周年，也是我区新一轮普通高中学业水平考试改革的第一年。普通高中学业水平实验操作测试是人数众多的有组织的群体参与的工作，是《宁夏普通高中新课程学校教育质量监测方案》的重要组成部分，也是学校教育质量监测的重要方面。各市、县（区）教育考试中心要进一步提高政治站位、高度重视，专门成立实验操作测试领导小组，负责实验操作测试工作的组织实施和监控，指导学校实施测试；专门召开考务工作会，统一认识，统一要求，落实责任；制定出2021年普通高中学业水平实验操作测试实施办法、测试安排和应急预案，做到测试实施有序组织，各项工作有章可循，应急措施严密有效；要切实做好考点考场布局、监考教师选聘培训及巡考督查工作，确保实验操作测试工作安全、平稳、顺利进行；要认真总结实验操作测试在评分培训、监考安排、考场编排、组织方式、考试实施、成绩收集、成绩管理、成绩入库、补考安排等方面的组织管理经验，为制定新的实验操作测试管理规定积累管理严格、程序合理、便于操作的管理经验。 　　测试期间，宁夏教育考试院将对全区普通高中学业水平实验操作测试工作进行巡视、检查和督导。 　　二、严格组织程序，严肃考风考纪 　　我区2021年普通高中实验操作测试工作，继续按照《关于做好2007年5月实验操作测试工作有关问题的通知》（宁教考办〔2007〕45号）要求组织实施。为培养普通高中学校良好的教风和普通高中学生良好的学风，维护普通高中学业水平实验操作测试的严肃性，营造诚信、安全的实验操作测试环境，各市、县（区）教育考试中心要以对学生、对教师、对学校、对事业认真负责的态度，高度重视实验操作测试管理工作，严谨作风，严密流程，严肃考风，严格考纪；要强化对学生的诚信教育、安全教育、考纪教育，确保诚信、安全、有序开展实验操作测试工作；要加强对考务人员、监考教师的责任意识教育，要求监考教师认真履行监考工作职责，严格依照评分标准“一把尺子”量到底；要加强考务管理，做到计划周密、分工明确、职责到人；要深化对测试工作重要性的认识，广泛听取对测试工作的意见和建议，积极解决学校、学生的实际困难，改进测试管理、监测办法；要加强对学校实验操作测试工作全过程的监督、监察、指导。 　　学生原始成绩达到60分以上为合格。考试成绩不合格的学生，可在本次测试期间安排一次补测，也可参加下次测试。 　　三、认真做好学校选题、考点安排和试题需求汇总上报工作 　　根据教育厅办公室关于印发《宁夏回族自治区普通高中学业水平合格性考试说明（试行）》的通知（宁教基办【2021】2号）精神，我院组织专家结合近年来实验操作测试命题、测试情况，专门研究确定了《2021年5月宁夏普通高中学业水平实验操作测试范围》（见附件1）,公布了物理、化学、生物三个学科12道测试题（其中物理4道、化学4道、生物4道），供学校根据本校的教学实际进行选择。 　　每所学校在公布的物理、化学、生物三个学科的测试题中，每学科至少选择两道测试题，用于实验操作测试。 　　学生根据自己报考的测试科目，在学校选定的测试题目范围内，每个学科现场随机抽签确定一道测试题目参加测试。 　　各市、县（区）教育考试中心，要认真组织好学校选题、考点和测试时间安排以及试题需求统计汇总工作，及时准确填写《2021年5月宁夏普通高中学业水平实验操作测试选题汇总及试卷订数表》（见附件2）和《2021年5月宁夏普通高中学业水平实验操作测试考点及测试时间安排表》（见附件3），于4月20日前将纸质版加盖公章后传真或直接送到宁夏教育考试院学考处张伯阳老师处（电话及传真号0951-5559172），同时将电子版表格发送到邮箱2804496738@qq.com。 　　各市、县（区）教育考试中心的纸质版“实验操作测试工作安排”在领取实验操作测试试卷时上报到宁夏教育考试院学考处，或将电子版发送至邮箱。 　　四、严格遵守测试时间，及时统计上传成绩 　　为了加强管理，便于组织开展巡视、指导、督查等工作，各市、县（区）教育考试中心必须将测试时间统一安排在5月19日至5月23日进行。 　　测试结束后，各市、县（区）教育考试中心，要及时审查汇总测试成绩，于6月9日至19日，通过宁夏教育考试院普通高中学业水平考试管理平台，将原始成绩数据上传到高中学业水平考试数据库，同时将原始成绩数据在“爱数系统”中分享给学考处李晓燕老师存档备查。 　　原始成绩数据库格式在普通高中学业水平考试管理平台实验成绩导入菜单附件中下载。 　　五、采取有效措施，确保测试安全 　　各市、县（区）教育考试中心，要高度重视普通高中学业水平实验操作测试的安全工作，结合本地疫情防控实际情况，落实疫情常态化防控措施，制定应急预案，精心组织实施。要按照学生所在学校负责本校学生安全责任的工作思路开展工作，进一步压实工作责任。考点学校要对交通、食宿、实验用电、易燃易爆有毒药品的存放、使用以及实验操作不当等，可能引发的事故做好防范预案，确保学生、监考教师和工作人员生命安全。若发生突发事件，应及时处理；发生重大事件，学校应第一时间通过市、县（区）教育考试中心上报宁夏教育考试院学考处。 　　在2021年5月普通高中学业水平实验操作测试、数据上传过程中，有关管理问题由考试院学考处负责解答，有关数据上传流程和技术问题由考试院信息处负责解答。 　　考试院学考处联系人：张伯阳，电话：0951-5559172 　　考试院信息处联系人：刘文智，电话：0951-5559152 　　附件：1、2021年5月宁夏普通高中学业水平实验操作测试范围 　　宁夏教育考试院 　　2021年3月22日