ris

名词 n. 1.旅游者,观光者[C]San Francisco is full of tourists in the summer. 夏天去旧金山旅游的人很多。 2.(飞机、轮船等的)旅游舱,经济舱[U]形容词 a. 1.旅游的,观光的the tourist industry 旅游业 2.旅游舱的,经济舱的,二等舱的副词 ad. 1.在经济舱;乘经济舱3.二等卧车水陆交通词汇大汇总(铁路交通)[眼镜论坛]...150. 二等卧车 tourist

"tourist"的英文音标是/tu028aru026ast/。与这个词相关的词汇包括：tourism（旅游业）、tour（旅游）、sightseeing（观光旅游）、travel（旅行）等。"Tourist" 这个单词来自于法语词汇 "touriste"，最早的出现可以追溯到1800年代。它起初是指那些远离家乡到其他地方旅游或度假的人。随着旅游业的发展和国际旅游的兴起，这个单词逐渐为人们所熟知，成为了一个普遍使用的术语。在现代英语中，“tourist” 通常用来形容那些进行短期旅行、休闲度假或观光旅游的人。

偷额瑞私体呲

1.Timisoara does not feature on many tourist itineraries.蒂米什瓦拉并不在很多游客的旅行路线上。2.Tourist numbers are also going up again.旅游者人数也出现了回升。3.What more could you want as a tourist?作为一个旅行者，你还期待什么呢？4.The down turn has reduced tourist arrivals.游客的人数因为经济衰

tourist[英]["tu028au0259ru026ast][美][u02c8tu028aru026ast]n.旅行者，观光客；〈美〉冬季到南部做工的流动工人复数: tourists双语例句1.Beware of dishonest traders in the tourist areas.在旅游区一定要谨防奸商。2.Most British visitors beat a well-worn path to the same touristareas of the US.大多数英国游客总沿着一条老路线参观相同的美国旅游景点。3.Venice is one of the great tourist attractions of the world.威尼斯是世界上令人向往的旅游胜地之一。4.The town depends almost solely on the tourist trade.这座城市几乎完全靠旅游业维持。5.The town relies on the seasonal tourist industry for jobs.这个城镇依靠季节性旅游业提供就业机会。

tourists读["tu028au0259ru026asts]。tourists的意思：n. 旅游者（tourist的复数）；（美）冬季到南方做工的流动工人。v. 旅游；观光（tourist的三单形式）。网络释义：1、游客的。Tourists across the south-eastern part of Europe have faced severe disruption to their holiday plans , with hotels evacuated in fire-stricken areas and some roads rendered too dangerous to travel .在整个欧洲东南部地区，游客的度假计划被明显打乱。游客被迫撤离火灾地区的酒店，而一些道路也由于太过危险而关闭。2、旅客。We got a lot of tourists from Europe and some from further afield .我们的旅客很多来自欧洲 , 有些来自更远的地方。3、旅游者的。Through further literature research , this paper then will compare " after 80s " tourists to " non-after 80s " tourists " differences .并通过进一步文献整理，比较“80后”旅游者与非“80后”旅游者的差异性。4、游客们。What should tourists take with them .游客们应该随身携带什么东西呢？tourists 用法和例句：1、One number being bandied about is 8 million extra tourists .一个常常被提到的数字是增加800万游客。2、Tourists flew to istanbul or haifa instead of athens , and rewarded their hotels and vendors .游客们飞至伊斯坦布尔或海法，而不是雅典，给当地的酒店和零售业带来了滚滚财源。3、And tourists have long prized a visit to the palm or smith & wollensky as a must-dine experience .游客长期以来都将棕榈餐厅（Palm）或者史密斯u2022沃伦斯基牛排馆视为不可错过的用餐目的地。4、Outside , dozens of tourists rested on benches surrounded by mountains of shopping bags .室外，数十名游客在长凳上休息，周围堆满了购物袋。5、The company "s 411 : online hub where tour guides and tourists can connect .公司业务：在线连接导游与游客。

感觉楼主和一楼太偏激了！难道hip-hop,R&B就不好听了吗？？你能说欧美的说唱因为不入你耳就变得不好听了吗？？这说明她能驾驭多种曲风，别人想都没有的天赋。一楼的应该是很不喜欢玛丽亚凯莉吧，不然你怎么说的那么不公正？？你把其他几位说的飞上天，她们不还是没有玛丽亚人气高吗？?近几年的Christina不仅是海豚音发不出了吧，她是个很好的录音歌手，不过现场我就不敢恭维了！每次都降调！Celine能驾驭多风格的？？是吗？我怎么没觉得，一点现场发挥的能力都没有，这一点完全不如惠特尼和玛利亚，空浪费了好嗓子。那个“她（惠特尼）的感情非常丰富。声音非常感人。”我是赞同的，但是，说她在巅峰时期声音最好有点过了吧，大家都说惠特尼是goodvoice,但她自己也承认过：Mariah是greatvoice.玛丽亚凯莉位列MTV22个伟大声音之首，这可不是我说的。Mariah声音的确退化了，但是CD,CA,WH没退化吗？？LeonaLewis受CD影响很大？？那么她受Mariah和Whitney影响更大吧！只不过不想被人家说成是复制罢了。

歌曲名:True Love (Reprise)歌手:Code Of Ethics专辑:Code Of EthicsTrue love -- Elton JohnDuet with Kiki DeeWritten by Cole PorterSuntanned, windblownHoneymooners at last aloneFeeling far above parOh, how lucky we areWhile I give to you and you give to meTrue love, true loveSo on and on it will always beTrue love, true loveFor you and I have a guardian angelOn high, with nothing to doBut to give to you as you give to meLove forever, trueLove forever, trueGive me more true loveOh yeahTrue love, true loveGotta give me your true loveOh yeahTrue love, true lovehttp://music.baidu.com/song/2885352

申请格式个人资料姓名 1 这里应该是nombre 名 2 姓 S.S.会员编号 电子邮件身份证类型 身份证号家庭地址地址类型 街道或其他 地址名称名称街道号 附加号 几座 梯子 楼层 门 c.p.拉科鲁尼亚省 展示地址 具体地址：点击展示地点

IEAsteriskPassWordUncover使用方法：1,打开IEAsteriskPasswordUncover，启动IEAsteriskPasswordUncover,2，打开以后出现红框<那个红框是加上去的标志>，点击即开始监视。如果网页里有星号密码信息的话，IEAsteriskPasswordUncover将会为自动显示出来。

用户云端数据安全有保障 北森iTalent获VeriSign SSL认证 日前，中国人才管理第一品牌北森的核心产品iTalent获得了全球最大的数字证书颁发机构威瑞信（VeriSign） 的安全认证。 依靠SSL技术建立起高强度加密的信息传输通道，北森可以最大限度地确保了用户数据在云中的传输安全。目前，财富500 强企业中超过93% 的公司都运用VeriSign SSL 证书加强网站安全防护。 一直以来，云计算企业不仅要确保客户享受高效率的解决方案，更要捍卫大量在云端聚集的数据安全。北森总裁王朝晖表示：“北森的客户大都是中国银行、中粮集团等重量级的客户，为确保涉及企业内部人才信息的数据不泄露，北森一直不遗余力地在数据安全上投入，通过服务器身份认证、数据加密和租户隔离等方式保证数据安全。北森此次获得VeriSign SSL安全认证，将北森现有的大量安全措施与VeriSign数字证书对接，实现了安全保障的u2018强强联合u2019，使iTalent平台中各项产品的安全性更加可靠，其服务品质也更加向国外先进水平看齐。” 据北森专家介绍，现在用户登陆到iTalent平台时，会发现界面右下角显示VeriSign Secured签章的图示，同时会在地址栏看到浏览器自动激活时显示“锁”的安全标志---这意味着用户的浏览器和北森的.云计算服务器之间建立起了一条安全的加密通道。 作为中国第一个人才管理云计算平台，北森iTalent被称为云计算技术行业垂直应用的成功典范。自2012年上线以来，该平台招聘管理、人才测评、绩效管理、继任与发展、360度评估反馈、员工调查等多个模块都在进行快速迭代研发，在为客户提供价值方面不断提升。业内认为，此次获得VeriSignSSL安全证书，不仅对北森3000多家已有客户提供了更加安全的信息保障，也在整体上提升了企业对人才管理云计算安全的信心和接纳程度，这对加速整个人才管理行业的发展起到关键作用。 ;

ORION是钻戒，求婚或者订婚的时候一般用钻戒。Charis是结婚对戒（男款和女款）。一般来说订婚戒指的设计都会比较华丽，像ORION中间用的就是一颗吸睛的钻石，两侧有碎钻点缀，彰显高雅。Charis就比较简洁大方，因为是结婚对戒，要考虑到双方，所以比起ORION要低调，但是优美的气质完全不减，具体要看你用在什么场合了。现在女生叠戴也很流行，就是把女生的对戒和钻戒一起戴，看上更时尚。iprimo还有笔试叠戴款，可以研究研究。

1.红旗升起是 [被]升起 (人为)所以用be raised 而太阳是自己升起 (非人为) 用rise 选D 2.选C 这里是pay sb的被动(be paid)意思是支付给某人报酬(salary) 由by the hour 可知时态应该用将来时 所以是 sb will be paid

crisper的本质是细菌的一种保护机制。1、crisper介绍。CRISPR是原核生物基因组内的一段重复序列，是生命进化历史上，细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器，简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌，利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出CRISPR-Cas9系统。利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的基因组上切除，这是细菌特有的免疫系统，是古菌和细菌抵抗病毒等外源遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。2、crisper的功能特点。CRISPR是生物科学领域的游戏规则改变者，这种突破性的技术通过一种名叫Cas9的特殊编程的酶发现、切除并取代DNA的特定部分。这种技术的影响极其深远，从改变老鼠皮毛的颜色到设计不传播疟疾的蚊子和抗虫害作物，再到修正镰状细胞性贫血等各类遗传疾病等等。该技术具有非常精准、廉价、易于使用，并且非常强大的特点。crisper的技术运用：1、CRISPR技术可以纠正导致疾病的基因错误。肥厚型心肌病（HCM）是一种心脏疾病，影响着全球0.2%的居民，该患者群体将承受巨大的痛苦，而且该疾病会致命。通过使用这项技术，有可能减轻这种遗传性疾病对家庭造成的负担，最终影响全人类。2、CRISPR技术可消除导致疾病的微生物。虽然艾滋病治疗是从感染致命病毒转变为健康状态，但是科学家仍没有找到有效的解决办法。这种状况可能会随着CRISPR技术的发展而改变，研究人员对使用CRISPR技术设计噬菌体保持乐观态度，因为它们是一种经过验证的、安全的治疗细菌感染方法。3、CRISPR技术可培育更健康的新型食物。CRISPR基因编辑技术被证实在农业研究领域具有发展前途，美国纽约冷泉港实验室科学家使用CRISPR工具能够增大番茄产量，该实验室开发一种方法能够编辑基因，确定番茄的大小，分枝结构以及最大产量时番茄的外形。

TALEN (Transcription Activator-Like Effector Nucleases) 和 CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 都是现代基因编辑技术的代表，它们有以下相同点：都可以精确切割DNA：TALEN和CRISPR都是通过酶切酶的功能，识别和切割目标DNA序列。都需要设计与序列匹配的RNA或DNA：TALEN和CRISPR都需要特异性的引物来识别和结合目标基因，以进行基因编辑。都可用于修饰基因组中的特定位点：TALEN和CRISPR都能够精确编辑基因组中的特定位点，以产生所需的基因改变。都可以在细胞和生物体中应用：TALEN和CRISPR都可以应用于生物体中，包括单细胞和多细胞生物，以进行基因修饰。都可以被用于基因治疗：TALEN和CRISPR都是潜在的基因治疗方法，因为它们可以用于纠正病态基因。需要注意的是，TALEN和CRISPR的具体工作机制、设计原理和应用范围都有所不同，所以在具体应用时需要根据需求进行选择。

近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。

crispr cas9技术原理如下：CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统,用来抵抗外源遗传物质的入侵,比如噬菌体病毒和外源质粒。同时,它为细菌提供了获得性免疫:这与哺乳动物的二次免疫类似,当细菌遭受病毒或者外源质粒入侵时,会产生相应的“记忆”,从而可以抵抗它们的再次入侵。CRISPR/Cas系统可以识别出外源DNA,并将它们切断,沉默外源基因的表达。这与真核生物中RNA干扰(RNAi)的原理是相似的。CRISPR-Cas9，一种基因治疗法，这种方法能够通过DNA剪接技术治疗多种疾病。2017年3月，英国《自然·通讯》杂志发表一项遗传学重要研究成果，利用CRISPR-Cas9系统可拯救失明小鼠。CRISPR-Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。而CRISPR-Cas9基因编辑技术，则是对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，这项技术也是用于基因编辑中前沿的方法。以CRISPR-Cas9基础的基因编辑技术在一系列基因治疗的应用领域都展现出极大的应用前景，例如血液病、肿瘤和其他遗传疾病。该技术成果已应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确修饰。专利授权：2014年4月15日，获得了美国专利与商标局关于CRISPR的第一个专利授权。专利权限包括在真核细胞或者任何细胞有细胞核的物种中使用CRISPR。这意味着拥有在除细菌之外的所有生物，包括老鼠、猪和人身上使用CRISPR的权力。

CRISPR （Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats）是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞（包括iPS）的特定的基因组位点上进行切割，修饰。 Rudolf Jaenisch 研究组将Cas9与Te1和Tet2特异的sgRNA共注射到小鼠的受精卵中，成功得到双基因敲除的纯合子小鼠，效率高达80%。 他们将Cas9/sgRNA 与带突变序列的引物共注射，能准确在小鼠两个基因引入所要的点突变。在ES细胞中他们更是成功的一次敲除了五个基因。与ZFN/TALEN相比，CRISPR/Cas更易于操作，效率更高，更容易得到纯合子突变体，而且可以在不同的位点同时引入多个突变。但该系统是否有脱靶效应尚需进一步的研究。 传统的转基因和基因打靶技术，由于技术稳定成熟，可以对小鼠和大鼠的基因组序列进行各种修饰，仍将是模式动物的构建的主要技术。 核酸酶ZFN/TALEN 尤其是CRISPR/Cas技术如果能解决脱靶效应的话，有可能会广泛应用于小鼠，大鼠及其他模式动物的制备和研究中，成为传统的转基因和基因打靶技术的重要补充。

“基因敲除狗”，“基因敲除猪”，CRISPR/Cas9到底是怎样一个技术技术近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗？杜德娜和艾曼纽？夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。二、CRISPR/Cas系统的灵感来源CRISPR/Cas9技术的灵感来源于细菌的一种获得性免疫系统。与哺乳动物的二次免疫应答类似，细菌在抵抗病毒或外源质粒入侵时，会产生相应的“记忆”，来抵抗该种外源遗传物质的再次入侵，而这种获得性免疫正是由细菌的CRISPR/Cas系统实现的。在细菌的基因组上，存在着串联间隔排列的“重复序列”，这些重复序列相对保守，我们称之为CRISPR序列（Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats—成簇的规律间隔的短回文重复序列）。1、“记录”入侵者档案其中的“间隔序列”来源于病毒或外源质粒的一小段DNA，是细菌对这些外来入侵者的“记录”。（如图A所示）。图1 CRISPR序列示意图其中，菱形框表示高度可变的间隔序列，正方形表示相对保守的重复序列病毒或外源质粒上，存在“原间隔序列”，“间隔序列”正是与它们互相对应。“原间隔序列”的选取并不是随机的，这些原间隔序列的两端向外延伸的几个碱基往往都很保守，我们称为PAM（Protospacer adjacent motifs-原间隔序列临近基序）。当病毒或外源质粒DNA首次入侵到细菌体内时，细菌会对外源DNA潜在的PAM序列进行扫描识别，将临近PAM的序列作为候选的“原间隔序列”，将其整合到细菌基因组上CRISPR序列中的两个“重复序列”之间。这就是“间隔序列”产生的过程。2、打击二次入侵者当外源质粒或病毒再次入侵宿主菌时，会诱导CRISPR序列的表达。同时，在CRISPR序列附近还有一组保守的蛋白编码基因，称为Cas基因。CRISPR序列的转录产物CRISPR RNA和Cas基因的表达产物等一起合作，通过对PAM序列的识别，以及“间隔序列”与外源DNA的碱基互补配对，来找到外源DNA上的靶序列，并对其切割，降解外源DNA。这也就实现了对病毒或外源质粒再次入侵的免疫应答。正是基于细菌的这种后天免疫防御机制，CRISPR/Cas9技术应运而生，从而使科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点进行修饰。三、CRISPR/Cas9技术的实现需要什么？在CRISPR/Cas9技术中，我们把即将被编辑的细胞基因组DNA看作病毒或外源DNA。基因编辑的实现只需要两个工具——向导RNA（guide RNA， gRNA）和Cas9蛋白。其中，向导RNA的设计并不是随机的，待编辑的区域附近需要存在相对保守的PAM序列（即三碱基序列NGG，其中N可以是任意碱基），而且向导RNA要与PAM上游的序列碱基互补配对。以基因敲除为例，如图3所示，在待敲除基因的上下游各设计一条向导RNA（向导RNA1，向导RNA2），将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，向导RNA通过碱基互补配对可以靶向PAM附近的目标序列，Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂。对于DNA双链的断裂这一生物事件，生物体自身存在着DNA损伤修复的应答机制，会将断裂上下游

Crispr/cas9是种基因工具，在基因工程里修改调节基因etc.这个系统有两部分，guide RNA 用来和目标基因匹配（定位），Cas酶消化目标序列（两条链一起切）。

[](javascript:void(0);) | CRISPR/Cas系统是细菌和古菌特有的一种天然防御系统，用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。当外源基因入侵时，该防御系统的 CRISPR 序列会表达与入侵基因组序列相识别的 RNA，然后 CRISPR 相关酶(Cas)在序列识别处切割外源基因组DNA，从而达到防御目的。 根据Cas蛋白的特点，可将CRISPR/Cas系统分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型和Ⅲ型系统需要借助复杂的蛋白复合体发挥作用，Ⅱ型系统仅借助 Cas9蛋白和sgRNA即可对靶目标进行编辑，结构简单，操作容易，因此目前主要使用Ⅱ型CRISPR/Cas9 系统。 CRISPR/Cas自诞生以来，迅速发展，已经成为生命科学领域最耀眼、最有前景的技术。尤其是近两年，在全世界科学家的共同努力下，CRISPR/Cas相关新进展新突破不断涌现。 一、基因编辑技术的发展史 基因编辑可以分为三代，第一代：ZFN；第二代：TELEN；第三代：CRISPR/Cas。这三个基因编辑技术都利用了DNA修复机制，所以我们先来了解一下DNA修复机制（ 图1 ）。[图片上传失败...(image-8dab49-1625385468208)] 图1-NHEJ修复（左），HDR修复（右） NHEJ（Non-homologous end joining） 非同源性末端接合 NHEJ修复机制不需要任何模版，修复蛋白直接将双股裂断的DNA末端彼此拉近，在DNA连接酶的帮助下重新接合（ 图1 ）。 HDR（Homology directed repair） 同源重组修复 当细胞核内存在与损伤DNA同源的DNA片段时，HDR才能发生。 NHEJ的机制简单又不依靠模版，因而NHEJ的活性相对于HDR高出许多。但NHEJ修复出错的概率较高，容易造成移码突变等，基因编辑正是利用了这一点（ 图1 ）。 1.ZFN的识别切割机制 融合锌指模块和FokI切割结构域形成ZFN ；以二聚体的形式靶向切割每个锌指结构；特异识别3个碱基 ；组装多个锌指结构(识别12-18bp)形成的ZFN对可特异切割基因组靶点 （ 图2 ）。 [图片上传失败...(image-3f1d8d-1625385468209)] 图2-ZFN基因编辑原理图 2.TALEN的识别切割机制 两个TALE靶向识别靶点两侧的序列；每个TALE融合一个FokI内切酶结构域；FokI通过TALE靶向形成二聚体切割靶点；设计灵活识别特异性强（ 图3 ）。 [图片上传失败...(image-6dcfc-1625385468209)] 图3-TELEN基因编辑原理图 3.CRISPR/Cas9的识别切割机制 crRNA通过碱基配对与 tracrRNA结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA（ 图4 ）。 [图片上传失败...(image-c85235-1625385468209)] 图4-CRISPR/Cas9基因编辑原理图 ZFN、TELEN、CRISPR/Cas9比较 [图片上传失败...(image-dd6344-1625385468209)] 图5-三种基因编辑的比较 二、CRISPR/Cas技术的介绍 CRISPR/Cas9 系统的发现 1987年，在大肠杆菌的基因组中首次发现了一个特殊的重复间隔序列——CRISPR序列，随后，在其他细菌和古菌中也发现了这一特殊序列。 2005年，发现这些CRISPR序列和噬菌体的基因序列匹配度很高，说明CRISPR 可能参与了微生物的免疫防御。 2011年，CRISPR/Cas系统的分子机制被揭示：当病毒首次入侵时，细菌会将外源基因的一段序列整合到自身的CRISPR的间隔区；病毒二次入侵时，CRISPR 转录生成 前体crRNA (pre-crRNA)， pre-crRNA 经过加工形成含有与外源基因匹配序列的crRNA，该crRNA与病毒基因组的同源序列识别后，介导 Cas 蛋白结合并切割，从而保护自身免受入侵。 2013年，发现CRISPR/Cas9系统可高效地编辑基因组。随后张锋等使用CRISPR系统成功的在人类细胞和小鼠细胞中实现了基因编辑。 从此开始，CRISPR/Cas9技术给生命科学领域带来了巨大冲击，CRISPR/Cas9相关研究成果频频登上CNS等顶级期刊，近两年更是成为诺贝尔奖热门候选。 CRISPR/Cas技术的原理 CRISPR/Cas9系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA（trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计 crRNA 和 tracrRNA 这两种 RNA，改造成具有引导作用的sgRNA （single guide RNA ），从而引导 Cas9 对 DNA 的定点切割（图4）。 CRISPR/Cas技术的优势 设计简单，简明的碱基互补设计原则，识别不受基因组甲基化影响，能靶向几乎任意细胞任意序列，方便同时靶向多个靶点，切割效率高。 三、CRISPR/Cas的脱靶效应 PAM**** (Protospacer adjacent motif ) 前间区序列邻近基序 PAM序列区是CRISPR/Cas9系统行使切割功能的基本条件。如果靶序列 3′端没有PAM序列，即使靶序列与sgRNA序列完全匹配，Cas9蛋白也不会切割该序列位点。 PAM序列主要影响CRISPR/Cas9的DNA切割效率。在细胞水平上，NGG介导的切割效率是最高的。 sgR****NA ****(Single guide RNA ) 向导 RNA sgRNA与目标基因组相结合的 20nt 序列区决定着 CRISPR/Cas 系统的靶向特异性。CRISPR/Cas9与靶位点识别的特异性其实主要依赖于sgRNA与靠近PAM区的10~12 bp的碱基配对，而其余远离PAM序列 8~10 bp 碱基的错配对靶位点识别的影响并不明显。目前研究结果均提示，可能靠近 PAM 的 8~14 bp 序列是决定特异性的关键，其他序列也均在不同程度上影响脱靶效应。 CRISPR/Cas9的脱靶效应给研究带来了一定程度上的不确定性，也是限制其发挥更大潜力的主要原因之一。 2017年5月30日， Nature 杂志子刊 Nature Methods 刊登了美国哥伦比亚大学研究人员的一篇文章，研究人员通过CRISPR/Cas9成功修复了导致小鼠失明的基因后，对小鼠进行全基因测序，发现修复后的小鼠基因组有超过1500个单核苷酸突变，以及超过100个位点发生大片段插入或缺失（ 图6 ）。文章的结论无疑引发了巨大震动，也给正在进行中的CRISPR/Cas9带来了不确定性。 [图片上传失败...(image-f21b76-1625385468208)] 图6--动物体内实验中CRISPR/Cas9编辑后发生意想不到的突变 仔细分析后，发现该文章并不十分严谨，文章仅有两只小鼠作为实验组，一只作为对照组，数量不足以证明结论是否只是个例。而且单碱基突变是生物体内自然现象，不能全归于CRISPR/Cas9。整个实验只基于一个sgRNA数据，且该sgRNA特异性评分很低，造成脱靶效应也应该在预料之中（ 图7 ）。 [图片上传失败...(image-751d94-1625385468208)] 图7--针对 Nature Methods 文章的回应 经过一系列的研究和改进，目前CRISPR系统的脱靶性已经很低，当然，要想达到理想的状态，还有很长的路要走。 四、CRISPR/Cas技术的进展 2016年6月，张锋在 Science 发表文章，发现CRISPR/Cas13a能有切割细菌的特定RNA序列。 2016年9月，Jennifer Doudna在 Nature 发表文章，证实CRISPR/Cas13a可以用于RNA检测。 2017年2月22日，美国纪念斯隆.凯特林癌症中心（MSK）研究人员在 Nature 杂志发文，使用腺相关病毒（AAV）介导，将CRISPR/Cas9基因编辑技术应用于CAR-T疗法。该研究既解决了传统CAR-T疗法的随机整合可能存在的潜在危害，又大大降低了CAR-T细胞发生分化或癌化的风险，赋予了CAR-T技术全新的高效性、稳定性、安全性。 2017年8月2日，Shoukhrat Mitalipov在 Nature 发表长文，使用CRISPR/Cas9技术修正了植入子宫前的人类胚胎中一种和遗传性心脏病有关的变异。该研究证实了通过编辑人类胚胎进行治疗遗传病是安全可行的。值得一提的是，该成果受到了基因编辑领域大牛George Church等人的质疑。 2017年8月11日，杨璐菡等在 Science 发表文章，通过CRISPR/Cas9技术敲除猪基因组中的内源逆转录病毒（PERV）序列，并克隆出多只PERV失活小猪。向最终实现使用猪器官进行人体器官移植的终极目标迈进了一大步。 2017年9月，杂交水稻之父”袁隆平院士宣布使用CRISPR/Cas9技术敲除与镉吸收和积累相关基因的水稻育种成功。该研究从根本上解决了水稻镉污染的问题，将扭转我国部分农作物重金属超标的问题，进而改善部分人群重金属慢性中毒的问题。 2017年10月4日，张锋在 Nature 发表论文证实CRISPR/Cas13a能够在哺乳动物细胞中编辑特定的RNA。CRISPR/Cas13a能够达到RNAi相似的降低基因表达的效率，而且有更强的特异性，且对细胞内天然的转录后调控网络的影响更小。 2017年10月19日，Jennifer Doudna在 Nature 发表文章，设计了高精确性的Cas9变体—HypaCas9。该研究极大地降低了Cas9的脱靶效应，且不降低靶向切割效率。 2017年10月25日，张锋在 Science 发表文章介绍CRISPR新系统--REPAIR，可以高效的进行RNA的单碱基修复。因为不改变DNA序列，所以为通过基因编辑治疗遗传病而又不永久影响基因组提供了新可能。 2017年10月25日，哈佛大学Broad研究所的David Liu实验室在 Nature 发表长文，报道了新型腺嘌呤基因编辑器——ecTadA-dCas9，可以将A·T碱基对转换成G·C碱基对，该技术首次实现了不依赖DNA断裂即可进行基因编辑的技术，即单碱基基因编辑技术。该技术高于其它基因组编辑方法的效率，且几乎没有随机插入、删除或其它突变等不良副作用，因此为今后大范围治疗点突变遗传疾病提供了极大的便利。 五****、展望 近几年CRISPR/Cas基因编辑技术飞速发展，推广应用到了生物、医学、农业以及环境等多个领域，造就了一批批科研奇迹，尤其是在遗传病的治疗、疾病相关基因的筛查与检测、肿瘤治疗以及动植物的改造、病原微生物防治等领域有着巨大的潜力，也将深远地影响整个世界。 特别感谢：BioArt主编给予的帮助和意见以及吉满生物吴晨提供图1-图5的图片。 | | |

　　中山大学人类胚胎遗传性致病基因修复实验采取了CRISPR／Cas9基因编辑技术。该技术是近年在锌指核酸酶（ZFN）技术、类转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）技术之后出现的新型基因编辑技术，原理来自细菌的适应性免疫防御机制。相比传统的基因打靶技术和其他基因编辑技术，CRISPR／Cas9更为精确、高效和经济。　　科学家发现，细菌在遭遇噬菌体等病毒侵染之后，可以获得其部分DNA（脱氧核糖核酸）片段并整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，转录出相应的RNA（核糖核酸），利用其中的“定位信息”引导Cas蛋白复合物定位和切割、彻底地摧毁入侵病毒的DNA。CRISPR／Cas9技术就是利用这一原理，用一种定制的RNA引导Cas，对预设DNA位点进行切割，造成DNA断裂，启动细胞内基因组修复机制，实现基因敲除、特异突变的修复或引入和定点转基因等。

CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，短短几年内,CRISPR-Cas9技术风靡全球, 成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一，成为当今最主流的基因编辑系统。 一、什么是CRISPR-Cas系统 CRISPR-Cas系统是原核生物的一种天然免疫系统 。某些细菌在遭到病毒入侵后，能够把病毒基因的一小段存储到自身的 DNA 里一个称为 CRISPR 的存储空间。当再次遇到病毒入侵时，细菌能够根据存写的片段识别病毒，将病毒的DNA切断而使之失效。 C RISPR-Cas系统包含CRISPR基因座和Cas基因（CRISPR关联基因）两部分。 1、CRISPR（/"kru026aspu0259r/）是原核生物基因组内的一段重复序列 。CRISPR全称Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats（成簇的规律性间隔的短回文重复序列）。分布在40%的已测序细菌和90%的已测序古细菌当中。 （注：生活在深海的火山口、陆地的热泉以及盐碱湖等极端环境中，有一些独特结构的细菌，称为古细菌） CRISPR基因序列主要由前导序列（leader）、重复序列（repeat）和间隔序列（spacer）构成 。 ①前导序列 ：富含AT碱基，位于CRISPR基因上游， 被认为是CRISPR序列的启动子 。 ②重复序列 ：长度约20–50 bp碱基且包含5–7 bp回文序列，转录产物可以形成发卡结构， 稳定RNA的整体二级结构 。 ③间隔序列 ： 是被细菌俘获的外源DNA序列 。这就相当于细菌免疫系统的“黑名单”，当这些外源遗传物质再次入侵时，CRISPR/Cas系统就会予以精确打击。 2、Cas基因位于CRISPR基因附近或分散于基因组其他地方，该基因编码的蛋白均可与CRISPR序列区域共同发生作用。因此，该基因被命名为CRISPR关联基因（ CRISPR associated，Cas ）。 Cas基因编码的Cas蛋白在防御过程中至关重要，目前已经发现了Cas1-Cas10等多种类型的Cas基因。 依据Cas蛋白在细菌免疫防御过程中参与的角色，目前将CRISPR-Cas系统分为两大类。 第一大类 ：它们切割外源核酸的效应因子为多个Cas蛋白形成的复合物，包括Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型。 第二大类 ：它们的作用因子是比较单一的Cas蛋白，比如Ⅱ型的Cas9蛋白和Ⅴ型的Cpf蛋白。 目前，被最为广泛应用的CRISPR系统是II型CRISPR-Cas系统，也就是CRISPR-Cas9系统。 二、CRISPR-Cas9的作用原理 对于CRISPR-Cas9的作用机理可以分为三个阶段来理解。 1、第一阶段：CRISPR 的高度可变的间隔区的获得 （ 俘获外源DNA，登记“黑名单” ） CRISPR 的高度可变的间隔区获得，其实就是指外来入侵的噬菌体或是质粒DNA 的一小段DNA 序列被整合到宿主菌的基因组，整合的位置位于CRRSPR 的5" 端的两个重复序列之间。因此，CRISPR 基因座中的间隔序列从5" 到3" 的排列也记录了外源遗传物质入侵的时间顺序。 新间隔序列的获得可能分为三步： 第1步：Cas1和Cas2编码的蛋白将扫描入侵的DNA，并识别出PAM区域，然后将临近PAM的DNA序列作为候选的原型间隔序列。 第2步：Cas1/2蛋白复合物将原间隔序列从外源DNA中剪切下来，并在其他酶的协助下将原间隔序列插入临近CRISPR序列前导区的下游。 第3步：DNA会进行修复，将打开的双链缺口闭合。这样一来，一段新的间隔序列就被添加到了基因组的CRISPR序列之中。 2、第二阶段：CRIPSR 基因座的表达（包括转录和转录后的成熟加工） CRISPR序列在前导区的调控下转录产生pre-crRNA（ crRNA的前体 ），同时与pre-crRNA序列互补的tracrRNA（ 反式激活crRNA ）也被转录出来。pre-crRNA通过碱基互补配对与tracrRNA形成双链RNA并与Cas9编码的蛋白组装成一个复合体。它将根据入侵者的类型，选取对应的“身份证号码”（ 间隔序列RNA ），并在核糖核酸酶Ⅲ（ RNaseⅢ ）的协助下对这段“身份证”进行剪切，最终形成一段短小的crRNA（ 包含单一种类的间隔序列RNA以及部分重复序列区 ）。 crRNA，Cas9以及tracrRNA组成最终的复合物，为下一步剪切做好准备。 3、第三阶段：CRISPR/Cas 系统活性的发挥（靶向干扰） crRNA，Cas9以及tracrRNA组成最终的复合物就像是一枚制导导弹，可以对入侵者的DNA进行精确的打击。这个复合物将扫描整个外源DNA序列，并识别出与crRNA互补的原间隔序列。这时，复合物将定位到PAM/原间隔序列的区域，DNA双链将被解开，形成R-Loop。crRNA将与互补链杂交，而另一条链则保持游离状态。 随后，Cas9蛋白精确的平端切割位点位于PAM上游3个核苷酸位置，形成平末端产物。Cas9蛋白的HNH结构域负责切割与crRNA互补配对的那一条DNA链，而RuvC结构域负责切割另外一条非互补DNA链。最终在Cas9的作用下DNA双链断裂（DSB），外源DNA的表达被沉默，入侵者被一举歼灭。 三、 CRISPR-Cas9基因编辑技术及应用… tracrRNA-crRNA在被融合为单链向导RNA（sgRNA）时也可以发挥指导Cas9的作用。 CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。 CRISPR-Cas9的广泛应用 1、基因敲除（Knock-out） Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。在通常情况下，细胞会采用高效的 非同源末端连接 方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。但是，在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象，造成移码突变，（ 移码突变 ：是指DNA分子由于某位点碱基的缺失或插入，引起阅读框架变化，造成下游的一系列密码改变，使原来编码某种肽链的基因变成编码另一种完全不同的肽链序列。）使靶标基因失去功能，从而实现基因敲除。为了提高CRISPR系统的特异性，可将Cas9的一个结构域进行突变，形成只能对DNA单链进行切割造成DNA缺口的Cas9 nickase核酸酶。因此想要形成双链断裂的效果可以设计两条sgRNA序列，分别靶向DNA互补的两条链，这样两条sgRNA特异性的结合靶标序列，即可形成DNA断裂，并在修复过程中通过移码突变实现基因敲除 2、基因敲入（Knock-in） 当DNA双链断裂后，如果有DNA修复模板进入到细胞中，基因组断裂部分会依据修复模板进行 同源重组修复 （HDR），从而实现基因敲入。修复模板由需要导入的目标基因和靶序列上下游的同源性序列（同源臂）组成，同源臂的长度和位置由编辑序列的大小决定。DNA修复模板可以是线性/双链脱氧核苷酸链，也可以是双链DNA质粒。HDR修复模式在细胞中发生率较低，通常小于10%。为了增加基因敲入的成功率，目前有很多科学家致力于提高HDR效率，将编辑的细胞同步至HDR最活跃的细胞分裂时期，促进修复方式以HDR进行；或者利用化学方法抑制基因进行NHEJ，提高HDR的效率 3、基因抑制、基因激活（Repression or Activation） Cas9的特点是能够自主结合和切割目的基因，通过点突变的方式使Cas9的两个结构域RuvC-和HNH-失去活性，形成的dCas9只能在sgRNA的介导下结合靶基因，而不具备剪切DNA的功能。因此，将dCas9结合到基因的转录起始位点，可以阻断转录的开始，从而抑制基因表达；将dCas9结合到基因的启动子区域也可以结合转录抑制/活化物，使下游靶基因转录受到抑制或激活。因此dCas9与Cas9、Cas9 nickase的不同之处在于，dCas9造成的激活或者抑制是可逆的，并不会对基因组DNA造成永久性的改变。 4、多重编辑（Multiplex Editing） 将多个sgRNA质粒转入到细胞中，可同时对多个基因进行编辑，具有基因组功能筛选作用。多重编辑的应用包括：使用双Cas9nickases提高基因敲除的准确率、大范围的基因组缺失及同时编辑不同的基因。通常情况下，一个质粒上可以构建2～7个不同的sgRNA进行多重CRISPR基因编辑。 5、功能基因组筛选 利用CRISPR-Cas9进行基因编辑可以产生大量的基因突变细胞，因此利用这些突变细胞可以确认表型的变化是否是由基因或者遗传因素导致的。基因组筛选的传统方法是shRNA技术，但是shRNA有其局限性：具有很高的脱靶效应以及无法抑制全部基因而形成假阴性的结果。CRISRP-Cas9系统的基因组筛选功能具有高特异性和不可逆性的优势，在基因组筛选中得到了广泛的应用。目前CRISPR的基因组筛选功能应用于筛选对表型有调节作用的相关基因，如对化疗药物或者毒素产生抑制的基因、影响肿瘤迁移的基因以及构建病毒筛选文库对潜在基因进行大范围筛选等。

CRISPR的全称Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats，意为成簇规律间隔短回文重复序列，Cas则是CRISPR-associated (Cas) systems。 CRISPR/Cas 系统是原核生物的免疫系统，这个系统可以识别出外源 DNA，并将它们切断，沉默外源基因的表达，用来抵抗外源遗传物质比如噬菌体病毒和外源质粒的入侵。这与真核生物中RNA干扰（RNAi）的原理是相似的。正是由于这种精确的靶向功能，CRISPR/Cas 系统被开发成一种高效的基因编辑工具。在自然界中，CRISPR/Cas系统拥有多种类别，其中 CRISPR/Cas9 系统是研究最深入，应用最成熟的一种类别。 CRISPR/Cas9 利用一段小 RNA 来识别并剪切 DNA 以降解外来核酸分子。现在使用的 CRISPR/cas 9 系统是由最简单的 type II CRISPR 改造而来，该系统由单链的 guide RNA 和有核酸内切酶活性的 Cas 9 蛋白构成。 u26a0ufe0fnature video视频： CRISPR: 基因编辑原理及应用 基因敲除：sgRNA+Cas9 基因敲入：sgRNA+Cas9+目的基因（HDR模版） 5‘端开始数20个碱基这一段是需要设计的，这一段用来识别目的基因上的靶标，并通过碱基互补配对原理与靶点位置结合。 gRNA再往后数76个碱基，是另一段transactiviting RNA (tracrRNA)。它的序列是一定的，就像转运RNA一样可以形成空间结构，然后就可以和Cas9酶相结合。 这样一条完整的gRNA就可以识别靶点，并且把与它自身结合的Cas9酶带到这个靶点，引导Cas9酶在靶点处对目的基因的双链DNA进行切断，从而达到基因编辑的目的。 目前又很多在线工具可以用于设计sgRNA 不同的导入方式基因标记效率和脱靶效率不同 参考： CRISPR实验究竟怎么做？手把手教给你 CRISPR/Cas9 基因编辑全套操作和解决方案（TAKARA 讲解）

ZFNZFN，即锌指核糖核酸酶，由一个 DNA 识别域和一个非特异性核酸内切酶构成。DNA 识别域是由一系列 Cys2-His2锌指蛋白（zinc-fingers）串联组成（一般 3~4 个），每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基。锌指蛋白源自转录调控因子家族（transcription factor family），在真核生物中从酵母到人类广泛存在，形成alpha-beta-beta二级结构。其中alpha螺旋的16氨基酸残基决定锌指的DNA结合特异性，骨架结构保守。对决定DNA结合特异性的氨基酸引入序列的改变可以获得新的DNA结合特异性。多个锌指蛋白可以串联起来形成一个锌指蛋白组识别一段特异的碱基序列，具有很强的特异性和可塑性，很适合用于设计ZFNs。与锌指蛋白组相连的非特异性核酸内切酶来自FokI的C端的96个氨基酸残基组成的DNA剪切域(Kim et al., 1996)。FokI是来自海床黄杆菌的一种限制性内切酶，只在二聚体状态时才有酶切活性(Kim et al., 1994)，每个FokI单体与一个锌指蛋白组相连构成一个ZFN，识别特定的位点，当两个识别位点相距恰当的距离时（6~8 bp），两个单体ZFN相互作用产生酶切功能。从而达到 DNA 定点剪切的目的。TALENTALENs中文名是转录激活因子样效应物核酸酶，TALENs是一种可靶向修饰特异DNA序列的酶，它借助于TAL效应子一种由植物细菌分泌的天然蛋白来识别特异性DNA碱基对。TAL效应子可被设计识别和结合所有的目的DNA序列。对TAL效应子附加一个核酸酶就生成了TALENs。TAL效应核酸酶可与DNA结合并在特异位点对DNA链进行切割，从而导入新的遗传物质。相对锌指核酸酶(zinc-finger nuclease, ZFN)而言，TALEN能够靶向更长的基因序列，而且也更容易构建。但是直到现在，人们一直都没有一种低成本的而且公开能够获得的方法来快速地产生大量的TALENs。CRISPRCRISPR是生命进化历史上，细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器，简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌，利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出CRISPR系统，利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是细菌特有的免疫系统。微生物学家10年前就掌握了细菌拥有多种切除外来病毒基因的免疫功能，其中比较典型的模式是依靠一个复合物，该复合物能在一段RNA指导下，定向寻找目标DNA序列，然后将该序列进行切除。许多细菌免疫复合物都相对复杂，其中科学家掌握了对一种蛋白Cas9的操作技术，并先后对多种目标细胞DNA进行切除。以往研究表明，通过这些介入，CRISPR能使基因组更有效地产生变化或突变，效率比TALEN（转录激活因子类感受器核酸酶）等其他基因编辑技术更高。但最近研究发现，虽然CRISPR有许多优点，在人类癌细胞系列中，它也可能产生大量“误伤目标”，尤其是对不希望改变的基因做修改。三种系统的比较那么，可能会有人疑问了，既然如此，这三种系统的区别和联系又是什么呢？特意从有效性，特异性，载体性及其它四个方面，进行了一个小小的总结。有效性在不同的基因位点基因靶向性的有效性都是不同的，并且这也依赖于每种细胞的转染的效率。因此，只能点对点的比较靶向位点，细胞系和转染方法，这样的比较才有意义。基于我们课题组和其他课题组的ZFN和TALENs的靶向效率的实验，我们在细胞系水平上进行了比较，虽然他们可能与不同的突变特征有关。Chen的课题组的最近的研究进行了大规模的体外分析，发现TALENs在使用与上下游相关的序列的时候比ZFNs显著的具有更多的突变产生。另一个组比较了TALENs和CRISPRs在人类ESCs细胞中的情况，观察到，通过用CRISPR更换掉TALENs，在其他方面条件相同的情况下，通过产生更多的基因突变的克隆，本质上提高了效率。最近，功能上重新编码的TALENs（reTALENs）已经得到了发展，并且在人类的iPSCs细胞中的基因编辑的有效性相比较于CRISPR得到了提高。但是这个研究发现，CRISPR比reTALENs能够实现7-8倍的同源重组效率，并且其一定程度的比HE更有效率，挡雨ODN捐赠者进行比较。特异性ZFN和TALENs都是作为二聚体发挥作用的，其特异性是由DNA绑定的区域决定的，这个区域在每个剪切位点最多可以识别36bp。然而，在在II型CRISPR系统中的Cas9是由一种RNA引导的核酸，它的特异性是由PAM和PAM上游的20个引导核苷酸决定的。这表明，3"12个碱基的“种子序列”是最关键的，而剩下的8个碱基（非种子序列）甚至PAM序列都是可以错配的。ZFN的特异性由一种不带偏见的全基因组分析进行，并且发现存在频率低，但是可以检测到的脱靶事件的发生，其可以定义为一个高度有限的一部分。已经有研究表明，TALENs有比ZFN更低的细胞毒性和脱靶效率。基于这个研究，TALENs诱导的CCR5特异性突变在CCR5的对偶基因上发生率是17%，而在高度同源的CCR2位点上只有1%。相反，CCR5特异性的ZFN的活性在这两个位点是相在当的，CCR5位点的突变频率是14%，而CCR2的是12%。几个研究也报告了，CRISPR/Cas系统在细胞毒性评价或者DSB诱导的检测（即，H2AX免疫染色）中都没有明显的脱靶现象。然而，最近的研究发现，CRISPR诱导的靶向不同的人类细胞的基因出现了显著的脱靶现象。例如，靶向CCR5的CRSIPR/Cas9系统偶到的在CCR2上的脱靶切除的突变率为5-20%，这是非常接近之前讨论的CCR5靶向的ZFN诱导的突变率。三个其他的小组利用更系统的方法在人类细胞中评估了CRISPR的脱靶活性，其结果表明CRISPR可能能够发生目标不匹配，从而在预测的脱靶位点上引入微缺失或者插入（插入缺失）。此外，靶向位点的定位和内涵能够显著的影响gRNA识别他们的靶向目标，而在基因组序列中的“脱靶序列”也是一样的。已经有报告说，脱靶效应能够通过小心的控制Cas9的mRNA的浓度来克服。此外，在基因编辑的时候使用配对的Cas9的切口酶已经表明能够显著的减少至少1500倍的脱靶活性。病毒为基础的传递ZFN基因可以通过慢病毒和腺病毒进行传递。当前，ZFNs导入体细胞是通过共转染两个慢病毒载体，每个载体编码一个功能性异源二聚体对的一个单体。相反，腺病毒，但不是基于HIV的慢病毒，载体使用与TALEN的基因的传递，因为TALENs的大尺寸和TALE重复序列的种应用。Cas9也是一个较大的基因，并且其酶促死的版本也可以通过慢病毒进行传递，虽然也盛行的Cas9的稳定的表达对于细胞的毒性依然是不清楚的。其他方面ZFNs和TALENs都能够在切割时产生粘性末端，因此可以使用标签绑定，如果具有互补突出部分的双链寡聚核苷酸（dsODN）是可以进行预测的。ZFNs和TALENs都可以在捐赠的质粒的基因组中引入同一个核酸靶向位点来实现。ZFNs和TALENs通过采取同源二聚体的方式从而获得优势，绑定门通过设计实现了重组（Ob-LiGaRe）。这种方法在使用的质粒中倒置了两半的核酸酶的结合位点，这是在没有改变接头区的方向实现的，因此通过相同的ZFN/TALEN碱基对能够阻止连接产物的消化。因为CRISPR产生了一个非粘性末端，直接连接会遇到挑战。最近的文章表明，具有Cas9n的gRNAs的碱基对能够诱导具有徒步部分的DSBs，并且促进dsODN的高效率的NHEJ介导的插入。虽然至今还没有出版，但是进入的转基因大小的DNA能够通过引入在目标质粒的CRISPR/Cas9靶向位点的具有CRISPR/Cas的基因组使用。CRISPR/Cas系统相比较于ZFNs和TALENs具有几个优势，例如易于构建，花费低，并且产物具有可扩展性，并且能够用于多个靶向基因组位点。

歌曲名:Symphony歌手:Chris Tomlin专辑:Passion: Here For YouSarah Brightman - SymphonyI don"t know what I"m suppose to sayWhen love suddenly you feels so far awayBut you"re not prepared, you tookAnd if you"re now afraid to listenAnd I don"t want to do this anymoreWhy don"t know which way that I should turnSeems the morning love we know we have to learnAnd I keep staring at your spaceLike it somehow has the answersSo don"t let the music end, all my darlingSymphonyIt"s gone quiet around last nightHow I wish you would hold meAnd that you never told meAnd it"s better if you leaveLook out the sunIt"s starting to leads all every eyeBut you once spoke so brightly,tell me we might beThat you"re going anywayWhen you turn, know what she"s got, until it"s goneBut then nothing ever hurt like holding onI am scared and unprepared and I feel like I have fallingSo can you tell me, where did we go wrong?SymphonyIt"s gone quiet around last nightHow I wish you would hold meAnd that you never told meAnd it"s better if you leaveSarah Brightman - SymphonyBut everything is brokenand it"s better that we give upAnd remember how we once had something beautifulSymphonyIt"s gone quiet around last nightHow I wish you would hold meAnd that you never told meAnd it"s better if you leaveLook out the sunWhen starting to leads all on every lightBut you once spoke so brightly,so tell me we might beThat you"re going anywayhttp://music.baidu.com/song/8140728

转基因技术是指利用DNA重组、转化等技术将特定的外源目的基因转移到受体生物中，并使之产生可预期的、定向的遗传改变。转基因技术应用在人类社会各个领域 中，较为常见的包括了利用转基因技术生产的农作物，以及利用转基因技术生产疫苗等。含有转基因作物成分的食品被称之为转基因食品，其与非转基因食品具有同样的安全性。世界卫生组织以及联合国粮农组织认为：凡是通过安全评价上市的转基因食品，与传统食品一样安全，可以放心食用。一连串基因研究工作开启了人类改造生物的新纪元，这种按照工程设计原理，利用现代生物技术手段达到预期目标的技术体系被称为“基因工程”或“遗传工程”。通常将植物基因工程称为“转基因技术”，所获得的产品被称为转基因植物或转基因作物，有时也使用“遗传修饰生物”或“工程作物”等名称转基因技术是利用现代生物技术，将人们期望的目标基因，经过人工分离、重组后，导入并整合到生物体的基因组中，从而改善生物原有的性状或赋予其新的优良性状。除了转入新的外源基因外，还可以通过转基因技术对生物体基因的加工、敲除、屏蔽等方法改变生物体的遗传特性，获得人们希望得到的性状。这一技术的主要过程包括外源基因的克隆、表达载体构建、遗传转化体系的建立、遗传转化体的筛选、遗传稳定性分析和回交转育等。

是50ml香奈儿邂逅机会女士香水(金黄色水)-CHANCECHANELEAUDETOILETTEVAPORISATEURSPRAY。香奈儿是法国著名的品牌，该品牌产品种类繁多如服装、珠宝配饰、化妆品、护肤品等。旗下的香水因其独特的香味和华丽的包装深受广大消费者的喜爱，vaporisateurspray便是其中一款香水。香奈儿是法国著名的品牌，该品牌产品种类繁多如服装、珠宝配饰、化妆品、护肤品等。旗下的香水因其独特的香味和华丽的包装深受广大消费者的喜爱，vaporisateurspray便是其中一款香水。vaporisateurspray是什么香水是50ml香奈儿邂逅机会女士香水(金黄色水)-CHANCECHANELEAUDETOILETTEVAPORISATEURSPRAYUS$92.60产品信息CHANELCHANCE香奈儿邂逅品牌：chanel/香奈儿规格：50ml适用：女士香水香调：清新花香调前味：风信子、白麝香中味：粉红胡椒、茉莉、香根草、柑橘后味：鸢尾花、琥珀、广藿香充满诗意的纯然嗅觉感受，提醒人们机会的稀有与珍贵。香奈儿邂逅柔情淡香水，被柔软温馨的氛围所包裹，呈献给崇尚欢乐、善于把握机缘的乐观女子。恰似一幕幸福围绕的绝美温柔画面，邂逅柔情钟爱邂逅香水的女性是对生命充满激情与热忱的年轻女子，她有点小迷信(相信自己的幸运符)，并追求快乐、勇于冒险。她纯真而执着、勇敢、有梦想，她特立独行、不按常理出牌但也并不会做事毫无根据，她难以捉摸而又十足浪漫的。淡香水展现出优雅的悸动，唤起甜美的愉悦。使用方法1、香水会由下往上升：香水使用在身上，香味会随着时间温度由下往上升;因此在使用香水的时候，不要只集中在上半身使用，要注重均衡分布。2、使用在温度高的部位，香味更香，香水味通常会随着体温升高而更易散发出真香味，因此，使用在体温高的部位，会比使用在衣服上更香，在季节上，使用在夏天也比冬天更容易感觉到香味。3、香味使用在动态的部位上，香味更容易散发，香味会随着身体的动作而扩散因此使用在手挽，手肘膝盖内侧等经常动的部位最理想。以上是关于vaporisateurspray香水的内容，消费者倘若对vaporisateurspray香水感兴趣可以先购买小样或者前往实体店试香看看香味是否喜欢，防止买了正装又不喜欢这款香味导致香水闲置。

是50ml香奈儿邂逅机会女士香水(金黄色水)-CHANCECHANELEAUDETOILETTEVAPORISATEURSPRAY。香奈儿是法国著名的品牌，该品牌产品种类繁多如服装、珠宝配饰、化妆品、护肤品等。旗下的香水因其独特的香味和华丽的包装深受广大消费者的喜爱，vaporisateurspray便是其中一款香水。香奈儿是法国著名的品牌，该品牌产品种类繁多如服装、珠宝配饰、化妆品、护肤品等。旗下的香水因其独特的香味和华丽的包装深受广大消费者的喜爱，vaporisateurspray便是其中一款香水。vaporisateurspray是什么香水是50ml香奈儿邂逅机会女士香水(金黄色水)-CHANCECHANELEAUDETOILETTEVAPORISATEURSPRAYUS$92.60产品信息CHANELCHANCE香奈儿邂逅品牌：chanel/香奈儿规格：50ml适用：女士香水香调：清新花香调前味：风信子、白麝香中味：粉红胡椒、茉莉、香根草、柑橘后味：鸢尾花、琥珀、广藿香充满诗意的纯然嗅觉感受，提醒人们机会的稀有与珍贵。香奈儿邂逅柔情淡香水，被柔软温馨的氛围所包裹，呈献给崇尚欢乐、善于把握机缘的乐观女子。恰似一幕幸福围绕的绝美温柔画面，邂逅柔情钟爱邂逅香水的女性是对生命充满激情与热忱的年轻女子，她有点小迷信(相信自己的幸运符)，并追求快乐、勇于冒险。她纯真而执着、勇敢、有梦想，她特立独行、不按常理出牌但也并不会做事毫无根据，她难以捉摸而又十足浪漫的。淡香水展现出优雅的悸动，唤起甜美的愉悦。使用方法1、香水会由下往上升：香水使用在身上，香味会随着时间温度由下往上升;因此在使用香水的时候，不要只集中在上半身使用，要注重均衡分布。2、使用在温度高的部位，香味更香，香水味通常会随着体温升高而更易散发出真香味，因此，使用在体温高的部位，会比使用在衣服上更香，在季节上，使用在夏天也比冬天更容易感觉到香味。3、香味使用在动态的部位上，香味更容易散发，香味会随着身体的动作而扩散因此使用在手挽，手肘膝盖内侧等经常动的部位最理想。以上是关于vaporisateurspray香水的内容，消费者倘若对vaporisateurspray香水感兴趣可以先购买小样或者前往实体店试香看看香味是否喜欢，防止买了正装又不喜欢这款香味导致香水闲置。

Leisure as relaxing at anywhere , 休闲可以在室内家里出外也行tourism is must be outing. 旅游就肯定是出外了另外旅游不一定能休闲

rise的过去式：rose，过去分词：risen。一、rise的释义：1、名词：n.上升；升起；增加；增长；上涨；加剧；源头；起源；玫瑰花；玫瑰红葡萄酒；玫瑰色；红润的肤色；莲蓬式喷嘴；玫瑰花形纹章。2、动词：v.上升；达到较高水平；起立；起床；起身；站起；隆起；高起；增加；增长；上涨；提高；改善；接近。3、形容词：adj.玫瑰的；玫瑰色的，粉红色的。二、rise的派生词：risen：vt.使…浮上水面；使（鸟）飞起；复活；发酵。rising：n.反抗；起义；造反；叛乱。三、rise的常见短语：rise and fall兴衰；起伏；（价格等的）涨落。rise to上升到；上升至；崛起。rise from the ashes毁后被重建。 get a rise out of惹…恼怒。rise through the ranks升为军官；晋升；提升。rise with the lark早起。rose的例句1、During the day,the hottest time is between 2 pm and 4 pm when temperatures rise to 33℃.白天，最热的时候在下午2点到4点之间，这段时间气温能上升到33摄氏度2、Research company Nielsen found that in the UK,sales of e-books are falling while sales of paper books are rising.研究公司Nielsen发现，在英国，电子书的销量在下降，而纸质书的销量在上升。3、Edward rose early on the New-year morning.新年的早晨，爱德华早早起床了。4、Yan is a rising star in the science world.Yan是科学界的后起之秀。5、There has been a dramatic rise in the number of extreme weather events over the past 20 years.在过去20年中，极端天气事件的数量急剧上升。6、Pale rose.Light tawny colour which some red winnes acquire om oxidation.洋葱皮色一些红葡萄酒在氧化过程中所产生的浅茶色。7、And we go to the stars.Evergreen.A rose garden.African Wind.Zephyrus.我们飞向群星，我们飞向群星，常青的，一个玫瑰花园。8、She rose above her own agony to outsing even the lark and the nightingale.建立在它痛苦之上的绝唱，甚至超过了云雀和夜莺。9、With the advent of PCs the popularity of Bulletin Board Systems rose rapidly.随着个人电脑的普及布告栏系统迅速上升。

[辨析] arise (arose, arisen) vi. 呈现, 出现；发生， 产生；起身，起立。无被动语态。常用短语：arise from / out of sth.由……引起；因……产生。如：How did the quarrel arise? 争吵是怎么引起的？They are talking about problems arising out of the lack of communication.他们正在谈论由于缺乏交流而产生的问题。rise（rose, risen)vi. 上升，升起, 升高；上涨；站起来。说明主语自身移向较高位置，常用于日、月、云、雾、烟、蒸汽、河水、温度、物价以及人的职位等，无被动语态。 如：The moon has risen above the hills. 月亮已经从山上升起。The river has risen by several meters.　河水上涨了好几米。raise vt. 举起，提起；抬高；筹集。说明主语发出的动作是要作用于其它事物的，往往有使物体达到其应有的高度的含义。可用于被动语态。如： Heavy rain raised the river stage. 暴雨使河水水位升高。The boss promised to raise her salary.老板答应要给她加薪水希望有帮助，望采纳~O(∩_∩)O~

rise英 [rau026az] 美 [rau026az] vi.上升; 增强; （数量）增加; 休会n.兴起; （数量或水平的）增加; （数量、价格、价值等的）增长; （日、月等的）升起vt.使…浮上水面; 使（鸟）飞起; 复活; 发酵网络英语; 孙燕姿; 起第三人称单数： rises 现在分词： rising 过去式： rose 过去分词： risen 形近词： Rise RISE

如果是覆盖版的，替换data1.fbz就可以了，最好事先先把本来的data1.fbz做一下备份。如果你下载的是data.fbz,用解压工具打开data1.fbz，将汉化补丁其复制进去即可

3eqwewe

曼多萨想要控制火焰泰坦去对付其他的泰坦，但是要想控制泰坦就得牺牲整个岛和岛上的人们。主角坚决不同意这种做法，于是他们两人闹翻了。曼多萨进去了黄金大门，并将主角关在了外面。主角去找泰坦领主厄斯冈商量对策，厄斯冈告诉他只有泰坦领主可以讲泰坦打败并重新封印而要成为泰坦领主就需要找到所有的泰坦装备。主角和派蒂找到了所有的泰坦装备成为了新的泰坦领主。他回到黄金大门将曼多萨击败重新开启了黄金大门进去将泰坦重新封印。制作组合照时主角和派蒂对话的大概意思：派蒂说那么接下来你要怎么办。主角说了为了人类我必须回去大陆将剩下的泰坦全部击败。这时估计片头的水系泰坦出现了。于是主角说这里还有另外一个泰坦要对付，等解决掉他这该死的风暴就会结束了。我们一起回大陆吗?end(我猜测派蒂一定会跟主角回去，因为派蒂还有她父亲铁须的大陆藏宝图。她原来就邀请主角一起回去寻宝。续集有得玩了，主角回到大陆对付其他的泰坦顺便和派蒂一起寻找铁须的财宝。本来写了一个从头到尾完整的剧情，没想到没发成功结果全部都白写了 只好写个概要了

现在完成时 has done 这里的risen是过去分词,所以选D

"Rise" 是一个英语单词，可以用作名词、动词或形容词。以下是一些常见的用法：作为名词，"rise" 可以表示上升或增长，也可以指日出或上升的坡度。例句：The rise in global temperatures is a major concern.（全球温度的上升是一个重大问题。）2.作为动词，"rise" 可以表示上升、增加、升高等，也可以指站立、起床等。例句：The price of oil has risen sharply.（石油价格急剧上涨。）3."rise" 还可以表示变得更好或更成功，也可以指出现、发生或升级。例句：He has risen to the top of his field.（他已经成为他领域的顶尖人物了。）4.作为形容词，"rise" 可以描述高度、位置或价值等的增加。例句：The rise floor provides excellent views of the city.（高层楼层提供了城市的优美景色。）总之，"rise" 是一个多义词，其具体含义取决于上下文和语境。

raise 举起 过去式和过去分词都是直接在后面加d ，即raised raisedrise 升起 不及物动词过去式是 rose过去分词是 risen太阳升起用 rise

存档在C:users用户名saved gamesRisenSaveGamese快速存档是按F8，读取是F9。 手动存档是按ESC，到主界面，然后点游戏，有存档和读取的选项。希望能帮到您！

raisevt.及物动词。以下词典：n.上升,高地,增高v.升起,举起,饲养Iwasraisedbymyauntonafarm.我是在农场由姨妈抚养大的。Hislongabsenceraisedfearsabouthissafety.他长期不在引起了大家对他的安全的担心。这个用rise就变hislongabsencegiverisetofearsabouthissafety..giveriseto（rise名词）vt.引起(使发生,导致)Sheraisedherfingertoherlipsasasignforsilence.她举起一根手指放在唇边，示意肃静。rise不及物动词。以下词典：risen.上升,增加,小山v.升起,起身,上升,(日、月、星)升起Thesunrisesintheeast.太阳从东方升起。Sheroseaboveherdifficultiesandbecameatremendoussuc...raisevt.及物动词。以下词典：n.上升,高地,增高v.升起,举起,饲养Iwasraisedbymyauntonafarm.我是在农场由姨妈抚养大的。Hislongabsenceraisedfearsabouthissafety.他长期不在引起了大家对他的安全的担心。这个用rise就变hislongabsencegiverisetofearsabouthissafety..giveriseto（rise名词）vt.引起(使发生,导致)Sheraisedherfingertoherlipsasasignforsilence.她举起一根手指放在唇边，示意肃静。rise不及物动词。以下词典：risen.上升,增加,小山v.升起,起身,上升,(日、月、星)升起Thesunrisesintheeast.太阳从东方升起。Sheroseaboveherdifficultiesandbecameatremendoussuccess.她战胜了重重困难，取得了巨大的成功。总而言之。意思有些不同。见词典吧。还有就是及物和不及物动词的区别rose是rise的过去时。。。完成时是risenrised忘记了。也许是rise的过去时。

riseKK:[]DJ:[]vi.1.上升;升起;上涨;升高;增加The sun has not yet risen.太阳还没升起.The population of the city has risen to five million.该市人口已增加到五百万.2.高耸;高出[W][Q]An immense building rose ...

rise的过去式：rose，过去分词：risen。作名词时意为“（数量或水平的）增加；加薪；（权利等）增强；上升；小丘；（诱饵）游上水面；源头；（楼梯的）级高；晋升；出现”。作动词时意为“攀升；起床；升起；休会。用法1：rise是不及物动词,不能用于被动结构,常与above, from, to等介词连用。2：rise偶尔也用作系动词,后接形容词作表语。3：同是rise,却有时表示“开始”,有时表示“结束”。4：rise的基本意思是指空间位置的上升运动,引申可指数量、价格、需求、生活、费用、体温等的“增加,增长”,是可数名词; 也可指某事物的“兴起,发展”,是不可数名词; 还可指工资的“增加”,是可数名词。

非谓语动词 修饰sun可以翻译作The sun which was rising was hidden by the clouds表示正在进行的状态

用密码不就好吗 崛起秘籍_Risen游戏秘籍游戏中输入 minsky 按回车开启秘籍模式和控制台，然后按 ～ 或 [F1] 开启控制台，输入以下秘籍可得到对应效果：（秘籍中的#代表数字，注意替换！）秘籍 作用 God 无敌模式 Invisible 隐形模式 Teach [skill] # 获得指定的技能 Teach All # 全技能 Give [item name] 获得对应物品 give It_Gold 获得金钱 give It_Gold # 获得指定数目的金钱 give It_Armor 所有护甲 give It_Ru_Teleport 所有传送符文 Give All # 获得所有物品 Spawn [entity name] 召唤指定的entity Time [hh.mm] 设置游戏时间 Time scale # 设置快慢动作，默认是1 IsoView Isometric 视角 FirstPerson 第一人称视角 Set [variable] # 设置变量或状态 help 帮助信息 list 列出秘籍代码（使用HELP后） goto [name] 到达指定NPC (区分大小写 ) edit PC_Hero 角色编辑器

你没有这个吗？有删吗？《崛起（Risen）》V2.0 【安装注意事项】最终汉化补丁V2.0，安装后请务必删除“library.00”、“strings.00”文件。RT，如果有任何文字显示问题，或者文字不是此图中的字体，最好是删除掉以下两个文件，不管是否出现问题。...Deep SilverRisendatacompiledlibrary.00...Deep SilverRisendatacompiledstrings.00（PS：没有strings.00则最好，但是library.00一定会有，且务必要删除掉。)或者再打个2.1的

“状元365答疑网老师"帮你解答:rise 是不及物动词,表示“升起”， 例：The sun is rising. 时态变化：rise--rose--risen raise 是及物动词，表示“举起”，时态变化：raise-raised-raised 例：Raise your hands. The worker demand the manager to raise their salary.工人们要求加薪水。 此外，raise有“饲养、供养”的意思： 例如： "These families may raise children as their chief occupation, leaving the childless families free to move from job to job." 这些家庭将抚养孩子作为他们的主要职业,让不带孩子的家庭自由地从一种工作转换到另一种工作。 go up 是动词固定搭配，表示“上升”“增长”，例: The temperature is going up. 它们用什么时态都可以，要根据句子需要。

存档在C:\users\用户名\saved games\Risen\SaveGamese 快速存档是按F8，读取是F9。 手动存档是按ESC，到主界面，然后点游戏，有存档和读取的选项。 希望

是这样的rise 是不及物动词raise 是及物动词

你好！对不起，之前的说错了！可以杀掉的NPC不是关键的NPC，如果杀不掉就是关键的NPC！另外用近战武器杀NPC，NPC会复活的，如果用魔法和弓箭杀的，就无法复活！但不影响剧情！希望对你有所帮助，望采纳。

前言：这游戏不同上古4, 没有潜行攻击,更没有潜行中3倍攻击修正, 再加上敌人是打一下,来一群, 这样的环境下, 使用箭作为主要攻击手段似乎是非常蛋痛的行为.可是,正因为在这样的情况下,我偏要发掘它的可能性.就在刚才通关了,感觉上弩箭手是有作为的.先上通关前的状态图.简单的说明一下:因为弓箭下坠得太厉害的关系,我选了弩(十字弓)作为主要武器.可是,十字弓是以力量点数作为装备基准的,所以作为一个弩手必定需要加点进力量. (4把弩的需求分别是10,25,50和90点)没特意去收集Hero"s crown, 所以DEX 到了190就没升了,带个+5的指环帮一下.十字弓技能可以加快回弹的速度,但效果不明显,所以我没有加满,带个技能+1的指环就算了.这把剑攻击力不高但有技能+2 的能力,对我来说正好,有了回旋斩,近战会轻松不少.弩手有什么特点呢?首先要说明一下十字弓的攻击力有多少,找个例子,以大家都知道的单手剑为例好了.在相同点数(力量和DEX), 和相同武器攻击力下, 一发箭的威力大约就是单手剑最后一下垂直下斩的攻击力.看明白了吗?这样的攻击力不能说很高,以我195 DEX 拿个Titan 十字弓, 能秒普通蜥_人, 蜥_战士也可以秒, Undead,精英蜥_战士能扣过半,也就是需要两发才能击杀.但十字弓上弹慢,差不多3-4秒才能射下一发,攻击频率也低.以攻击力换取的是远距离攻击能力,所以使用十字弓就是要不停的跑,在敌人进入近战范围前击杀他们.通关后,我发觉这战法比想象中好用,很多地方也能够无伤消灭敌人,就是有些地方没了退路,不得已才要近战, 不过也没差,反正我们的近战能力不低,被围也不怕.同样是远攻,对比起魔法师,弩手攻击力比较低,但不需要使用魔力作远距离攻击.十字弓的瞄准范围比魔法小,也就是说比较容易打失.比起近战悲剧的魔法师,我们力量有加点,轻松得多.说到这里,大家应该明白弩手的角色了,在开始训练之前,先说一下几个注意事项.一发箭就是一个金币,后期要多买点箭枝不然不够用,每次传送回去铁匠都有200枝箭卖的.右键是瞄准,但瞄准中自己的速度会变慢,所以我们要盲射,后面有说明的了.要养成习惯,不论什么情况,瞄准射击后一定先右键回复正常视点, 系统是白痴的,如果射击后直接拔刀的话会维持着放大了的视点,非常不便.上弹的时候不能跳,按了跳的话会没反应但会在上弹完结时给你跳一下,非常弱智.上弹中途被任何事情打断(敌人的攻击,或是在有高低差的地方落下等等)都会帮你完成上弹.请记住你走过的地方的地型,因为待一会逃跑的时候会用得上.弩手是一个先甜后苦再甜的职业.好了,要养成一个弩手,首先我们要搞清楚不同时候的目标.一开始我们要做的,是一个普通的战士,目标是先把力量加到50,拿hunting crossbow,会一直用到取得Titan crowbow 为止的.为了最多的经验,一开始当然是先进盗贼,之后海港再进修道院的做法.技能方面, 潜行,开锁2必学,偷窃学不学没所谓,其他点数都投到力量上去,DEX先不用加.这样,在7级就可以拿着hunting crossbow 进修道院,像我就是9级才进修道院,多了的点数投进DEX.进了修遁院后,辛苦的旅程开始了,在DEX不过80之前,你的攻击力明显有点低,要有用技术补救的心理准备.十字弓技能的效果有点鸡肋,不用像近战职业那样注重加技能,反而应该多加点进DEX,尽快到100,之后立即用+DEX药水.苹果和捡到的+力量药水都立即用掉, 升级点数能省就省.这样,在18级左右就能破百的DEX, 到达弩手能威风的时候了.之后就是加力量到90点和升十字弓技能了, 点数不足的话优先升力量.拿到Titan 十字弓的时候,恭喜你了,你应该已经无敌了,不过是指技术层面......瞄准射击相关,当然,要训练一个箭手同时也要训练自己的瞄准能力,上面也说了,盲射对箭手来说是一个重要的能力啊.好,首先我们来看看普通的瞄准, 正常人也不会对这个有问题吧,但比较要注意的一点是,弓箭打到敌人的头部是有攻击加成的(约7分之一左右吧),所以请努力瞄准一点.能使用瞄准的最大限度就如下图所示,差不多这个距离就是安全距离,超过的话就会被攻击,所以请后退或是绕圈圈保持这个距离,或是盲射.盲射是一个箭手最重要的技能了, 因为很多时候站在被追赶的立场,没有那么多时间给你进入瞄准,这时候就要一边后退一边盲射了.大家应该知道,在瞄准下指着一个敌人会在它的头上出现它的名字,盲射也一样, 看到它的名字表示已经很接近了,但还是不肯定会中的.看下面的图,盲射而且敌人的名字出来了.到底什么地方会中呢, 很简单,红线就是看到名字的范围,绿线是能打中的范围.所以名字只是大约的, 实际上会打中的范围只有中间的部分,所以,就可以利用左右两边浮现名字的点估计中间点在哪里了,很简单是不是?多用几次,就会明白箭的方向了.......不过,实战中会盲射的时候,敌人也差不多追到你了吧,目标近了,不要慌,因为上弹慢,请确实瞄准下再盲射,箭是能够打停敌人的.暂时想写的就这么多,不得不说,箭手真是一个蛋痛的职业啊.

应当为名词.英文名应当有创意,展示自己个性,为mase!

B

rise, rose, risenraise, raised, raised.这两个词虽不同义，但因意义上有联系而易被混淆。1．rise是“上升，上涨，起床，站立”的意思。该词含义较广，总的意思是指依次上升，如自然界的日、月、星、雾、云的上升，人体从睡、跪、坐、躺等姿势站立起来等。该词为不及物动词，其过去式与过去分词分别是rose和risen。如：The sun rises in the east and sets in the west.日出于东而落于西。Prices rise every day in those countries.那些国家里的物价天天上涨。The chairman rose from his chair.主席从椅子上站了起来。2．raise用作及物动词，其基本含义是“使升起来，举起”，它的过去分词和过去式都是raised。如：Heavy rains raised the river.暴雨使河水水位升高。We must raise the living standard of the people.我们必须提高人民的生活水平。His speech raised my interest.他的发言激起了我的兴趣。3．与raise常搭配的固定说法有：raise a subject提出一个问题raise one"s voice提高嗓门raise a family养家糊口raise money筹款raise price提高价格raise one"s spirits打起精神

任务怎么做就不说了，攻略多的很。提供下游戏进行思路，首先，去强盗营地，做所有任务，只要不是去修道院就可以。然后去海港，完成7个任务，至少4个任务是偏向秩序的，这样就可以混进修道院当法师。被抓壮丁进去的就不行。这样，以后可以随意出入强盗营地。开始就被抓壮丁则损失很多很多任务、经验、物品等。这样走可以做两头任务，包括见修道院卷轴师的任务可以做两次，还可以学习魔法。做完强盗和海港的任务，路上杀点小怪，可以到13级（需要完成包括探访东边封闭的神庙任务)。先学习潜行、开锁1、力量到30、开锁2、剑术9或者10、采矿、铁匠3、力量尽量高。这样到修道院正好可以14级，力量够拿起锋利双手剑。双手剑+盾的魔法师。哇哈哈战斗技巧：开始在海滩上就可以找到厨刀和盾牌，初期打架都是用防御后攻击的多。闪避攻击不推荐，有时候闪不过去反而不好。打怪尽量找两套连招可以打死的那种。不然就以后再打。中期可以买到召唤骷髅，骷髅前期可以顶，你绕背后攻击。后期你档骷髅前面防御，骷髅攻击后你跟着攻击，99%可以命中敌人。骷髅在后期打蜥蜴人的时候很重要，可以大量减少打怪时间。其他：1、身上要带好铲子、铁镐，很多任务要用，平时也可以挖挖宝藏啥的。扫帚可以扫学院地，勺子可以煮汤，炒锅可以烧烤，铁匠和金匠的锤子可以制作东西，一些工具可以得到动物尸体上的额外战利品。2、战斗时存盘读取会有一定延迟，尽量在安全的地方存盘。不要等画面亮了自己已经躺了。要存盘也要正对敌人且有一定距离。3、潜行去偷东西。对方不走你可以拔刀或者当他面潜行，然后你引开他可以迅速跑回来偷点东西。也可以干脆直接放到对方后用笑话卷轴。后期这个卷轴多的是。4、打没防御的怪可以砍下后迅速左向侧移，然后可以接着砍。被围攻时候尽量不要用。5、喝水可以1次补15HP，初期免费补血。6、不要在墙角（正好把怪卡在三角处）打怪，打到墙角会硬直。但是可以把怪逼到靠边打，你的攻击打到怪，有怪垫着你就不会硬直。7、偷东西只能偷一次只能一个东西，时间到你没偷对方会翻脸。3级偷窃也不知道什么地方学，通关后发现能偷盗的东西以后都会有的。1级偷窃基本没成功的，2级要10LP，没必要。8、弓可以射开关、绞索，没必要用魔法。9、学技能的时候把加能力的装备除下再学。不然要多收钱哦10、跑动时可以加血，换弓箭等。11、开锁的时候，左和右是一样多的。12、每一个章节，商店增加商品，野外动物增加，箱子增加。但是死掉了就不会复活，不存在刷的问题。13、同伴挨打的呻吟都是男的（也许是我的游戏版本问题）14、吸烟、鱼翅、嫖娼可以加经验。鸡蛋可以加经验，吃10个可以加力量1。苹果吃10个可以加力量1。但是吃食物一共只可以加力量5。15、你的骷髅同伴S/L后满血，你传送后会去最近的传送点等待。变身后会在原地等待。16、有用的食物：香料、土豆、洋葱、酒、水、面包、鱼、草药。可以进一步加工。17、有用的物品：翅膀、骨头、壳。其他随意。18、同伴是没有误伤的，但是中立的有。譬如你拉个怪去城里，你打怪的时候不小心打了守卫，守卫会放倒你的。同伴经验共享，中立的则没经验。19、力量+1近战攻击也+1教最多100，能到达的最多200。敏捷对远程有加成。20、尽快把剑练到4，可以用右键攻击，速度快。可以攻击两下跟一下左键正好是重击。5级4连击后反而不是很好。所以要升级5的时候已经是后期，为了单手拿宽剑双手剑。21、时不时找有名字的人对话，也许啥时候就可以得到额外的钱和经验。做任务完成了就可以拿到经验，回复任务还是可以拿到，当间谍告密又可以拿到经验。多对话吧。22、只有主角会中陷阱。你的敌人和骷髅是不会的不过有时候骷髅会在陷阱那里卡住。当然，你靠近了触发了陷阱，你的敌人和骷髅也是会死的。23、开棺材远点，这样，跳东西出来就不会来不及准备，也不会吓一跳。如果看见主角往棺材那里走了，再取消后跑棺材边开。英雄皇冠这个草药比较稀有，找了大概2/3地图，后来打迷宫比较郁闷就没找了：1、修道院门外第一个人边上的角落；2、修道院下村子边上2个野猪处；3、强盗营地出口3个矮人处；4、海港西出口过树林，路边海鸟处；5、XX的儿子（诅咒戒指任务的那个家伙）所在地边上2个野猪处；6、XX的儿子沿路往南，有路边有3个剑蝶处；7、修道院下的绿地河流边群狼处；8、强盗营地下绿地上通往山上的路边；9、左上角往海边去的路上，箱子边；10、海盗蝎子边；11、塔下第三块绿地北方；12、最右下绿地北方路边野猪处；13、修道院下沼泽里；14、打猎任务，猎人说往北走的地方往东走几步（其实往东一样到，不过多打个食人魔）；15、租狼的地方，往吊桥方向2个黑狼处；16、修道院西墓地边；17、右上角河流源头2个食人魔处；18、狼带路找德鲁伊的小桥边；19、南方拿诅咒戒指的洞口。自己拿到了大概20多个，后来懒的记了。力量堆到200不难。血那时候也有个5、6百，敏捷估计要喝药水也可以加到150以上。

一点肉搏心得，给初期被怪虐得很郁闷的孩子们。首先把敌人分为两类：可以格挡的（人型怪，虫子们）和不可以格挡的（动物们）对第一类，首先一直格挡等他攻击（人型怪第一下比较喜欢用横砍（lateralattack），这招用侧闪很难避开），挡住后马上侧闪，然后扁他。一般会有两种结果：（1）这厮继续连招砍向我侧闪前的地方，而被我成功躲开了。这时我在这家伙的侧面而他还露出破绽，自然被我砍。（2）这厮没有继续攻击而是很漂亮的后闪，所以我的攻击也落空了。这时我们要快速收招，最有效的就是‘取消"。活说连招的最后一下伤害最大但是出招慢收招慢，是最容易被怪反击的时候。这时可以用后闪或侧闪取消这招的发出或是快速的收招，基本上没有破绽。对第二类，之前有人讲了就是等怪扑上来的时候侧闪，然后砍（动物没横砍，所以侧闪很安全）。只是注意动物反击很快，所以记住多用‘侧闪取消"快速收招，同时避免动物正对你。好了，就这些。主要是初期的技巧，不过很实用。本人就用力量15的手拿伤害15的剑砍通了沼泽地的竞技场。感觉risen的肉搏比哥3强了不少（哥3的肉搏简直sb）。估计之后学了新的技能应该有更丰富的变化。题外话。游戏还是不错的。很喜欢哥系列的全程语音对话（包括主角），risen也保留了。对话很幽默。剧情还行。任务系统不错，有提示地图所以不会摸不着头脑，但又不会太无聊有些任务也需要自己想想。战斗有质的改善。优化也好了些，读存档很快。哥系列的带入感很强，risen这方面也不错，特别是慢吉他的背景音乐很好听。

第一章时此时由于是初期，最好别乱晃，就呆在Don的营地里，就是Swamp那里，做那里的任务就行了，偷窃和潜行必须学，无论是前期还是后期都很有用。初期累计金钱的方法大家可以参考攻略区中的“初期赚钱小技巧”，还有就是偷东西时要小心点，学了潜行再进屋偷东西吧，否则很容易被人发现。第二章这时已经来到了海港城，这里给个提醒，就是第三个金碗就在JACK旁边的灯塔里面，在横梁上，跳到桶上面，对着前面较矮的横梁再调一下，然后晃一下鼠标，当物品名字显示时点击左键即可，无需用魔法。在海港城中的任务中，有一点很重要，就是选择阵营，这就看大家的喜好了。我是选了Order，因为我看了网上的攻略说选Order才能当法师，至于选择Don能不能学魔法我就不清楚了。第三章可以说已经是比较后期了，这时可以去大地图到处逛逛了，打点厉害的怪，赚赚经验，毕竟有钱了，还得有学习点。这里有一个值得提醒的就是如何找到地下图书馆的那个老头。先去图书馆，在最里面的那堵墙旁有个拉环，反正对着墙按左键就行了，然后墙就会开启，接着就能进入地下图书室。这里有很多书，对wisdom有不少提高。至于如何才能找到老配药师呢？嘿嘿，注意观察墙角或者房间中有没有小洞。发现了，恭喜了，用个变成大蜗牛（我也不知道该怎么叫）的魔法将自己表小，就可以穿过去啦。那个魔法需要蜗牛壳？什么，没有，恭喜了，哈哈，跑去海港城旁边的小岛再找吧找到老头后，老友旁边有一本书，那就是其中一个魔法学徒要你找的illusionscroll的咒语组合第四章这里可以说是我卡的最久的地方了，主要是在寻找5件泰坦神装那里。这里有两个个人觉得需要提醒大家的1在Order的城堡附近的那个（plaintemple）最容易得到，好像是盾，祭台（暂且这样称呼吧）上需要的bust就在祭台正对着的墙上2在瀑布上面的那个temple入口首先_switch_面的石___地下的_子___一_____後_露出大_的第一道石_只剩下__，可以隔着它屈死undeadbeast然後_switch右面的石__去___，__了_石__的一_支道，看地_就明白了_入支道，有一_破的位置可以看到吊_的__因_那_是anti-magicznoe，用箭射那__吧__吊_就_放下_去switch那__左_的石_，走_吊_(大_忘了)，再__另一___就可以__大_的第二____面有__了至于传送石，我只找了这里，小弟给各位几点建议1尽量多做支线任务吧一来可以最大范围的感受游戏的乐趣，二来又可以赚取经验值，何乐而不为？2从高往低处走时，直接用那个反重力魔法，例如我就直接从volcanookeep那里直接飞下山的，还有就是多买几张Speed魔法，当然买了符文更好，无论是平时走路还是打怪都能提高效率3每个人只能偷一次，即使用一次pickpocket，用完会自动保存，所以请各位务必把握好。最后，祝大家尽情享受这款由PiranhaBytes和DeepSilver制作的冒险RPG游戏。

前提是学会了蓄力攻击。我忘记是几级剑术了。在敌人离你攻击范围还差一点就能打到的时候按住左键蓄力攻击。一般都能命中，就算被敌人格挡了他也会因为你的强力攻击硬直，这时继续使用轻攻击。如果对方反应很快躲过了你就用盾牌挡，然后在移动到合适的位置再发动攻击。这招除了不适合对付大金刚、食尸鬼、兽人以外其他怪都能轻松应对。兽人和大金刚都需要相当的操作水平和一定的装备才能正面对抗，食尸鬼后面很弱，只需要2剑就砍死。初期打食尸鬼的方法是，离他远一些，举好盾牌，他会向你扑过来一爪将你的盾牌打的弹开。这时就是你的机会，给他一个3连击。然后再举好盾牌，他可能会放冰魔法，也可能会给你来个3连击。如果他放冰魔法，你就赶紧的再给他来个3连击。如果他3连击了，你就等他连完了再反击。反击多少下？看情况了不过rpg毕竟是rpg如果等级装备技能上去了，怎么打都行。仅供参考，不好勿怪。

刚用法师通关，通关时间按存档记录是40.5小时，考虑到大量的S/L应该有50小时左右。通关等级29级，完成了除传送石任务和阵营冲突任务以外全部任务。总结一下自己的经验心得，以及法师路线的技能学习建议，供后人参考，欢迎大家讨论指正。法师路线，初期不能学魔法，大家都一样，为了省LP学魔法，初期近战会比较吃力；如果技能分配不好（后面我会说怎么学比较好），比如初期为了好过一点学些近战技能，那么中期魔法成型慢，也会比较吃力；但是一旦魔法成型，攻击魔法到比较高的级别，并且可以召唤骷髅了，就比战士类要轻松很多了，前面骷髅牵制，后面火球狂轰，基本可以平趟大部分战斗。想做法师，关键是要自愿加入修道院而不是被征召，所以初期一定要避免去下面几个地方：1、海港城正门；2、修道院及下面的农庄，外面有个叫Stan的人把守，他不会抓你，不过看到他就不要继续往里走了；3、沼泽附近的修道院挖掘营地；4、中间农庄做完杀狼任务时，有人过来说Order的人来巡查了，这时候一定要乖乖的跟着他去谷仓睡觉到天亮。注意这些，法师之路就永远对你敞开！（当然还有盗贼之路。。。）为了获得最多经验，初期建议把盗贼任务和海港任务能做的都做完再加入修道院。首先让Jan带着把沼泽和海港城的路都走一遍，因为经验共享，路上把附近的怪全都引过来让他砍，他很厉害的哦。沼泽山洞门口的几个bogbody也可以引过来，不过里面的ghoul就算了，因为它们跑的比你快。另外沼泽附近修道院的人也不要去惹，反正后面也有相关任务。然后可以考虑先开始做盗贼任务。当然也可以先进海港城做任务等有了密道钥匙再出来。不过盗贼卖的工人服应该是初期最好的衣服。注意沼泽里有好几处可以挖掘的地点，一般附近都有铲子，不要错过了。做到竞技场任务如果觉得比较难打，先去海港城也行。见到theDon之后，旁边的Fincher会给一个率领众盗贼屠杀修道院营地的任务，赚经验的机会来了，把沼泽附近的怪全部杀光吧！注意南边最远到往西海岸去的路口小弟们就不走了，北边不要接近山上那只Ogre，他会秒杀你的小弟的。然后Fincher会给个去探索东部神殿的任务，那边的怪比较厉害，就先去海港城吧。注意从后门进海港城。海港城里面有7个阵营选择的任务，做够4个就可以加入修道院，所以可以有选择的帮盗贼3次。帮Delgado可以学偷窃2，帮Cid可以学开锁2，因为我是先做的海港任务，所以不确定沼泽能不能学到这些技能的2级。帮Weasel可以得到两个敲诈信息，没多大用。帮Toni似乎没有任何好处。帮Lukor和Romanov都是多得一点钱（100-200左右）。把金碗卖给Scordo可以多得很多钱（大约400）。在选定阵营（帮4次）之前，先去Scordo那儿搞到密道钥匙，学了偷窃的话直接偷，没学的话就扁他，不过他比较厉害一点。然后出去把之前没做的盗贼任务全部搞定。帮Order4次以后，Carlos就会叫你去，给他密道钥匙，逮捕Scordo，拿到推荐信，就可以去修道院了。要当法师的话刚进去注意跟Pollas说自己想做Mage。如果前面完成盗贼和海港的全部任务的话，进修道院时应该在10级以上，修道院的任务都很轻松了。

rise常用搭配如下：rise against 起来反抗…rise from 由…复活,从…上升rise to 应付…,上升到...rise with 随着…增长rise解析如下：一、单词读音：英式发音：[rau026az]美式发音：[rau026az]二、单词释义：n. 上升，增长，上涨v. 上升，升起，增长，起立，站起来三、词形变化：第三人称单数：：rises动词过去式：rose动词过去分词：risen动词现在分词：rising四、单词用法：rise的基本意思是指空间位置的上升运动,引申可指数量、价格、需求、生活、费用、体温等的“增加,增长”,是可数名词; 也可指某事物的“兴起,发展”,是不可数名词; 还可指工资的“增加”,是可数名词。 rise还可指“斜坡,高岗”,是可数名词。 五、双语例句：The sun will rise at 6 am tomorrow.明天太阳将在早上6点升起。The price of oil has risen significantly in the past month.过去一个月里，石油价格大幅上涨。She rose from her chair and walked towards the door.她从椅子上站起来，走向门口。The company"s rise to success was due to its innovative products.公司的成功崛起归功于其创新的产品。He rose to fame after winning the singing competition.他在赢得歌唱比赛后声名鹊起。

rise不及物动词 rise-rose-risen eg:the sun rises in the eastraise及物动词 raise-raised-raised eg:raise your hand

rise rose risen

rise过去式是rose，过去分词是risen。I.过去式的构成规则过去式表示过去发生的动作或状态。一般情况下，动词的过去式由原形动词的基本形式加上了-ed或-d来构成，但不同的动词存在着一些特殊变化规则。II.rise的过去式构成动词rise的过去式是rose。它是一个属于不规则动词的一种，没有遵循一般的过去式构成规则，而是通过改变动词的音标来表示过去时态。III.过去分词的构成规则过去分词表示过去发生的动作或状态，并且用作完成时和被动语态等形式。大多数动词的过去分词构成规则与过去式相同，即在基本形式的基础上加上-ed或-d。但也有一些不规则动词的过去分词需要特殊记忆。IV.rise的过去分词构成动词rise的过去分词是risen。与过去式相同，过去分词risen也是一个不规则变化的动词形式，不遵循一般的过去分词构成规则。V.不规则动词的过去式和过去分词变化规则除了rise这类属于不规则动词的例子外，还有其他一些常见的不规则动词形式。这些动词的过去式和过去分词需要特殊记忆，无法根据一般构成规则来变化。VI.总结rise的过去式是rose，过去分词是risen。需要记住，不同的动词在过去式和过去分词的构成上可能存在不规则变化，需要通过学习和记忆来掌握它们的正确形式和用法。熟练掌握动词的各种形式对于准确表达过去发生的动作或状态以及使用完成时和被动语态等形式非常重要。rise的用法rise、raise都可表示“上升，增长”，区别如下：rise是不及物动词，后面不能加宾语。raise是及物动词，后面必须有宾语。rise表示“（太阳、月亮等）从哪个方向升起”时，介词用in不用from。rise不能用于被动结构，其过去分词risen可作形容词，表示“已升起的”。

Risen（锐诺）是一家中国品牌的轮胎制造商。该公司专注于生产和销售各种类型的轮胎，包括汽车轮胎、商用车轮胎、工程机械轮胎等。Risen（锐诺）轮胎以其优质的性能、可靠性和竞争力的价格而闻名。他们致力于提供高性能和持久耐用的轮胎产品，满足不同车辆和道路条件下的需求。请注意，市场上存在许多轮胎品牌，选择适合你的车辆和需求的轮胎时应该进行适当的研究和咨询。

risen是rise的过去分词 rise的过去式是roserise的用法：vi. 上升；增强；起立；高耸 vt. 使…飞起；使…浮上水面 n. 上升；高地；增加；出现raise的用法：vt. 提高；筹集；养育；升起 vi. 上升 n. 高地；上升；加薪 两者的用法其实差不多 只是要注意词组的固定搭配和读音的不同rise是/raiz/ 而raise是/rez/还有不明白的可以追问欧

risen意思是：升起，（数量）增加，休会。一、risen相关短语1、on the rise.在增加；在上涨。2、give rise to.使发生，引起。3、temperature rise.温升；温度上升。4、rise up.上升，起义；叛变。5、rise and fall.涨落；抑扬。6、rise from.从…升起，由…复活。7、rise above.克服；不受…的影响。8、rise in value.价值升高。9、rise again.死而复生。二、例句1、Perhaps it was because his temperature had risen.这或许是因为他体温上升的缘故。2、Mankind commenced in a state of extreme rudeness from which they had risen by slow and successive steps.人类是从极端原始的状况下迈步，而后一步接着一步慢慢上升的。

过去分词是：risen英［＇ru026azu0259n］释义：v.升高；站起来；起床，起立；休会，闭会；反抗（rise的过去分词）adj.（太阳）升起的n.（Risen）（美、瑞典、俄）理森（人名）短语：the moon is fully risen静谧的月光撒落在海面；当月亮爬上晚空；月亮升到天际扩展资料：词语辨析：arise，rise，raise，lift这些动词均有“上升，举起”之意。1、arise书面用词，多用于诗歌或比喻中，具有特殊的修辞色彩。2、rise普通用词，指具体的或抽象的事物由低向高移动。3、raise及物动词，常用词，多指把某物从低处升到高处，有时作引申用。4、lift语气比raise强，指用体力或机械的力举起或抬起某物。

两个发音单词不一样WASP 音标:/wɑsp/ 本意是 黄蜂,现在多指代表美国主流价值观的人,通俗来说是指上层社会的白人 crisps 音标:/krɪsps/ 作名词是 油炸薯片,作形容词是 脆的 酥的. wasp读 哇斯普crisps读 克瑞斯普斯 纯手写,望采纳!

http://zhidao.baidu.com/question/5218081.html?si=3

歌曲名:Lottery歌手:Chris Brown专辑:Chris Brown / ExclusiveLotteryC.BIf I gotta guess it I willI think it"s 310-143-1437Baby if I press it then will I get to you?Let me know, what is your number girl?Every minute is worth a dime of spendingYou can change my whole life if you wit itI chart, one in a billionMy heart, I bet on you if I just get your numberGirl if I put your number in my phoneI hope that it"s the right oneGirl If I did thenI"m goin in tonight honIt could mean a lot for meI think I done hit the Lottery, baby yeahThink I hit the Lottery, baby yeahGet on this investment cuz if you bet on meThen we can go anywhere in love it"s nothingIf I leave a message I hope that it comes throughLet me know, if I"m the one girlEvery minute is worth a dime of spendingYou can change my whole life if you wit itI chart, one in a billionMy heart, I bet on you if I just get your numberGirl if I put your number in my phoneI hope that it"s the right oneGirl If I did thenI"m goin in tonight honIt could mean a lot for meI think I done hit the Lottery, baby yeahThink I hit the Lottery, baby yeahThink I hit the Lottery...If you choose me (Girl I promise)If you choose (I"ll be honest)If you choose me (Won"t abuse it)If you choose meAnd if you choose meAnd if you chooseAnd if you choose meAnd if you choose (I"mma love you)Girl if I put your number in my phoneI hope that it"s the right oneGirl If I did thenI"m goin in tonight honIt could mean a lot for meI think I done hit the Lottery, baby yeahThink I hit the Lottery, baby yeah(Can I get your number?)Girl let me get that number, hit the jackpot girlYour like the Lottery, your like the Lottery yeahGirl let me get that number, hit the jackpot girlYour like the Lottery, your like the Lottery yeahGirl let me get that number, hit the jackpot girlYour like the Lottery, your like the Lottery yeahGirl let me get that number, hit the jackpot girlYour like the Lottery, your like the Lottery yeahhttp://music.baidu.com/song/10418457

希望我的时候,您的梦想工作是一个梦, 不过是场梦;现在我醒来的时候, 超过为孤儿,穿,旧的, 对于一个梦想的缘故。 我的琴音变为悲音,我挂在树上, 一个漂亮的一个湖泊。 我有我的沉默,榨和snapt竖琴 对于一个梦想的缘故。 撒谎,撒谎,我仍然心碎。 我沉默的心中,安静地躺在和休息。 生命,和世界,和我自己,都改变了 对于一个梦想的缘故。

什么是CRISPR/Cas9？ CRISPR----Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats 是在细菌和古细菌中广泛存在的成簇的、有规律的、间隔的短回文重复序列。 07年，发现细菌可以用CRISPR系统抵抗噬菌体的入侵；08年，发现细菌的 CRIS

作为美国Movement Lifestyle 编舞工作室创始人，Shaun Evaristo不仅仅是一个优秀的舞者，他还是全球新生代先锋编舞师领袖人物，全球最才华绝伦的编舞师之一。 曾与Omarion,Vanessa Hudgens和Justin Bieber同台表演，为J.Lewis, NLT, Travis Garland以及韩国著名组合Big Bang, 2NE1, Se7en等编舞。 Shaun&Bigbang太阳 Shaun&Justin Bieber 他和 Parris Goebel 一样是YG Entertainment的御用编舞师，也是Bigbang早期的编舞师，大家熟知的《wedding dress》的编舞就是Shaun的作品。 就在去年我们的鹿晗新专辑Reloaded的所有MV中的舞蹈还有巡回演唱会的编舞全是Shaun的作品。（有点意思这首歌的编舞就是shaun的作品哦） 最厉害的舞蹈可以是炸得让人头皮发麻，也可以是看似随意但深藏功力，一切动作都随心所欲，信手拈来浑然天成。让我们来看看Shaun的舞蹈，到底是如何的畅顺与自然。（ 点击此处查看视频 ） 舞蹈，是发自内心的热爱 所有的舞蹈表达之所以那么自然和流畅，这一切都是因为Shaun从小就热爱跳舞。 大约在Shaun5岁的时候，看到电视上Michael Jackson在跳舞便跟着模仿，后来还和家里同辈的小孩一起组成了“舞团”每周五都在家碰面一起跳舞，而妈妈则会给他们煮美味的意面。 这样美好的画面一直陪伴他长大，后来渐渐越来越多人加入他们的舞团，参加了演出获得了一些名气。在父母亲的支持下，在18岁那年，Shaun决定把舞蹈成为自己终身为之奋斗的梦想。 在舞蹈上不断创新与探索 从在车库里练舞到创建第一个舞团Gen2，再加入The Company，Shaun出于热爱，在舞蹈这个行业年复一年地打拼，最后他来到了美国LA，这个让他梦想茁壮成长的大舞台继续打拼：和韩国YG Entertainment合作，和全球各巨星合作，进行各种舞蹈授课，编舞，裁判等等。而后，他和他的兄弟CJ（也是世界顶级的编舞师）一起创办了Movement Lifestyle，正式开展了自己的舞蹈事业。 Movement Lifestyle 作为一家公司，Shaun并没有把名字改为Movement Managenment或者Movement X 之类的名字，是他认为Movement Lifestyle不仅仅是一家公司，每个人都有自己的生活方式，在这里跳舞的人有可能是DJ，设计师，画家或者是舞者，他们跳舞的目的并不相同，来到这里，只是想做他们想做的，不一定是称之为舞蹈的事情，也许仅仅只是一种生活方式的表达而已，这是超越舞蹈本身的存在。 就像Nike始于跑步一样，Movement Lifestyle始于舞蹈，却又超越舞蹈。 Shaun身上有一种令人难以言喻的气质，琅妹称它为纯粹。因为每一个上过Shaun课的人都会非常感激他，都会说是Shaun改变了自己对舞蹈的理解和看法，甚至是感动。而Shaun本人却很是谦虚，他认为我只是分享快乐而已， We just dance! 但就是因为Shaun纯粹的气质，总能让课堂充满欢乐，当你在舞蹈中寻找到快乐，也许你就会在不知不觉中突破了自己的瓶颈了。 就连他的好兄弟CJ都曾说过，自己在舞蹈上深受Shaun的影响。 Shaun不仅仅是一个很厉害的舞蹈家和编舞师，他更是舞蹈行业的探索者， 发展了以歌词、感情表达为主题的Hip hop编舞，可以说是影响了舞蹈风格发展的舞者，开拓了舞蹈和商业有机结合的新方式 ，让很多才华的舞者得到更广阔的生存空间和得以更好地发展和传播。 他就像舞蹈行业的开荒牛一样，不断地学习，尝试，创新。他证明给世人看， 舞蹈的编排不只是用来做商业表演，它更是一种艺术的表现方式。 Shaun常感恩自己过往的经历，无论好坏，因为他的编舞灵感，基本上都是来源于过往的生活经历。经历越多，在创作时就越深有体会，就可以在不同的情绪和认知当中选择，融入到舞蹈动作当中。 “Always give yourself 10% chance.” 当别人问Shaun是如何设计编舞的时候，他总会说这句话。他认为设计和创作达到90%便可以，留下10%让它“听天由命”。也许100%的编排能让你把一切掌控在手中，但总会缺少点什么，留给自己10%的余地让其自由发挥，会发现更多不一样的惊喜。个人的感悟是非常重要的，留下10%的空间让自己，比起跟着计划走更来得深刻，也能获得更多的成长。 Shaun给新生代舞者的建议 新生代的舞者拥有很美好的未来，但你们现在脚下的路，都是从前的人们所构筑的，如果你不曾了解过去，你将无法创造你的未来。 SOUL.D小提示： 感恩前人的努力，新生代舞者应该继续加油，不断创新。

Something has changed within meSomething is not the sameI"m through with playing by the rulesOf someone else"s gameToo late for second-guessingToo late to go back to sleepIt"s time to trust my instinctsClose my eyes: and leap! It"s time to tryDefying gravityI think I"ll tryDefying gravityKiss me goodbyeI am defying gravityAnd you wont bring me down! I"m through accepting limits”cause someone says they"re soSome things I cannot changeBut till I try, I"ll never know!Too long I"ve been afraid ofLosing love I guess I"ve lostWell, if that"s loveIt comes at much too high a cost!

《Harrison Bergeron（哈里森·伯格朗）》是美国“黑色幽默”小说家Kurt Vonnegut（冯尼格特）的一篇短篇小说。一般被认为是一篇反乌托邦的、讽刺绝对平等的作品

友邦加惠定期寿险附加合同Enhanced Term Rider，简称ETR。友邦加惠定期寿险附加合同ETR第一条 附加合同的订立和构成友邦附加加惠定期寿险》合同(以下简称本附加合同)，依主保险合同(以下简称主合同)投保人的申请，经本公司同意而订立。主合同的条款也适用于本附加合同，若主合同与本附加合同条款互有冲突，则以本附加合同为准。若本附加合同的承保事项不在投保单上载明或保险合同上批注，本附加合同不产生效力。本附加合同英文全称为Enhanced Term Rider，简称ETR。第二条 投保年龄本附加合同接受的被保险人的投保年龄为十八周岁至五十五周岁。第三条 保险责任于本附加合同有效期内，若被保险人身故，本公司将按保险单载明的本附加合同的基本保险金额给付保险金予健在的身故保险金受益人，除另有特别安排外，若所有身故保险金受益人先于被保险人身故，则本附加合同应付的身故保险金将归于被保险人的遗产；若被保险人发生残废，本公司将按保险单载明的本附加合同的基本保险金额给付保险金予被保险人。本附加合同所称的残废，是指被保险人在本附加合同有效期内发生下列情况之一者：(1)双目永久完全失明的(注1)；(2)两上肢腕关节以上或两下肢踝关节以上缺失的；(3)一上肢腕关节以上及一下肢踝关节以上缺失的；(4)一目永久完全失明及一上肢腕关节以上缺失的；(5)一目永久完全失明及一下肢踝关节以上缺失的；(6)四肢关节机能永久完全丧失的(注2)；(7)咀嚼、吞咽机能永久完全丧失的(注3)；(8)中枢神经系统机能或胸、腹部脏器机能极度障碍，终身不能从事任何工作，为维持生命 必要的日常生活活动，全需他人扶助的(注4)。注：(1)失明包括眼球缺失或摘除、或不能辨别明暗、或仅能辨别眼前手动者。最佳矫正视 力低于国际标准视力表0.02，或视野半径小于5度，并由保险公司指定有资格的眼科医师出具医疗诊断证明。(2)关节机能的丧失系指关节永久完全僵硬、或麻痹、或关节不能随意识活动。(3)咀嚼、吞咽机能的丧失系指由于牙齿以外的原因引起器质障碍或机能障碍，以致不能作咀嚼、吞咽运动，除流质食物外不能摄取或吞咽的状态。(4)为维持生命必要之日常生活活动，全需他人扶助系指食物摄取、大小便始末、穿脱衣服、起居、步行、入浴等，皆不能自己为之，需要他人帮助。所谓永久完全系指自以上情况发生之日起经过一百八十天的治疗，机能仍然完全丧失，但眼球摘除等明显无法复原之情况，不在此限。第四条 保险费的缴付本附加合同的保险费按每个保险单年度计算，但投保人可选择以年缴、半年缴、季缴或其它由本公司同意的方式缴付保险费。除趸缴外，其它缴费方式的缴费日期同主合同。第五条 保险责任的开始若本附加合同与主合同同时投保，则以主合同的生效日为本附加合同的生效日。若投保人于主合同有效期内申请附加本附加合同并缴付应缴的保险费，且本公司同意承保，则本附加合同生效，本附加合同的生效日则以批注所载的生效日期为准。第六条 责任免除因下列原因之一而导致被保险人身故或残废，本公司不负给付保险金的责任：(1)投保人、受益人故意造成被保险人身故或残废；(2)被保险人服用、吸食或注射毒品；(3)被保险人在生效日起两年内或最后复效日起两年内(以较迟者为准)，自杀或自残；(4)被保险人酒后驾车、无照驾驶或驾驶无有效行驶证的机动交通工具；(5)被保险人因从事非法、犯罪的活动或因拒捕而导致身故或残废；(6)被保险人患艾滋病(AIDS)或感染艾滋病病毒(HIV)期间(上述病症的定义，应按世界卫生组织所订的定义为准。若在被保险人的血液样本中发现上述病毒或其抗体，则认定被保险人已感染该病毒)；(7)被保险人在本附加合同有效期内，因原子能或核能装置所造成的爆炸、灼伤或辐射导致身故或残废；(8)被保险人因战争、军事行动、暴乱或武装叛乱导致身故或残废。因上列原因导致被保险人身故或残废，本公司将按退保处理；但唯第(5)项原因导致身故或残废，且投保人未交足两年保险费的，本公司将不退还保险费或现金价值。第七条 借款本附加合同的现金价值不作借款处理。第八条 退保投保人可于本附加合同有效期内随时向本公司申请退保，本公司将根据本附加合同现金价值表的约定向投保人支付退保金额。若主合同中止效力，则本附加合同同时中止效力。若投保人自中止效力后两年内未提出复效书面申请，则本附加合同将作退保处理，本公司将根据本附加合同现金价值表的约定向投保人支付退保金额。若投保人申请主合同退保或将主合同变更为减额付清保险时，本附加合同将作退保处理，本公司将根据本附加合同现金价值表的约定向投保人支付退保金额。第九条 附加合同转换的权利于本附加合同有效期内，投保人可向本公司申请将本附加合同转换为当时可以投保的寿险主合同，转换后的寿险主合同的基本保险金额等同于本附加合同的基本保险金额。转换后的寿险主合同将以转换日为合同生效日，其保险费将根据被保险人申请转换时的年龄所对应的该寿险主合同的费率计算。第十条 附加合同效力终止发生下列情况之一时，本附加合同即时终止：(1)投保人于本附加合同有效期内向本公司申请退保；(2)主合同终止效力、豁免保险费或变更为减额付清保险；(3)被保险人身故或发生本附加合同所约定的残废；(4)本附加合同的第 个保险单周年日；(5)依本附加合同第九条转换为新寿险主合同。第十一条 残废证明被保险人发生本附加合同所约定的残废，索赔申请人应尽速通知本公司，并提供保险合同、被保险人的户籍证明、身份证及以下任何一项残废证明或资料：(1)三级或三级以上医院出具的与残废有关的证明或资料；(2)司法机关出具的与残废有关的证明或资料；(3)其他本公司认可的残废证明或资料。 ．若本公司依照本附加合同的约定，认为有关的证明或资料不完整者，可通知索赔申请人补充提供有关的证明或资料。

《骏马奥斯温4》百度网盘高清资源免费在线观看：链接: https://pan.baidu.com/s/1PqBghetW5SqjypuBme3wVg 提取码：sk47《骏马奥斯温4》是特丽萨·冯·埃尔兹执导的一部德国家庭片，于2019年2月18日在慕尼黑首映。讲述无论飓风与米卡相隔多远，他们的心永远紧紧相连。这回，有位特别的女孩走进他们的生命，展开新的冒险。米卡的朋友芬妮在社工实习时，遇到了不受控制的亚希。为了帮助亚希并避免她被囚禁在儿童之家，芬妮带她前往凯登巴赫，进行特别的「马术治疗」。如果资源不正确，或者版本不正确，欢迎追问

可以这样理解：pathological gambling” involves persistent,recurring and uncontrollable pursuit of money 病态赌博是持久性，经常性和不可控的追求钱pathological gambling” involves persistent,recurring and uncontrollable pursuit of the thrill of taking risks in quest of a windfall.病态赌博是持久性，经常性和不可控的寻求承担风险意外收获的一种快感。两者都有， 但是 pursuit （less ）of money （ than ）of the thrill of taking risks。。。（意思两者比较，除了追求钱，更多的是追求快感。。。追求快感多过追求钱）** 猫迷英语专家团提供【Real。American。English。】

酒名： LEONARDO RISERVA CHIANTI 2003酒厂： LEONARDO 种类： Red Wine(红葡萄酒) 国家： IT(意大利) 产地：意大利-托斯卡纳-吉安蒂Chianti Tuscany, Italy 年份： 2003 酒精度： 13% 容量： 750ml 葡萄品种： -Sangiovese 价格：$21.95 国外的价格，22美元左右。进口后会在300元以上吧。Leonardo Chianti Riserva is made in the hills surrounding the ancient town of Vinci, birthplace of Leonardo di Vinci. This fruit-forward and round Chianti is elegant. It is the ideal wine to enjoy alongside pasta with tomato sauce and fresh herbs.该酒因产自达芬奇的出生地而得名。果香优雅，适合于搭配番茄酱意面。

歌曲名:Vanity歌手:Christina Aguilera专辑:BionicI"m not cocky, I just love myselfBitch!--- Christina Aguilera - Vanity - {Bi~ON~ic} (2010) ---Mirror mirror on the wallWho"s the flyest bitch of them all?Never mind i am (that bitch is so fuckin" pretty)Yeah I am (If I were her I would kiss me) Muah. Hey!Mirror mirror on the wallHit up prince charming tell him give me a callNever mind screw him (cuz I found somebody better)Never mind screw him (I make myself so much wetter)Everyday I see myself, I Love me even more (More)It"s me I adoreAin"t nobody got shit on me, I"m the best for sureMy cherie amorV is for vanityEverytime I look at meI turn myself on yeah, I turn myself on yeahV is for vanitythank you mom and daddy cuzI turn myself on yeah, I turn myself on yeah(Get into it)Mirror mirror on the wallWho"s the sexiest of them all?Never mind I am (Oh she"s so hot and sexy)Yeah I am (no wonders she"s so cocky)Ow!Mirror mirror on the wallThey call me stuck upBut I"m not at allNever mind I am (I am)(It"s not my fault I"m the shit)Yeah I am (I am)(and I"m a bad ass bitch)Everyday I see myself, I Love me even more (More)It"s me I adoreAin"t nobody got shit on me, I"m the best for sureAre you ready for me?V is for vanityEverytime I look at meI turn myself on yeah, I turn myself on yeahV is for vanitythank you mom and daddy cuzI turn myself on yeah, I turn myself on yeahGet into itNo regretsGet into itNo apologiesAnd now take myself to be my lawfully wetted bitchAll the girls say, yeah I"m vain, so what, so whatAll the boys say, yeah I"m vain, so what, so whatAll the girls say, yeah we"re vain, so what, so whatEverybody says, yeah were vain, so what and so whatV is for vanityEverytime I look at meI turn myself on yeah, I turn myself on yeahV is for vanitythank you mom and daddy cuzI turn myself on yeah, I turn myself on yeah(Get into it)If the shoe fits, wear it bitchIf the shoe fits, wear it bitchIf the shoe fits, wear it bitchRead my lips (muah!)I"m a vain bitch (hey!)HeeeeeeeeeeeeeeeeeyCan"t love no one elseTill you love yourselfAnd if they don"t like itTell "emGet in lineAnd kiss your ass bitch (muah!)Love you baby (au revoir)That"s rightLet"s go out like thisMirror mirror on the wallWho"s the flyest of them allIt"s me, bow down get on your kneesWhere"s my queensWho reign supremeLet me hear you screamWhooo!And the legacy lives onGoing strongLet us not forgetWho owns the throne?(Max) You do mommy!http://music.baidu.com/song/52224770