na

你的问题，，无外乎这两种情况。第一，系统是ghost版win7，精简掉了部分输入法，可以打出日语，但是却是按照键盘输入排列的半角片假名 即输入 abc 出来的是 ? ? ? 第二，系统是安装版，可以正常输入，但是你不小心按到了输入条上的KANA按钮，按回来就可以了。

彼女が一番少女なのか？歌词：kana作词：さつき が てんこもり(studio皐)编曲：さつき が てんこもりサークル：ふぉれすとぴれおアルバム：T★GIRLS.02原曲：[东方红魔郷]U.N.オーエンは彼女なのか？相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏画着双重大的圆圈一个接一个合奏好きよ好き闻いて最期の最期まで临终的临终听到所喜的所喜同音异义と吐き舍てたって接触说话同音异议，舍弃与人接触欲望を埋めていく连欲望也一并埋没相なる二重の丸顺缲り并んで合奏画着双重大的圆圈一个接一个合奏好きよ好き闻いて心の中まで心中听到所喜的所喜同音异义と吐き舍てたって接触说话同音异议，舍弃与人接触いなくなっていくだけ也不仅仅是那样哦前途多难永远に前途一直多难疎外感间隔混沌空虚疏远感间隔混沌空虚カウントダウンチクタクと刻み込むこだまだけ听到的只有时间的回声数え切れない几つもの夜数不清的夜晚揺らぎ流れ生まれ消えてしぶきを上げて生命如飞沫般掀起又消失抑えきれない空っぽ记忆不曾间断的空白记忆巡り浮いて回り続ける漂浮在身边继续回转相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏画着双重大的圆圈一个接一个合奏好きよ好き闻いて最期の最期まで临终的临终听到所喜的所喜同音异义と吐き舍てたって接触说话同音异议，舍弃与人接触欲望を埋めていく连欲望也一并埋没意中眼中上々に意中眼中无可挑剔おだやかな记忆レスで平静的虚无记忆カウントダウンチクタクと刻み込むこだまだけ听到的只有时间的回声辿りつけないとめど无い暗走向无法抗拒的无尽黑暗思い耽り惑う笑颜一切无くて思考沉耽困惑笑容一切没有今も心は闭じ込めたまま如今也锁上了心灵昙り沈み眠り続ける在阴霾中继续沉眠二重の丸顺缲り并んで合奏双重大的圆圈一个接一个合奏好きよ好き闻いて心の中まで心中听到所喜的所喜同音异义と吐き舍てたって接触说话同音异议，舍弃与人接触いなくなっていくだけ也不仅仅是那样哦相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏画着双重大的圆圈一个接一个合奏好きよ好き闻いて最期の最期まで临终的临终听到所喜的所喜同音异义と吐き舍てたって接触说话同音异议，舍弃与人接触欲望を埋めていく连欲望也一并埋没

大写字母和假名 kana是日语仮的罗马音

质粒没构好呗 拿个确定有卡纳抗性的空质粒试试 看是不是感受态问题

最近刚入手一个白色KANA，外观出色，性能中等！左右键微动偏硬。适合FPS游戏，玩狙非常不错；用来玩...至于鼠标握感我觉得习惯了就好，对于任何鼠标都一样。以

是的，简介是这样写的新语联盟cv，复旦大学留声社社长。现隶属奇响天外配音工作室，代表作有《原神》空、《山海镜花》金乌拾郎。国内比较喜欢的配音演员是刘校妤和赵路。

1、首先鹿喑出生于世书家庭，其父母都是大学老师。2、其次鹿喑从小便对学习有很大的兴趣。3、最后在其刻苦努力下考入复旦大学。

复旦大学留声社社长。现隶属奇响天外配音工作室，代表作有《原神》空、《山海镜花》金乌拾郎。

彼女が一番少女なのか？歌词：kana作词：さつき が てんこもり(studio皐)编曲：さつき が てんこもりサークル：ふぉれすとぴれおアルバム：T★GIRLS.02原曲：[东方红魔郷]U.N.オーエンは彼女なのか？相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏sou naru nijuu no ooki i maru jun kuri naran de gassou好きよ好き闻いて最期の最期までsuki yo suki kii te saigo no saigo made同音异义を吐き舍てたって接触douon igi wo haki sute tatte sesshoku欲望を埋めていくyokubou wo ume teiku相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏sou naru nijuu no ooki i maru jun kuri naran de gassou好きよ好き闻いて心の中までsuki yo suki kii te kokoro no naka made同音异义を吐き舍てたって接触douon igi wo haki sute tatte sesshokuいなくなっていくだけinakunatteikudake前途多难永远にzentotanan eien ni疎外感间隔混沌空虚sogaikan kankaku konton kuukyoカウントダウンチクタクとkauntodaunchikutaku to刻み込むこだまだけkizami komu kodamadake数え切れない几つもの夜kazoe kire nai ikutsu mono yoru揺らぎ流れ生まれ消えて飞沫をあげてyura gi nagare umare kie te shibuki woagete抑えきれない空っぽの记忆osae kirenai karappo no kioku巡り浮いて回り続けるmeguri ui te mawari tsuduke ru相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏sou naru nijuu no ooki i maru jun kuri naran de gassou好きよ好き闻いて最期の最期までsuki yo suki kii te saigo no saigo made同音异义を吐き舍てたって接触douon igi wo haki sute tatte sesshoku欲望を埋めていくyokubou wo ume teiku意中眼中上々にichuu ganchuu joujou niおだやかな记忆レスでodayakana kioku resu deカウントダウンチクタクとkauntodaunchikutaku to刻み込むこだまだけkizami komu kodamadake辿りつけないとめど无い暗tadori tsukenaitomedo nai yami思い耽り惑う笑颜一切なくてomoi fukeri madou egao issai nakute今も心は闭じ込めたままima mo kokoroha tojikome tamama昙り沈み眠り続けるkumori shizumi nemuri tsuduke ru（わんu30fbつーu30fbさんu30fbし！）( wan . tsu ^ . san . shi !)相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏sou naru nijuu no ooki i maru jun kuri naran de gassou好きよ好き闻いて心の中までsuki yo suki kii te kokoro no naka made同音异义を吐き舍てたって接触douon igi wo haki sute tatte sesshokuいなくなっていくだけinakunatteikudake相なる二重の大きい丸顺缲り并んで合奏sou naru nijuu no ooki i maru jun kuri naran de gassou好きよ好き闻いて最期の最期までsuki yo suki kii te saigo no saigo made同音异义を吐き舍てたって接触douon igi wo haki sute tatte sesshoku欲望を埋めていくyokubou wo ume teiku

na i mo no ne da ri

有个Kanon模型KANO 模型是东京理工大学教授狩野纪昭(Noriaki Kano)发明的对用户需求分类和优先排序的有用工具。

容易。根据查询生物之家官网显示，随着继代培养的时间延伸，污染率不断增加，培养基萌芽特别容易污染，避免污染是至关重要的，所以kana抗性培养基容易被污染。

没有对象。鹿喑kana是某网站的up主，是奇响天外的配音演员，粉丝已有72万人，本人在其网站动态说自己是“单身狗”。情感攻略绿茶鉴定指南119.7万人浏览过超全面实用情话33万人浏览过亲家见面那些事儿40.1万人浏览过血型性格大揭秘157.2万人浏览过30+女子情感图鉴145.2万人浏览过查看全部攻略— 为你推荐更多精彩内容 —

日语输入法一般是用romaji（罗马音），大多数人用的都是罗马音的日语输入法，比较简单，初学者也比较适合用，符合中国人的习惯。日本人大多数用的也是罗马音输入法，毕竟比较简单，输入起来方便，稍微学习一下就能熟悉。而假名输入法类似五笔输入法，比较难，需要去记，还要多练习，所以用的人比较少。扩展资料：日语标点符号的输入：1、句号——“。”（句点、まる） 对应按键：主键盘上的“.”（注意小键盘上的“.”在Num状态下为小数点。）2、逗号—— “、”（_点、点）日语的逗号有两种不同的写法：竖写时写作“、”（_点、点）；横写时多写作“，”竖写时对应按键为“,”横写时，对应按键为“,”外加汉字切换按钮（在IME中默认按键为“空格”），选择“コンマ”输入3、单引号——“「 」”（かぎかっこ、かぎ）对应按键左引号为“[”，右引号为“]”4、双引号——“『』”（二重かぎかっこ、二重かぎ）输入方法：先输入单引号但不要确定（即不按回车），然后按下汉字切换按钮（在IME中默认按键为“空格”），选择“二重かぎカツコ”输入。5、破折号——“—”（ダッシュ）对应按钮：先按“-”（主键盘），然后按下汉字切换按钮（在IME中默认按键为“空格”），选择“ダッシュ”输入。6、长音符号——“_”（长音）这个问得较多，因为很多外来词诸如“ア_ク”（Arc，电弧）因为长音会用到这个符号，它的输入方法其实很简单，直接按破折号对应的“-”键输入即可。

　　すぐ逢(あ)えるからって君(きみ)の言叶(ことば)は　　sugu ae rukaratte kun no kotoba ha　　私(わたし)に吐(は)く初(はじ)めての嘘(うそ)ね。　　watashi ni haku hajimete no uso ne .　　切(き)れてしまいそうな小指(こゆび)の糸(いと)辿(たど)って　　kire teshimaisouna koyubi no ito tadotte　　君(きみ)のいるその场所(ばしょ)に、いけるなら。　　kimi noirusono basho ni , ikerunara .　　人(ひと)の波(なみ)の中(なか)に私(わたし)だけが置(お)き去(ざ)り　　hito no nami no nakani watashi dakega okizari　　迫(せま)りくる夕暗(ゆうやみ)、独(ひと)り心细(こころぼそ)くて　　semari kuru yuuyami , hitori kokorobosoku te　　君(きみ)のくれた香(かお)りを身(み)に着(つ)けて歩(ある)いた。　　kimi nokureta kaori wo mini tsuke te arui ta .　　そうしたら君(きみ)が気(き)づいてくれるって、そんな気(き)がして。　　soushitara kimi ga kidu itekurerutte , sonna kiga shite .　　すぐ逢(あ)えるからって君(きみ)の言叶(ことば)は　　sugu ae rukaratte kimi no kotoba ha　　私(わたし)の为(ため)だけに吐(は)く嘘(うそ)ね。　　watashi no tameda keni haku uso ne .　　溶(と)けてしまいそうな小指(こゆび)の糸(いと)辿(たど)って　　toke teshimaisouna koyubi no ito tadotte　　君(きみ)のいるその场所(ばしょ)に、いきたいよ。　　kimi noirusono basho ni , ikitaiyo .　　涙(なみだ)のような雨(あめ)、私(わたし)だけに沁(し)みてる　　namida noyouna ame , watashi dakeni shimi teru　　君(きみ)のくれた指轮(ゆびわ)を身(み)に饰(かざ)って歩(ある)いた。　　kimi nokureta yubiwa wo mini kazatte arui ta .　　そうしたら君(きみ)が駆(か)けてきてくれるって、そんな気(き)がして。　　soushitara kimi ga kake tekitekurerutte , sonna kiga shite .　　すぐ逢(あ)えるからって君(きみ)の言叶(ことば)は　　sugu ae rukaratte kimi no kotoba ha　　私(わたし)だけに吐(は)く优(やさ)しい嘘(うそ)ね。　　watashi dakeni haku yasashii uso ne .　　どこまでも淡(あわ)い小指(こゆび)の糸(いと)辿(たど)って　　dokomademo awai koyubi no ito tadotte　　君(きみ)のいるその场所(ばしょ)に、いけるなら　　kimi noirusono basho ni , ikerunara　　いきたいよ。　　ikitaiyo .　　ほろり落(お)とした涙(なみだ)粒(つぶ)は心(こころ)を濡(ぬ)らして　　horori oto shita namida tsubu ha kokoro wo nura shite　　水(みず)溜(たま)りのような想(おも)いを流(なが)していく　　mizutamari noyouna omoi wo nagashi teiku　　君(きみ)がくれた言叶(ことば)を身(み)に缠(まと)って歩(ある)いた。　　kimi gakureta kotoba wo mini matotte arui ta .　　そうしたら君(きみ)の傍(そば)に居(い)られるって、そんな気(き)がして。　　soushitara kimi no bou ni ira rerutte , sonna kiga shite .　　すぐ逢(あ)えるからって君(きみ)の言叶(ことば)は　　sugu ae rukaratte kimi no kotoba ha　　私(わたし)を支(ささ)える优(やさ)しい嘘(うそ)ね。　　watashi wo sasae ru yasashii uso ne .　　谁(だれ)にも见(み)えない小指(こゆび)の糸(いと)辿(たど)って　　dare nimo mie nai koyubi no ito tadotte　　君(きみ)のいるその场所(ばしょ)へ　　kimi noirusono basho he　　待(ま)っているからって私(わたし)の笑颜(えがお)　　matte irukaratte watashi no egao　　君(きみ)に吐(は)いた最初(さいしょ)の嘘(うそ)よ。　　kimi ni hai ta saisho no uso yo .　　二人(ふたり)を繋(つな)げる赤(あか)い糸(いと)を辿(たど)って　　futari wo tsunage ru akai ito wo tadotte　　君(きみ)のいるその场所(ばしょ)に、いきたいよ。　　kimi noirusono basho ni , ikitaiyo .　　会(あ)いたいよ。　　ai taiyo .

いっせーのーせでふみこむごーるらいんぼくらはなにもなにもまだしらぬいっせんをこえてふりかえるともうないぼくらはなにもなにもまだしらぬうだってうだってうだってくきらめくあせがこぼれるのさおぼえてないこともたくさんあっただろうだれもかれもしるえっとだいじにしてたものわすれたふりをしたんだよなにもないよわらえるさいっせーのーでおもいだすしょうねんぼくらはなにもかもをほしがったわかってるってあぁきづいてるってとけいのはりはひびはとまらないうばってうばってうばってくながれるときときおくとおくとおくとおくになっておぼえてないこともたくさんあっただろうだれもかれもしるえっとおそれてまるごとしらないふりをしたんだよなにもないよわらえるさひらりとひらりとまってるこのはのようにゆれることなくしょうそうなくすごしていたいよおぼえてないこともたくさんあったけどきっとずっとかわらないものがあることをおしえてくれたあなたはきえるきえるしるえっとだいじにしたいものもっておとなになるんだどんなときもはなさずにまもりつづけようそしたらいつのひにかなにもかもをわらえるさひらりとひらりとまってるこのはがとんでいくWO...

零下20度。溶解100毫克卡那霉素于足量的水中，最后定容至10毫升。分装成小份贮存。常以10终浓度添加于生长培养基。

なが　とき　くず　(白色)しろ　わたし(我)　はな(花)　かな　くろ(黑色)　なに(什么)

日语输入法一般是用romaji（罗马音），大多数人用的都是罗马音的日语输入法，比较简单，初学者也比较适合用，符合中国人的习惯。日本人大多数用的也是罗马音输入法，毕竟比较简单，输入起来方便，稍微学习一下就能熟悉。而假名输入法类似五笔输入法，比较难，需要去记，还要多练习，所以用的人比较少。扩展资料：日语标点符号的输入：1、句号——“。”（句点、まる） 对应按键：主键盘上的“.”（注意小键盘上的“.”在Num状态下为小数点。）2、逗号—— “、”（_点、点）日语的逗号有两种不同的写法：竖写时写作“、”（_点、点）；横写时多写作“，”竖写时对应按键为“,”横写时，对应按键为“,”外加汉字切换按钮（在IME中默认按键为“空格”），选择“コンマ”输入3、单引号——“「 」”（かぎかっこ、かぎ）对应按键左引号为“[”，右引号为“]”4、双引号——“『』”（二重かぎかっこ、二重かぎ）输入方法：先输入单引号但不要确定（即不按回车），然后按下汉字切换按钮（在IME中默认按键为“空格”），选择“二重かぎカツコ”输入。5、破折号——“—”（ダッシュ）对应按钮：先按“-”（主键盘），然后按下汉字切换按钮（在IME中默认按键为“空格”），选择“ダッシュ”输入。6、长音符号——“_”（长音）这个问得较多，因为很多外来词诸如“ア_ク”（Arc，电弧）因为长音会用到这个符号，它的输入方法其实很简单，直接按破折号对应的“-”键输入即可。

鹿喑kana27岁。鹿喑kana于1996年3月31日出生，截止到2022年9月5日，已经有27岁。

kana模式和一个键位一个假名是两回事。日语输入法里kana模式都是指敲键盘出假名的意思。一个键位一个假名是类似于五笔的一种输入法，这种办法，每个假名对应着键位，直接敲击即可。多数用的是罗马发音，比如微软的IME，按照字词的罗马字键入即可。拗音按罗马音，促音则是把促音后一个字的头文字重复一次，长音要按减号键(-)。例如：今日：KYOU　キャベツ：KYABETU学校：GAKKOU　ずっと：ZUTTOクーラー：KU-RA-　セラー：SERA-

根据公开资料，暂时无法获知鹿喑 kana的年龄。

卡纳（KANA)心海之涟系列手表80050746女表推出时间：2009年9月表体：不锈钢表壳表圈；表圈活耳镶嵌72颗天然蜜色托帕斯宝石；柄头镶嵌天然蓝宝石；30米防水表盘颜色：间幻彩表款尺寸：直径32mm，厚7.6mm表镜材质：蓝宝石表镜表带尺寸：宽13mm表带材质：沙蛇皮表带表带颜色：金色表扣形式：双按键实心不锈钢折叠带扣机芯：瑞士原装小秒针石英机芯功能：时、分、秒指示是否夜光：否 产地：中国大陆 品牌介绍：KANA（卡纳）是中国市场第一个以镶嵌彩色天然宝石为亮丽特征的高级女装珠宝腕表品牌；是依波与国际著名公司施华洛世奇强强联手共创美好的炫丽结晶。KANA腕表全部采用天然宝石手工镶嵌，材质高贵、工艺精湛，是睿智、优雅女性的不二选择。KANA是幸运女神的象征，她将佑护每一位心有灵犀的佩戴者，使她们尽享自信、自爱的美丽。包装清单：产品保证书x1、产品使用说明书x1、天然宝石质保卡x1、身份卡x1 温馨提示：根据国家相关法律规定，此类商品属于特殊商品，一经售出，非质量问题，概不退换

利益分配问题。匠人绘是哔哩哔哩视频博主，kana是博主旗下的一名艺术工作者，kana于2022年7月1日宣布离开匠人绘，根据kana本人的透露，因利益分配不和离开，并决定个人经营账号。利润分配是企业在一定时期(通常为年度)内对所实现的利润总额以及从联营单位分得的利润，按规定在国家与企业、企业与企业之间的分配。企业利润分配的对象是企业缴纳所得税后的净利润，这些利润是企业的权益，企业有权自主分配。

1、促音とは　打ちたい仮名　前にxを加わて、eg：だって（da　xtu　te）です、同じ场合はこのようにするわ2、长音とは　ひらがなではuff62うuff63、片仮名ではuff62ーuff63を加わると、いいです。3、拗音とはりょ　ryo、このようにすると　できます。

你是指手机还是电脑上面的输入法呀可以安装一个百度输入法，挺好用的

鹿喑kana27岁。鹿喑kana于1996年3月31日出生，截止到2022年，年龄为27岁，鹿喑kana艺名为鹿喑，属于奇响天外工作室的配音演员，配音的角色有《原神》中的男主角空。鹿喑是中国大陆的男性配音演员，新语联盟角色声音的配音者，复旦大学留声社社长。现隶属奇响天外配音工作室，代表作有《原神》空、《山海镜花》金乌拾郎，国内比较喜欢的配音演员是刘校妤和赵路。

kana [u02c8kɑ:nu0259] n. 〈日〉假名(日文的字母,由汉字简化而来者)

看看是是不是主频调的比较高。

鹿喑kana主业是社畜。根据查询相关资料信息显示，配音工作是副业，本职是社畜曾就职于某游戏公司的某开服即破产的手游的项目组。

鹿喑kana通过自己的努力考上复旦的。根据查询相关资料得知，鹿喑kana高中上课摸鱼画画，但是我们只是看到了他玩的一面，在我看不到地方，他也是很努力的，每天夜里努力学习，没有天生的天才，只有不努力的人，因此鹿喑kana是通过自己的努力考上复旦的。

鹿喑kana是通过高考考上的复旦。鹿喑kana是奇响天外配音演员，与2013年高考考上复旦大学，曾任复旦大学留声社社长。

日语输入法教程及日文键盘分部图！2011-11-17 16:13:27如何输入日语微软日文输入法是输入罗马字或者直接输入假名的方式。输入法任务栏上面的“Input Mode”菜单里面：Hiragana是平假名Katakana是片假名Alphanumeric是英文数字Direct Input是直接输入假名方式Full-width是全角Half-width是半角一般我们常用Hiragana（平假名）模式输入。日语输入法的输入规则简略如下表：清音（以平假名为例，片假名是一样的）あ a い i う u え e お o か ka き ki く ku け ke こ ko さ sa し shi す su せ se そ so た ta ち chi つ tsu て te と to な na に ni ぬ nu ね ne の no は ha ひ hi ふ fu へ he ほ ho ま ma み mi む mu め me も mo や ya ゐ wi ゆ yu ゑ we よ yo ら ra り ri る ru れ re ろ ro わ wa を wo ん nn 浊音が ga ぎ gi ぐ gu げ ge ご go ざ za じ ji ず zu ぜ ze ぞ zo だ da ぢ di づ du で de ど do ば ba び bi ぶ bu べ be ぼ bo ぱ pa ぴ pi ぷ pu ぺ pe ぽ po 拗音诸如きゃ、きゅ、きょ，可输入kya、kyu、kyo。把第一个字的母音去掉即可。其他诸如てゃ、てぃ（ティ）、てゅ，可输入tha、thi、thu。更多具体输入对应表请参照本文最后一页：罗马字和假名输入完全对应表1）汉字、词的变换不变换汉字、词的时候，请直接按「enter」回车键即可。要变换汉字、词语时，请按「space」空格键，即会出现变换出来的汉字或词的清单，找到想输入的汉字或词时再按「enter」回车键。2）长音ー输入片假名里的长音符号“ー”，输入方法是按数字键0右方的-（减号键）。3）拨音ん的输入连续打两个n。4）促音输入单词中输入促音也就是小っ，方式有两种：① 双重输入后一发音的第一个字母后，会出现促音，比如：切符，きっぷ kippu、学校 がっこう gakkou② 单独输入小っ的时候可以使用直接输入ltu或者xtu5）小ぁぃぅぇぉ其他小假名的输入方式和上面②里面说明的相同，只要在前面加上x或l就可以变成小假名（没有小假名的除外）。比如：输入字母“l”或“x”+a、i、u、e、o，输入la得到ぁ，输入xa也得到ぁ，输入li得到ぃ。6）ぢ和づ的输入ぢ读音为ji，但在输入时应该输入di。づ读音为zu，但在输入时应该输入du。7）は和を的输入は在作助词用时，读作wa，但输入仍为ha。を的读音为o，但输入时为wo。8）古语假名ゐ和ゑ的输入ゐ输入wiゑ输入we然后按空格键寻找就可以了。9）平假名、片假名、英数字间的转换输入罗马字之后，按F6转换为平假名，按F7转换为全角片假名，按F8转换为半角片假名，按F9转换为全角英文数字，按F10转换为半角英文数字。10）快捷键① 快捷键Alt + ~（Esc键下边的那个键）可以在直接输入Direct Input（图标A）和平假名Hiragana（图标あ）间切换② 快捷键Alt + Shift在系统默认输入/中文输入法和日文输入法之间切换 ③ 快捷键Alt +CapsLock 和Ctrl + CapsLock输大量片假名时，在平假名Hiragana（图标あ）模式下，可以按Alt +CapsLock切换到片假名Katakana（图标カ）模式，输完按CTRL+CAPSLOCK可切回平假名Hiragana（图标あ）。日文输入法想要问问题，却不知道如何输入日文字吗？请参考下列的表格练习练习，再进入麻鸡的日语教室学习吧！u0007あ aいiうuえeおou0007かkaきkiくkuけkeこkou0007さsaしshiすsuせseそsou0007たtaちchiつtsuてteとtou0007なnaにniぬnuねneのnou0007はhaひhiふfuへheほhou0007まmaみmiむmuめmeもmou0007やyaゐwiゆyuゑweよyou0007らraりriるruれreろrou0007わwaをwoんnn浊音u0007が gaぎgiぐguげgeごgou0007ざzaじjiずzuぜzeぞzou0007だdaぢdiづduでdeどdou0007ばbaびbiぶbuべbeぼbou0007ぱpaぴpiぷpuぺpeぽpou0007其他きゃ、きゅ、きょ：kya、kyu、kyo。把第一个字的母音去掉即可。 「ぁぃぅぇぉ」：要打小母音的时候，请在母音前加「x」。例：てぃ→texi 促音「っ」：重复输入一个紧接著促音後的子音。例：わらった→waratta 变换：不变换字型的时候，请直接按「enter」键即可。 要变换字型时，请按「space」键，即会出现选字清单，找到想要的字时再按「enter」。 あ行 あ い う え お ぁ ぃ ぅ ぇ ぉ a i u e o la li lu le lo yi wu xa xi xu xe xo whu lyi lye xyi xye いぇ ye うぁ うぃ うぇ うぉ wha whi whe who か行 か き く け こ きゃ きぃ きゅ きぇ きょ ka ki ku ke ko kya kyi kyu kye kyo ca cu co qu くゃ くゅ くょ qya qyu qyo くぁ くぃ くぅ くぇ くぉ qwa qwi qwu qwe qwo qa qi qe qo qyi qye が ぎ ぐ げ ご ぎゃ ぎぃ ぎゅ ぎぇ ぎょ ga gi gu ge go gya gyi gyu gye gyo ぐぁ ぐぃ ぐぅ ぐぇ ぐぉ gwa gwi gwu gwe gwo さ行 さ し す せ そ しゃ しぃ しゅ しぇ しょ sa si su se so sya syi syu sye syo ci ce sha shu she sho shi すぁ すぃ すぅ すぇ すぉ swa swi swu swe swo ざ じ ず ぜ ぞ じゃ じぃ じゅ じぇ じょ za zi zu ze zo zya zyi zyu zye zyo ji ja ju je jo jya jyi jyu jye jyo た行 た ち つ て と ちゃ ちぃ ちゅ ちぇ ちょ ta ti tu te to tya tyi tyu tye tyo chi tsu cha chu che cho cya cyi cyu cye cyo っ つぁ つぃ つぇ つぉ ltu tsa tsi tse tso xtu てゃ てぃ てゅ てぇ てょ tha thi thu the tho とぁ とぃ とぅ とぇ とぉ twa twi twu twe two だ ぢ づ で ど ぢゃ ぢぃ ぢゅ ぢぇ ぢょ da di du de do dya dyi dyu dye dyo でゃ でい でゅ でぇ でょ dha dhi dhu dhe dho どぁ どぃ どぅ どぇ どぉ dwa dwi dwu dwe dwo な行 な に ぬ ね の にゃ にぃ にゅ にぇ にょ na ni nu ne no nya nyi nyu nye nyo は行 は ひ ふ へ ほ ひゃ ひぃ ひゅ ひぇ ひょ ha hi hu he ho hya hyi hyu hye hyo fu ふゃ ふゅ ふょ fya fyu fyo ふぁ ふぃ ふぅ ふぇ ふぉ fwa fwi fwu fwe fwo fa fi fe fo fyi fye ば び ぶ べ ぼ びゃ びぃ びゅ びぇ びょ ba bi bu be bo bya byi byu bye byo ヴぁ ヴぃ ヴ ヴぇ ヴぉ va vi vu ve vo ヴゃ ヴぃ ヴゅ ヴぇ ヴょ vya vyi vyu vye vyo ぱ ぴ ぷ ぺ ぽ ぴゃ ぴぃ ぴゅ ぴぇ ぴょ pa pi pu pe po pya pyi pyu pye pyo ま行 ま み む め も みゃ みぃ みゅ みぇ みょ ma mi mu me mo mya myi myu mye myo や行 や ゆ よ ゃ ゅ ょ ya yu yo lya lyu lyo xya xyu xyo ら行 ら り る れ ろ りゃ りぃ りゅ りぇ りょ ra ri ru re ro rya ryi ryu rye ryo わ行 わ うぃ うぇ を ん ん ん ん wa wi we wo n nn n" xn 注 っ： n 以外の子音の连続も可。 例： itta → いった ん： 子音の前のみ n 。母音の前は nn または n" 。 例： kanni → かんい 例： kani → かに ヴ： のひらがなはありません。日文输入时 促音 及 不常用假名的输入方式 输入促音 在单词中输入促音 也就是 小っ方式有两种 a 双重输入后一发音的第一个字母后，会出现促音 比如 切符 きっぷ kippu 学校 がっこう gakkou b 单独输入 小っ的时候 可以使用直接输入 罗马字输入字母为 ltu 或者 xtu 其他 小假名的输入方式 和 b 里面说明的相同，只要在前面加上 x 或者 l 就可以变成 小假名（没有小假名的除外）ぢ づ 的输入方式ぢ diづ du古语假名 ゐ い i ゑ ヱ え e只需要按空格键寻找就可以

平仮名：ひらがな　hiragana片仮名：かたかた katakana

例如输入あいうえお，可以长按あ，应该会出现あ行的其他假名，滑动手指就可以了。促音在た行，长按た会出现，自己选择，恩，，，基本是这样，我是直接输罗马音的，九宫的稍微不怎么用。望采纳，，，，，

一般情况我们输入数字都是用小键盘上的数字，用大键盘上的数字比较少还有方法是用F9或者F10进行转换，可以将假名转换为英数字，F9和F10一个是转换为全角一个是半角的但是在我的机器上不好使，不知道为什么，但是公司的电脑是好使的符号你需要打什么符号呢？比如、。是按住shift按的，而下点.一般是打る然后按F9 F10变换的，或者是直接打小键盘的下点.回答人的补充 2009-05-09 21:561、全角平假 切换快捷键 Ctrl + Caps Lock 2、全角片假 切换快捷键 Alt + Caps Lock 3、全角英数 切换快捷键 Shift + Caps Lock 之后 Shift+Space 4、半角片假 切换快捷键 Alt + Caps Lock 之后 Shift+Space 5、半角英数 切换快捷键 Shift + Caps Lock 6、直接入力 切换快捷键 Alt + ~

点了kana就是一键一假名，再点一下去了kana才是罗马字输入。

kinsen和鹿喑kana两人是合作关系。kinsen，配音演员，代表作品《无法逃离的机械城》《精分君》系列等。鹿喑kana，奇响天外配音演员，新语联盟cv。kinsen和鹿喑kana都是配音演员，经常一起合作出作品，赢得了广大网友喜爱。以下是对配音演员的介绍：配音演员是指为影视剧作配上对白的人，其不同于舞台演员和电影演员，他们用声音再现原片中人或物的形象，以声音作为其表演手段。他们在配音前必须对原片的主题、艺术样式、风格、时代背景等做充分分析，然后拟定出自己对某一角色的配音方案，也称之为声音化妆。配音演员在广义上是指为影片配上对白的人，狭义上指为某个人物角色配音的人。除了翻译影片包括外国语 翻译和普通话、粤语、方言、少数民族语言之间的互相翻译。需配音演员配录台词外，在有的影片里，由于演员嗓音不好、语言不标准或不符合角色性格的要求，都不采用他们本人的声音，而在后期录音时请配音演员为影片配音。现今大多数的配音员都指是广义上的配音员，配音员的工作种类已经趋向多元化，而非仅限为人物配音。

应该是kanade，我看金弦3时，女主人公为小日向奏，大家叫她kanade

kana抗生素储存温度是4摄氏度。抗生素指的就是在使用后能够抑制或杀灭细菌和其他致病微生物，能够干扰其他生化细胞发育功能的化学物质。抗生素的特点是能够直接作用在菌体细胞、具有选择性抗生谱，用药范围特别广，对许多微生物，比如细菌、衣原体都有着抑制的作用。

鹿喑kana被骂的原因可能主要有以下几点：1. 模仿其他人的声音和卖腐炒作。这可能引起部分人的反感，他们认为这种行为是不合适的。2. 他的粉丝可能过度热衷于给他打榜，以至于在一些平台上进行刷票等操作，这也引起了部分人的不满。不过，这些原因都只是推测，具体的情况可能因个人观点和立场的不同而有所不同。每个人的行为都有好与坏两面，人们在表达自己的观点和批评时，应该尊重他人，避免过度攻击和恶语相向。

kana有如下几种：かな、カナ、仮名、金、加奈、香奈、可奈、哉可奈所以爱读ai

是配???????????????????音演员。龙哥是配???????????????????音圈的一个梗。男主角的CV，配???????????????????音演员@鹿???????????????????喑kana，因为本名中带龙字，被粉丝叫龙哥。原神游戏在新手刚进游戏时可以选择男主或者女主，绝大多数人都选择的是女主，男主存在感比较低，游戏中几乎没有台词；且龙哥本人话也很少，所以忽略龙哥也不会有什么影响，别管龙哥了就成了一个经常被提起的梗。

呵呵依波kana啊，多流行啊，纪念情人节期间最火的礼品之一，这是一款依波与施华洛世奇天然宝石部门合作打造的女装时尚腕表，网上的依波金殿就能买到。

一般都是用罗马音输入的

因为你转基因时载体的抗性是kana，所以要用kana筛选。

24至48小时。kana平板培养菌的时间可以因实验设计、自然生长条件以及所需的目的而异。通常情况下，kana平板培养菌可以在室温下孵育24至48小时，但具体时间取决于所需菌落大小和形态的特定要求。如果需要更长时间的培养，建议将平板存放在4°C的冰箱中以减缓生长速度，但需注意保存时间，避免影响实验结果。

不太懂你的意思。你是不能输入，还是不会用呢？另外，最好用的免费输入法是谷歌，词汇联想不是百度能比的。

卡纳（KANA)心海之涟系列手表80050746女表推出时间：2009年9月表体：不锈钢表壳表圈；表圈活耳镶嵌72颗天然蜜色托帕斯宝石；柄头镶嵌天然蓝宝石；30米防水表盘颜色：间幻彩表款尺寸：直径32mm，厚7.6mm表镜材质：蓝宝石表镜表带尺寸：宽13mm表带材质：沙蛇皮表带表带颜色：金色表扣形式：双按键实心不锈钢折叠带扣机芯：瑞士原装小秒针石英机芯功能：时、分、秒指示是否夜光：否 产地：中国大陆 品牌介绍：KANA（卡纳）是中国市场第一个以镶嵌彩色天然宝石为亮丽特征的高级女装珠宝腕表品牌；是依波与国际著名公司施华洛世奇强强联手共创美好的炫丽结晶。KANA腕表全部采用天然宝石手工镶嵌，材质高贵、工艺精湛，是睿智、优雅女性的不二选择。KANA是幸运女神的象征，她将佑护每一位心有灵犀的佩戴者，使她们尽享自信、自爱的美丽。包装清单：产品保证书x1、产品使用说明书x1、天然宝石质保卡x1、身份卡x1 温馨提示：根据国家相关法律规定，此类商品属于特殊商品，一经售出，非质量问题，概不退换

鹿喑kana的身高为**1米63**。鹿喑kana是米哈游出品的游戏《原神》及其衍生作品中的男主角，从世界之外漂流而来的旅行者，曾经跨越诸多世界。

kana模式和一个键位一个假名是两回事。日语输入法里kana模式都是指敲键盘出假名的意思。一个键位一个假名是类似于五笔的一种输入法，这种办法，每个假名对应着键位，直接敲击即可。多数用的是罗马发音，比如微软的IME，按照字词的罗马字键入即可。拗音按罗马音，促音则是把促音后一个字的头文字重复一次，长音要按减号键(-)。例如：今日：KYOU　キャベツ：KYABETU学校：GAKKOU　ずっと：ZUTTOクーラー：KU-RA-　セラー：SERA-

Kana是谁？回答： 1）Kana是日本漫画中一个人物的名字，简介如下：在东京，在它的地下，有不为人知的世界。平凡的国中生——祐二，在从补习班的回家路上，在地铁的车站邂逅了一名漂亮的少女—Kana。但她并不是人类，而是一匹野兽，住在东京地下的世界。 2）Kana 还是一位日本女歌手的的名字，中译名的：西野加奈。她是零九年才出道的新人歌手，现在是蛮热的。

kana离开匠人绘的原因是同学对她性骚扰。匠人绘是原画、插画的培训班。当时kana老师直播教学过程中，只是去上厕所就被同学在qq群里说一些污秽之词。kana老师接受不了在之后退出了班群，离开了匠人绘。

鹿喑kana27岁，鹿喑kana于1996年3月31日出生，截止到2022年8月22日，年龄为27岁。鹿喑kana本名鹿喑，属于奇响天外工作室的配音演员，配音的角色有《原神》中的男主角空，以及愚人众第六执行官散兵。

利益分配问题。匠人绘是哔哩哔哩视频博主，kana是博主旗下的一名艺术工作者，kana于2022年7月1日宣布离开匠人绘，根据kana本人的透露，因利益分配不和离开，并决定个人经营账号。

kana 英["kɑ:nɑ:] 美["kɑ:nɑ:] n.假名（日文的字母,由汉字简化而来者） 名词复数:kana,kanas [例句]Each kana corresponds to one sylabble. 每个假名都对应一个音节.

かな【かな】【kana】◎ 1. 哉，乎，耶。（感动、惊叹。）ああ壮なるかな/呜呼,壮哉!楽しきかな人生/快哉人生!惜しいかな/惜乎。2. 轻微的疑问。（疑问u30fb懐疑〕どうしたかな/怎么了呀?彼もそんな男になったかな/难道他竟变成那样的人了?おれたちはこれでうまくいってるほうじゃないかなあ/我们这样不是进展得很顺利的吗?3. 啊a。〔愿望〕早くこないかなあ/怎么还不快来啊。

格式不对，可以试试14.0版本的软件；或者打开k文件，找到*CONTROL_CONTACT，下面改成就留两行就行，其他的行删掉

struts2 是控制业务逻辑hibernate 做持久化的spring 3 面向切面，依赖注入和ioc

操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水65C反应10min,冰上放置5min后：这一步是让RNA变性，把RNA的二级结构打开；再加dNTP，RNaseA，BUFFER, MTV逆转录酶，反应25℃10min：这一步是让反转录引物（oligodT，随机引物）和模板RNA退火结合37℃60min：这一步是反转录酶的工作温度70℃10min：这一步是变性，把合成的cDNA和RNA变性开，就拿到单链的cDNA

操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水65C反应10min,冰上放置5min后：这一步是让RNA变性，把RNA的二级结构打开；再加dNTP，RNaseA，BUFFER,MTV逆转录酶，反应25℃10min：这一步是让反转录引物（oligodT，随机引物）和模板RNA退火结合37℃60min：这一步是反转录酶的工作温度70℃10min：这一步是变性，把合成的cDNA和RNA变性开，就拿到单链的cDNA

真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中 rRNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA分子种类繁多，分子量大小不均一，表达丰度也不一样。真核生物mRNA有特征性的结构，即具有5"端帽子结构（m7G）和3"端的poly(A)尾巴——绝大多数哺乳动物细胞的3"端存在20~300个腺苷酸组成的poly（A）尾，通常用poly（A+）表示，这种结构为真核mRNA分子的提取、纯化，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。一般mRNA分离纯化的原理就是根据mRNA 3" 末端含有多poly(A)尾巴结构特性设计的。当总RNA流经寡聚（dT）（即oligo(dT)）纤维素柱时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异地吸附在oligo(dT)纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo(dT)纤维素柱，即可得到较纯的mRNA。目前常用的mRNA的纯化方法有：（1）寡聚（dT）－纤维素柱层析法，即分离mRNA的标准方法；（2）寡聚（dT）－纤维素液相离心法，即用寡聚（dT）－纤维素直接加入到总的 RNA溶液中并使mRNA与寡聚（dT）－纤维素结合，离心收集寡聚（dT）－纤维素／mRNA复合物，再用洗脱液分离mRNA，然后离心除去寡聚（dT）－纤维素；（3）其它一些方法：如寡聚（dT）－磁性球珠法等。本实验应用方法（1）进行mRNA的分离纯化。【试剂与器材】（一）试剂1． 0.1mol/L NaOH ，每组200mL2． 寡聚Oligo（dT）-纤维素3． 加样/洗涤缓冲液1：0.5 mol/L NaCl, 20 m mol/L Tris-HCl(pH 7.6)，每组250mL或0.5mol/L NaCl, 20mmol/L Tris-HCl(pH7.6), 1mmol/L EDTA(pH8.0), 0.1% SDS。4． 洗涤缓冲液2：0.1 mol/L NaCl, 20 m mol/L Tris-HCl(pH 7.6)，每组250mL或10mmol/L Tris-HCl (pH7.6), 1mmol/L EDTA (pH8.0), 0.05% SDS。配制时可先配制Tris-HCl(pH 7.6)、NaCl、EDTA（pH 8.0）的母液，经高压消毒后按各成分确切含量，经混合后再高压消毒，冷却至65℃时，加入经65℃温育（30min）的10%SDS至终浓度。5． 5 mol/L NaCl，每组10mL6． 3 mol/L NaAc pH5.2，每组10mL7． 无RNase双蒸水(DEPC水)，每组100mL8． 70%乙醇，每组10mL注意：溶液5，6的配制都应该加0.1% DEPC处理过夜，溶液1，3，4，8则用经0.1% DEPC处理过的无RNase双蒸水配制，Tris应选用无RNase的级别。溶液配制后，最好能够按一次实验所需的分量分装成多瓶（如10ml或50ml/瓶）保存，每次实验只用一份，避免多次操作造成对溶液的污染。（二）器材1． 恒温水浴箱2． 冷冻高速离心机3． 紫外分光光度计4． 巴斯德吸管5． 玻璃棉6． 5ml一次性注射器【操作方法】（一） oligo(dT)纤维素的预处理1． 用0.1mol/L NaOH悬浮0.5-1.0g oligo(dT)纤维素。2． 将悬浮液装入填有经DEPC水处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床体积为0.5-1.0mL，用3倍柱床体积的无RNase的灭菌双蒸水冲洗oligo(dT)纤维素。3． 用3-5倍柱床洗涤缓冲液I冲洗oligo(dT)纤维素，直到流出液的pH值小于8.0。4． 将处理好的oligo(dT)纤维素从巴斯德吸管倒出，用适当的柱床洗涤缓冲液I悬浮，浓度约为0.1g/mL，保存在4℃待用。（二） 总RNA浓度的调整1． 把实验一所提的总RNA转到适合的离心管中，如果总RNA的浓度大于0.55mg/mL，则用无RNase的双蒸水稀释至0.55mg/mL，总RNA的浓度对除去rRNA是很重要的。把RNA溶液置于65℃水浴加热5 分钟，然后迅速插在冰上冷却。2． 加入1/10体积5 mol/L NaCl使RNA溶液中盐的浓度调至0.5 mol/L。（三） mRNA的分离1． mRNA与Oligo(dT)-纤维素结合：用移液器重新悬浮oligo(dT)-纤维素，按下表取适量的oligo(dT)-纤维素到RNA样品中，盖上盖子，颠倒数次将oligo(dT)-纤维素与RNA混匀。于37℃水浴保温并温和摇荡15分钟。总RNA (mg)寡聚Oligo(dT)-纤维素(mL)洗涤缓冲液1，2 (mL)洗脱体积(mL)<0.20.21.01.00.2-0.50.51.51.50.5-1.01.03.03.01.0-2.02.05.05.02． 转移：取1个5ml的一次性注射器，取适量经过高温灭菌的玻璃棉塞紧前端，并把它固定在无RNase的支架上，再把oligo(dT)-纤维素/RNA悬浮液转移到注射器，推进塞子直至底部，把含有未结合上的RNA液体排到无RNase的离心管中（保留至确定获得足够的mRNA）。3． 洗涤：根据上表直接用注射器慢慢吸取适量的洗涤缓冲液1，温和振荡，充分重新悬浮mRNA-oligo(dT)-纤维素，推进塞子，用无RNase的离心管收集洗出液。测定每一管的OD260，当洗出液中OD为0时准备洗脱。4． 洗脱：根据上表直接用注射器慢慢吸取适量（2-3倍柱床体积）的洗脱缓冲液2或无RNase双蒸水到注射器内充分重悬mRNA-oligo(dT)-纤维素，推进塞子以1/3至1/2柱床体积分管收集洗脱液。5． 测定每一管的OD260，合并含有RNA的洗脱液组分于4℃，2500g，离心2-3分钟，上清转移至新的离心管中，去掉残余的oligo(dT)-纤维素。6． 沉淀：洗脱液中加入1/10体积的3mol/L NaAc （pH5.2）, 再加入2.5倍体积的冰冷乙醇，混匀后，-20℃30分钟或放置过夜。7． 离心收集：12000g, 4℃离心15分钟，小心弃去上清，mRNA沉淀此时往往看不见，用70%乙醇漂洗沉淀，12000g, 4℃离心5 分钟，小心弃去上清液，沉淀空气干燥10分钟，或真空干燥10分钟。将mRNA沉淀溶于适当体积的无RNase的双蒸水，立即用于cDNA合成（或保存在70%乙醇中并贮存于-70℃）。8． 定量：测定OD260和OD280，计算产率以及OD260/OD280的比率（同上一实验）。【注意事项与提示】1． 整个操作过程必须严格遵守无RNase操作环境规则。2． 提取的总RNA必须完整，不能被降解，这是mRNA质量的先决条件。3． 总RNA与Oligo(dT)-纤维素的比例要适当，过量的总RNA，容易造成mRNA不纯。4． RNA溶液与Oligo(dT)-纤维素结合前必须置于65℃加热5 分钟，这一步很重要，其作用（1）破坏mRNA的二级结构，特别是poly(A+)尾处的二级结构，使poly(A+)尾充分暴露，提高poly(A+)RNA回收率；（2）解离mRNA与rRNA的结合。加热后应立即插入冰上，以免由于温度的缓慢下降使mRNA又恢复其二级结构。5． 应注意mRNA不能被DNA污染，即使是1 ppm DNA污染，也可严重影响实验结果。6． mRNA制备后，可用变性琼脂糖凝胶电泳捡测其完整性和有无DNA污染。提取的mRNA应该在0.5~8.0kb之间呈现弥散状，无明显区带，但大部分的mRNA应在1-2.0kb范围内（如下图）。一般来说，经过一次纯化分离的mRNA还会有微量的rRNA残留，但一般来说不会对后续实验造成很大的影响，如果样品充足，可将经过一次纯化分离的mRNA再纯化一次，进一步提高其纯度。Lane 1, 0.24–7.5kb RNA分子量Maker;Lane 2, 老鼠肝脏总 RNA;Lane 3, 老鼠肝脏mRNA7． 为防止mRNA降解，应避免多次冻融，可将mRNA少量分装后保存。另外，如果有低温冰箱,最好在 -70℃～ -80℃保存。 也可将mRNA在70%乙醇中-70℃保存一年以上。8． 寡聚(dT)纤维素柱用后可用0.3mol/l NaOH洗净，然后用层析柱加样缓冲液平衡，并加入0.02%叠氮钠（NaN3)冰箱保存，重复使用。每次用前需用NaOH、灭菌 ddH2O、层析柱加样缓冲液依次淋洗柱床。9． 一般而言，107哺乳动物培养细胞能提取1-5μg Poly(A+)RNA，约相当于上柱总RNA量的1%-2%。【实验安排】1． 第一天：试剂的配制和所用一次性塑料制品和玻璃器皿的去RNase处理（0.1%DEPC浸泡或高温干烤）。2． 第二天：进行（一）、（二）和（三）1-6。3． 第三天：进行（三）7和变性琼脂糖凝胶电泳捡测mRNA。4． 为了避免由于保存时间过长造成的RNA降解，最好能将总RNA提取、mRNA的分离纯化、RT-PCR和cDNA文库构建实验安排在连续的时间内进行。【实验报告要求与思考题】1． mRNA的OD260和OD280值，OD260/OD280比率和计算mRNA产率；2． mRNA变性琼脂糖凝胶电泳结果；3． 为什么mRNA提取是cDNA合成成败的关键？附录：1．逆转录酶及其活性逆转录酶（reversetranscriptase）又称RNA指导的DNA聚合酶，是以RNA为模板合成DNA的酶。这种酶是1970年美国科学家特明（H.M.Temin）和巴尔的摩（D.Baltimore）分别于动物致癌RNA病毒中发现的，他们以此获得了1975年度诺贝尔生理学或医学奖。人们发现，当RNA致癌病毒，如鸟类劳氏肉瘤病毒（Rous sar-coma virus）进入宿主细胞后，其逆转录酶先催化合成与病毒RNA互补的DNA单链，继而复制出双螺旋DNA，并经另一种病毒酶的作用整合到宿主的染色体DNA中，该整合的DNA可能潜伏数个世代不表达，等到适合的条件时被激活，才利用宿主的酶系统转录成相应的RNA，其中一部分作为病毒的遗传物质，另一部分则作为mRNA翻译成病毒特有的蛋白质。最后，这些RNA和蛋白质被组装成新的病毒粒子。在这个过程中，遗传信息流动的方向是从RNA到DNA，正好与转录过程相反，故称反转录（reversetranscription，RT）。逆转录酶在许多方面与DNA聚合酶相似，含Zn2+，以脱氧核苷三磷酸为底物，从5"到3"合成DNA，反应需要引物。目前已发现不少动物反转录病毒，近年来也发现了几种人类反转录病毒，艾滋病毒也是一种反转录病毒。一些生物公司已经提纯了逆转录酶，生产出了各自的主打产品，比如TAKARA从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶，Invitrogen 从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MLV)反转录酶, 以及进一步开发的更耐高温的ThermoScript，Gibco 开发的SuperScripⅡ等，可作为合成某些特定RNA的互补DNA的工具酶，也可用于DNA的序列分析和克隆重组DNA。AMV反转录酶包括两个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于RNA的DNA合成,依赖于DNA的 DNA合成以及对DNA:RNA杂交体的RNA部分进行内切降解(RNA酶H活性)。MLV反转录酶只有单个多肽亚基,兼备依赖于RNA和依赖于DNA的DNA合成活性,但降解RNA:DNA杂交体中的RNA的能力较弱,且对热的稳定性较AMV反转录酶差。MLV反转录酶能合成较长的cDNA(如大于2-3kb)。AMV反转录酶和MLV反转录酶利用RNA模板合成cDNA时的最适pH值,最适盐浓度和最适温室各不相同,所以合成第一链时相应调整条件是非常重要。因为RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响，良好的逆转录效果非常重要。研究表明，ThermoScript比AMV的灵敏性强得多。RT-PCR产物的大小受限于逆转录酶合成cDNA的能力，尤其是克隆较大的cDNA时。同MMLV相比，SuperScripⅡ显著提高了长RT-PCR产物的产量。不管是M-MLV还是AMV，在本身的聚合酶活性之外，都具有内源RNaseH活性。RNaseH活性同聚合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。研究表明，SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA。RNaseH- 的逆转录酶同时增加了热稳定性，所以反应可以在高于正常的37-42℃的温度下进行。2．引物的设计一般遵循的原则：1）典型的引物20-24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是太长的引物可能会与错误配对序列杂交降低了特异性，同时因为 比短序列杂交慢，从而降低了产量。2）设计5"端和中间区为G或C，且GC含量为50％~60％的引物，以增加引物的稳定性及其与目的序列杂交的稳定性。3）3"末端尽量不要富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。但因为3"端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸，为了避免3"末端的错误配对，所以末端尽量避免为核苷A。4）在引物对3"末端尽量避免互补序列以免形成引物二聚体，抑制扩增。如果引物序列可能产生内部二级结构会破坏引物退火稳定性，也要尽量避免。此外，目的序列上并不存在的附加序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5"端而不影响特异性。有时候，仅有有限的序列信息可供用于引物设计。比如，如果仅知道氨基酸序列，可以设计简并引物，同时使用较高的引物浓度（1μM到3μM），因为许多简并混合物中的引物不是特异性针对目的模板。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。不要在引物的3"端使用简并碱基，因为3"端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR。

外源RNA酶清除剂，RNA提取必备。简单浸泡处理几分钟就能破坏附着在固体表面（器皿，枪头，台面，仪器等）的外源RNA酶蛋白质的二硫键，清除剂RNA酶，立即使用，晾干烘干备用。北京华越洋生物的有售。

胍盐/β-巯基乙醇法胍盐使细胞充分裂解，β-巯基乙醇做为蛋白的变性剂在实验中可抑制RNase的活性，保护RNA不被降解。通过高盐溶液上柱，低盐溶液洗脱，配合吸附柱使用。

CTAB是一种阳离子去污剂,可以有助于细胞裂解并具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，由于溶解度差异，CTAB与多糖形成复合物沉淀，但核酸仍可溶。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来

把你要提取的组织或虫体，1ml加Trzol，用组织匀浆器磨碎，4°16000g，离心15~30min，加氯仿200ul，离心15min，这时候液体分三层，取最上层，加等量异戊醇（约600ul），室温放置30min，离心10~15min，去上清，加1000ul75%乙醇清洗沉淀。4000g，3min去乙醇，加40~50ul去RNA的酶的水。搞定所有用到的枪头，离心管，匀浆器都要灭RNA酶。室温低一点。 带口罩，手套。手套要经常更换。凭记忆，具体步骤，参照天根的Trzol试剂盒。

液氮冻村 然后研磨成粉末 然后加trizol 按细胞提取RNA步骤即可

求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤样品处理：a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。

植物材料用最精确的方法,称取不超过100mg的植物材料,置于处理过的研钵,加入液氮进行研磨将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备),注意材料要保持冷冻状态加入450?L Buffer RLT（1mL 加入10μL β-巯基乙醇）,颠倒混匀,涡旋将溶解物转移至于淡紫色的QIAshredder spin column,最大转速离心2分钟,取上清转移至新的2mL的收集管（自备）加0.5倍体积（约225μL）的无水乙醇,迅速吹打混匀将样品(约650μL )转移至带有2mL回收管的粉色RNeasy spin column（以下简称column）,>=8000g离心15s,将滤出物丢弃加入700?L Buffer RW1至column,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物和收集管转移column至新的收集管（提供）,加入500 ?L Buffer RPE,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物再加入500?L Buffer RPE,>=8000g离心2分钟清洗柱子上的滤膜(为了保证除净Buffer RPE,可弃旧的收集管和滤出物,取新收集管(自备)最大转速离心1分钟)转移RNeasy spin column至1.5mL收集管（提供）,加入30-50?l 无RNA酶的水于滤膜上,>=8000g离心1分钟,洗脱RNA（如果预期得到的RNA大于20?g,可重复第十步）或者看说明书最好了

试剂: 异硫氰酸胍提取剂: 4 mol/L 异硫氰酸胍、25 mmol/L 柠檬酸三钠、1.5%十二烷基硫酸钠、1 mol/L β- 巯基乙醇、V( 氯仿) ∶V( 异戊醇) =49∶1、2 mol/L 醋酸钠( pH 5.2) 、5 mol/L 醋酸钾。以上所有试剂均为分析纯。PCR 试剂以及用于RNA 逆转录的试剂盒为Promega 公司产品。1.2 方法1.2.1 RNA 的提取取新鲜猕猴桃果实3 g 置于预冷的研钵中, 加入液氮, 迅速研磨成均匀的粉末, 研磨得越细越好; 将粉末全部移入3 个冰上预冷的7 mL 离心管中, 每管加入2.4 mL 异硫氰酸胍提取剂( 临用时加入1/10 体积的巯基乙醇) , 再加入1/10 体积的醋酸钾、1/4 体积的100%冰乙醇及1/10 体积的醋酸钠, 上下颠倒几次使离心管内溶液混合均匀, 再加入1.2 mL 的水饱和酚及1.2mL 氯仿- 异戊醇, 上下颠倒几次, 混匀, 在冰上放置5 min, 于12 000 r/min 离心10 min; 取上清液,加入等量的水饱和酚及氯仿- 异戊醇, 于12 000 r/min 离心10 min; 取上清液, 加入等量的异戊醇,于- 20 ℃沉淀1 h, 随后以18 000 r/min 离心18min; 吸净上清液, 用适量的75%乙醇洗涤沉淀, 以12 000 r/min 离心5 min; 吸净上清液, 在通风处吹干, 然后将沉淀溶于适量的DEPC 处理过的灭菌蒸馏水中, 经电泳检测后分装。按照同样的方法提取番茄果实的RNA。1.2.2 cDNA 单链的合成首先在PCR 管中加入经上述检测合格的猕猴桃果实总RNA 2 μL ( 约1 μg) , 于70 ℃温育10 min 以破坏RNA 的二级结构, 立即冰浴2 min, 离心, 将管内液体收集至管底; 建立20 μL 反转录体系, 在冰上依次加入下列试剂: 5×RT 缓冲液4 μL、20 u/μL RNA 酶抑制剂0.5 μL、10 mmol/L dNTPs 2 μL、15 u/μL AMV反转录酶1 μL, 最后用DEPC 处理的无菌水调至20 μL; 离心, 将管内液体收集至管底, 于42 ℃保温1 h, 然后在95 ℃加热5 min 以灭活反转录酶,立即冰浴5 min, 贮于- 20 ℃备用。1.2.3 PCR 扩增猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因根据GeneBank 中已发表的猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因序列, 设计合成了1 对特异引物: 上游: 5′- ATGGCCTTTTCCTATTG- 3′; 下游: 5′-TAGCCACAACTGGACAT- 3′。以上述合成的cDNA单链为模板, 进行PCR 扩增反应。在PCR 管中依次加入下列试剂: 10×PCR 缓冲液2.5 μL、dNTPs 0.5 μL、cDNA 模板0.5 μL、上游引物及下游引物各1 μL、Taq DNA 聚合酶0.5 μL, 最后加入灭菌的无核酶蒸馏水至25 μL。经离心混匀后,放入PCR 仪中进行扩增。扩增条件: 95 ℃预热5 min; 94 ℃变性5 min; 45.2 ℃复性30 s; 72 ℃结合30 s, 共35 个循环。之后, 在72 ℃延伸10 min,最后于4 ℃保温1 h。用1%琼脂糖凝胶电泳检查PCR 扩增产物。2 结果与分析2.1 猕猴桃和番茄总RNA 质量分析将所提取的猕猴桃和番茄的总RNA 经琼脂糖凝胶电泳分析, 可在胶上清晰地看到两条分离的带, 即28 S rRNA 和18 S rRNA, 如图1 所示。在提取过程中RNA 没有降解, 完整性较好, 可作为反转录的模板。这种方法不但可以成功地提取猕猴桃的RNA, 还可以提取番茄的RNA, 因此适用于富含多糖的植物果实的总RNA 的提取。2.2 PCR 扩增猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因kwPMEI 全序列用提取的总RNA 合成cDNA 后, 以该cDNA为模板, 以猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因序列设计合成1 对特异引物, 进行PCR 扩增反应。通过琼脂糖凝胶电泳分析, 在500 bp 偏上有1 条带, 如图2 所示。猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因序列含有589 bp, 这与该条带的位置基本吻合, 说明所获得的cDNA 可成功地用作PCR 扩增反应的模板。提取RNA 过程中需要注意的问题在所有操作步骤中应防止RNA 酶产生的污染。具体的预防措施是: 将用过的移液器头等塑料制品于121 ℃高压灭菌1 h; 玻璃仪器、研钵及研棒、金属制品放在200 ℃烘箱中干燥2 h; 所有的溶液用0.1% DEPC 水配制; 在提取过程中戴上手套、口罩, 以防止人体RNA 酶的污染; 划分专门的区域, 用过的化学试剂和用品不要再作其它用途;所提取的RNA 经电泳检测合格后, 在条件允许的情况下, 应立即进行反转录, 因为RNA 的反复冻融会影响其质量; RNA 于- 80 ℃条件下贮存。提取猕猴桃果实总RNA 的新方法 中国食品学报 梅晓宏高红岩罗云波( 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083)

酵母rna的提取及组分鉴定实验报告如下。目的和要求，了解核酸的组成及其提取原理及方法。掌握鉴定核酸组分的方法。基本原理，由十RNA的来源很多，因提取制备方法也很各异。一般有苯酚法，去污剂法和盐酸瓜法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶十十层被酚饱和的水相中。DNA和蛋白质训留在酚层中。il水层加入乙醇后，RNA即以自色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。酵母的作用美国、日本及欧洲一些国家在普通的粮食制品如面包、蛋糕、饼干和烤饼中掺入5%左右的食用酵母粉以提高食品的营养价值。酵母自溶物可作为肉类、果酱、汤类、乳酪、面包类食品、蔬菜及调味料的添加剂。在婴儿食品、健康食品中作为食品营养强化剂。由酵母自溶浸出物制得的5′－核苷酸与味精配合可作为强化食品风味的添加剂。从酵母中提取的浓缩转化酶用作方蛋夹心巧克力的液化剂。从以乳清为原料生产的酵母中提取的乳糖酶，可用于牛奶加工以增加甜度，防止乳清浓缩液中乳糖的结晶，适应不耐乳糖症的消费者的需要。

总RNA提取试剂盒步骤： 样品处理： a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

RNA是由戊糖，磷酸基团，碱基组成的，所以只要鉴别出这三样物质就可以鉴定RNA组分了。 1、制得RNA水解液：在粗制RNA中，加入百分之十硫酸，搅拌均匀，加热。 2、RNA水解鉴定：用水解液和苔黑酚反应，生成FeCl3试剂，加热直到沸腾1分钟，若呈现墨绿色说明含有戊糖。用水解液和氨水以及百分之五的硝酸银溶液反应，如果出现絮状嘌呤银化合物，说明有碱基存在。用水解液，少量浓硝酸和少量钼酸铵溶液反应，若呈现淡黄色，说明有磷酸基团存在。

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

真是同情楼主，估计这是屎上最恶心的提RNA

因为要保持核酸的完整性(我们上星期刚做过DNA的纯化,因为RNA要容易降解的多)

如果按照一般的标准，我个人觉得RNA提得还是可以的。一般我们用BIOG离心法提取RNA后测完RNA后按照浓度电泳只上样1ug，太多反而会影响电泳效果（有次我们有个博后电泳上样量高了，跑完之后5s亮的吓人，16、23很弱，都以为是降解了；后来降低浓度跑了一次电泳，结果就正常了。所以RNA电泳控制在上样1ug左右就可以，不要高出太多；而且你的od达到了5000ng，这个时候测得数值往往不准，可以取少量样品适当稀释后，再测）。一般初始菌量过高，会导致trizol法提得RNA杂质（包括蛋白、DNA等等）太多，所以建议降低初始菌量。如果rna杂质多，可以通过DNA酶处理，然后酚仿抽提去蛋白，最后用70%乙醇沉淀得到RN

a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。

[思路分析]：①取鸡血细胞液（其红细胞椭圆具核，除骆驼外，猪、羊、狗等哺乳动物红细胞无核），或取新鲜猪肝、菜花、洋葱等材料。虽然在细菌的转化实验中提取的是无核细胞中的DNA，但一般而言，均是从具核的生物材料中提取DNA。当然，在提取出的DNA中也含有一定量的胞质DNA，即线粒体DNA和叶绿体DNA。值得推介的材料是洋葱，取材容易，操作简便，效果明显。将家用加盐洗洁精与洋葱碎屑混合研磨并过滤后，再加酒精，微摇后即出现白色的毛絮状DNA混合物。②使红细胞溶血破膜以及化学药剂十二烷基磺酸钠 SDS（洗洁精的主要成分）或三氯乙酸溶膜。在低渗溶液中，如加蒸馏水使血细胞过度渗透吸水直至破裂，同时用玻棒加速血细胞及核破裂，经一级过滤后滤出液为DNA核蛋白和RNA核蛋白。对于菜花、洋葱等植物材料，在研磨破坏其细胞壁的同时，可考虑适量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解。③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA。在浓氯化钠溶液（2 mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，而RNA核蛋白的溶解度很小。在稀氯化钠溶液（0.14mol／L）中DNA的溶解度最低，蛋白质的溶解度很高而出现盐溶现象，经二级过滤后滤出液主要为DNA粗制品。④DNA不溶于酒精，经三级过滤后，再利用乙醇沉淀法使其他物质溶于酒精而进一步纯化DNA。⑤二苯胺或甲基绿鉴定法即DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成蓝色，遇甲基绿被染成蓝绿色，且颜色的深浅与DNA纯化程度有关。在此过程中设计对照实验，以增强实验中二苯胺对DNA专一性显色结果的可信度。

原因：浓盐法改变细胞膜的通透性。浓盐法提取RNA是用10%NaCl溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。实验中主要是将pH调到2.0～2.5，在等电点附近要求要在7.0。DNA携带有合成RNA和蛋白质所必需的遗传信息，生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。扩展资料：关于RNA的有关事项：1、DNA中的核苷酸中碱基的排列顺序构成了遗传信息。该遗传信息可以通过转录过程形成RNA，然后其中的mRNA通过翻译产生多肽，形成蛋白质。2、在细胞分裂之前，DNA复制过程复制了遗传信息，这避免了在不同细胞世代之间的转变中遗传信息的丢失。 在真核生物中，DNA存在于细胞核内称为染色体的结构中。3、在没有细胞核的其它生物中，DNA要么存在于染色体中要么存在于其它组织。在染色体中，染色质蛋白如组蛋白、共存蛋白和凝聚蛋白将DNA在一个有序的结构中。参考资料来源：百度百科-脱氧核糖核酸