isa

all the past is a prologue .刚刚那些是开场白。

这个是因为反应过于激烈，请稀释你的样本或者抗原抗体。如果试剂盒是订购的成品，标准品孔无问题，一般稀释你的待测样品。如果标准孔也没有差别的话，就得怀疑是试剂盒的问题了。如果是你自己包被的试剂盒的话，可能要优化的地方就多了，就是做不同的稀释吧。

在elisa实验中所需要的一个重要显色成分是显色剂A（含过氧化氢）为供氢体（DH2）。elisa试剂盒酶联免疫诊断试剂盒的底物A就是显色剂A（含过氧化氢）为供氢体（DH2）,底物B就是显色剂B（含TMB）,用于显色。另外，常用的底物还有：AP的底物，常用的为对-硝基苯磷酸脂（PNP），其反应物为黄色的对硝基酚，测读波长为405nm2）GOD的底物，为葡萄糖，供氢体为对硝基蓝四氮唑，反应产物为不溶性的蓝色沉淀什么是TMB？TMB即四甲基联苯胺（3，3"，5，5"-Tetramethylbenzidine）是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应，且由于这种高度的脂溶性，使其易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物，这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。同时反应产物的沉淀，使得HRP的活性部位更加暴露，利于酶氧化反应进行。TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围（而DAB则被限制在其内），故TMB反应的检测阈较低。

包被100 ul，你的反应体系应该就是100 ul。除了封闭用150 ul，其余所有包括TMB都用100 ul没有问题。终止液可以只加50 ul，2M的硫酸足够强了。看你OD值下降了，主要原因应该就是抗原和二抗的量都加少了。由于有封闭这一步，你不用担心气泡带着抗原超过了100 ul体系，只要不超过150 ul就可以（当然对于好的移液枪操作，不应该造成气泡）。TMB是HRP的底物，自己不能显色，但随着反应时间延长，显色是会加深，根据自己实际反应来控制反应时间，不用管别人推荐的时间。反应时间主要看阳性对照的OD值，即不能太长，使得阳性对照超出了仪器检测范围，或实验组将底物全部反应完（通常底物是过量的），造成实验组无差别；也不能太短，造成检测灵敏度下降。

因为TMB是显色液啊，变蓝实属于正常现象哈，这点是可以肯定的咯！

TMB无色时为0价蓝色时正1价黄色时正2价

额！培植物不知道！不过效果还不错！

配方一：底物显色A液：醋酸钠13.6g ,柠檬酸1.6g,30%双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml.底物显色B液 :乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油 50ml,取0.15g TMB溶于3mlDMSO中,蒸馏水加至500ml.使用的时候根据需要量取等量AB液混匀后使用配方二：底物缓冲液(pH 5.0磷酸钠柠檬酸)：0.2 mol/L Na2HPO425.7 ml，0.1 mol/L柠檬酸24.3 mL，50mL蒸馏水TMB(四甲基联苯胺)使用液：0.5 ml 2 mg/mL TMB无水乙醇溶液，10 mL底物缓冲液，32μL30% H2O2混合，现用现配。将底物缓冲液与TMB使用液按1：1混匀即可，现用现配。

年幼即开始接触音乐的丽莎，曾经在都柏林莱斯特音乐学校(Leinster School of Music)受过正统声乐训练，早被指导老师挖掘的她其实对音乐剧具有相当浓厚的兴趣，本身也在许多表演中当纲演出，像是在Chess剧中Florence Vassy一角 , 或是Chicago里Velma Kelly的角色，以及The Magic of Cole Porter, The Music of Irving Berlin 等皆可欣赏这位能歌善舞的女伶魅力，直到2000年她才完全投身加入大河之舞的表演，在美国、加拿大一带巡回演出。2002年，丽莎受邀录制了个人专辑Lisa,此专辑包括大河之舞中的歌曲Lift The Wings，及The Deer"s Cry.2004年，Lisa参与了本预计只是一次演出的Celtic Woman演唱会，但由于此次演唱会在美获得广泛好评，使Celtic Woman成为一组合开始了巡演，Lisa也是成员之一。 2012年，Lisa由于怀孕宣布暂时离开Celtic Woman组合，其位置暂由Susan Mcfadden(Brian Mcfadden的妹妹）代替。2013年, Lisa宣布将与丈夫Scott Porter(Celtic Woman CEO)一同离开凯尔特女人，开办演艺培训学校The Lisa Kelly Voice Academy。

【答案】：A邻苯二胺、四甲基联苯胺在ELISA中常作为HRP的底物；硝基苯磷脂常常作为AP的底物。

TMB显色液是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术，通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色，用于ELISA等的显色液。TMB对人体有刺激性，请注意适当防护，如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成较深的蓝色，应该停止使用。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

HRP底物：TMB--H2O2系统。经多年使用比较如下：国外商品化（双组份与单组份比较）：双组份的灵敏度比较高，保存时间也很长（一般4度放3-5年没有问题），单组份的要差一些。国内的：商品化的双组份灵敏度和保存时间与进口大公司的相当；单组份的：哈哈。

什么是企业文化？企业文化是一种很虚的概念。但是它确实存在，不管你如何定义。当你踏入一家公司的办公室，它像是悬浮空气中的力量，影响着工作是如何被完成，直接影响到项目的成败，决定了员工的忠诚度，生产效率。Cultural Web，由Johnson和Scholes在1992年提出，提供了一个分析和改变企业文化的分析框架。Cultrual web 辨认了组成所谓“paradigm”的六个相互影响的要素。paradigm这里他们指工作的模式。六要素是：Stories（故事）：人们在公司内部或者外部谈论的过去的事件，流传的故事；例如公司的品牌故事，历史事件，重要事件和重要文物的事迹。Rituals and Routines （日常的工作，仪式，惯例）：例如公司员工惯例周五下班happy hour，周末组织足球运动。Symbols 组织的标识，外在的体现：公司的logo，办公室装修风格，dressing code，车辆标识，职位的名称，常常在办公室流传的一些术语和俚语，名言。例如，在一些会计师事务所，人们私下流传：“少壮不努力长大当审计”（这就是symbol之一）体现了员工厌恶繁琐的审计工作，不利于工作效率的提高。又例如，私下流传的某个领导的花名：“灭绝师太”，就认定这个领导不受欢迎。Organizational Structure 组织架构：包括公司成文或者不成文的影响和权力架构Control system （控制系统）：包括财务系统，质量控制系统，奖惩制度；Power Structures 权力机构：公司的真正的决策机构。可能是一个人，几个高管，或者某个机构。这些人对公司的决策，运营和战略方向有最大的影响力。

电影　　1989 【The Tall Guy/高个子】→Doctor #2 　　1994 【Shopping/疯狂追缉令】→Market Trader 　　1995 【Solitaire For 2】→Harry 　　1995 【Dangerous Lady/危险女人】→Michael Ryan 　　1996 【Dragonheart/龙之心】→Lord Felton 　　1997 【Event Horizon/黑洞表面/撕裂地平线】→D.J. 　　1998 【Armageddon/世界末日/绝世天劫】→Dr.Ronald Quincy,Research 　　1998 【Divorcing Jack/杰克离婚】→Cow Pat Keegan 　　1998 【Soldier/兵人】→Mekum 　　1999 【St Ives/情在深秋】→Alain de Keroual de Saint-Yves 　　1999 【The End of the Affair/爱到尽头/情事终结】→Father Richard Smythe 　　2000 【Windtalkers/风语者】→Major Mellitz 　　2000 【The Patriot/爱国者】→British Colonel William Tavington 　　2001 【Sweet November/甜蜜十一月】→Chaz Watley 　　2001 【Black Hawk Down/黑鹰计划/黑鹰坠落】→US Army Captain Mike Steele 　　2001 【The Last Minute/最后一分钟/最后关头】→Dave "Percy" Sledge 　　2001 【The Tag】→Robert 　　2002 【Harry Potter and The Chamber of Secrets/哈利·波特与消失的密室】→Lucius Malfoy 　　2002 【Passionada/真爱赌局】→Charles Beck 　　2002 【Resident Evil/生化危机】→Dr. William Birkin 　　2002 【High Times Potluck/家常便饭】→Arneau 　　2002 【The Tuxedo/燕尾服/神奇燕尾服】→Clark Devlin 　　2002 【Windtalkers/风语者/追风战士】→Major Mellitz 　　2003 【Hotel/噩宴旅店】→Australian Actor 　　2003 【Peter Pan/彼得·潘/小飞侠】→Mr. Darling/Captain Hook 　　2004 【Nouvelle-France/全新的法国/新法兰西】→Général James Wolfe 　　2005 【The Chumscrubber/我行我素】→Mr. Parker 　　2005 【Elektra/幻影杀手/黑天使/艾丽卡】→DeMarco 　　2005 【Harry Potter and The Goblet of Fire/哈利·波特与火焰杯】→Lucius Malfoy 　　2005 【Nine Lives/九种生活】→Damian 　　2005 【Tennis Anyone!/明星打网球】→Johny Green 　　2006 【Friends with Money/老友有钱】→David 　　2007 【Harry Potter and The Order of the Phoenix/哈利·波特与凤凰社】→Lucius Malfoy 　　2007 【Grindhouse/刑房】→Bearded Man 　　2007 【Shamrock Boy/三叶草男孩】→Joe Biddle (attached) 　　2008 【Good/好人/良知】→Maurice 　　2008 【Stopping Power/制止力】 　　2008 【The Rain Horse】 　　2008 【Man with the Football】→John 　　2008 【The Curse of Steptoe】→Harry H .Corbett 　　2008 【Conjura de El Escorial, La/艾斯特里亚尔阴谋】→Antonio Pérez 　　2009 【Green Zone/绿色地带】→Maj. Briggs 　　2010【Skeletons】→The Colonel 　　2010【Harry Potter and The Deathly Hallows:Part1/哈利波特与死亡圣器 上】→Lucius Malfoy 　　2011【Harry Potter and The Deathly Hallows:Part2/哈利波特与死亡圣器 下】→Lucius Malfoy 　　2011【Abduction/绑架】→Kevin

mentally disabled智障人士；弱智；精神不健全的例句1.He has spent all his life working with mentally disabled people.他毕生为精神障碍者工作。2.Every four years, mentally disabled athletes come together to take part in the Special Olympics.智障运动员每四年聚会一次，参加特殊奥运会。3.Her efforts changed the way the world thinks about the mentally disabled.她的努力改变了世界弱智人士认为。4.mentally disabled children and adults can develop their ability to move.精神残障儿童和成人能发展他们行动的能力。5.FEPACI; Pan-African Federation of Organizations of Mentally disabled Persons;心智残障人组织泛非联合会；

一个低能/弱智/心智不全的人。

根据公开资料，暂时无法计算LisaSparks的年龄，因为没有具体的出生日期信息。

Lisa Sparks是一名美国女演员，主要作品为《TheWitch"sSabbath》。

Samuel我觉得是推动情节的一个角色。母亲代表他们兄弟三人缺少的母爱，一定程度上，这也是他们父子四人悲剧的原因之一。Isabel 自小仰慕Tristan，和他结合也是必然。熊则是Tristan的内心体现，它和Tristan合而为一。

读 ：么力洒

区别就是在价位和材料上，前者的价钱更加低端。应该算是梅丽莎的代替品，无意发现这个牌子，价格也很亲民，跟梅丽莎有得一拼，重点味道是不会熏死人。蝴蝶结变成了他们的设计的主题，不仅是在脚趾的鞋面上，还是在鞋子后面，都会有蝴蝶结。但是我感觉，最近Melissa设计的路线好像已经开始转型，开始走更加时尚的路线，比如穆勒鞋。

根据十大牌子网显示，儿童果冻鞋热销榜中前六都是visamoris品牌，而Melissa品牌最靠前的也是第八。visamoris主营产品:儿童果冻鞋,果冻鞋,硬纸盒,亲子鞋,宝宝单鞋,皮鞋。MELISSA是属于Grendene旗下一家生产、销售女鞋、童鞋的品牌。另外，MELISSA的产品“巴西果冻鞋”是以PVC材质为主要原材料，不仅商品材质具防水、透气、舒适的特性，还讲究人体工学的楦模开发。

The shootdown was the deadpest aviation disaster since the Kano air disaster earper that year, which killed 176 passengers and crew. The "" Kano air disaster ""was a chartered Boeing 707 passenger fpght on 22 January 1973 which crashed while attempting to land at Kano International Airport. At the time it occurred, the Kano air disaster was the deadpest-ever aviation accident, a dubious distinction it only held for about 14 months when Turkish Airpnes Fpght 981 crashed in France kilpng 346 people. It"s difficult to find kano air disaster in a sentence. 用 kano air disaster 造句挺难的

WinRAR 是最新版本吗?

这两个单词是同一个港口的不同名称，是菲律宾的奥萨米士港，位置：08 09N 123 51E。

巴基斯坦Faisalabad（费萨拉巴德）的邮编：38000PS：巴基斯坦邮政编码由5位数字组成，例如：44000，其中前2位数字表示转送区域，后2位数字表示邮局。示范：Mr. Nasratullah KhanHouse No 17-BStreet No 30Sector F-7/1ISLAMABAD–44000PAKISTAN

你好，这个问题需要两部分回答你。（以下来自网络）一、SandForce 公司是世界领先的固态硬盘控制器厂商。其创新的DuraClassu2122固态硬盘控制技术可将市场上普通的MLC闪存应用到企业级数据存储中。在不对日常使用有任何限制情况下，将固态硬盘的生命周期延长了5年时间。SandForce的SSD控制器可以解决低成本MLC闪存存在的一系列可靠性和性能问题，将SSD的耐用性和性能提升80～100倍。SandForce的SSD控制器克服了闪存技术的写入限制，读取和写入性能达到85000 IOPS，每秒连续读取和写入速度达到550MB。二、2011年10月底，SandForce首次被收购，被著名半导体企业LSI收归旗下，身价达3.7亿美元(3.32亿美元现金加4800万美元股票)。2013年12月，新加坡半导体厂商Avago(安高华)以66亿美元的高价收购了LSI，SandForce部分自然也要陪嫁，但是谁都没有提及对这个业务部门的具体安排。而在仅仅半年之后，它就被甩手扔了出去，接下的则是机械硬盘大厂希捷。这必然意味着，Avago几乎是在收购LSI的同时就开始寻找SandForce的下家了，真是可怜。希捷此番收购的包括Avago加速解决方案部门、闪存元件部门，总价4.5亿美元，预计今年第三季度完成交易。在这其中，为了得到SandForce业务，希捷只付出了区区8000万美元。不到三年时间被接连甩卖，身价暴跌近80％，辉煌无比的SandForce何以沦落至此？希捷和西数是机械硬盘的两大霸主，但在固态硬盘上迟迟进展缓慢。希捷虽然也推出了消费级的固态硬盘产品，但一直没有自己的主控和闪存，缺乏核心技术。此番拿下SandForce，否意味着希捷终于要大规模进军固态硬盘了。或者，还要趁机借此扼住其他固态硬盘厂商的咽喉？西数也是通过收购拓展固态硬盘业务的，先后拿下了STEC、Virident、VeloBit，但仍无主控技术。Avago/LSI没有解释低价抛售SandForce的原因，但是据说他们都对第三代主控SF3700的一再延迟非常不满。或许，Avago对于这块业务从来都没有任何兴趣。

森大人(MORI SAMA) 传说中与邪王真眼和闇炎圣使是朋友，并与邪王真眼的侍从雷霆鎚使对战过并落败的传奇生物。

如果你当初在银行注册的地址还是英国地址的话， 你的新卡会在过期一个月前邮寄到你的注册地址， 除非你回国之前把你的国内地址通知给银行， 现在英国大部分银行都可以邮寄银行statement和新卡到中国。银行不会无缘无故注销你的账户， 况且你的账户还有钱。现在唯一可用的办法是你打电话给tsb, 说明你的情况， 看看他们会怎么处理。 或者还有一个办法， 也是打电话， 但是说你也转换地址， 试着把地址转到国内， 或者英国的朋友家里。然后就说之前的卡没有收到， 叫他们重新发卡给你。

louisantonio中文名叫路易斯安东尼奥 是一种洋酒

第二个好不过还是要看个人的意见啦

直接法需要先把抗原吸附到盘子的表面，然后再加抗体。而间接法盘子表面是事先吸附好了抗体，便于大规模的商业化生产。更重要的是，间接法可以使用统一的标记二抗，这样即使“免疫第二种动物获得的抗体”千变万化，只要都是来源于同一种动物，就可以使用一样的二抗。大大减少标记不同抗体的时间和花费。直接法需要先纯化抗原，再吸附。费时费力

双抗体夹心法：(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

你应该去咨询专家，才能获得正确的答案的。

ELISA的最基本的要求是：抗原或抗体的固相化、抗原或抗体的酶标记和底物系统。既然是双抗体夹心法，就必须把抗体进行包被，加以酶标记的抗体，才能形成夹心，用于检测抗原。

但在包被是要确定包被抗体的最佳浓度，请问怎么确定？ 我对于elisa试剂盒不是很了解，我是做化学发光试剂盒的。只能给你一个参考的数值，具体的还要

代那

你可以扩大包板范围，选用4倍稀释，选择3个浓度来包被，如1ug，4ug，16ug来包被，检抗可以选择4个，1：1000，1：2000，1：4000，1：8000.在根据你滴定的结果确定具体的包被浓度和检抗的稀释范围。

ELISA酶联免疫吸附实验1.原理：免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法，酶联免疫吸附分析（下称ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。2.步骤：免疫识别是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗体，而后利用抗体识别待测的抗原（通常是疾病的蛋白质生物标记物，病毒，细菌等等，从复杂待测液中将抗原吸附到96孔板表面。接着用带有辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）、荧光或放射性标记的抗体通过直接或者间接的方式输出识别信号。最后利用信号强度，标准样品浓度梯度等信息计算得出待测样中目标抗原的浓度。3.分类：根据免疫识别和信号输出方式的不同，ELISA可以分为双抗体夹心法、直接免疫竞争法和非直接免疫竞争法等等。其中双抗体夹心法在商业应用上最常见。双抗体夹心法：①：抗体包被 在96孔板上包被抗体。由于酶标板是由聚苯乙烯制成，其含有的苯环与抗体的氨基酸残基具有类似π-π堆积作用的引力，结合静电和疏水作用，可以将抗体吸附于其表面。然后，将未吸附的抗体用缓冲液清洗后，加入含有明胶或牛血清蛋白（Bovine Serum Albumin, BSA）的封闭液以封闭酶标板上未结合抗体的部分。加入封闭液的目的，是防止其他蛋白因静电或疏水作用吸附在96孔板上，造成假阳性信号，干扰后续实验的进行。②：免疫识别 在96孔板上包被抗体后，加入待测样，并在37°C环境下孵育一段时间，通常是1-2小时。此时酶标板上的抗体与待测抗原进行特异性识别结合。此处抗体的质量是关键，好的抗体既能特异性高效地结合抗原又不受待测样中其他生物大分子、蛋白质和无机盐等成分的影响。③：洗板 将未结合的抗原洗掉，加入该抗原所对应的识别抗体并在37°C下继续培养1-2小时，接着将未连接上抗原的抗体洗掉。④：酶标信号输出 加入带有辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）标记的酶标二抗，用于和标准抗体结合。在培养30分钟后洗掉未连接的二抗，并加入显色剂显色。根据显色的结果判断抗原的浓度。一般认为，抗原浓度与显色后的发光强度呈正相关。免疫竞争法以抗原竞争抗体为例，在上述免疫夹心法操作步骤的第二步加入待测抗原后，立刻加入酶标抗原，使之与待测抗原竞争识别酶标板上的抗体。当待测抗原浓度越高，能够连上酶标板上抗体的酶标抗体就越少，输出的信号就越少。这样待测样浓度与酶显色信号就呈逆相关。

【答案】：AELISA双抗体夹心法检测抗原是利用包被在固相载体上的抗体和待测抗原结合，然后待测抗原与酶标记的抗体结合形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物来检测的。

所谓双抗体夹心法就是指，两种抗体包裹待测抗原，通过酶标记标示出来经过显色后读出具体的数据最终计算出浓度的方法，铺板（多抗体）—样本（待测抗原）—结合物（单抗）—显色—终止—读数进行计算。

竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原，其原理为： 将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上，检测时加入待测样本，使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合，然后加入HRP酶标记的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体结合，由于酶标板上固著的抗体数量有限，因此当样本中抗原的量越多，则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少，两种抗原竞争结合包被抗体，所以称为竞争法，接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，当样本中抗原量越多，代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少，显色也就越浅； 夹心法又叫双抗夹心法，用于检测较大分子的抗原或抗体，又分为：双抗体夹心法，用于检抗原；和双抗原夹心法用于检抗体。

将定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于微孔板表面。双抗体夹心法，其基本原理是将定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于微孔板表面，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。ELISA是以体外抗原抗体反应为基础，将抗原抗体特异性反应与酶的高效催化作用相结合的一种检测方法，灵敏度可达皮克(pg/mL)水平。它是目前商业应用最为成熟的免疫分析方法之一，在医学实验、临床诊断、生物制药方面的运用也极为广泛。目前，常见的ELISA类型有四种：双抗夹心法、直接法、间接法和竞争法。

双抗体夹心的意思是包被抗体-检测抗原-酶标抗体形成夹心结构。至于是单抗或者多抗都可以。如果是酶标二抗（二抗就是抗抗体）的话，一般是包被抗原-抗体-酶标二抗，这种是间接法的

正确答案:A解析：ELISA双抗体夹心法检测抗原是利用包被在固相载体上的抗体和待测抗原结合，然后待测抗原与酶标记的抗体结合形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物来检测的。

竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原，其原理为：将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上，检测时加入待测样本，使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合。然后加入HRP酶标记的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体结合，由于酶标板上固著的抗体数量有限，因此当样本中抗原的量越多，则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少，两种抗原竞争结合包被抗体，所以称为竞争法。接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，当样本中抗原量越多，代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少，显色也就越浅。百特纯大分子Meretciel的测激素的ELISA试剂盒有些就是竞争法的。夹心法又叫双抗夹心法，用于检测较大分子的抗原或抗体，又分为：双抗体夹心法，用于检抗原；和双抗原夹心法用于检抗体。以双抗体夹心法为主，下面以双抗体夹心法为例讲解原理（双抗原夹心法类似）：首先将具有专一性之抗体包被（coating）于酶标板上，检测时加入待测样本，样本中若含有待测抗原，则会与酶标板上包被的抗体专一性结合，然后加入另一种针对待检抗原的抗体，通常称为检测抗体，包被抗体和检测抗体将抗原夹在中间所以叫双抗夹心。检测抗体通常带有HRP酶标记，接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，样本中抗原量越多则显色越深。现在很多ELISA试剂盒生产厂家比如：优尔生和百特纯大分子Meretciel将生物素-亲和素放大系统引入双抗夹心法，也就是在检测抗体上标记生物素，然后加入HRP酶标记的亲和素（或链亲和素），利用亲和素可以和生物素分子紧密结合的特性，将HRP酶连接到检抗上，接着加入底物显色。也有引入二抗的，如下图，检测抗体不标记，再加入HRP标记的二抗与检测抗体结合

【答案】：B双抗体夹心法的原理是利用连接于固相载体上的抗体（未标记）和酶标抗体可分别与样品中被检测抗原分子上2个不同抗原表位结合，形成固相抗体和酶标抗体免疫复合物。

不直接标记一抗而标记二抗，这是从生产成本上考虑的。二抗大部分是通用的，标记一次可以大量标记，比如10ml或者更多的浓缩液，可以生产上千上万的试剂盒。一次检测就行了而一抗种类很多，量少，如果标记一抗，比较费事。次次得检测（标记完得检测）。HRP标记不是很简单的事科研用的试剂盒。单品销售量很小的，不值当。但临床上的ELISA试剂盒是直接标记在一抗上的，他们量大。这样也用着简单。还有一个，科研试剂盒也不一定用的酶标二抗，有的是生物素放大系统，这样提离灵敏度。

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酶免法(ELISA)和化学发光法(CLIA)是一种免疫测定技术，可用于检测乙肝、艾滋病等传染性疾病，区别如下：1、原理上的区别化学发光法依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量。酶免法原理是在测定时把受检标本和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。

ELISA只能检测溶液中的细胞因子浓度。而流式检测细胞因子有两种机理：固定细胞后，使用荧光抗体检测。检测到的是每个细胞内的细胞因子的量使用表面粘附抗体的微珠，基本原理和ELISA相似。但是可以同时检测数十种细胞因子在溶液中的浓度。

曲名:I do作曲:Yoko Kanno(菅野洋子)作词/演唱:Ilaria GrazianoBy:Brent.Z.Henell"illusione ho creduto alla mia forza inesorabile//在梦幻中我相信自己毫不留情的力量e inevitabilmente sono diventata debole(ora sento)//却软弱到无法回避gli eventi si trasformano e so gia(di emozioni)//我现在感受到、我已知道，它自身在改变姿态che aprono ricordi lontani//用强烈的感情打开久远的记忆nell"anima ritrovo la speranza che nel corpo stanco ormai//如今肉体虽已疲惫，却在灵魂中寻得失却的希望ha smesso di vibrare come un fuoco spento dal mio pianto(tra le mani)//用我的眼泪阻止如同它消逝的火焰一般而动un filo d"acqua portero con me e(nel deserto)//用双手哪怕是运送那么一点点水吧，这样一来un filo d"erba sopravvivera//沙漠里就能有些许的草生存下来吧I do, I do, emergere dal fondo per lottare e poi//I do, I do, 挣扎着想要从底部浮起salire in alto piu che mai//升到前所未有的高度I do, I do, guardare nel futuro e sorridere//I do, I do, 望着未来微笑senza temere nulla piu//不再有任何畏惧之物......in un instante nuove aspirazioni anche se davanti a me//涌现出殷殷的崭新希望，在我眼前si apre uno scenario di conquiste e smarrimenti(nel silenzio)//无论获得与丧失的剧情是否展开riflessi di epoche lasciate via(respirando)//在静寂之中，弃于彼方而不顾的思考停止的回光返照ne avverto il moto circolare e poi...//一边呼吸一边关注着那反复往来的动向，而其后...il temp si e fermato per tracciare nuovi confini, ed i//为了追寻停止的时间前端那新的尽头，我mi spingero lontano raccogliendo le mie forze nel vento(tra le mani)//将自己远远地推向前，聚集风中的我的力量riflessi di epoche lasciate via(camminando)//将弃于彼方而不顾的思考停止的回光返照拾于双手之中ritrovo le tracce indelebili//走着去寻找无法消除的痕迹I do, I do, gridare contro gli occhi spenti e gelidi//I do, I do, 我对着他暗冷如冰的眼睛叫喊per essere sempre di piu//总有一天会比现在更好I do, I do, oltrepassare mondi inespugnabili//I do, I do, 要超越坚固的世界而去senza temere nulla piu...//不再有任何畏惧之物...I do, I do, emeregere dal fondo per lottare e poi//I do, I do, 挣扎着想要从底部浮起salire in alto piu che mai//升到前所未有的高度I do, I do, guardare nel futuro e sorridere//I do, I do, 望着未来而微笑con una nuova identita//与全新的自我一起fino a quando il sole sorgera...//待到太阳升起之时......I do............I do............http://music.baidu.com/song/7529481

elisa法的基本原理：它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

retaliate

Hi, dear friend. These words are often confused by English learners. Let me show you the difference. ▪ 【vanish】 to completely disappear, especially suddenly: The boat vanished without trace off the coast of Australia. | All hopes of finding the boy alive have vanished. | The fields have vanished beneath a new town of skyscrapers and motorways.▪ 【disappear】 if something disappears, you cannot see it any longer, or it does not exist any longer: The sun slowly disappeared over the horizon. | Millions of people saw their savings disappear. | 16% of the forest cover has disappeared during the last 100 years. ▪ 【fade away】 to gradually become less clear, strong, or bright, and finally disappear: Her voice began to fade away. | His anger slowly faded away. | The last rays of the evening sun were fading away.Have you got it? So easy! Now you see.

disappear和vanish 两词都可表示“消失”，但前者为常用词，既可指逐渐消失，也可指快速消失；后者则指突然地以一种奇异而神秘的方式消失，不留任何痕迹。 *When spring comes,the snow disappears. *The thief ran into the crowd and vanished from sight. *The airplane vanished into the clouds.采纳哦

vanish是突然消失disappear就是没了

这是凯撒的名言：I came, I saw, I conquered. 我所到之处，我所见之事，我所向披靡。公元前47年，恺撒大帝率军进入小亚细亚的吉拉城，只用了5天的时间就平定了庞培部下本都王子帕尔纳凯斯的叛乱。欣喜的凯撒给罗马友人报捷时只用了3个拉丁语单词：“Veni！Vidi！Vici！即为：I came, I saw, I conquered，我来了，我看见了，我征服了。凯撒的名句：Icame，Isaw，Iconquer很高兴为你解答，不懂请追问！满意请采纳，谢谢！O(∩_∩)O~

在香港可以直接刷银联，不需要手续费，刷卡时向店员讲你要刷银联就可以了。你如果非要刷VISA或者maestro，那是很不算的，会经历二次汇率结算（这两条线都是用美金作为结算币种，而香港使用港币，首先就是把港币结算为美金进行交易，然后再把结算后的美金再结算为人民币从你卡中扣除），其次，VISA或者maestro会再单独收取一个手续费，一般以交易金额的百分比计算。所以，不管你的是信用卡还是借记卡，请在香港刷银联。另外单独补充，在香港提取现金，无论是走银联还是VISA还是maestro，都会收手续费，收费多少，各家银行的标准不同，你需要详细询问你的发卡行。记住，只有刷卡消费刷银联才是免费的。

国内仅有20家第三方支付公司获得该资质，苏宁支付好像有。

《Monsters》

这个很难说，我们昨天刚收到移民局的来信，一个客户tr 转Pr,只用了9个月。这个时间真的不一定的。

你要办理的是英国特有的EEA FAMILY PERMIT签证，是非常特殊的签证，严格的说不叫夫妻签证，属于欧盟的签证。你首先要申请EEA FAMILY VISIT 去英国，然后再英国自动转为5年的EEA FAMILY PERMIT。拥有了这个签证在欧洲任何国家都不用申请签证了。不过问题在于第一次在英国办理EEA FAMILY VISIT是非常难的。即使你拥有了葡萄牙的签证也不定代表英国政府认可你们的夫妻关系，以及经济关系，这是英国法律的规定。类似很多的案例包括拒签的在龙朔的网站上边都有。你可以用百度搜索一下龙朔两个字，或者搜索SUPERFY，他是这方面的专家，可以多跟他咨询。

不会很难，就把你们从相识到交往的过程，想说故事一样陈述一下，一页纸左右就够了。 其实就是写流水帐，你对自己英文信心不大的话，可以写起稿，让人帮忙翻译。嗯，有格式的。 是美国公民办K1未婚夫/妻申请是吗？开头是：我，某某某，美国公民，我的地址是xxxx,作如下宣言：（中间就是你的故事了。哦，对了。声明到最后的段落要写上，说你打算在你的未婚夫/妻来美后，多少天以内结婚，会一起住在哪里什么的）结尾是：我作以上的声明都是事实，否则将收到法律制裁。 朋友写的声明信，格式也一样，中间就说一下以他们所知道的你们的情况，当然是越亲密越好啦。

更改环境变量即可。“我用proteus仿真时它出现这样的错误是怎么一回事 《cannot open"c:TempLISA5076.SDF" 和 simulation FAIL”问题解决方法步骤如下：1、打开控制面板，点击大图标切换到大图标模式2、选择系统3、点击高级设置4、选择环境变量5、在系统变量里面选择新建6、输入环境变量信息名称：自己随便取一个路径：都很重要；必须要输入的输入之后记得点击确定7、然后我们来命令行下运行一下看看以上就是解决“我用proteus仿真时它出现这样的错误是怎么一回事 《cannot open"c:TempLISA5076.SDF" 和 simulation FAIL”的问题全部步骤。

小的是猴子。大的是大猩猩。

歌曲名:Lately歌手:Lisa Scott-Lee专辑:Lately「LATELY」作词∶Stevie Wonder作曲∶Stevie Wonder歌∶平井坚Lately, I"ve had the strangest feelingWith no vivid reason here to findYet the thought of losing you"s been hanging"round my mindFor more frequently you"re wearing perfumeWith you say no special place to goBut when I ask will you be coming back soonYou don"t know, never knowWell I"m a man of many wishesHope my premonition missesBut what I really feel my eyes won"t let me hide"Cause they always start to cry"Cause this time could mean goodbyeLately I"ve been staring in the mirrorVery slowly picking me apartTrying to tell myself I have no reasonwith your heartJust the other night while you were sleepingI vaguely heard you whisper someone"s nameBut when I ask you of the thoughts you"re keepingYou just say nothing"s changedWell I"m a man of many wishesHope my premonition missesBut what I really feel my eyes won"t let me hide"Cause they always start to cry"Cause this time could mean goodbye, goodbyeOh, I"m a man of many wishesI Hope my premonition missesBut what I really feel my eyes won"t let me hide"Cause they always start to cry"Cause this time could mean goodbye収録：Ken"s Bar II発売日：2009/05/27http://music.baidu.com/song/9661497

百度搜下，记得我考四级时，有英语作文范文就有这一篇。

使用myisam引擎使用latin1为默认字符集

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最好上传个图片 矮扁蓝瓶是男士香水瓶子的经典外观 很多牌子都有采用 比如宝格丽 CK等.. 至于瓶底 一般都会有 英语和法语的标识 你那瓶写的是天然原料淡香型.。 一般会留香 3-4 小时 适合白天上班使用...至于真假的问题 从瓶身是看不出来的 很多大牌子的香水本身就不是注重瓶子设计的。也许是你没看过的牌子 可以通过味道判断下吧 留香时间 以及会不会有刺鼻的酒精味道

喷雾器喷射

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招聘信息经常有".isaplus"是“必须吗”的英文翻译是: information often has. "Isaplus" is "must"

同楼上的

这问题问得不清不楚的。只能大概理解一下意思。看意思你是实现了点击复选框，控制文本框的功能了，难题在于一旦网页刷新了，这些选择控制就不存在了，还要重新设置，是不是这个意思。如果要解决这种问题，你首先要弄清楚网页的基本原理：网页是无状态的。因此单独的网页是绝对不可能保留状态的，如果要实现这个功能，必须在选择的同时，利用ajax把操作状态发送到服务器保存。一旦网页刷新，根据保存的数据重新加载网页。否则不可能实现保留操作状态的刷新。

正确说法是Where there is a will there is a way. 有志者，事竟成。where引导了一个地点状语从句。

法圣尼万事好 LOI SAINTENY

Visa工银北京2022年冬奥会主题信用卡，为金卡等级。卡面融入北京2022年冬奥会吉祥物“冰墩墩”形象，为持卡人呈现冬奥会运动精神和中国特色风貌。冰墩墩（英文：Bing Dwen Dwen，汉语拼音：bīng dūn dūn），是2022年北京冬季奥运会的吉祥物。其以国宝熊猫为原型设计创作，“冰壳”（糖衣）参考自中国传统的冰糖葫芦的文化元素，头部外壳参考自冰雪运动头盔，将熊猫憨态可掬的形象与富有超能量的冰晶外壳相结合，整体形象酷似航天员，同时体现了冬季冰雪运动特点。